بروتوكول لتطوير نموذج قطع عظم الفخذ في فئران ويستار ألبينو

Summary

هنا ، نقدم بروتوكولا لكسر عمود عظم الفخذ من فئران Wistar albino ومتابعة تطور الكالس. يمكن أن يساعد نموذج قطع عظم الفخذ هذا الباحثين في تقييم عملية التئام الكسور ودراسة كيفية تأثير الدواء على التئام الكسور.

Abstract

التئام الكسور هو عملية فسيولوجية تؤدي إلى تجديد عيوب العظام من خلال العمل المنسق لبانيات العظم والخلايا الآكلة للعظم. الأدوية الابتنائية العظمية لديها القدرة على زيادة إصلاح الكسور ولكن لها قيود مثل التكاليف المرتفعة أو الآثار الجانبية غير المرغوب فيها. يمكن تحديد إمكانات شفاء العظام للدواء في البداية من خلال الدراسات المختبرية ، ولكن هناك حاجة إلى دراسات في الجسم الحي للإثبات النهائي للمفهوم. كان هدفنا هو تطوير نموذج للقوارض العظمية لعظم الفخذ يمكن أن يساعد الباحثين على فهم تطور تكوين الكالس بعد كسر عمود عظم الفخذ ويمكن أن يساعد في تحديد ما إذا كان الدواء المحتمل له خصائص شفاء العظام. تم استخدام ذكور الفئران البيضاء Wistar albino البالغة بعد تصريح لجنة أخلاقيات الحيوان المؤسسية. تم تخدير القوارض ، وفي ظل ظروف معقمة ، تم إنشاء كسور عرضية كاملة في الثلث الأوسط من مهاوي عظم الفخذ باستخدام قطع العظم المفتوح. تم تقليل الكسور وإصلاحها داخليا باستخدام أسلاك K داخل النخاع ، وسمح بحدوث التئام الكسور الثانوية. بعد الجراحة ، تم إعطاء المسكنات داخل الصفاق والمضادات الحيوية لمدة 5 أيام. الأشعة السينية الأسبوعية المتسلسلة تقييم تشكيل الكالس. تم التضحية بالفئران بناء على نقاط زمنية محددة إشعاعيا مسبقا ، وتم تحليل تطور الكالس المكسور إشعاعيا وباستخدام الكيمياء المناعية.

Introduction

العظم هو نسيج ضام كثيف يتكون من الخلايا المكونة للعظام ، وبانيات العظم ، والخلايا الممتصة للعظام ، ناقضات العظم. التئام الكسور هو عملية فسيولوجية تؤدي إلى تجديد عيوب العظام من خلال العمل المنسق لبانيات العظم والخلايا الآكلة للعظم¹. عندما يكون هناك كسر ، فإن نشاط العظم العظمي والعظم العظمي في موقع الكسر هي بعض العوامل المهمة التي تحدد شفاء العظام². عندما ينحرف التئام الكسر عن مساره الطبيعي ، فإنه يؤدي إلى تأخر الاتحاد أو سوء الاتحاد أو عدم الاتحاد. يقال إن الكسر يكون في حالة عدم الاتحاد عندما يكون هناك فشل في اتحاد الكسر لمدة 9 أشهر ، مع عدم وجود تقدم في الإصلاح في آخر 3 أشهر³. ما يقرب من 10٪ -15٪ من جميع الكسور تعاني من تأخير في الإصلاح قد يتطور إلى nonunion⁴. معدل عدم الاتحاد لجميع الكسور هو 5٪ -10٪ ويختلف باختلاف العظم المعني وموقع الكسر⁵.

يشتمل النظام الحالي لعلاج عدم اتحاد الكسور على طرائق جراحية و / أو طبية. في الوقت الحالي ، يمكن التغلب على الكسور المتأخرة أو غير المنتظمة عن طريق الاستراتيجيات الجراحية مثل تطعيم العظام. ومع ذلك ، فإن تطعيم العظام له حدوده ومضاعفاته مثل توافر أنسجة الكسب غير المشروع ، وألم موقع المتبرع ، والمراضة ، والعدوى⁶. يشمل العلاج الطبي أدوية الابتنائية العظمية مثل البروتين المورفولوجي العظمي (BMP) وتيريباراتيد (نظير هرمون البارات). عوامل الابتنائية العظمية المستخدمة حاليا لديها القدرة على زيادة إصلاح الكسور ولكن لها قيود مثل التكاليف الباهظة أو الآثار الجانبية غير المرغوب فيها⁷. وبالتالي ، هناك مجال لتحديد بدائل غير جراحية فعالة من حيث التكلفة لشفاء العظام. يمكن تحديد إمكانات شفاء العظام للدواء في البداية من خلال الدراسات المختبرية ، ولكن هناك حاجة إلى دراسات في الجسم الحي للإثبات النهائي للمفهوم. يجب تقييم الدواء المعروف بتعزيز التئام العظام في المختبر ، وإذا وجد واعدا ، يمكن استخدامه في دراسات النماذج الحيوانية في الجسم الحي . إذا أثبت الدواء أنه يعزز تكوين العظام وإعادة تشكيلها في النموذج الحي ، فيمكن أن ينتقل إلى المرحلة التالية (أي التجارب السريرية).

يعد تقييم التئام الكسور في الحيوانات خطوة منطقية إلى الأمام لتقييم عامل جديد تم تقديمه لشفاء العظام قبل أن يخضع لتجارب بشرية. بالنسبة لدراسات النموذج الحيواني في الجسم الحي لالتئام الكسور ، أصبحت القوارض نموذجا^شائعا بشكل متزايد 8. ولدت نماذج القوارض اهتماما متزايدا بسبب انخفاض تكاليف التشغيل ، والحاجة المحدودة للمساحة ، والوقت الأقل اللازم لشفاء العظام⁹. بالإضافة إلى ذلك ، تحتوي القوارض على مجموعة واسعة من الأجسام المضادة والأهداف الجينية ، والتي تسمح بإجراء دراسات على الآليات الجزيئية لشفاء العظام وتجديدها¹⁰. سلط اجتماع توافقي الضوء بشكل شامل على العديد من نماذج شفاء عظام الحيوانات الصغيرة وركز على المعلمات المختلفة التي تؤثر على شفاء العظام ، بالإضافة إلى التأكيد على العديد من نماذج كسور الحيوانات الصغيرة والغرسات¹¹.

يمكن تقسيم نماذج الكسر الأساسية على نطاق واسع إلى نماذج مفتوحة أو مغلقة. تستخدم نماذج الكسور المغلقة قوة ثني من ثلاث أو أربع نقاط على العظم ولا تتطلب نهجا جراحيا تقليديا. أنها تؤدي إلى كسور مائلة أو حلزونية ، تشبه كسور العظام الطويلة في البشر ، ولكن عدم توحيد موقع الكسر وأبعاده قد يكون بمثابة عامل مربك فيها¹². تتطلب نماذج الكسور المفتوحة الوصول الجراحي لقطع العظم العظمي ، وتساعد على تحقيق نمط كسر أكثر اتساقا في موقع الكسر ، ولكنها ترتبط بتأخر الشفاء مقارنة بالنماذج المغلقة¹³. يبقى اختيار العظام المستخدمة لدراسة التئام الكسور بشكل أساسي الساق وعظم الفخذ نظرا لأبعادهما وإمكانية الوصول إليهما. عادة ما يكون اختيار موقع الكسر هو الحجاب الحاجز أو الميتافيزيس. يتم اختيار منطقة metaphyseal خصيصا في الحالات التي يتم فيها دراسة التئام الكسور في مواضيع هشاشة العظام ، حيث أن metaphysis أكثر تأثرا بهشاشة العظام¹⁴. يمكن استخدام العديد من الغرسات مثل المسامير داخل النخاع والمثبتات الخارجية لتثبيت الكسر^11,15.

كان الهدف من هذه الدراسة هو تطوير نموذج بسيط وسهل المتابعة للقوارض يمكن أن يساعد الباحثين ليس فقط على فهم تطور الكالس بعد كسر عظم الفخذ ولكن يمكن أن يساعد في تحديد ما إذا كان الدواء المحتمل له خصائص شفاء العظام من خلال فهم الآلية التي يعمل بها.

Protocol

تم إجراء التجارب على الحيوانات بعد الحصول على الموافقة الأخلاقية من لجنة أخلاقيات الحيوان المؤسسية (IAEC) ، AIIMS ، نيودلهي ، الهند (286 / IAEC-1/2021).

1. إجراء ما قبل الجراحة

1. منزل ذكور فئران Wistar albino من 6-8 أسابيع من العمر ، ويزن كل منها ما بين 150-200 غرام ، في مرفق الحيوانات المركزي (CAF) في أقفاص فردية منفصلة. هذا يضمن عدم وجود إصابة جراحية / كسر في الموقع عندما تشترك الفئران المتعددة في الأقفاص.
2. حافظ على الفئران عند درجة حرارة 23 درجة مئوية ± 2 درجة مئوية في بيئة يتم التحكم فيها بالرطوبة مع رطوبة نسبية تبلغ 50٪ ± 5٪ ، وتعريضها لدورة مظلمة / خفيفة لمدة 12 ساعة ، وإعطاء ad libitum إمكانية الوصول إلى الطعام (النظام الغذائي شبه الاصطناعي القياسي): حمية بيليه (جافة) والماء. تكوين النظام الغذائي شبه الاصطناعي القياسي هو كما يلي: دقيق البنغال المحمص (60 ٪) ، دقيق القمح (22 ٪) ، الكازين (4 ٪) ، مسحوق الحليب الخالي من الدسم (5 ٪) ، الزيت المكرر (4 ٪) ، خليط الملح مع النشا (4.8 ٪) ، وخليط فيتامين الكولين مع النشا (0.2 ٪).
3. تأقلم الفئران لمدة لا تقل عن 48 ساعة قبل الجراحة.
4. قم بوزن كل فأر على ميزان رقمي ولاحظ الوزن.
5. يتم تطبيق حقن سيفوروكسيم داخل الصفاق (100 ملغ/كغ من وزن الجسم)، ترامادول (25 ملغ/كغ من وزن الجسم)، ومزيج من الكيتامين (75 ملغ/كغ من وزن الجسم) مع زيلازين (10 ملغ/كغ من وزن الجسم) للفئران قبل 15 دقيقة من البدء بالعملية الجراحية. ضع مرهم العيون على كلتا العينين لمنع جفاف العين.
6. قم بإزالة الشعر من الطرف السفلي الأيمن ، من منطقة الجناح حتى مفصل الركبة ، مع التطبيق الموضعي لكريم إزالة الشعر.
   ملاحظة: يمكن جمع الدم (0.5 مل) من الوريد الخلفي لكل فأر لتحليل خط الأساس لمعلمات مختلفة. يمكن جمع الدم مرة أخرى كل 2 أسابيع بعد الجراحة.

2. إجراء جراحي لإنشاء كسر عرضي كامل من خلال قطع العظم المفتوح

ملاحظة: استخدم غرفة عمليات مخصصة مزودة بطاولة عمليات ودرجة حرارة محيطة مثالية (26 درجة مئوية) لتنفيذ الإجراء.

1. ضع كتلة الشمع (صينية ألومنيوم 30 سم × 30 سم × 4 سم تحتوي على شمع حتى عمق 2.5 سم) على طاولة العمليات وقم بتغطيتها بستائر معقمة. تمنع كتلة الشمع أي تغيير في وضع الحيوان أثناء الجراحة.
2. تأكيد بداية التخدير (عن طريق التحقق من فقدان قرصة إصبع القدم). ضع الجرذ المخدر على ستارة معقمة في الوضع الجانبي الأيسر. اطلب من أحد المساعدين أن يمسك الطرف السفلي الأيمن (الركبة والورك) في التمديد. احتفظ بدعامة صلبة معقمة (كتلة رخامية) أسفل الساق اليمنى لدعم عظم الفخذ. تنظيف موقع الجراحة مع الكحول والبيتادين.
3. حقن التخدير الموضعي (0.25 مل من 1٪ lignocaine) في موقع الشق (الجانب الجانبي من الفخذ الأيمن) ، وقطع ثقب في ثنى معقم آخر ، وفضح فقط الساق اليمنى للفأر من خلاله لإجراء عملية جراحية.
4. قم بإحداث شق عمودي للجلد بطول 1 سم على الجانب الجانبي من الفخذ الأيمن ، وقم بتمديده حسب الحاجة بشفرة جراحية رقم 15.
5. كشف العضلة الوعائية الجانبية عن طريق فصل اللفافة العميقة باستخدام مقص Metzenbaum. قم بتقسيم الأوعية الدموية الجانبية بما يتماشى مع ألياف العضلات باستخدام ملقط الشريان حتى يتم الوصول إلى عمود عظم الفخذ.
6. حرر العظم من العضلات المرتبطة به باستخدام مصعد السمحاق.
7. حقن التخدير الموضعي (0.2 مل من 1٪ lignocaine) في وحول السمحاق لمنع المنعكس الوعائي المبهمي.
8. قم بإنشاء مسافة بادئة في الثلث الأوسط من عمود عظم الفخذ باستخدام الشفرة الجراحية رقم 15 ، وكسر العظم في الثلث الأوسط من العمود (كسر كامل) عن طريق وضع إزميل على المسافة البادئة (بحيث لا ينزلق الإزميل) والنقر برفق على الإزميل بمطرقة. استخدم الدعامة الصلبة المعقمة (كتلة رخامية) لدعم العظم أثناء كسره لضمان كسر نظيف.
   ملاحظة: عادة لا يسبب الدعم الصلب المعقم إصابة كبيرة للعضلات الموجودة تحته.
9. قم بإصلاح الكسر داخليا باستخدام سلك K معقم (1.0 مم) يتم تثبيته بمساعدة مثقاب طاقة يعمل بالبطارية. مرر السلك K إلى القناة النخاعية للجزء البعيد عبر موقع الكسر. بعد ذلك ، قم بحفر سلك K من خلال الطرف البعيد لعظم الفخذ باستخدام مثقاب الطاقة الذي يعمل بالبطارية.
   ملاحظة: قم بتطهير سطح المثقاب الكهربائي بالكحول قبل الاستخدام. قم بتغيير القفازات بعد إصلاح سلك K.
10. بعد تقليل الكسر ، قم بدفع سلك K من الطرف البعيد إلى قناة الجزء القريب حتى يحصل على الشراء في منطقة المدور. اقطع الجزء البعيد من سلك K البارز عبر الجلد باستخدام قاطع الأسلاك.
11. ثني طرف السلك K إلى حوالي 90 درجة باستخدام كماشة واستخدم ضمادة شاش مبللة في البيتادين لتضميد موقع الدبوس. يعمل السلك K كجبيرة داخل النخاع للحفاظ على الكسر في وضع منخفض.
12. تأكد من الإرقاء الكامل قبل إغلاق الجلد باستخدام خياطة نايلون 3-0. الضغط على منطقة النزيف باستخدام شاش معقم أو ملقط شرياني لوقف أي نزيف.
13. تنظيف الجرح مع betadine ، وتغطيته بشاش معقم وشريط لاصق micropore.

3. رعاية ما بعد الجراحة

1. أعد الفئران إلى أقفاصها ، واسمح بالتنقل الطبيعي ، واستمر في إعطاء نظام غذائي شبه اصطناعي قياسي حتى التضحية بها ، وكذلك المضادات الحيوية (حقن سيفوروكسيم 100 مجم / كجم) والمسكنات (حقن ترامادول 25 مجم / كجم / يوم في جرعتين مقسمتين) داخل الصفاق لمدة 5 أيام بعد العملية.
   ملاحظة: يمكن تقسيم الفئران إلى مجموعات علاج وتحكم لاختبار دواء معين. إذا كان الدواء قابلا للذوبان في الماء ، فيمكن إعطاؤه عن طريق الفم من خلال التزويج. يمكن ملاحظة وزن الحيوانات الفردية لحساب جرعة الدواء المراد استخدامها. يمكن اتباع معايير التضمين والاستبعاد لضمان تجانس المجموعات الحيوانية.
2. ضع الحيوانات في أقفاص فردية في ظل ظروف مماثلة لفترة ما قبل الجراحة. افحص موقع الجراحة كل يوم للبحث عن أي علامات لألم ما بعد الجراحة أو عدوى الجرح أو انزلاق الغرز أو أي تورم أو إزعاج في البطن.
3. تقييم التئام العظام عن طريق الأشعة السينية للموقع المكسور مرة واحدة أسبوعيا.

4. الإجراء الإشعاعي

1. قبل الأشعة السينية، تخدير الفئران بحقنة الكيتامين داخل الصفاق (50 مغ/كغ من وزن الجسم) والزيلازين (5 مغ/كغ من وزن الجسم).
2. حافظ على مفصل الورك للفأر في وضع مرن ومختطف بينما يتم الاحتفاظ بمفصل الركبة شبه مرن لأخذ الأشعة السينية للطرف المكسور مع إعدادات التعرض التالية: المرجع kVp ≈ 62 ؛ المرجع mAS = 6.4 ؛ وإعدادات التعرض التلقائي (المرجع. مللي أمبير = 160).
   ملاحظة: تم أخذ الأشعة السينية عند خط الأساس (1 يوم بعد الجراحة) ثم مرة واحدة أسبوعيا حتى التضحية أو 5 أسابيع.

5. القتل الرحيم للحيوانات واسترجاع الكالس

1. التضحية بالفئران بجرعة زائدة من ثاني أكسيد الكربون (إدارة 100٪ CO₂ بمعدل تدفق 7-8 لتر / دقيقة لمدة 1 دقيقة ، تليها فترة انتظار من 4-5 دقائق) ، في نقطتين زمنيتين محددتين مسبقا ، بناء على المظهر الإشعاعي للنسيج الناعم والصلب ، على التوالي.
2. شق الجلد بالتوازي مع عظم الفخذ وافصل العضلات العلوية بعناية لتجنب تلف أنسجة الكالس.
3. كسر العظم بين مفصل الورك وأنسجة الكالس باستخدام مطرقة وإزميل. وبالمثل ، كسر العظم بين الكالس ومفصل الركبة. قم بإزالة السلك K ونظف قطعة العظم في محلول ملحي لإزالة جلطات الدم والأنسجة الرخوة.
4. انقل الكالس على الفور إلى حاوية تحمل علامة بها 10٪ فورمالين محايد (20 مل لكل عينة) واحتفظ به لمدة 3 أيام في درجة حرارة الغرفة (RT).

6. إزالة الكلس من العظام وأنسجة الكالس

1. خذ نسيج الكالس من الفورمالين واحتفظ به في RT في محلول ETDA بنسبة 20٪ ، الرقم الهيدروجيني 7 ، لإزالة الكلس من الأنسجة العظمية.
2. قم بتغيير محلول EDTA الطازج كل 2 أيام لمدة 3 أسابيع تقريبا ، وتحقق من إزالة الكلس العظمي عن طريق دس العظم بإبرة دون إزعاج أنسجة الكالس. يشار إلى إزالة الكلس المثلى بفقدان الإحساس الطبيعي بالرمل للأنسجة العظمية.
3. بعد إزالة الكلس بالكامل ، قم بقطع القسم السهمي من الكالس وقم بإعداد كتل البارافين من أنسجة الكالس. قطع أقسام بسمك 4 ميكرومتر من أنسجة الكالس لعلم الأنسجة¹⁶ وأي تحليل مقارن آخر¹⁷.

النتائج

أجريت هذه الدراسة لتطوير نموذج قطع عظم الفخذ في فئران Wistar albino. يمكن استخدام هذا النموذج لتقييم التئام العظام ، وكذلك التأثير العظمي لدواء ابتنائي عظمي واعد في التئام العظام. تم اتباع الاحتياطات والبروتوكولات الجراحية القياسية. تم استخدام العباءات المعقمة والستائر والمعدات الجراحية لهذا...

Discussion

تصف هذه الطريقة بوضوح التفاصيل اللازمة لتطوير نموذج قطع العظم للكسر في فئران Wistar albino. يمكن استخدام هذا النموذج لتقييم التأثير العظمي لدواء ابتنائية عظمي واعد في التئام الكسور ، وكذلك فهم تعقيدات التئام العظام. الميزة البارزة لهذه الطريقة هي أنها بسيطة ولا تحتاج إلى الكثير من الوقت أو الم?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alcohol	Raman & Weil Pvt. Ltd, Mumbai, Maharashtra, India	MFG/MD/2019/000189	Sterillium hand disinfectant
Artery forceps	Nebula surgical, Gujarat, India	G.105.05S	5", straight
Bard-Parker handle	Nebula surgical, Gujarat, India	G.103.03	Size number 3
Betadine solution	Win-medicare New Delhi, India	UP14250000001	10% w/v Povidone iodine solution
Cat's-paw skin retractor	Nebula surgical, Gujarat, India	908.S	Small
EDTA	Sisco research laboratories Pvt. Ltd, Maharashtra, India	43272	Disodium salt
Eosin	Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, India	115935	For preparing the staining solution
Forceps (plain)	Nebula surgical, Gujarat, India	115.06	6", plain
Forceps (toothed)	Nebula surgical, Gujarat, India	117.06	6", toothed
Formaldehyde	Sisco research laboratories Pvt. Ltd, Maharashtra, India	84439	For preparing the neutral buffered formalin
Haematoxylin	Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, India	104302	For preparing the staining solution
Hammer	Nebula surgical, Gujarat, India	401.M
Injection Cefuroxime	Akumentis Healthcare Ltd, Thane, Maharashtra, India	48/UA/SC/P-2013	Cefuroxime sodium IP, 1.5 g/vial
Injection Ketamine	Baxter Pharmaceuticals India Private Limited, Gujarat, India	G/28-B/6	Ketamine hydrochloride IP, 50 mg/mL
Injection Xylazine	Indian Immunologicals Limited, Hyderabad, Telangana, India	28/RR/AP/2009/F/G	Xylazine hydrochloride USP, 20 mg/mL
Injection Lignocaine	Jackson laboratories Pvt Limited, Punjab, India	1308-B	2% Lignocaine Hydrochloride IP, 21.3 mg/mL
Injection Tramadol	Intas Pharmaceuticals Limited, Ahmedabad, Gujarat, India	MB/07/500	Tramadol hydrochloride IP, 50 mg/mL
K-wire	Nebula surgical, Gujarat, India	166 (1mm)	12", double ended
Mechanical drill for inserting K-wire	‎Bosch, Germany	06019F70K4	GSR 120-LI Professional
Metzenbaum cutting scissors	Nebula surgical, Gujarat, India	G.121.06S	6", straight
Needle holder	Nebula surgical, Gujarat, India	G.108.06	6", straight
Ophthalmic ointment	GlaxoSmithKline Pharmaceutical Limited, Bengaluru, Karnataka, India	KTK/28a/467/2001	Neomycin, Polymixin B sulfate and Bacitracin zinc ophthalmic ointment USP
Osteotome (chisel)	Nebula surgical, Gujarat, India	1001.S.10	10 mm, straight
Periosteal elevator	Nebula surgical, Gujarat, India	918.10.S	10 mm, straight
Pliers cum wire cutter	Nebula surgical, Gujarat, India	604.65
Reynold’s scissors	Nebula surgical, Gujarat, India	G.110.06S	6", straight
Standard semi-synthetic diet	Ashirvad Industries, Chandigarh, India	No catalog number available	Detailed composition provided in materials used
Steel cup for keeping betadine for application	Local purchase	No catalog number available
Steel tray with lid for autoclaving instruments	Local purchase	No catalog number available
Sterile gauze	Ideal Healthcare Industries, Delhi, India	E(0047)/14/MNB/7951	Sterile, 5cmx5cm, 12 ply
Sterile marble block for support	Local purchase	No catalog number available	Locally fabricated; autoclavable
Syringe and needle (1 mL)	Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India	REF 303060	1 mL sterile Syringe with 26 G x 1/2 (0.45 mm x 13 mm) needle
Syringe and needle (2 mL)	Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India	REF 307749	2 mL sterile syringe with 24 G x 1'' (0.55 mm x 25 mm) needle
Syringe and needle (10 mL)	Hindustan Syringes & Medical Devices Ltd. Faridabad, India	334-B(H)	10 mL sterile syringe with 21 G x1.5" (0.80 mm x 38 mm) needle
Surgical blades (size no.15)	Paramount Surgimed Ltd, New Delhi, India for Medline Industries Inc, IL, USA	REF MDS15115E	Sterile, Single use
Surgical blades (size no.24)	Paramount Surgimed Ltd, New Delhi, India for Medline Industries Inc, IL, USA	REF MDS15124E	Sterile, Single use
Sutures	Healthium Medtech Pvt Ltd, Bangalore, Karnataka, India	SN 3318	4-0, 16 mm, 3/8 circle cutting needle, monofilament polyamide suture
Wax block in aluminium tray	Locally fabricated	No catalog number available	30 cm x 30 cm x 4 cm aluminium tray containing wax (to prevent animal from slipping)
X-ray machine	Philips India Ltd, Gurugram, Haryana	SN19861013	Model: Philips Digital Diagnost R 4.2