JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

توضح هذه المقالة طريقة واضحة لإعداد أدمغة الحيوانات الصغيرة لتصوير الأشعة المقطعية الصغرى، في الآفات التي يمكن قياسها كمياً واقطاب الموقع بدقة عالية في سياق الدماغ كله.

Abstract

التحقق من مكان الآفة والقطب تتم تقليديا عبر نسيجية فحص شرائح المخ الملون، إجراء تستغرق وقتاً طويلاً ويتطلب تقدير دليل. وهنا يصف لنا أسلوب بسيط ومباشر للتحديد الكمي للآفات وتحديد مواقع أقطاب كهربائية في الدماغ الذي هو أقل مشقة، وتعطي نتائج أكثر تفصيلاً. العقول كلها ملطخة بأكسيد الاوزميوم، جزءا لا يتجزأ من الراتنج، وتصويرها مع الماسح ضوئي CT الصغرى. المسح الضوئي ينتج وحدات التخزين الرقمي 3D للعقول مع القرارات وسمك الفرع الافتراضي يعتمد على حجم العينة (12-15 و 5-6 ميكرون كل فوكسل للفئران وحمار وحشي فينش العقول، على التوالي). الآفات السطحية والعميقة يمكن أن توصف، وواحدة تيتروديس, تيترودي صفائف, آفات كهربائياً، ويمكن أيضا أن تكون مترجمة المسابير السليكون. البرمجيات الحرة والملكية يسمح المجربون لدراسة حجم العينة من أي طائرة والجزء المتعلق بالحجم يدوياً أو تلقائياً. نظراً لأن هذا الأسلوب إنشاء حجم الدماغ كله، الآفات واقطاب يمكن قياسها كمياً لدرجة أعلى بكثير مما في الأساليب الحالية، مما سيساعد على توحيد المقارنات داخل وعبر الدراسات.

Introduction

علماء الأعصاب قد اعتمدت على الآفات لفترة طويلة من أجل فهم العلاقة بين الوظيفة والمكان في الدماغ. على سبيل المثال، قد فهمنا الحصين بأنه لا غنى عنه للتعلم والذاكرة وقشرة prefrontal كمفتاح للتحكم دفعة منتجات كلا من آفات الصدفة في البشر1،2. قد يسمح باستخدام نماذج حيوانية، ولكن علماء الأعصاب لتسخير القوة الآفات التي يتجاوز مجرد الصدفة، وقد تم توضيح الوظيفة من عدد لا يحصى من مناطق الدماغ من خلال دراسات منهجية للدالة هيكل العلاقات من خلال 3،الآفات4.

لتعيين الدالة بشكل صحيح إلى بنية، ومع ذلك، تتطلب دراسات الآفة إجراءات القياس الكمي الدقيق، وهي منطقة التي كانت تفتقر إلى. معيار الذهب الحالي للتحديد الكمي للآفات إلى الباب، وجبل، والعقول الصورة مع مجهر ضوء. ثم تتم مطابقة الشرائح المصورة لأقرب الفروع المتعلقة بأطلس، واحداثيات تقريبية للآفات عبر مواضيع غير مباشر يقال، غالباً من خلال استخدام الصور lucida الكاميرا أو المثال شرائح نسيجية3،4 ،،من56،،من78،9،10.

أبعد من عدم الدقة في الإجراءات الحالية لتقدير حجم الآفة، هذه التقنيات مضيعة للوقت وعرضه للفشل. يمكن أن تؤدي التغييرات الصغيرة في تصلب الدماغ والحدة بليد، ودرجة الحرارة إلى مقاطع فاشلة أو مشوه أو ممزقة. مقاطع يمكن أيضا وصمة عار غير متكافئ وتصويرها غير سليمة بسبب فقاعات في الأجلين المتوسط وتصاعد. الأهم من ذلك، تقطيع، إطار ثلاثي الأبعاد للموقع للآفة في الدماغ عند المفقودة، مما يجعل إعادة الإعمار 3D دقيقة من الآفة في تحدي الدماغ.

وقد آخر التطبيقات الشائعة للآفات لتحديد موقع واحد ومتعددة التسجيلات الكهربائي في الدماغ. في نهاية الدورة التسجيل النهائي، الباحثون حمل آفات الالكتروليتى صغيرة على طرف القطب وعملية المخ الأشيع كما فعلت في تجربة آفة تقليدية11. هذا الأسلوب يعاني من نفس العيوب المذكورة أعلاه، مع مشاكل إضافية هي أن تكون عادة أكبر من أقطاب كهربائية تستخدم لجعلها الآفات الالكتروليتى ولكن عادة ما تكون صغيرة بما يكفي بأنها تمثل تحديا لإيجاد الأشيع. عندما يتم إدراج متعددة الأقطاب، على غرار مجموعة تيترودي، التحقق من خلال الآفات الالكتروليتى حتى أكثر صعوبة. بديل لآفات الالكتروليتى هو استخدام صبغة على مسرى بعد التحقق من الأشيع12، ولكن هذا الأسلوب يعاني من نفس العيوب التي تأتي مع الأنسجة التقليدية.

هنا، يمكننا وصف متعمق أسلوب وصف مؤخرا13 استناداً إلى تلطيخ تقنيات الميكروسكوب الإلكتروني (م) والأشعة السينية المقطعي (الصغرى-CT) التي يوضحها الآفات ويحدد موقع الأقطاب في أدمغة الحيوانات الصغيرة أفضل من الحالية أساليب. CT الجزئي هو أسلوب تصوير فيها إطلاق النار الأشعة السينية في نموذج الذي يتم استدارة 360 درجة بينما يقوم سسينتيلاتور تجميع الأشعة السينية لا نحيد بالعينة. والنتيجة هي إعادة إعمار 3D رقمية ذات الدقة عالية للعينة التي يمكن أن تصور في أي اتجاه وتحديداً كمياً. وقد العديد من المؤسسات الأكاديمية الصغرى-CT الماسحات الضوئية، وهي أيضا متاحة تجارياً.

Protocol

استعراض كل الرعاية والتلاعب التجريبية للحيوانات ووافقت عليه لجنة الاستخدام وجامعة هارفارد، الرعاية المؤسسية على الحيوان. نضح الموصوفة هنا محددة للفئران، ولكن هذا الإجراء لا ينطبق على أي الحيوانات مع أدمغة أصغر أو الحجم وبالمثل.

1. نضح

  1. إعداد 1 × مخزنة الفوسفات المالحة (PBS). للفئران (العمر: 0.5 – 1.5 سنة، الوزن: غ 250 – 600)، 800 – 1,000 مل ينبغي أن يكون كافياً. استخدم 400 مل نتخلل الحيوان و 400 مل إضافية تمييع مثبت.
  2. إعداد مثبت تتكون من 2% (w/v) بارافورمالدهيد (PFA) و 2.5% (w/v) جلوتارالديهيدي (GA) في برنامج تلفزيوني 1 x. للفئران، 400 مل كافية. حفظ 50 مل في أنبوب 50 مل مخروطية للتثبيت بعد الدماغ بعد نضح.
  3. تخدير الفئران مع الغاز إيسوفلوراني 4 – 5% (في 0.8 لتر في الدقيقة س2 في شريط 1.0 في 21 درجة مئوية) لمدة 15 دقيقة.
  4. حقن جرعة قاتلة من بينتوباربيتال الصوديوم إينترابيريتونيلي (180 مغ/كغ).
  5. اختبار فقدان المنعكس في الحيوان بإجراء امتحان تو-رشة منعكس. الانتظار للبدء نضح حتى الحيوان فقد ردها منعكس.
  6. اتبع إينتراكارديال هو موضح سابقا نضح والدماغ استخراج البروتوكول14 مع الحلول التالية: نتخلل الحيوان مع 400 مل من برنامج تلفزيوني 1 x في 125 ملم زئبق لإزالة الدم. مرة واحدة كل الدم قد تم إزالته واستبداله ببرنامج تلفزيوني x 1، تبدأ بيرفوسينج مع 400 مل الحل % 2 منهاج عمل بيجين والجأ 2.5% حله في برنامج تلفزيوني x 1 في 125 ملم زئبق.
    ملاحظة: إذا كان الإجراء الذي يجري في حيوان الذي هو ليس من الفئران، العناصر الهامة فقط في الإجراء نضح هي استخدام 1 × 2% وبرنامج تلفزيوني منهاج عمل بيجين، GA 2.5% في برنامج تلفزيوني 1 x. يمكن تعديل حجم الحل وضغط التروية وفقا للأنواع.

2-بعد انتهاء التثبيت

  1. ضع الدماغ المستخرجة في 2% منهاج عمل بيجين، GA 2.5% في 1 × برنامج تلفزيوني الحل (نفس المستخدمة في نتخلل الحيوان سابقا). التأكد من أن حجم الحل على الأقل 10 × حجم الدماغ. للفئران، وضع الدماغ في أنبوب 50 مل مخروطية مع 50 مل من محلول. تخزين العينة في التثبيت بعد 2-3 أيام، تهز طفيفة عند 4 درجة مئوية.
    ملاحظة: إذا كانت العينة في أنبوب 50 مل مخروطية، وضعه أفقياً على شاكر مداري سوف ضمان أفضل النتائج.
  2. بعد العينة قد تم بعد ثابتة لفترة طويلة كافية، تغسل العينة في الماء المقطر مزدوجة (ddH2س) أو الماء المتأين دي (diH2س) الماء عالي النقاوة (انظر الجدول للمواد) أربع مرات للفترات التالية: 1، 1، 1، و 15 دقيقة.
    ملاحظة: لهذا البروتوكول، ddH2س أو س diH2الماء عالي النقاوة ينبغي أن تكون قابلة للتبادل. للبساطة، ستستخدم ddH2س للإشارة إلى تنقية المياه من الآن فصاعدا.

3-تلوين

تنبيه: لهذه الخطوة، إجراء جميع الأعمال التحضيرية الحل تحت غطاء محرك السيارة أثناء استخدام القفازات.

  1. إعداد على الأقل 10 × حجم الدماغ تلطيخ الحل. لأدمغة الفئران، إعداد 50 مل من 2% (w/v) أكسيد الاوزميوم (أوسو4) في ddH2س بضم 25 مل من 4% الأسهم أوسو4 الحل و 25 مل ddH2o.
    تنبيه: أكسيد الاوزميوم قابلة للاشتعال وقد تسبب العمى المؤقت ومشاكل في الجهاز التنفسي إذا لم تعالج على نحو ملائم. تجاهل جميع المواد التي اتصل أكسيد الاوزميوم في حاوية مناسبة عن إخطار المواد كيميائية داخل حاوية ثانوية.
  2. وضع الدماغ في أنبوب 50 مل مخروطية الشكل جديد وإضافة الحل4 أوسو. ينبغي أن تبدأ الدماغ لتحويل البنى أوسو4 يتفاعل مع الدهون في الأنسجة.
  3. إغلاق الأنبوب وختم ذلك تماما مع البارافين الفيلم (انظر الجدول للمواد) التأكد من أنها لا تسرب أثناء الحضانة.
    ملاحظة: الاوزميوم متقلبة وسترد أقل ما يقال ببلاستيك الأنبوب، حتى إغلاق الأنبوب بشكل صحيح مهم جداً. قد يكون التفاف الأنبوب مع رقائق الألومنيوم للحماية الإضافية.
  4. تخزين الأنبوبة المختومة في 4 درجات مئوية، تهز طفيفة في شاكر مداري 50 لفة في الدقيقة لمدة أسبوعين. ضع أنبوب أفقياً لضمان خلط أفضل. التأكد من أن العينة هي مغمورة تماما في الحل بينما تهز.
    ملاحظة: إذا كان غير مسموح الاوزميوم أن تعمم بشكل مستمر، فإنه قد لا تماما اختراق العينة، ذلك الموضع الأفقي على شاكر مهم جداً.

4-التضمين

  1. بعد قد تم المحتضنة العينة في أوسو4 لمدة أسبوعين، يغسل مع ddH2س 5 مرات في درجة حرارة الغرفة (RT) للفترات التالية: 1، 1، 1 و 15 و 60 دقيقة لإزالة جميع أوسو غير منضم4 في العينة.
    ملاحظة: التبادلات متعددة، بما في ذلك تبادل آخر 60 دقيقة، ضرورية للسماح لجميع أوزميوم في الدورة الدموية منتشر ب.
  2. تغسل العينة مع ddH2س لمدة 30 دقيقة في 4 درجات مئوية.
    ملاحظة: قد يستمر أوزميوم منتشر من العينة، ولكن كمية ينبغي أن يخفض إلى حد كبير من الخطوة السابقة.
  3. يذوي العينة مع الإيثانول التسلل في نهاية المطاف أنه مع الراتنج. ليذوي، استبدل ddH2س 10 – 20 مل تخفيف الإيثانول التالية (مدة 30 دقيقة كل في 4 درجات مئوية): الإيثانول 20% (v/v) و 80% (v/v) ddH2س؛ الإيثانول 50% (v/v) و 50% (v/v) ddH2س؛ إيثانول 70% (v/v) و 30% (v/v) ddH2س؛ الإيثانول 90% (v/v) و 10% (v/v) ddH2س؛ الإيثانول 100%.
  4. إعداد تخفيف الأسيتون/الراتنج كما يلي.
    1. تحضير 100 مل الراتنج لتضمين (انظر الجدول للمواد) وفقا لإرشادات الشركة المصنعة.
    2. جعل 33% (v/v) راتنج-67% الحل الأسيتون، صب 15 مل راتنج في أنبوب 50 مل مخروطية وإضافة 30 مل الأسيتون المقطر الزجاج 100%.
    3. جعل الأسيتون راتنج-50% 50% (v/v)، صب 22.5 مل راتنج في أنبوب 50 مل مخروطية وإضافة 22.5 مل الأسيتون المقطر الزجاج 100%.
    4. جعل 67% (v/v) راتنج-33% الحل الأسيتون، صب 30 مل راتنج في أنبوب 50 مل مخروطية وإضافة 15 مل الأسيتون المقطر الزجاج 100%.
    5. استخدم مل 32.5 المتبقية من راتنج كحل أول 100 ٪ راتنج أدناه.
  5. تبدأ عملية تسلل الراتنج بتحريك العينة من خلال 10-20 مل تخفيف الأسيتون، والاسيتون/الراتنج التالية: الأسيتون 100% لمدة 30 دقيقة عند 4 درجة مئوية؛ الأسيتون 100% لمدة 30 دقيقة عند 4 درجة مئوية؛ والاسيتون 100% لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (RT).
    ملاحظة: بقية عملية تسلل ستجري في الرايت
  6. تزج العينة في 33% (v/v) الأسيتون 67% راتنج ح 3 في الرايت، ثم الأسيتون راتنج-50% 50% (v/v) ح 3 في الرايت، الأسيتون 33 ٪ راتنج 67% (v/v) ح 3 في الرايت، وراتنج 100% ح 12 في الرايت
  7. تقديم دفعة جديدة 50 مل من الراتنج اتباع التعليمات الموجودة على الزجاجة. نقل العينة إلى الحاوية التي سيتم علاجها (مثلاً.، قوالب المتاح المبين في الجدول للمواد). صب العينة مع الطازجة 100 ٪ راتنج لمدة 4 ساعات في الرايت
    ملاحظة: إذا لم يتم استخدام الراتنج الطازجة، الراتنج به في اليوم السابق سوف تبدأ في تتصلب قبل الأوان، وسوف يكون من الصعب للتلاعب العينة.
  8. ديغا العينة في فرن فراغ لمدة 15 دقيقة عند 45 درجة مئوية.
    ملاحظة: هذه الخطوة سوف تساعد على إزالة أي فقاعات الهواء المحبوس داخل العينة، بل هو غير ضروري ولن يؤثر على نوعية البيانات.
  9. وأخيراً، علاج العينة في فرن ح 48 عند 60 درجة مئوية.

5-الصغير-الأشعة المقطعية

  1. بمجرد قد تم علاجه العينة، تقشر العفن المتاح ومسحها ضوئياً مع الجهاز الصغير-CT.
    ملاحظة: اعتماداً على الإله المستخدمة، سوف تكون الإعدادات مختلفة. للماسح المستخدمة من قبل المؤلفين المدرجة في الجدول للمواد، هي الإعدادات المستحسنة 130 كيلو فولت، µA 135 مع عامل تصفية نحاس 0.1 مم ومصدر موليبدينوم، تعرض لفترة ثانية واحدة، وفي متوسط 4 الإطارات في الإسقاط. ومع ذلك، المجربون ينبغي معايرة الماسح الضوئي كل على حدة، كما سوف تؤثر عوامل كثيرة على الإعدادات المثلى خلال جلسة خاصة.
  2. وبمجرد الانتهاء من المسح الضوئي، إعادة إعمار العينة مع المعلمات الموصى به لتركيبة المجرب الماسح الضوئي وبرامج على جهاز كمبيوتر مع برنامج الماسح الضوئي.
  3. وأخيراً، تصور وتحليل وحدة التخزين الرقمي أعيد بناؤها باستخدام البرمجيات المجرب الاختيار (انظر الجدول للمواد للحصول على أمثلة).

النتائج

تقليديا، مقطوع العقول والملون من أجل التحديد الكمي للآفات وتحديد موقع كهربائي، ولكن هذا الأسلوب عرضه للخطأ، وكثيفة العمالة، وعادة ما يتطلب تقدير النتائج. قبل إعداد العقول كلها للتصوير بالأشعة المقطعية الصغرى، احتمال إلحاق الضرر بالعينات هو تقلص إلى حد كبير وقد حلل الم?...

Discussion

وفيما يلي الخطوات الأساسية للبروتوكول: أولاً، استخدام مزيج من منهاج عمل بيجين والجأ نتخلل الحيوان وفي وقت لاحق بعد إصلاح الدماغ أمر بالغ الأهمية لتحقيق اختراق أوزميوم كاملة متسقة من الأنسجة. على الرغم من أننا لا اختبار هذا صراحة، تفسيراً معقولاً هو أن تثبيت PFA15من عكسها، حين أ...

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

يشكر المؤلفون لين جريج وآرثر ماكليلاند لخبرتهم مع آلة الأشعة المقطعية الصغرى وديفيد ريتشموند واليوت هنتر في الصورة وتحليل البيانات الأساسية (إيداك) في مدرسة هارفارد الطبية لهذه المشورة ومعالجة الصور، ووليام ليبرتي في بوسطن الجامعة تكرم توفير المخ زيبرا فينش. هذا العمل قد أنجز جزئيا في المركز لأنظمة النانو (CNS)، عضوا للوطنية تكنولوجيا النانو منسقة البنية التحتية الشبكة (ننسى)، الذي تدعمه "المؤسسة الوطنية للعلوم" NSF جائزة 1541959 رقم. الجهاز العصبي المركزي جزء من جامعة هارفارد. كان يؤيد هذا العمل ريتشارد و "سوزان سميث مؤسسة الأسرة" وإياربا (عقد #D16PC00002). وأيده S.B.E.W. زمالات دراسية من "برنامج العلوم البشرية الحدودية" (هفسب؛ LT000514/2014) والمنظمة الأوروبية في مجال البيولوجيا الجزيئية (التطريز؛ ALTF1561-2013). وأيد غ. غ. بمؤسسة العلوم الوطنية (NSF) الدراسات العليا البحوث زمالة برنامج (جرفب).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Paraformaldehyde (PFA)Electron Microscopy Sciences (EMS)157102% (w/v/) in 1X PBS
Glutaraldehyde (GA)EMS162202.5% (w/v) GA in 1x PBS
OsO4EMS19190Work in fume hood
EthanolDecon LabsKoptec140, 190, 200 proof
AcetoneEMS10015Glass-distilled
Durcupan ACM resinSigma-Aldrich44610A, B, C and D components, resin for embedding
Disposable moldsTed Pella27114Suggested
milliQ water (ultrapure water)Millipore SigmaQGARD00R1 (or related purifier)Suggested
Parafilm (paraffin film)Millipore SigmaP7793Suggested paraffin film
Micro-CT scannerNikon Metrology Ltd., Tring, UKX-Tek HMS ST 225Used by authors
Software for visualizing and analyzing micro-CT scans:
Volume GraphicsVG Studio MaxUsed by authors
FEI / Thermo ScientificAvizoUsed by authors
FEI / Thermo ScientificAmiraSimilar to Avizo
Mark Sutton & Russell GarwoodSpiersFree, http://spiers-software.org/
Pixmeo SarlOsirix LiteFree, https://www.osirix-viewer.com/
Open SourceFIJIFree, https://fiji.sc/
AdobePhotoshopGood for analyzing one slice at a time

References

  1. Scoville, W., Milner, B. Loss of recent memory after bilateral hippocampal lesions. Journal of Neuropsychiatry and Clinical Neuroscience. 12, 103-113 (2000).
  2. Damasio, H., Grabowski, T., Frank, R., Galaburda, A. M., Damasio, A. R. The return of Phineas Gage: clues about the brain from the skull of a famous patient. Science. 264 (5162), 1102-1105 (1994).
  3. Kawai, R., et al. Motor cortex is required for learning but not for executing a motor skill. Neuron. 86, 800-812 (2015).
  4. Otchy, T., et al. Acute off-target effects of neural circuit manipulations. Nature. 528, 358-363 (2015).
  5. Wright, N., Vann, S., Aggleton, J., Nelson, A. A critical role for the anterior thalamus in directing attention to task-relevant stimuli. Journal of Neuroscience. 35, 5480-5488 (2015).
  6. Kapgal, V., Prem, N., Hegde, P., Laxmi, T., Kutty, B. Long term exposure to combination paradigm of environmental enrichment, physical exercise and diet reverses the spatial memory deficits and restores hippocampal neurogenesis in ventral subicular lesioned rats. Neurobiology of Learning and Memory. 130, 61-70 (2016).
  7. Hosseini, N., Alaei, H., Reisi, P., Radahmadi, M. The effects of NBM- lesion on synaptic plasticity in rats. Brain Research. 1655, 122-127 (2017).
  8. Palagina, G., Meyer, J., Smirnakis, S. Complex visual motion representation in mouse area V1. Journal of Neuroscience. 37, 164-183 (2017).
  9. Ranjbar, H., Radahmadi, M., Reisi, P., Alaei, H. Effects of electrical lesion of basolateral amygdala nucleus on rat anxiety-like behavior under acute, sub-chronic, and chronic stresses. Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. , (2017).
  10. Wood, R., et al. The honeycomb maze provides a novel test to study hippocampal-dependent spatial navigation. Nature. , (2018).
  11. Vermaercke, B., et al. Functional specialization in rat occipital and temporal visual cortex. Journal of Neurophysiology. 112, 1963-1983 (2014).
  12. Jun, J. J., et al. Fully integrated silicon probes for high-density recording of neural activity. Nature. 551, 232-236 (2017).
  13. Masís, J., et al. micro-CT-based method for quantitative brain lesion characterization and electrode localization. Scientific Reports. 8, 5184 (2018).
  14. Gage, G., Kipke, D. R., Shain, W. Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents. Journal of Visualized Experiments. 65, 3564 (2012).
  15. Helander, K. Kinetic studies of formaldehyde binding in tissue. Biotechnic & Histochemistry. , (1994).
  16. Paljärvi, L., Garcia, J., Kalimo, H. The efficiency of aldehyde fixation for electron microscopy: stabilization of rat brain tissue to withstand osmotic stress. Histochemical Journal. , (1979).
  17. Okuda, K., Urabe, I., Yamada, Y., Okada, H. Reaction of glutaraldehyde with amino and thiol compounds. Journal of Fermentation and Bioengineering. 71, (1991).
  18. Bahr, G. Osmium tetroxide and ruthenium tetroxide and their reactions with biologically important substances: electron stains III. Experimental Cell Research. , (1954).
  19. Khan, A. A., Riemersma, J. C., Booij, H. L. The reactions of osmium tetroxide with lipids and other compounds. Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 9, 560-563 (1961).
  20. Riemersma, J. Osmium tetroxide fixation of lipids for electron microscopy a possible reaction mechanism. Biochimica et Biophysica Acta. 152, (1968).
  21. Mikula, S., Binding, J., Denk, W. Staining and embedding the whole mouse brain for electron microscopy. Nature Methods. 9, 1198-1201 (2012).
  22. Mikula, S., Denk, W. High-resolution whole-brain staining for electron microscopic circuit reconstruction. Nature Methods. 12, 541-546 (2015).
  23. Crespigny, A., et al. 3D micro-CT imaging of the postmortem brain. Journal of Neuroscience Methods. 171, 207-213 (2008).
  24. Anderson, R., Maga, A. A novel procedure for rapid imaging of adult mouse brains with MicroCT using Iodine-Based contrast. PLoS One. 10, 0142974 (2015).
  25. Zhou, Z., et al. Cerebral cavernous malformations arise from endothelial gain of MEKK3-KLF2/4 signalling. Nature. 532, 122-126 (2016).
  26. Choi, J., et al. Micro-CT imaging reveals mekk3 heterozygosity prevents cerebral cavernous malformations in Ccm2-Deficient mice. PloS One. 11, 0160833 (2016).
  27. Choi, J., Yang, X., Foley, M., Wang, X., Zheng, X. Induction and Micro-CT imaging of cerebral cavernous malformations in mouse model. Journal of Visualized Experiments. , (2017).
  28. Benveniste, H., Kim, K., Zhang, L., Johnson, G. Magnetic resonance microscopy of the C57BL mouse brain. Neuroimage. 11, 601-611 (2000).
  29. Weninger, W. J., et al. High-resolution episcopic microscopy: a rapid technique for high detailed 3D analysis of gene activity in the context of tissue architecture and morphology. Anat Embryol. 211, 213-221 (2006).
  30. Schneider, J. E., et al. high-throughput magnetic paragraph sign resonance imaging of mouse embryonic paragraph sign anatomy using a fast gradient-echo sequence. MAGMA. 16, 43-51 (2003).
  31. Sharpe, J. Optical projection tomography. Annual Review of Biomedical Engineering. 6, 209-228 (2004).
  32. Cox, D. D., Papanastassiou, A., Oreper, D., Andken, B., James, D. High-Resolution Three-Dimensional microelectrode brain mapping using stereo microfocal x-ray imaging. Journal of Neurophysiology. 100, 2966-2976 (2008).
  33. Borg, J. S., et al. Localization of metal electrodes in the intact rat brain using registration of 3D microcomputed tomography images to a magnetic resonance histology atlas. eNeuro. 2, (2015).
  34. Fu, T. -. M., et al. Stable long-term chronic brain mapping at the single-neuron level. Nature Methods. 13, 875-882 (2016).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

141

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved