تقنيات زراعة الكلب في الحيوانات الكبيرة والصغيرة

Summary

والهدف من هذا البروتوكول هو إظهار تقنيات المحاصيل المأمونة في الحيوانات الصغيرة والكبيرة للحصول على عينات مرضية من الأنسجة لاختبار داء الكلب.

Abstract

يتلقى مختبر داء الكلب التابع لوزارة الصحة في ولاية نيويورك ما بين 6000 و9000 عينة سنوياً، ويجري اختبار داء الكلب في الولاية بأكملها، باستثناء مدينة نيويورك. مختبر داء الكلب necropsies مجموعة متنوعة من الحيوانات تتراوح في الحجم من الخفافيش إلى bovids. معظم هذه العينات هي الحيوانات التي تظهر علامات عصبية، ومع ذلك، أقل من 10٪ اختبار إيجابي فعلا لداء الكلب. مما يعني الصدمة، والآفات أو غيرها من العوامل المعدية كسبب لهذه الأعراض. بسبب خطر الهباء الجوي العوامل المعدية غير المشخصة، لا يستخدم مختبر داء الكلب أدوات الطاقة أو المناشير. وسيتم تقديم ثلاث تقنيات necropsy للالحيوانات التي لا يمكن اختراق جماجمها مع مقص. وقد نفذ المختبر هذه التقنيات للحد من التعرض المحتمل للعوامل المعدية، والقضاء على التلاعب غير الضروري في العينة وتقليل وقت المعالجة. مزايا تقنية مفضلة مقابل أخرى تخضع للفردي المدرب معالجة العينة.

Introduction

إن العمل على أرضية مختبر داء الكلب أمر خطير بطبيعته. في بعض الأحيان، تصل العينات مع ريش porcupine جزءا لا يتجزأ، والأجسام الغريبة بما في ذلك الأسهم / الرصاص / الكريات أو شظايا العظام المكشوفة التي قد تخترق التفاف الشحن واقية. التعبئة والتغليف غير لائق يمكن أن يؤدي إلى تسرب، مما يعرض للخطر الأفراد الذين فك العينات. وبالإضافة إلى الإصابة البدنية، فإن فنيي المحاصيل النيكروبية يتعرضون لخطر التعرض لعوامل معدية حيوانية غير معروفة من الجهاز العصبي الوطني وسوائل الجسم في العينات. بالإضافة إلى ذلك ، قد تنقل الطفيليات الخارجية التي تحملها العينة أمراضًا حيوانية أخرى ، حيث يُنظر إلى البراغيث والقراد عادة ً على الحيوانات المقدمة. وحسب الموقع الجغرافي والأنواع التي تنطوي عليها الأمراض المعرضة تختلف. فيروسات الأربو، مثل فيروس التهاب الدماغ في الفروسية الشرقية (EEEV) أو فيروس غرب النيل (WNV)، والأمراض المنقولة بالقراد بما في ذلك مرض لايم أو التولاريميا، والبكتيريا المسببة لحم ضفية السل أو السل، وprions المعدية اسم عدد صغير من المخاطر المحتملة^{1 , 2 , 3}.

والغرض من هذه الأساليب هو إظهار تقنيات المحاصيل الآمنة والفعالة باستخدام الأدوات التي تقلل إلى أدنى حد من إمكانية الهباء الجوي على عكس أدوات الطاقة أو المناشير⁴و5. عادة ، فإن المحاصيل من الحيوانات الصغيرة في مختبر داء الكلب يتطلب قطع العضلات القحفية واستخدام مطرقة وإزميل لفتح الجزء الظهري الكنوع من calvarium⁶. إزالة هذه المنطقة من calvarium يكشف الدماغ الخلفي، بما في ذلك المخيخ بأكمله وجذع الدماغ القحفي. يمكن إجراء تقنيات المحاصيل النازرة المعدلة على الجزء البطني من الجمجمة، وتجنب العضلات القحفية الكبيرة والمناطق الأكثر سمكا من الجمجمة. ومع ذلك، فإن هذه التقنيات النيوروبسية المعدلة لا يمكن إلا عندما تكون العينة بدون فقرات عنق الرحم.

وبالمثل ، يمكن إزالة أنسجة الدماغ في الحيوانات الكبيرة عن طريق فصل العضلات القحفية وفتح الجزء الظهري الصددي من الجمجمة⁷. ويلزم بذل جهد كبير لفضح المخيخ وجذع الدماغ حيث أن جماجم الحيوانات الأكبر حجما ً هي عموماً أكثر سمكاً. لتجنب اختراق الجمجمة ، يتم وضع رأس الحيوان الكبير بحيث يواجه الجزء الفينتو-كودال من الجمجمة الفني. باستخدام الأدوات المعدلة، تتم إزالة المخيخ وجذع الدماغ من خلال ماغنوم اللبو. وهذا يشبه طريقة اكتساب العينة التي أوصى بها مختبر الاتحاد الأوروبي المرجعي TSE لتحقيقات اعتلال الدماغ الاسفنجي (TSE) المنقولة⁸. يجب إزالة الفقرات القحفية مسبقاً لتوفير الوصول إلى ماغنوم اللبو.

وتطبيق هذه التقنيات مفيد للفنيين المدربين تدريبا مناسبا في مختبرات داء الكلب. كما يتلقى مختبر داء الكلب عينات من مختلف الأحجام، من الخفافيش الأحداث إلى الكبار مشروع الخيول^9،والفني لديه عدة طرق للاختيار من بينها على أساس الظروف الفردية. كما أن الطريقة المثبتة لحيواني كبير مناسبة أيضاً للأطباء البيطريين الذين يقومون بزراعة النيبروفيات في الميدان، حيث أن شحن رأس حيواني كبير بالكامل لاختبار داء الكلب أمر مرهق ومكلف. ومن خلال تنفيذ أي من هذه التقنيات، سيؤدي ذلك إلى تحسين السلامة عن طريق تقليل إمكانات إنتاج الهباء الجوي، وتقليل مناولة العينة، وتوفير وقت المعالجة. ومع ذلك، وبما أن الحقل لا يتمتع بنفس المزايا التي يتمتع بها المختبر الذي أنشئ خصيصاً لاختبار داء الكلب، فمن الضروري أن تركز أي تعديلات تُدخلت على هذه الإجراءات على السلامة، ولا سيما استخدام معدات الحماية الشخصية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

تمت الموافقة على جميع الطرق الموصوفة من قبل لجنة الرعاية والاستخدام المؤسسية للحيوانية التابعة لمركز وادسوورث (IACUC).

1- الإعداد

1. دون PPE، في الحد الأدنى لحماية العين (النظارات أو درع الوجه)، وقناع الجراحية أو N-95، والقفازات غير اللاتكس.
2. إعداد منطقة العمل، من الناحية المثالية مجلس الوزراء السلامة الحيوية (BSC)، مع سطح العمل المتاح تغطية(على سبيل المثال، ورق الكرافت أو منصات ماصة) والأدوات necropsy نظيفة (الشكل 1).
3. وضع العينة على سطح العمل واستخدام الأدوات للتلاعب بها لتقييم حالة العينة بما في ذلك الأدلة على التحلل، والأضرار التي لحقت الجمجمة، والمخاطر المحتملة (على سبيل المثال، ريش porcupine، شفرات مشرط)، ونوعية قطع الرأس.

2. طريقة البطني

ملاحظة: عندما يتم قطع رأس العينة بشكل صحيح في خط الفك، سيتم الكشف عن ماغنوم الفورامن وcondyle القذالي. الطريقة البطنية أقل تعقيدا لاسترداد المخيخ وجذع الدماغ.

1. وضع العينة مع الجانب البطني حتى والأنف توجيه غير محالة نحو الجزء الخلفي من BSC.
2. عقد مطرقة العظام / مطرقة في اليد اليمنى (إذا اليد اليمنى) وفي الوقت نفسه عقد إزميل أعضاء المجلس في اليد اليسرى.
3. ضع الإزميل في زاوية 45 درجة مع نقطة زاوية الإزميل توجيه بين الجانب الأيمن من العظام الزمنية والعظام القذالي مما يجعل فتح "V".
4. ضرب الجزء العلوي من إزميل مع المطرقة حتى العظام اثنين منفصلة. جعل قطع إلى المتاخمة للعظام أساسالفيني.
5. كرر على الجانب الأيسر من العظام الزمنية / العظام القذالي (الشكل2A).
6. ثني منطقة "V" من الجمجمة إلى الأسفل مع إزميل. كشف كامل منطقة rhombencephalon من الدماغ (المخيخ وجذع الدماغ) (الشكل2B).
7. استخرج جذع الدماغ والمخيخ بالمقص وملقط. إزالة أي قطع المتبقية من الجمجمة إذا لم الجذعية الدماغ والمخيخ لم يخرج في قطعة واحدة.

3. طريقة الظهر

ملاحظة: إذا كانت العينة لديها قطع رأس ضعيف (اللومانوم اللاظاهرة) ولا يمكن إزالة الرقبة بسهولة أثناء المحاصيل أو إذا كان يشتبه في تلف المخيخ، يجب استخدام الطريقة الظهرية.

1. وضع dorsally العينة مع الأنف توجيه غير محتفى نحو الجزء الخلفي من BSC.
2. باستخدام tenacula الورم، واستيعاب العضلات الزمنية اليسرى مع أسنان tenacula وقفل عن طريق الضغط على المقبض.
3. قطع العضلات الزمنية وصولا الى العظام مع سكين نحت حاد.
4. تدوير العينة 180 درجة مع tenacula وسكين (وليس اليد) وتكرار العملية على العضلات الزمنية المعاكسة. كشف الجمجمة.
5. ضع إزميل في زاوية 45 درجة مع نقطة زاوية الإزميل في وسط الجمجمة عند منعطف العظم الجداري والباري.
6. ضرب الجزء العلوي من إزميل مع مطرقة حتى يتم فتح أفقي على النصف العلوي من الجمجمة في العظام الجدارية.
7. تدوير العينة 180 درجة وتكرار العملية على الجانب الآخر.
8. إدراج نقطة من إزميل في نهاية قطع 1 (الشكل3A)وعلى 90 درجة من فتح أفقي. ضرب مع المطرقة حتى يصل فتحة العظام القذالي (حوالي 10 سم اعتمادا على حجم العينة).
9. لفة العينة وكرر على الجانب الآخر في نهاية قطع 2.
   ملاحظة: مع عينة الظهرية والأنف المتمركزة نحو الجزء الخلفي من BSC، فتحات في الجمجمة تشبه رأسا على عقب "U".
10. أدخل أسنان التيلاكولا في الجمجمة في الجزء السفلي من "U" ونقب نحو نفسه. فضح نهاية الكاودال من المخوّل والمخيخ (الشكل3B).
11. استخدام مقص كما مغرفة ونقب من المخيخ بأكمله من داخل التجويف.
12. استخدام ملقط الأنسجة لندف خارج الدماغ تنبع من.

4. طريقة حيوانية كبيرة

1. وضع العينة بحيث الجزء الظهري من الجمجمة على اتصال مع سطح necropsy مع الجزء الكاوي ة من الجمجمة وforamen magnum التي تواجه الفني.
2. أدخل السكين الخنجر المعدل في ماغنوم الفرجبين بين الحبل الشوكي والغضروف الشوكي قدر الإمكان.
3. النتيجة حول الحبل الشوكي لفصل المخيخ والدماغ تنبع من السحايا العمود الفقري. بعد إدخال السكين من خلال ماغنوم اللطوام، زاوية بلطف السكين لمتابعة على طول الجمجمة قدر الإمكان.
4. أدخل ملعقة كيمياء أو ملعقة رفيعة، طويلة التعامل معها في الفضاء بين الأنسجة العصبية والسحايا الشوكي.
5. التحقيق حول الحبل الشوكي والمخيخ لضمان قطع الاتصال إلى السحايا العمود الفقري.
6. عقد جذع الدماغ مع ملقط. من ناحية أخرى، تقدم ملعقة rostrally ثم dorsally لسكوب حتى المخيخ. في وقت واحد سحب مرة أخرى على جذع الدماغ مع ملقط ومغرفة من المخيخ باستخدام الملعقة.
   ملاحظة: قد يستغرق الأمر أكثر من محاولة واحدة لاستعادة المخيخ كافية لاختبار داء الكلب.

5. آخر necropsy

1. التخلص من جميع المواد التي يمكن التخلص منها (القفازات، والوسادات، وأغطية منطقة العمل) والأنسجة غير المستخدمة في النفايات الخطرة بيولوجياً.
2. تنظيف وتطهير جميع الأدوات مع طريقة المتاحة (على سبيل المثال، غسالة الصحون الصناعية، الأوتوكلاف، مطهر الكيميائية، يغلي).
3. تنظيف وتطهير جميع أسطح العمل مع التبييض 20٪ و / أو 70٪ الإيثانول.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

جميع العينات الأرضية المقدمة مع الجماجم بين 31 يناير 2019 و28 فبراير 2019 كانت لديها معلومات عن وجود الرقبة وطريقة النيوروبسي التي تم جمعها. وخلال تلك الفترة، تم زرع 170 رأساً مع تمثيل 18 نوعاً. 52% (89/170) تم قطع رأسها بشكل صحيح. أما الفقرات المتبقية فكانت مرفقة بفقرة واحدة على الأقل،...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

العينات المقدمة لداء الكلب necropsy غالبا ما يكون لها تاريخ من العلامات السريرية متوافقة مع مرض عصبي. قد يرتبط وجود المرض السريري بمجموعة متنوعة من الاضطرابات، بما في ذلك الأمراض الحيوانية، مما يزيد من خطر الإصابة بعدوى مكتسبة في المختبر على الموظفين. وللحد من هذه المخاطر، تم تنفيذ تقنيات تق?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chemistry spoon	Any
Curved, sharp-blunt mayo scissors	Sklar	14-2055	Sklar Operating Scissors 5-1/2 Inch Premium OR Grade Stainless Steel Finger Ring Handle Curved Sharp/Blunt
Large sharp restaurant-quality carving knife	Dexter	P94848	8" Scalloped Utility Knife, white handle
Locking tumor-tenacula	Diamond Scientific and Surgicals	N/A	Czerny Tenaculum Forcep
Modified stiletto knife (6.5 inch long blade carving knife ground to 0.5 inch wide)	Dexter	P94848	Modified 8" Scalloped Utility Knife, white handle
Orthopedic mallet-hammer	Mortech	N/A	Postmortem hammer with hook
Sharp councilman orthopedic bone chisel	Shandon	60-5	Councilman's Chisel Blade: 2 in x 2.25 in standard 7 in
Sharpened tablespoon or other long handled spoon	Any
Smooth-tipped tissue dressing forceps without teeth	Shandon	63-03	Shandon Broad Point Dressing Thumb Forceps
Powder-free non-latex gloves	Any
Safety glasses, goggles, or faceshield	Any
Surgery or N-95 mask	Any
Kraft paper, butcher paper, absorbent pad, etc	Any