JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تستخدم نظم الاستزراع متعدد خطوة، نحن تقرير خلية بفي المختبر إلى خلية البلازما تمايز النموذجي.

Abstract

تفرز كميات كبيرة من الأجسام المضادة خلايا البلازما (أجهزة الكمبيوتر) وتطوير من الخلايا ب أنه قد تم تنشيط. أجهزة الكمبيوتر هي نادرة الخلايا الموجودة في نخاع العظام أو الغشاء المخاطي وضمان حصانة humoral. نظراً لتردد منخفض والموقع، دراسة لأجهزة الكمبيوتر من الصعب في الإنسان. أبلغنا أ ب للكمبيوتر نموذج التمايز في المختبر باستخدام مجموعات مختارة من الجزيئات السيتوكينات والتنشيط التي تسمح بإعادة إنتاج التمايز الخلية متسلسلة تحدث المجراة في. في هذا النموذج في المختبر، ذاكرة الخلايا ب (MBCs) سوف تفرق في ما قبل بلاسمابلاستس (بريببس)، بلاسمابلاستس (PBs)، أوائل أجهزة الكمبيوتر، وأخيراً، إلى المعمرة أجهزة الكمبيوتر، مع النمط الظاهري إغلاق لنظرائهم في الأشخاص الأصحاء. بنينا المعلوماتية الحيوية وصول مفتوح أيضا أدوات لتحليل المعلومات الأكثر بروزا من جيب البيانات المتصلة بالتمييز بين أجهزة الكمبيوتر. يمكن استخدام هذه الموارد لدراسة ب البشرية إلى التمييز بين أجهزة الكمبيوتر، وفي الدراسة الحالية، ونحن التحقيق في تنظيم التعبير الجيني عوامل جينية خلال ب البشرية إلى التمييز بين أجهزة الكمبيوتر.

Introduction

التفريق بين الخلايا ب إلى خلايا البلازما (أجهزة كمبيوتر) ضروري للحصانة humoral وحماية البلد المضيف ضد العدوى1. ب للكمبيوتر التمايز يرتبط بتغييرات كبيرة في قدرات النسخ والايض لاستيعاب لإفراز الأجسام المضادة. وقد درست عوامل النسخ التي تتحكم ب للتمايز الكمبيوتر على نطاق واسع وكشف شبكات الحصرية بما في ذلك النسخ المحددة ب والكمبيوتر عوامل (TFs)2. في الخلايا ب، وهي PAX5، و BCL6، و BACH2 TFs أولياء الأمور من الخلية بهويه2،3. سوف إخماد جينات الخلية بتحريض IRF4، PRDM1 ترميز BLIMP1 و XBP1 PC TF وحمل منسقة إفراز جسم خلية برنامج النسخي3،4،5. هذه التغييرات النسخي منسقة ترتبط بتفعيل النسخ الجينات Ig جنبا إلى جنب مع التحول من شكل غشاء زمنياً بشكل يفرز الغلوبولين المناعي السلسلة الثقيلة2،3، 4-ب إلى التمايز الكمبيوتر مرتبط بتحريض المورثات المشتركة في هيولى ووظائف المتزامن مع تنشيط استجابة (الاستعراض) البروتين تكشفت المعروفة للعب دور رئيسي في جهاز الكمبيوتر باستيعاب التوليف جهاز غولجي ويفرز المناعية6،7. TF XBP1 يلعب دوراً رئيسيا في هذا التكيف الخلوي8،،من910.

ب خلايا وأجهزة الكمبيوتر هي الجهات الفاعلة الرئيسية من الحصانة humoral. فهم البيولوجية العمليات التي تتحكم في الإنتاج وبقاء خلايا البلازما العادية أمر حاسم في التدخلات العلاجية التي بحاجة إلى ضمان فعالية الاستجابات المناعية ومنع المناعة الذاتية أو نقص المناعة. أجهزة الكمبيوتر هي خلايا نادرة مع التمايز المراحل المبكرة التي تجري في المواقع التشريحية التي تعوق توصيف كامل البيولوجية، وبخاصة في الإنسان. تستخدم نظم الاستزراع متعدد خطوة، أبلغنا ب في المختبر نموذج التمايز PC. يستنسخ هذا النموذج بتمايز الخلية متسلسلة والنضج التي تحدث في أجهزة مختلفة في الجسم الحي11،،من1213. في خطوة أولى، يتم تنشيط أولاً لمدة أربعة أيام قبل تركيبة يجند وأوليجوديوكسينوكليوتيديس وسيتوكين CD40 خلايا الذاكرة ب وتفرق في بريبلاسمابلاستس (بريببس). في خطوة ثانية، هي التي يسببها بريبلاسمابلاستس تفرق في بلاسمابلاستس (PBs) عن طريق إزالة التحفيز CD40L وأوليجوديوكسينوكليوتيديس وتغيير تركيبة سيتوكين. في خطوة ثالثة، هي التي يسببها بلاسمابلاستس تفرق في أوائل أجهزة الكمبيوتر عن طريق تغيير تركيبة سيتوكين11،12. خطوة الرابعة وقدم للحصول على أجهزة الكمبيوتر ناضجة تماما باستزراع هذه أجهزة مبكرة مع نخاع العظام الخلايا اللحمية مكيفة المتوسطة أو تحديد عوامل النمو13. أجهزة الكمبيوتر هذه ناضجة يمكن البقاء على قيد الحياة منذ عدة أشهر في المختبر وإفراز كميات عالية من الغلوبولين المناعي (الشكل 1). من المثير للاهتمام، ولدينا نموذج في المختبر يجمل التغييرات النسخي المنسقة وفي النمط الظاهري ب مختلف مراحل الكمبيوتر التي يمكن أن يكون تم اكتشافها في المجراة11،،من1213،14 ،15. أجهزة الكمبيوتر هي الخلايا النادرة ونموذجنا التمايز في المختبر يسمح للدراسة ب البشرية إلى التمايز PC.

Protocol

البروتوكول يتبع المبادئ التوجيهية وفقا "إعلان هلسنكي" واتفاق مركز مستشفى جامعة مونبلييه "الموارد البيولوجية".

1-في المختبر عادي خلية البلازما تمايز النموذجي

ملاحظة: يتم تكوين أجهزة الكمبيوتر من خلال ثقافة أربع خطوات11،،من1213.

  1. خلية بالتضخيم والتمايز
    1. استخدام خلايا الدم المحيطية من المتطوعين صحية للذاكرة تنقية الخلية ب.
    2. تمييع 7.5 مل دم مع مل 24.5 في المتوسط RPMI 1640.
    3. إضافة 12.5 مل من درجة حرارة الغرفة الكثافة المتدرجة (مثلاً، فيكول) إلى أنبوب مخروطي عقيمة 50 مل. تراكب التدرج الكثافة مع 32 مل الدم المخفف بلطف. تقليل الخلط بين المرحلتين.
    4. الطرد المركزي 20 دقيقة في 500 x ز مع الفرامل قبالة. جمع في ببمكس من واجهة التدرج/كثافة البلازما المخفف ومكان الخلايا في أنبوب عقيم 50 مل وإكمال إلى 45 مل مع الحل هانك الملح المتوازن.
    5. الطرد المركزي الخلايا لمدة 5 دقائق في 500 x ز. بعناية إزالة المادة طافية وإبقاء بيليه.
    6. إضافة 45 مل من مصل العجل الجنين RPMI1640/10% (FCS) وأجهزة الطرد المركزي 5 دقائق في 500 x ز. بعناية إزالة المادة طافية وإبقاء بيليه. إضافة 30 مل السفح PBS/2%.
    7. إزالة CD2 + الخلايا باستخدام الخرز المغناطيسية المضادة-CD2. إضافة 4 حبات للخلية الهدف واحد. احتضان 30 دقيقة في 4 درجات مئوية.
      1. خلايا منفصلة زمنياً حبة من الخلايا غير منضم باستخدام مغناطيس لتطبيق الفصل بين الخلية. جمع الخلايا غير منضم واحتضان بيليه الخلية مع مكافحة CD19 APC ومكافحة CD27 PE الأجسام المضادة لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية (2 ميليلتر من جسم 106 خلايا).
      2. تغسل مرتين في مصل الماعز PBS/10%.
      3. إزالة تلويث الأحداث في مؤامرات منتدى التعاون الأمني والتعاون بين بلدان الجنوب على حد سواء. ارسم نوع في منتدى التعاون الأمني-أ مقابل مقابل ح منتدى التعاون الأمني والتعاون بين بلدان الجنوب-أ ح ال SSC مؤامرات لإزالة الحطام وتحديد السكان مجموع الكريات البيض. حدد خلايا الذاكرة ب CD19/CD27 و CD19+CD27+.
      4. تنقية MBCs باستخدام أرز خلية بدرجة نقاء 95%.
    8. تنفيذ كافة الخطوات ثقافة استخدام FCS إيمدم و 10 في المائة، وتستكمل مع 50 ملغم/مل البشرية ترانسفيرين و 5 ملغ/مل الأنسولين البشري.
    9. لوحة تنقية MBCs في الثقافة جيدا ست لوحات (1.5 × 105 مليلتر MBCs في 5 مل/جيد)، لمدة 4 أيام، مع إيل-2 (يو 20/mL)، إيل-10 (50 نانوغرام/مل)، وايل-15 (10 نانوغرام/مل).
      1. إضافة فوسفوروثيواتي البد ODN 2006، معلم الحامض الأميني الماشوب البشري قابل للذوبان CD40L (sCD40L؛ 50 نانوغرام/مل) ومكافحة بوليهيستيديني ماب (5 ملغ/مل) للتنشيط MBCs (الشكل 1). التنشيط بواسطة sCD40L أو ODN مع محصول كوكتيل سيتوكين نفسه إلى انخفاض التضخيم12فقط. مزيج إشارات التنشيط الموصوفة هنا المحتوى على الرصاص للحد الأقصى لعدد تنشيط خلايا ب وبريببس11،12 (الشكل 1).
      2. للتنميط التعبير الجيني، تنقية CD38/CD20–– بريببس، في يوم 4، باستخدام أرز خلية (الشكل 2).
  2. جيل خلية بلاسمابلاستيك
    1. في يوم 4، عد الخلايا.
    2. لوحة خلايا في لوحات الثقافة 12-جيدا في 2.5 × 105/mL في 2 مل/جيدا.
    3. يحفز التمايز بإزالة النوكليوتيد CpG و sCD40L وإضافة وسيلة ثقافة جديدة مع سيتوكين جديد كوكتيل بما في ذلك إيل-2 (يو 20/mL)، إيل-6 (50 نانوغرام/مل)، إيل-10 (50 نانوغرام/مل)، وايل-15 (10 نانوغرام/مل) (الشكل 1). خلايا الثقافة لمدة 3 أيام (من يوم 4 إلى يوم 7) عند 37 درجة مئوية.
    4. للتنميط التعبير الجيني، تنقية CD38+/CD20– برنامج تلفزيوني، في يوم 7، استخدام أرز خلية (الشكل 2).
  3. بداية الخلية البلازمية جيل
    1. في يوم 7، عد الخلايا.
    2. لوحة خلايا في لوحات الثقافة 12-جيدا في/mL 5 × 105في 2 مل/حسنا.
    3. التفريق بين الجريدة الرسمية في أوائل أجهزة الكمبيوتر باستخدام الطازجة الثقافة المتوسطة مع إيل-6 (50 نانوغرام/مل)، إيل-15 (10 نانوغرام/مل) و IFN-α (500 U/mL) لمدة 3 أيام في 37 درجة مئوية. للتنميط التعبير الجيني، تنقية CD20/CD38–+/CD138+ أجهزة المبكر، في يوم 10، استخدام أرز خلية (الشكل 2).
  4. جيل المعمرة بلازما الخلية
    1. التفريق بين "أوائل أجهزة الكمبيوتر" إلى أجهزة الكمبيوتر عاش فترة طويلة بتغيير شروط الثقافة.
    2. الثقافة الخلايا في لوحات الثقافة 12-جيدا في/mL 5 × 105في 2 مل/استخدام خلية stromal وايل-6 مكيفة جيدا أو في لوحات الثقافة 24-جيدا في 1 مل/أيضا على 37 درجة مئوية، المتوسطة ونيسان/أبريل (200 نانوغرام/ملليلتر).
    3. الحصول على stromal المتوسطة مكيفة الخلية باستزراع الخلايا اللحمية لمدة 5 أيام مع الثقافة المتوسطة. تصفية طافية ثقافة الخلية stromal (0.2 ميكرون) وتجميدها.
    4. إضافة 50% من stromal مكيفة خلية الإعلام للثقافات PC مع تجديد كل أسبوع. يمكن الإبقاء على أجهزة الكمبيوتر المعمرة التي تم إنشاؤها لأشهر13. ويمكن الحصول على البقاء مدة طويلة لأجهزة الكمبيوتر مع إيل-6 ونيسان/أبريل فقط كما ذكرت13.
    5. فرز إفراز Ig قياس التدفق الخلوي من أجهزة الكمبيوتر.
    6. أجهزة الثقافة في 106 خلايا/مل ح 24 وحصاد الثقافة طافية. قياس مفتش وايغا استخدام الإنسان المرتبط بالانزيم المرتبط بالانزيم (إليزا) مجموعات11،12،13. متوسط إفراز مفتش تراوحت بين 10 بيكوغرام/خلية/يوم في يوم 10 إلى 17 جزء من الغرام/خلية/يوم في اليوم 6013.

2-الجزيئية أطلس ب للتمايز PC

ملاحظة: وبنينا وصول مريحة وفتح أدوات المعلوماتية الحيوية لاستخراج وتصور المعلومات الأكثر بروزا من جيب Affymetrix البيانات المتصلة بالكمبيوتر التمايز (جينوميكسكابي)15. جيب متاحة علنا من قاعدة البيانات أرراييكسبريس (http://www.ebi.ac.uk/arrayexpress/)، بما في ذلك تنقية MBCs، بريببس، وبرنامج تلفزيوني وابكس: ه-MTAB-1771، ه-ميكسب-2360 و14،ه-ميكسب-3034 وعطاءات ه-ميكسب-236015. جينوميكسكابي ويبتول متاحة بحرية.

  1. تحديد ب إلى PC dataset
    1. حدد ب إلى dataset الكمبيوتر في قائمة استعراض البيانات في الوصول المفتوح جينوميكسكابي بيوينفورماتيك أداة (http://www.genomicscape.com) تسمى الخلايا "البشرية ب" إلى خلايا البلازما. التصور للشخصية التعبير الجيني للجينات الفريدة أو قائمة بالجينات متاح باستخدام أداة التقرير التعبير-كوكسبريشن في أدوات التحليل المتاحة في الصفحة الرئيسية.
  2. تحليل تحت إشراف وتحليل المكونات الرئيسية (PCA)
    1. حدد "أدوات التحليل" | ويبسام لتحميل الأداة سام.
    2. اختر dataset الخلايا "البشرية ب" إلى خلايا البلازما وتحديد مجموعات العينات للمقارنة.
    3. استخدام عوامل التصفية المختلفة المتاحة لتطبيق خيارات التصفية للفائدة.
    4. لمقارنة ملامح التعبير الجيني مع أداة سام، قم بتعديل خيارات التصفية بما في ذلك حظيرة التغيير، عدد التباديل، معدل اكتشاف كاذبة والنوع من المقارنة. جينوميكسكابي سوف تحسب التحليل وتقديم الجينات أعرب متفاوتاً بين المجموعات المحددة.
    5. تشغيل تحليل المكونات الرئيسية عن طريق تحديد تحليل العنصر الرئيسي في القائمة أدوات التحليل .
    6. اختر dataset الخلايا "البشرية ب" إلى خلايا البلازما وحدد المجموعات ذات الاهتمام.
    7. قم بلصق قائمة جينات فائدة أو تحديد الجينات وفقا للفرق. للصق قائمة بالجينات، وحدد جينوميكسكابي لتحليل قائمة بالجينات/نكرناس، انقر هنا... سوف تحسب محكمة التحكيم الدائمة التي يمكن أن تصور وتحميلها.

النتائج

ويمثل الإجراء العام للتمايز الكمبيوتر العادي في المختبر في الشكل 1. باستخدام بروتوكول المعروضة هنا، ونحن يمكن أن تولد كمية كافية من الخلايا التي لا يمكن الحصول عليها مع السابقين فيفو العينات البشرية. على الرغم من أن قد تم التحقيق دور الشبكة المعقدة من عوا...

Discussion

في الإنسان، جهاز كمبيوتر هي خلايا نادرة مع مراحل التمايز تجري في الأماكن التشريحية التي تعوق توصيف كامل البيولوجية. وقد وضعنا ب في المختبر لنموذج التمايز الكمبيوتر باستخدام نظم الاستزراع متعدد خطوة حيث يتم بعد ذلك تطبيق تركيبات مختلفة من السيتوكينات وجزيئات التنشيط بغية إعادة إنتاج الت?...

Disclosures

الكتاب لا تمت بصلة إلى الكشف عن

Acknowledgements

بتأييد هذا العمل بمنح من "الإنكا الفرنسية" (المعهد الوطني للسرطان دو) معهد (PLBIO15-256) ووكالة الاستخبارات الوطنية (التعادل-تخطي) وسرطان إيتمو (ملم وترينيداد وتوباغو).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
anti-CD2 magnetic beadsInvitrogen11159D
Anti-CD138-APCBeckman-Coulter B49219
Anti-CD19-APCBD555415
Anti-CD20-PBBeckman-Coulter B49208
Anti-CD27-PEBD555441
Anti-CD38-PEBeckman-Coulter A07779
Anti-histidineR&D SystemsMAB050
CpG ODN(PT)SigmaT*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*
G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T
human TransferinSigma-AldrichT3309
IFN-αMerckIntron A
IMDMGibco31980-022
Recombinan Human CD40L-hiR&D Systems2706-CL
Recombinant Human APRILR&D Systems5860-AP-010
Recombinant Human IL-10R&D Systems217-IL-
Recombinant Human IL-15Peprotech200-15-10ug
Recombinant Human IL-2 ProteinR&D Systems202-IL-
Recombinant Human IL-6Peprotech200-06

References

  1. Shapiro-Shelef, M., Calame, K. Regulation of plasma-cell development. Nature Reviews Immunology. 5 (3), 230-242 (2005).
  2. Nutt, S. L., Hodgkin, P. D., Tarlinton, D. M., Corcoran, L. M. The generation of antibody-secreting plasma cells. Nature Reviews Immunology. 15 (3), 160-171 (2015).
  3. Shaffer, A. L., et al. Blimp-1 orchestrates plasma cell differentiation by extinguishing the mature B cell gene expression program. Immunity. 17 (1), 51-62 (2002).
  4. Minnich, M., et al. Multifunctional role of the transcription factor Blimp-1 in coordinating plasma cell differentiation. Nature Immunology. 17 (3), 331-343 (2016).
  5. Klein, U., et al. Transcription factor IRF4 controls plasma cell differentiation and class-switch recombination. Nature Immunology. 7 (7), 773-782 (2006).
  6. Gass, J. N., Gunn, K. E., Sriburi, R., Brewer, J. W. Stressed-out B cells? Plasma-cell differentiation and the unfolded protein response. Trends in Immunology. 25 (1), 17-24 (2004).
  7. Goldfinger, M., Shmuel, M., Benhamron, S., Tirosh, B. Protein synthesis in plasma cells is regulated by crosstalk between endoplasmic reticulum stress and mTOR signaling. European Journal of Immunology. 41 (2), 491-502 (2011).
  8. Yoshida, H., Matsui, T., Yamamoto, A., Okada, T., Mori, K. XBP1 mRNA is induced by ATF6 and spliced by IRE1 in response to ER stress to produce a highly active transcription factor. Cell. 107 (7), 881-891 (2001).
  9. Shaffer, A. L., et al. XBP1, downstream of Blimp-1, expands the secretory apparatus and other organelles, and increases protein synthesis in plasma cell differentiation. Immunity. 21 (1), 81-93 (2004).
  10. Reimold, A. M., et al. Plasma cell differentiation requires the transcription factor XBP-1. Nature. 412 (6844), 300-307 (2001).
  11. Jourdan, M., et al. Characterization of a transitional preplasmablast population in the process of human B cell to plasma cell differentiation. Journal of Immunology. 187 (8), 3931-3941 (2011).
  12. Jourdan, M., et al. An in vitro model of differentiation of memory B cells into plasmablasts and plasma cells including detailed phenotypic and molecular characterization. Blood. 114 (25), 5173-5181 (2009).
  13. Jourdan, M., et al. IL-6 supports the generation of human long-lived plasma cells in combination with either APRIL or stromal cell-soluble factors. Leukemia. , (2014).
  14. Kassambara, A., et al. Global miRNA expression analysis identifies novel key regulators of plasma cell differentiation and malignant plasma cell. Nucleic Acids Research. 45 (10), 5639-5652 (2017).
  15. Kassambara, A., et al. GenomicScape: an easy-to-use web tool for gene expression data analysis. Application to investigate the molecular events in the differentiation of B cells into plasma cells. PLOS Computational Biology. 11 (1), 1004077 (2015).
  16. Miremadi, A., Oestergaard, M. Z., Pharoah, P. D., Caldas, C. Cancer genetics of epigenetic genes. Human Molecular Genetics. 16, 28-49 (2007).
  17. Pei, H., et al. The histone methyltransferase MMSET regulates class switch recombination. Journal of Immunology. 190 (2), 756-763 (2013).
  18. Le Gallou, S., et al. IL-2 requirement for human plasma cell generation: coupling differentiation and proliferation by enhancing MAPK-ERK signaling. Journal of Immunology. 189 (1), 161-173 (2012).
  19. Cocco, M., et al. In vitro generation of long-lived human plasma cells. Journal of Immunology. 189 (12), 5773-5785 (2012).
  20. Leung-Hagesteijn, C., et al. Xbp1s-negative tumor B cells and pre-plasmablasts mediate therapeutic proteasome inhibitor resistance in multiple myeloma. Cancer Cell. 24 (3), 289-304 (2013).
  21. Orlowski, R. Z. Why proteasome inhibitors cannot ERADicate multiple myeloma. Cancer Cell. 24 (3), 275-277 (2013).
  22. Ding, B. B., Bi, E., Chen, H., Yu, J. J., Ye, B. H. IL-21 and CD40L synergistically promote plasma cell differentiation through upregulation of Blimp-1 in human B cells. Journal of Immunology. 190 (4), 1827-1836 (2013).
  23. Tsai, C. M., et al. Galectin-1 promotes immunoglobulin production during plasma cell differentiation. Journal of Immunology. 181 (7), 4570-4579 (2008).
  24. Tsai, C. M., et al. Galectin-1 and galectin-8 have redundant roles in promoting plasma cell formation. Journal of Immunology. 187 (4), 1643-1652 (2011).
  25. Anginot, A., Espeli, M., Chasson, L., Mancini, S. J., Schiff, C. Galectin 1 modulates plasma cell homeostasis and regulates the humoral immune response. Journal of Immunology. 190 (11), 5526-5533 (2013).
  26. Belnoue, E., et al. Homing and adhesion patterns determine the cellular composition of the bone marrow plasma cell niche. Journal of Immunology. 188 (3), 1283-1291 (2012).
  27. Belnoue, E., et al. APRIL is critical for plasmablast survival in the bone marrow and poorly expressed by early-life bone marrow stromal cells. Blood. 111 (5), 2755-2764 (2008).
  28. Huard, B., et al. APRIL secreted by neutrophils binds to heparan sulfate proteoglycans to create plasma cell niches in human mucosa. Journal of Clinical Investigation. 118 (8), 2887-2895 (2008).
  29. Ame-Thomas, P., et al. Human mesenchymal stem cells isolated from bone marrow and lymphoid organs support tumor B-cell growth: role of stromal cells in follicular lymphoma pathogenesis. Blood. 109 (2), 693-702 (2007).
  30. Ramachandrareddy, H., et al. BCL6 promoter interacts with far upstream sequences with greatly enhanced activating histone modifications in germinal center B cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (26), 11930-11935 (2010).
  31. Li, G., Zan, H., Xu, Z., Casali, P. Epigenetics of the antibody response. Trends in Immunology. 34 (9), 460-470 (2013).
  32. Miles, R. R., Crockett, D. K., Lim, M. S., Elenitoba-Johnson, K. S. Analysis of BCL6-interacting proteins by tandem mass spectrometry. Molecular & Cellular Proteomics. 4 (12), 1898-1909 (2005).
  33. McManus, S., et al. The transcription factor Pax5 regulates its target genes by recruiting chromatin-modifying proteins in committed B cells. The EMBO Journal. 30 (12), 2388-2404 (2011).
  34. Ahmadnejad, M., et al. Elevated expression of DNMT1 is associated with increased expansion and proliferation of hematopoietic stem cells co-cultured with human MSCs. Blood Research. 52 (1), 25-30 (2017).
  35. Beguelin, W., et al. EZH2 is required for germinal center formation and somatic EZH2 mutations promote lymphoid transformation. Cancer Cell. 23 (5), 677-692 (2013).
  36. Herviou, L., Cavalli, G., Cartron, G., Klein, B., Moreaux, J. EZH2 in normal hematopoiesis and hematological malignancies. Oncotarget. 7 (3), 2284-2296 (2016).
  37. Beguelin, W., et al. EZH2 enables germinal centre formation through epigenetic silencing of CDKN1A and an Rb-E2F1 feedback loop. Nature Communications. 8 (1), 877 (2017).
  38. Herviou, L., et al. PRC2 targeting is a therapeutic strategy for EZ score defined high-risk multiple myeloma patients and overcome resistance to IMiDs. Clinical Epigenetics. 10 (1), 121 (2018).
  39. Asangani, I. A., et al. Characterization of the EZH2-MMSET histone methyltransferase regulatory axis in cancer. Molecular Cell. 49 (1), 80-93 (2013).
  40. Pei, H., et al. MMSET regulates histone H4K20 methylation and 53BP1 accumulation at DNA damage sites. Nature. 470 (7332), 124-128 (2011).
  41. Cui, J., et al. EHMT2 inhibitor BIX-01294 induces apoptosis through PMAIP1-USP9X-MCL1 axis in human bladder cancer cells. Cancer Cell International. 15 (1), 4 (2015).
  42. Santo, L., et al. Preclinical activity, pharmacodynamic, and pharmacokinetic properties of a selective HDAC6 inhibitor, ACY-1215, in combination with bortezomib in multiple myeloma. Blood. 119 (11), 2579-2589 (2012).
  43. Amengual, J. E., et al. Dual Targeting of Protein Degradation Pathways with the Selective HDAC6 Inhibitor ACY-1215 and Bortezomib Is Synergistic in Lymphoma. Clinical Cancer Research. 21 (20), 4663-4675 (2015).
  44. Schoenhals, M., et al. Forced KLF4 expression increases the generation of mature plasma cells and uncovers a network linked with plasma cell stage. Cell Cycle. 15 (14), 1919-1928 (2016).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

143

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved