JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

وهدف البروتوكول بناء نموذج التهاب لثة بشرية في المختبر. هذا نموذج الأنسجة المزروعة شارك ثلاثة أنواع من الخلايا البشرية والخلايا الكيراتينيه هاكات والليفية اللثة والضامة THP-1، تحت ظروف ثلاثي الأبعاد. يمكن تطبيق هذا النموذج على التحقيق في أمراض اللثة، مثل التهاب اللثة والتهاب اللثة.

Abstract

أمراض اللثة (مثل التهاب اللثة والتهاب اللثة) هي الأسباب الرئيسية لفقدان الأسنان لدى البالغين. التهاب اللثة هو الفيزيولوجيا المرضية الأساسية لأمراض اللثة. تم إنشاء النماذج التجريبية الحالية لأمراض اللثة في أنواع مختلفة من الحيوانات. الفيزيولوجيا المرضية لنماذج حيوانية غير مختلفة عن البشر، مما يجعل من الصعب تحليل الآليات الجزيئية والخلوية، وتقييم الأدوية الجديدة لأمراض اللثة. نقدم هنا، بروتوكول مفصل لتعمير مكافئات الأنسجة البشرية التهاب اللثة (إيجتي) في المختبر. أولاً نبني مكافئات الأنسجة البشرية من لثة (GTE) باستخدام نوعين من الخلايا البشرية، بما في ذلك الخلايا الليفية اللثة البشرية (هجف) وجلد الإنسان البشرة الكيراتينيه (هاكات)، تحت ظروف ثلاثي الأبعاد. نحن خلق نموذج جرح باستخدام تثقيب أنسجة لكمه ثقب في GTE. يتم حقن وحيدات THP-1 المقبل، البشرية مختلطة مع جل الكولاجين في الحفرة في GTE. قبل أديميستراتيون من 10 نانوغرام/مل phorbol 12-ميريستاتي 13-خلات (سلطة النقد الفلسطينية) ح 72، THP-1 خلايا متباينة في الضامة للنموذج البؤر الملتهبة في GTE (إيجتي) (إيجتي كما يمكن أن يكون ستوميلاتيد مع 2 ميكروغرام/مل من ليبوبوليساكتشاريديس (LPS) عن 48 ساعة لبدء التهاب ). إيجتي هو أول نموذج في المختبر لالتهاب اللثة باستخدام الخلايا البشرية مع بنية ثلاثية الأبعاد. إيجتي يعكس التغييرات المرضية الرئيسية (اكتيفيشن إيمونوسيتيس، والتفاعلات داخل الخلايا بين فيبريوبلاستس والخلايا الظهارية ووحيدات والضامة) في أمراض اللثة. GTE و GTE الجرحى إيجتي يمكن استخدامها كأدوات متعددة لدراسة التئام الجروح وتجديد الأنسجة والتهاب، التفاعل خلية خلية وشاشة الأدوية المحتملة لأمراض اللثة.

Introduction

أمراض اللثة هي السبب الرئيسي لفقدان الأسنان لدى البالغين. التهاب اللثة والتهاب اللثة هي أمراض اللثة الأكثر شيوعاً. كل هذا التغييرات الالتهابات الحادة أو المزمنة بيوفيلم بوساطة في اللثة. التهاب اللثة يتميز بالتهاب حاد، بينما التهاب اللثة ويعرض عادة كالتهاب مزمن. على المستوى النسيجي، مكونات بكتيرية تؤدي إلى تنشيط الخلايا المناعية، مثل الضامة والخلايا الليمفاوية وخلايا البلازما وخلايا ماست1،2. هذه الخلايا المناعية، وبخاصة الضامة، تتفاعل مع الخلايا المحلية (بما في ذلك الخلايا الظهارية اللثة والخلايا الليفية، وخلايا بطانية وخلايا الاوستيوبلاستس) أدى إلى آفات التهاب في أنسجة اللثة3،4. تم إنشاء نماذج تجريبية لأمراض اللثة في أنواع مختلفة من الحيوانات مثل الفئران، الهامستر والأرانب، فرت، الأنياب والرئيسات. الفيزيولوجيا المرضية لنماذج حيوانية غير مختلفة عن البشر، مما يجعل من الصعب تحليل الآليات الجزيئية والخلوية، وتقييم الأدوية الجديدة لأمراض اللثة5. وقد استخدمت المشارك زراعة اللثة البكتيريا والخلايا الظهارية الشفوي البشري أحادي الطبقة التحقيق إليه التهابات اللثة6. ومع ذلك، تفتقر ثقافات أحادي الطبقة من الخلايا عن طريق الفم هندسة الأنسجة سليمة؛ الخلوية ثلاثية الأبعاد (3D) ولذلك، أنهم لا يمكن أن تحاكي الحالة في المختبر .

وهنا تنشأ مكافئات 3D الأنسجة البشرية التهاب اللثة (إيجتي) لتمثل أمراض اللثة في المختبر. هذا نموذج ثلاثي الأبعاد من أمراض اللثة تحتل موقعا وسيطة بين الثقافات الخلية أحادي الطبقة ونماذج حيوانية. ثلاثة أنواع من الخلايا البشرية، بما في ذلك الخلايا الكيراتينيه هاكات واللثة الليفية الضامة THP-1، يزرع شارك في جل الكولاجين، وتحفزها المبادرين التحريضية لبناء إيجتي. إيجتي يحاكي عن كثب الأوضاع في فيفو الخلية التمايز والتفاعل خلية خلية التنشيط بلعم في اللثة. هذا النموذج قد العديد من التطبيقات الممكنة للمخدرات فحص واختبار النهج الجديدة الدوائي في أمراض اللثة، وكذلك لتحليل الآليات الخلوية والجزيئية في التئام الجروح والالتهابات، وتجديد الأنسجة.

Protocol

تم تصميم هذا البروتوكول لإنشاء مكافئات أنسجة اللثة البشرية وجرح اللثة نماذج ونماذج التهاب اللثة. وقدمت جلد الإنسان البشرة الكيراتينيه (هاكات) يرجى من البروفيسور نوربرت هاء فوسينيج كريبسفورشونجسزينتروم الألماني (هايدلبرغ، ألمانيا)7. الليفية اللثة البشرية (هجفس) بمعزل عن أنسجة اللثة وفقا للبروتوكولات المنشورة سابقا8. تم الحصول على الموافقة المستنيرة مسبقاً، وتمت الموافقة على الدراسة وفقا للمبادئ التوجيهية التي وضعتها "لجنة الأخلاقيات"، نيبون الأسنان جامعة مدرسة الحياة طب الأسنان في طوكيو (رقم الترخيص: جامعة سيدة اللويزة-T2012-35). ينبغي القيام بالخطوات 1-3 من البروتوكول في غطاء ثقافة خلية.

1-إعداد معادلات الأنسجة البشرية 3D للثة (GTE) (الشكل 1A)

  1. مزيج الكولاجين النوع-أ جل مع 10% تتركز MEM-ألفا والتعمير 10% المخزن المؤقت (2.2 ز ناكو3 وز 4.47 حبيس في 100 مل 0.05 هيدروكسيد الصوديوم N) في أنبوب عقيم 15 مل من بيبيتينج. يبقى الحل الكولاجين مختلطة على الجليد حتى استخدامها.
  2. مكان إدراج الثقافة 24-جيدا (الحجم 3.0 المسام ميكرومتر) في لوحة 24-جيدا.
  3. إزالة هجفس من على سطح الثقافة باستخدام حل يدتا التربسين 0.25%. تعليق الخلايا في 10 مل متوسط الثقافة (MEM-ألفا + 20% FBS + 1% جلوتاماكس). حساب عدد الخلايا بعداد خلية تورك Bürker.
    1. استخراج الكمية المطلوبة من الخلايا (1-5 x105 خلايا/مل)، ثم الطرد المركزي لمدة 4 دقائق في 190 x ز.
    2. تعليق الخلايا الموجودة في الحل الكولاجين مختلطة. الحفاظ على الجليد الخليط حتى الخطوة التالية.
  4. إضافة 0.5 مل المخلوط الخلية-الكولاجين (0.5-2.5 × 105 خلايا/جيد) في إدراج الثقافة دون إنتاج أي فقاعات. احتضان هذا الخليط لمدة 10-30 دقيقة في جو هوميديفيد بنسبة 5% CO2 في 37 درجة مئوية يتجمد الخليط في جل.
    ملاحظة: إضافة خليط الكولاجين داخل مركز إدراج الثقافة لتجنب تشكيل غير المتكافئ لجل الكولاجين.
  5. أضف 1 مل المتوسطة الثقافة في البئر ومل 0.5 إلى الإدراج. احتضان لوحة الثقافة عن 24 ساعة أو طوال الليل في جو هوميديفيد بنسبة 5% CO2 في 37 درجة مئوية.
  6. إزالة خلايا هاكات من السطح الثقافة باستخدام حل يدتا التربسين 0.25%. تعليق الخلايا في 10 مل متوسطة ب (دميم + 10% FBS + 1% جلوتاماكس) وعدد الخلايا. استخراج الكمية اللازمة من الخلايا (1 – 5 × 105 خلايا/مل) مع ماصة، أجهزة الطرد المركزي لمدة دقيقة 4 في غ. س 190 تعليق الخلايا في المتوسط ب
  7. إزالة المتوسطة من إدراج الثقافة، التي تحتوي على خليط هجف-الكولاجين، بالطموح. إضافة 0.5 مل تعليق خلية هاكات (0.5-2.5 × 105 خلايا/جيد) على رأس هذا الخليط هجف-الكولاجين. احتضان ثقافات ح 24 أو بين عشية وضحاها.
    ملاحظة: عند هذه النقطة الزمنية، المتوسطة في الثقافة كذلك ينبغي أن يكون بالمتوسط، بينما ينبغي أن تكون المتوسطة في إدراج الثقافة ب المتوسطة
  8. استبدال المتوسطة الثقافة بقصر المتوسطة (المتوسطة ثقافة المشارك) (MEM-ألفا + 15% "خروج المغلوب المصل البديل" + 1% جلوتاماكس) + 5% FBS. إضافة 1 مل المتوسط الثقافة إلى الثقافة جيدا و 0.5 مل في إدراج الثقافة. احتضانها الثقافات من أجل ح 24-48.
  9. استبدال المتوسطة الثقافة بقصر متوسطة + 1% FBS. أضف 1 مل في الثقافة جيدا و 0.5 مل في إدراج الثقافة. احتضان ثقافات ح 24 أو بين عشية وضحاها.
  10. استبدال المتوسطة الثقافة في الثقافة جيدا مع 0.7 – 1 مل قصر المتوسطة. إزالة الوسط تماما من إدراج الثقافة (على سطح الثقافة ينبغي أن تتعرض للهواء). احتضان الثقافات 1 – 2 أسابيع. تغيير وسيلة في ثقافة جيدا مرتين في الأسبوع.
    ملاحظة: لا تدع ارتفاع المستوى المتوسط فوق سطح الثقافة (الطبقة العليا المؤلفة من الخلايا الكيراتينيه). تبقى دائماً على سطح الثقافة الجافة.

2-إعداد الجرحى GTE (الشكل 1B)

  1. إعداد تثقيب أنسجة قطرها 1 – 3 مم. تعقيم أنه مع اﻷوتوكﻻف في 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
  2. دفع التثقيب الأنسجة عمودياً إلى GTE عن عميق 300 ميكرون، ولكمه ثقب في الأنسجة لمحاكاة جرح.
  3. في هذه الخطوة، استخدم GTE الجرحى للتحقيق في تجديد الجرح الشفاء والأنسجة. وبدلاً من ذلك، إصلاح GTE استخدام 10% فورمالين محلول عازلة محايدة لإجراء التحليل النسيجي.

3-إعداد التحريضية GTE (إيجتي) (الشكل 1B)

  1. زراعة الخلايا THP-1 وفقا للتقرير السابق9.
  2. مزيج الكولاجين النوع-أ جل مع 10% تتركز 1640 RPMI، المخزن المؤقت لإعادة الإعمار 10% (2.2 ز ناكو3 وز 4.47 حبيس في 100 مل 0.05 هيدروكسيد الصوديوم N) و 10 نانوغرام/مل سلطة النقد الفلسطينية. يبقى الحل الكولاجين مختلطة على الجليد حتى الاستخدام.
  3. العدد 1 – 2 × 106 THP-1 الخلايا وأجهزة الطرد المركزي لمدة دقيقة 4 في غ. س 190 تعليق الخلايا الموجودة في 1 مل الحل الكولاجين مختلطة. الحفاظ على الجليد الخليط حتى الخطوة التالية.
  4. إضافة 10 – 30 ميليلتر THP-1-الكولاجين المخلوط إلى منطقة الجرحى GTE. استبدال ثقافة المتوسط إلى 0.7 – 1 مل قصر المتوسطة التي تحتوي على 10 نانوغرام/مل من سلطة النقد الفلسطينية.
  5. احتضان هذا الخليط في جو هوميديفيد بنسبة 5% CO2 في 37 درجة مئوية ح 72.
  6. استخدم هذا النموذج للتحري عن التهاب اللثة أو أمراض اللثة (على سبيل المثال، إضافة الأدوية المضادة للالتهابات المحتملة إلى إيجتي لمعرفة آثارها على سيتوكين الإصدار10). بدلاً من ذلك، تجاهل ح 72 سلطة النقد الفلسطينية-العلاج وإضافة 2 ميكروغرام/مل من لبس في الثقافة، واحتضان الأنسجة في جو هوميديفيد بنسبة 5% CO2 في 37 درجة مئوية ح 4811،12.

4-التثبيت وكله إيمونوستينينج جبل GTE وإيجتي الثقافات

  1. تثبيت الثقافات.
    1. إزالة المتوسطة الثقافة من لوحة 24-جيدا. تغسل الأنسجة 2 مرات مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS).
    2. أضف 1 مل من محلول عازلة محايدة الفورمالين 10% للإدراج ومل 1 للثقافة جيدا. اترك لوحة 24-جيدا في ثلاجة عند درجة 4 مئوية بين عشية وضحاها.
    3. إزالة الحل عازلة محايدة الفورمالين 10% في اليوم التالي.
    4. لكل جبل إيمونوستينينج، غسل الأنسجة 3-4 مرات مع برنامج تلفزيوني بعد التثبيت.
    5. الهيماتوكسيلين ويوزين (H & E) تلطيخ و immunostaining العادية، المضي قدما في الجفاف وتضمين البارافين وتمزيقها.
      ملاحظة: لكل جبل إيمونوستينينج، يمكن حذف هذه الخطوة.
  2. كله جبل إيمونوستينينج
    ملاحظة: تم تعديل هذا البروتوكول من واحد في مرجع 13.
    1. تغسل الأنسجة 3 x في برنامج تلفزيوني 0.5 – 1% تريتون، 10 – 30 دقيقة في كل مرة.
    2. احتضان الأنسجة مرتين لمدة 30 دقيقة في المخزن المؤقت لحظر (برنامج تلفزيوني 1% تريتون + 10% جيش صرب البوسنة)، في درجة حرارة الغرفة.
    3. أغسل × الأنسجة 2 في المخزن المؤقت لحظر، 5 – 10 دقيقة كل مرة.
    4. إضافة 50 ميليلتر من حل جسم الأولية إلى تدرج في تمييع/التركيز المطلوب. تستخدم فيلم تتشبث بلاستيكية رقيقة للالتفاف إدراج لتجنب جفاف الأنسجة.
    5. احتضان الأنسجة لمدة 1 إلى 2 في 4 درجات مئوية.
    6. غسل الأنسجة 3 مرات، لمدة 30 دقيقة في برنامج تلفزيوني 1% تريتون + 10% من جيش صرب البوسنة. أغسل مرة أخرى 3 مرات، لمدة 5 دقائق في برنامج تلفزيوني 1% تريتون.
    7. إضافة 50 ميليلتر من جسم الثانوية في المخزن المؤقت لحظر (برنامج تلفزيوني 1% تريتون + 10% جيش صرب البوسنة) و 5 ميليلتر من حل هويشت 33342 (خلية يعيش نوكبلوي وصمة عار) لكل إدراج. تستخدم فيلم تتشبث بلاستيكية رقيقة للالتفاف إدراج لتجنب جفاف الأنسجة.
    8. احتضان لمدة 1 إلى 2 في 4 درجات مئوية. التفاف لوحة 24-جيدا في منشفة ورقية رطب ومن ثم وضعه في علبة بلاستيكية لاستخدامها في جميع أنحاء الحضانة.
    9. غسل الأنسجة 3 مرات، لمدة 10 دقائق في برنامج تلفزيوني 1% تريتون
    10. استخدام إبرة حادة لقطع الغشاء لإدراج ثقافة الحصول على الأنسجة. مكان الغشاء إلى شريحة.
      ملاحظة: ينبغي أن تكون الأنسجة على الغشاء.
    11. إضافة 2-3 قطرات من الأسفار جبل المتوسطة. تغطية الأنسجة بتغطية الزجاج ومخزن في 4 درجات مئوية في الظلام حتى التحليل.
    12. عرض الأنسجة بليزر [كنفوكل] الفحص المجهري (LSM).

النتائج

عرض هاكات الخلايا keratinocyte نموذجي مورفولوجيا تحت الملاحظة المجهرية المرحلة عالي التباين (الشكل 2A). الماسح الضوئي الإلكترون المجهرية (SEM) الصور أظهرت أن أسطح الخلية هاكات مشمولة بالعديد من زغيبات. كانت وساطة الاتصالات بين الخلايا بين الخلايا هاكات من عمليات...

Discussion

ويستند هذا البروتوكول أساليب إنشاء معادلات أنسجة اللثة ومكافئات الأنسجة الدهنية تحت الجلد الموصوفة بالتقارير السابقة8،،من2122. على الرغم من أن هذا أسلوب بسيط وسهل، بعض الخطوات تتطلب اهتماما خاصا. على سبيل المثال، ينبغي أن يوضع الخليط الك?...

Disclosures

الكتاب يعلن لا تضارب في المصالح.

Acknowledgements

هذا العمل وأيد جزئيا "مجتمع اليابان" لمعونات النهوض بالعلوم (JSPS) "البحوث العلمية" (ك 26861689 و 17 11813). المؤلف يود أن يشكر السيد ناثانيل غرين لتصحيح التجارب المطبعية.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Collagen type I-ANitta Gelatin IncFor making dermis of GTE
MEM-alphaThermo Fisher Scientific11900073Cell culture medium
Cell Culture Insert (for 24-well plate), pore size 3.0 μmCorning, Inc.353096For tissue culture
GlutaMAXThermo Fisher Scientific35050061Cell culture reagent
DMEMThermo Fisher Scientific31600034Cell culture medium
KnockOut Serum ReplacementThermo Fisher Scientific10828028Cell culture reagent
Tissue puncherShibata system service co., LTDSP-703For punching holes in GTE
RPMI 1640Thermo Fisher Scientific31800022Cell culture medium
BSASigma-AldrichA3294For immunostaining
Hoechst 33342 (NucBlue Live Cell stain)Thermo Fisher ScientificR37605For labeling nuclei
Fluorescence mount mediumDakoFor mounting samples after immunostaining
Anti-Cytokeratin 8+18 antibody [5D3]abcamab17139For identifying epithelium
Scaning electron microscopeHitachi, Ltd.HITACHI S-4000For observing samples' surface topography and composition
Confocal laser scanning microscopyLSM 700; Carl Zeiss Microscopy Co., Ltd.LSM 700For observing samples' immunofluorescence staining
Anti-Cytokeratin 19 antibodyabcamab52625For identifying epithelium
Anti-vimentin antibodyabcamab92547For identifying fibroblasts and activated macrophages
Anti-TE-7 antibodyMilliporeCBL271For identifying fibroblasts in the dermis
Anti-CD68 antibodySigma-AldrichSAB2700244For identifying macrophages
Human CD14 AntibodyR&D SystemsMAB3832-SPFor identifying macrophages
Alexa Fluor 594-conjugated secondary goat anti-rabbit antibodyThermo Fisher ScientificA11012For immunofluorescence staining
Alexa Fluor 488-conjugated secondary goat anti-mouse antibodyThermo Fisher ScientificA11001For immunofluorescence staining
EVOS FL Cell Imaging SystemThermo Fisher ScientificFor observing the sample's immunofluorescence staining
THP-1 cellsRiken BRC cell bankRCB1189For making iGTE
PMA(Phorbol 12-myristate 13-acetate)Sigma-AldrichP8139For differentiatting THP-1 cells

References

  1. Cekici, A., Kantarci, A., Hasturk, H., Van Dyke, T. E. Inflammatory and immune pathways in the pathogenesis of periodontal disease. Periodontology 2000. 64 (1), 57-80 (2014).
  2. Hasturk, H., Kantarci, A., Van Dyke, T. E. Oral Inflammatory Diseases and Systemic Inflammation: Role of the Macrophage. Frontiers in Immunology. 3, 118 (2012).
  3. Koh, T. J., DiPietro, L. A. Inflammation and wound healing: The role of the macrophage. Expert reviews in molecular medicine. 13, e23 (2011).
  4. Mescher, A. L. Macrophages and fibroblasts during inflammation and tissue repair in models of organ regeneration. Regeneration. 4 (2), 39-53 (2017).
  5. Struillou, X., Boutigny, H., Soueidan, A., Layrolle, P. Experimental Animal Models in Periodontology: A Review. The Open Dentistry Journal. 4, 37-47 (2010).
  6. Han, Y. W., et al. Interactions between Periodontal Bacteria and Human Oral Epithelial Cells: Fusobacterium nucleatum Adheres to and Invades Epithelial Cells. Infection and Immunity. 68 (6), 3140-3146 (2000).
  7. Boukamp, P., Petrussevska, R. T., Breitkreutz, D., Hornung, J., Markham, A., Fusenig, N. E. Normal keratinization in a spontaneously immortalized aneuploid human keratinocyte cell line. J Cell Biol. 106 (3), 761-771 (1988).
  8. Xiao, L., Miwa, N. Hydrogen-rich water achieves cytoprotection from oxidative stress injury in human gingival fibroblasts in culture or 3D-tissue equivalents, and wound-healing promotion, together with ROS-scavenging and relief from glutathione diminishment. Hum Cell. 30 (2), 72-87 (2017).
  9. Tsuchiya, S., Yamabe, M., Yamaguchi, Y., Kobayashi, Y., Konno, T., Tada, K. Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1). Int J Cancer. 26 (2), 171-176 (1980).
  10. Ara, T., Kurata, K., Hirai, K., Uchihashi, T., Uematsu, T., Imamura, Y., Furusawa, K., Kurihara, S., Wang, P. L. Human gingival fibroblasts are critical in sustaining inflammation in periodontal disease. J Periodontal Res. 44 (1), 21-27 (2009).
  11. Park, E. K., Jung, H. S., Yang, H. I., Yoo, M. C., Kim, C., Kim, K. S. Optimized THP-1 differentiation is required for the detection of responses to weak stimuli. Inflamm Res. 56 (1), 45-50 (2007).
  12. Sharif, O., Bolshakov, V. N., Raines, S., Newham, P., Perkins, N. D. Transcriptional profiling of the LPS induced NF-kappaB response in macrophages. BMC Immunol. 8, 1 (2007).
  13. Shetty, S., Gokul, S. Keratinization and its disorders. Oman Med J. 27 (5), 348-357 (2012).
  14. Klinge, B., Matsson, L., Attström, R. Histopathology of initial gingivitis in humans. A pilot study. J Clin Periodontol. 10 (4), 364-369 (1983).
  15. Nagarakanti, S., Ramya, S., Babu, P., Arun, K. V., Sudarsan, S. Differential expression of E-cadherin and cytokeratin 19 and net proliferative rate of gingival keratinocytes in oral epithelium in periodontal health and disease. J Periodontol. 78 (11), 2197-2202 (2007).
  16. Goodpaster, T., Legesse-Miller, A., Hameed, M. R., Aisner, S. C., Randolph-Habecker, J., Coller, H. A. An immunohistochemical method for identifying fibroblasts in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue. J Histochem Cytochem. 56 (4), 347-358 (2008).
  17. Langeland, K., Rodrigues, H., Dowden, W. Periodontal disease, bacteria, and pulpal histopathology. Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 37 (2), 257-270 (1974).
  18. Holness, C. L., Simmons, D. L. Molecular cloning of CD68, a human macrophage marker related to lysosomal glycoproteins. Blood. 81 (6), 1607-1613 (1993).
  19. Mor-Vaknin, N., Punturieri, A., Sitwala, K., Markovitz, D. M. Vimentin is secreted by activated macrophages. Nat Cell Biol. 5 (1), 59-63 (2003).
  20. Xiao, L., Aoshima, H., Saitoh, Y., Miwa, N. The effect of squalane-dissolved on adipogenesis-accompanied oxidative stress and macrophage in a preadipocyte-monocyte co-culture system. Biomaterials. 31 (23), 5976-5985 (2010).
  21. Xiao, L., Aoshima, H., Saitoh, Y., Miwa, N. Highly hydroxylated fullerene localizes at the cytoskeleton and inhibits oxidative stress in adipocytes and a subcutaneous adipose-tissue equivalent. Free Radic Biol Med. 51 (7), 1376-1389 (2011).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

134 THP 1

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved