JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

هنا ، نوضح بروتوكولا لاستخدام التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني 16α- [18F] -fluoro-17β-estradiol (18F-FES) (PET) كأداة لتصور تعبير ERα في طعوم الثدي الإيجابية ERα.

Abstract

لتوضيح كيفية تصور الطعوم الغريبة لسرطان الثدي الإيجابي لمستقبلات هرمون الاستروجين ألفا (ERα) في الفئران العارية BALB / c باستخدام التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني 16α-[18F]-fluoro-17β-estradiol (18F-FES) (PET) ، تم حقن الفئران العارية BALB / c المبيض بخلايا سرطان الثدي الإيجابية ERα (MCF-7 ، 3 × 106 خلايا ؛ الكتف [ن = 10] أو 4وسادة دهون الثدي الأربية [ن = 10]) أو خلايا سرطان الثدي سلبية ERα (MDA-MB-231 ، 1 × 106 خلايا ؛ وسادة الدهون الثديية [ن = 5]). تلقت الفئران التي تؤوي خلايا MCF-7 حقنا تحت الجلد بمقدار 20 ميكروغرام من 17β-estradiol (20 ميكروغرام / 20 ميكرولتر ؛ زيت الذرة: الإيثانول ، 9: 1) في مؤخرة أعناقها قبل يومين من حقن الخلية ، تليها حقن يومية خمس مرات في الأسبوع لمدة 5 أسابيع. تم قياس أحجام الورم وفقا للصيغة: (L * W2) / 2 (L ؛ الطول ، W ؛ العرض). بمجرد أن تصل أحجام الورم إلى حوالي 100 مم3 ، تم إيقاف حقن 17β-estradiol قبل يومين من تلقي الفئران 18F-FES لتصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني لتجنب الارتباط التنافسي مع ERα. عند إعطاء 18F-FES عبر وريد الذيل الجانبي ، تم إجراء التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني / التصوير بالرنين المغناطيسي لمدة 15 دقيقة بعد ساعة إلى 1.5 ساعة بعد الحقن. 18لم يلاحظ امتصاص F-FES في الفئران الحاملة للورم MDA-MB-231 سلبية ERα. 18كان امتصاص F-FES أكثر وضوحا في الفئران التي تؤوي أورام MCF-7 في الكتف. في أورام MCF-7 المزروعة في وسادة الدهون الثديية الأربية ، كان امتصاص 18F-FES أقل وضوحا ، حيث حجب نمط الإفراز المعوي ل 18F-FES النشاط الإشعاعي الذي يمكن اكتشافه في هذه الأورام. لاستخدام 18F-FES PET كأداة لتصور تعبير ERα في طعوم الثدي الإيجابية ل ERα ، نوضح أن رؤية امتصاص 18F-FES واضحة في الأورام الموجودة بعيدا عن منطقة البطن للفئران ، مثل الكتف.

Introduction

يمكن تقسيم سرطانات الثدي (BC) إلى أنواع فرعية جزيئيةمختلفة 1. أورام الثدي التي تصنف على أنها النوع الفرعي اللمعي المفرط في التعبير عن مستقبلات هرمون الاستروجين ألفا (ERα). على هذا النحو ، يشار إلى هذا النوع الفرعي من BC أيضا باسم ERα-positive (ERα +). لحسن الحظ ، فإن أولئك الذين تم تشخيص إصابتهم ب ERα + BC يعانون من أعلى بقاء على قيد الحياة لمدة 10 سنوات إلى جانب معدلات منخفضة من ورم خبيث بعيد2،3. بسبب تعبير ERα ، يمكن لهؤلاء المرضى الوصول إلى مجموعة من خيارات العلاج الهرموني ، بما في ذلك معدلات مستقبلات هرمون الاستروجين الانتقائية (SERMs) ، والأدوية المضادة للإستروجين ، ومثبطات الأروماتاز4.

لتقييم ما إذا كانت مريضة سرطان الثدي مؤهلة للعلاج الهرموني ، يجب تحديد مستويات التعبير عن ERα داخل أورام الثدي5،6،7. بينما يتم إجراء المعيار الذهبي للاختبار باستخدام طرق الكيمياء المناعية (IHC) ، تسلط العديد من التقارير الضوء على مسألة كل من قابلية التكرار والموثوقية للنتائج التي تم الحصول عليها6،8،9. يمكن أن تؤدي IHC إلى تناقض في النتيجة لأن التقنية شبه كمية بطبيعتها ، حيث يمكن أن تؤدي الاختلافات في معالجة الأنسجة والتفسير اللاحق إلى التباين6. لتصحيح هذه المشكلة المتكررة ، تم وضع إرشادات في عام 2010 وتم تحديثها في عام 2020 من قبل الجمعية الأمريكية لعلم الأورام السريري بهدف تقليل تباين المراقبين10. حاليا ، يبلغ الحد الأقصى الذي تم التحقق من صحته سريريا ≥1٪ ، مع تعبير ERα حتى عند مستويات التعبير الصغيرة جدا التي تظهر فوائد ذات مغزى سريريا باستخدام علاج الغدد الصماء11.

في BC المتقدم ، قد يختلف تعبير ERα بين النقائل والورم الأساسي. تشير بعض الملاحظات إلى تناقض بنسبة 18٪ -55٪ في مستويات تعبير ERα بين الآفات النقيلية والورم الأولي ، مما يشير إلى أهمية تحديد حالة ERα لنقائل BC12. لمعالجة هذا الأمر ، تسلط الإرشادات الضوء على أهمية تأكيد حالة مستقبلات الهرمونات في الآفات النقيلية لوضع خطط علاج مستنيرة13،14. ومع ذلك ، فإن جدوى ذلك مشكوك فيها ، لا سيما من خلال طرق IHC ، مع الأخذ في الاعتبار أن النقائل قد توجد في أماكن يصعب أخذ الخزعات منها.

ظهرت طرق التصوير الجزيئي لتصبح أدوات أساسية للكشف عن آفات الورم وتصويرها لدى مرضى السرطان. على وجه الخصوص ، يتطلب التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني (PET) استخدام أجهزة التتبع أو ، بشكل أكثر تحديدا ، المستحضرات الصيدلانية المشعة ، والتي تم تصميمها لاستغلال سمات معينة للأورام بقصد تصور هذه الآفات بشكل غير جراحي. أكثر متتبع التصوير المبوهني شيوعا المستخدم في علم الأورام هو 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG) 15. في هذه الدراسة ، نستكشف استخدام شكل من أشكال استراديول ، 18F-fluoroestradiol (18F-FES). استراديول - رابط ل ERα - هو هرمون ينتجه المبايض في الغالب عند الإناث16. 18حصلت F-FES على موافقة حديثة من إدارة الغذاء والدواء (FDA) ويتم تسويقها باسم CeriannaTM. تم تصميم عامل التصوير هذا لاستخدامه كعامل مساعد للخزعات في المرضى الذين يعانون من BC17 المتكرر أو النقيلي. يمكن استخدام تصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني لكامل الجسم باستخدام 18F-FES كطريقة غير جراحية للكشف عن مستويات ERα في كل من الورم الأولي وفي النقائل البعيدة في المناطق التي يصعب الحصول على الخزعاتمنها 18. يرتبط التنبؤ بمستويات ERα باستخدام 18تصوير F-FES PET بنتائج IHC ، علاوة على ذلك ، فإن القليل من اكتشاف ERα باستخدام 18تصوير F-FES PET هو مؤشر موثوق به للأورام التي من غير المحتمل أن تستجيب للعلاج الهرموني18. لضمان الاستخدام المناسب ل 18F-FES في العيادة ، تمت صياغة الإرشادات بتوافق الآراء من قبل الخبراء في هذاالمجال 19. في هذه الدراسة ، نقوم بتقييم استخدام 18F-FES PET في النماذج قبل السريرية لسرطان الثدي في الفئران.

Protocol

تمت الموافقة على جميع الدراسات التي أجريت على من قبل لجنة أخلاقيات في مستشفى أوستن (A2023/05812) وتم إجراؤها وفقا للقانون الأسترالي لرعاية واستخدامها للأغراض العلمية.

1. تحضير الخلية

  1. باستخدام إجراءات زراعة الخلايا الروتينية، حافظ على خلايا MDA-MB-231 و MCF-7 في DMEM/F-12 المكملة بالبنسلين/الستربتومايسين ومصل الأبقار الجنينية بنسبة 10٪ في قوارير زراعة الأنسجة T175. قبل تحضير الخلايا للحقن ، تمر الخلايا 3x على الأقل بعد الإحياء من مخازن النيتروجين السائل. قم بزراعة الخلايا في حاضنة رطبة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2.
  2. نشر الخلايا بحيث يكون هناك 3 خلايا × 106 MCF-7 لكل حقنة لكل فأر ل 15 فأرا (أي ما لا يقل عن 45 × 106 خلايا MCF-7) و 1 × 106 خلايا MDA-MB-231 لكل حقنة لكل فأر ل 5 فئران (أي على الأقل 5 × 106 خلايا MDA-MB-231).
    ملاحظة: للسماح بعدد متساو من الخلايا في كل فأر ، قم بإعداد خلايا كافية لخمس حقن إضافية (على سبيل المثال ، قم بإعداد خلايا كافية ل 10 حقن لحقن خمسة فئران).
  3. في يوم حقن الخلية ، قم بإزالة الوسائط من جميع القوارير وضع ما يقرب من 5 مل من التربسين EDTA (0.25٪ تربسين و 0.05٪ EDTA) في محلول ملحي مخزن بمقدار 1x فوسفات (PBS) (درجة الحموضة 7.4) على الخلايا لتسهيل انفصال الخلية.
  4. بمجرد انفصال الخلايا ، ضع ما يقرب من 10 مل من الوسط الكامل في قوارير لتثبيط نشاط التربسين. قم بتعليق الخلايا ونقل معلق خلية واحدة إلى أنبوب سعة 50 مل. أجهزة الطرد المركزي عند ~ 300 × جم لمدة 2 دقيقة لخلايا الحبيبات.
  5. أعد تعليق حبيبات الخلية في حجم مناسب من الوسائط وعد الخلايا لتحديد العدد الإجمالي للخلايا التي تم حصادها.
    ملاحظة: تهدف إلى حساب المحاليل التي تبلغ حوالي 1 × 106 خلايا لكل مل (50-100 خلية لكل 16 مربعا إذا كنت تستخدم غرفة عد). بالنسبة للخلايا التي تنمو في 5 × 106 لكل قارورة كاملة ، قم بحصاد الخلايا في 5 مل من الوسائط. بالنسبة لخطوط الخلايا ذات الكثافة العالية ، استخدم 10 مل من الوسائط لكل قارورة.
  6. قم بتنفيذ هذه الخطوة على الجليد في خزانة تدفق رقائقي معقمة. بمجرد الوصول إلى هذا الرقم ، قم بالطرد المركزي لتعليق الخلية مرة أخرى عند 300 × جم لمدة دقيقتين لخلايا الحبيبات. أعد تعليق الحبيبات في PBS البارد ومحلول مصفوفة الغشاء القاعدي المثلج بحيث يوجد لكل 3 × 106 خلايا MCF-7 ، 40 ميكرولتر من PBS و 10 ميكرولتر من محلول مصفوفة الغشاء القاعدي.
  7. أعد تعليق حبيبات الخلية MDA-MB-231 بنفس المكونات بحيث ×يوجد 40 ميكرولتر من PBS و 10 ميكرولتر من محلول مصفوفة الغشاء القاعدي. انقل مزيج مصفوفة الغشاء القاعدي للخلية من أنبوب سعة 50 مل إلى أنابيب أصغر سعة 1.5 مل بطرف ماصة بارد واحتفظ بخليط الخلية على الجليد قبل حقن الخلية في الفئران.
    ملاحظة: يتم تخزين مصفوفة الغشاء القاعدي المستخدمة في هذه الدراسة عند -20 درجة مئوية. في اليوم السابق لطلب محلول مصفوفة الغشاء القاعدي ، يتم وضع كمية من المحلول عند 4 درجات مئوية لإذابة الثلج طوال الليل. في اليوم التالي ، يكون جاهزا للاستخدام في درجات الحرارة الباردة (على الجليد). عند سحب الماصة للمحلول، تأكد من أن أطراف الماصة المستخدمة باردة لمنع محلول مصفوفة الغشاء القاعدي من التصلب. من الممارسات الجيدة الاحتفاظ بعلبة من أطراف الماصة المعقمة في الثلاجة قبل يوم تحضير الخلية للحقن. عند إعادة تعليق حبيبات الخلية في محلول مصفوفة الغشاء القاعدي المثلج ، تتم إضافة PBS أولا ، متبوعا بالكمية المطلوبة من محلول مصفوفة الغشاء القاعدي.

2. حقن الخلايا في الفئران المبيض

  1. اسمح للإناث الفئران العارية BALB / c التي تتراوح أعمارها بين 6 و 8 أسابيع بالتأقلم في منشأة إسكان لمدة أسبوع واحد على الأقل قبل حقن الخلايا.
    ملاحظة: تمكنت هذه الدراسة من الوصول إلى الفئران الأكبر سنا التي تتراوح أعمارها بين 12 و 14 أسبوعا. يضمن استئصال المبيض مستويات منخفضة من الاستراديول الداخلي ويقلل من المنافسة مع 18F-FES ligand. اعتمادا على النموذج الذي تتم دراسته ، قد لا تحتاج الفئران الأصغر سنا (على سبيل المثال ، 4-8 أسابيع) إلى الخضوع لاستئصال المبيض بسبب انخفاض مستويات الاستراديول الذاتية20،21.
  2. تحفيز التخدير في الفأر بنسبة 4٪ أيزوفلوران وأكسجين بمعدل 4 لتر / دقيقة باستخدام غرفة تحريض التخدير. راقب الماوس وتحقق من فقدان منعكس التصحيح. بمجرد أن تتوقف عن الحركة ، انقل الفأر إلى خزانة تدفق رقائقي معقمة ، ضع الخطم في قناع الأنف ، وحافظ على التخدير عن طريق ضبط الأيزوفلوران إلى 2٪ والأكسجين بمعدل 2 لتر / دقيقة.
    ملاحظة: قم بتخدير فأرة واحدة في كل مرة لضمان الرعاية المثلى.
  3. لحقن وسادة الدهون داخل الثدي (IMF) ، قم بمسح الجلد فوق الغدة الثدييةالأربية 4 بالكحول. استخدم حقنة 27 جرام مبردة مسبقا (على الثلج) لسحب تعليق الخلية الباردة وترك المحقنة على الجليد لمنع تسخين / تصلب محلول مصفوفة الغشاء القاعدي قبل الحقن.
  4. باستخدام الإبهام والسبابة من اليد غير المهيمنة, رفع برفق 4 الغدة الثديية وإدخال إبرة حقنة 27 G مع اليد المهيمنة, ضمان شطبة الإبرة المواجهة لأعلى. قم بحقن 50 ميكرولتر ببطء من تعليق الخلية الذي يحتوي على خليط محلول مصفوفة الغشاء القاعدي للخلية PBS في وسادة دهون الثدي.
    ملاحظة: يجب الشعور بفقاعة بين الأصابع أثناء حقن الخلايا. تحقق من وجود أي تسرب في موقع الحقن.
  5. بمجرد اكتمال الحقن ، قم بإيقاف تشغيل الأيزوفلوران واحتفظ بأنف الفأر في مخروط الأنف لاستنشاق الأكسجين واستعادة الوعي (يجب أن يستغرق ذلك حوالي دقيقة). ضع الماوس مرة أخرى في قفص على وسادة حرارية للتعافي الأمثل.
  6. بالنسبة لحقن الكتف ، استخدم الإجراء المذكور أعلاه الموضح لحقن صندوق النقد الدولي ، والفرق الوحيد هو موقع حقن الخلايا.
    ملاحظة: بدلا من ذلك ، يمكن إكمال حقن الكتف بدون تخدير (انظر الخطوة 2.7 أدناه).
  7. لحقن الكتف بدون تخدير ، أمسك الجلد وارفعه فوق كتف الفأر باستخدام اليد غير المهيمنة بين الإبهام والسبابة ، لتشكيل "خيمة" في الجلد. قم بحقن 50 ميكرولتر ببطء من تعليق الخلية الذي يحتوي على محلول مصفوفة الغشاء القاعدي للخلية PBS باستخدام إبرة حقنة 27 G. اسحب الإبرة برفق وتحقق من وجود تسرب.
    ملاحظة: كبديل ، يمكن استخدام حقنة هاميلتون للحقن بكميات صغيرة لضمان دقة التسليم بالحجم. بين الحقن ، يتم استخدام 80٪ من الإيثانول الحجمي / الحجمي لشطف المحقنة عند استخدام خطوط خلايا مختلفة ، ويستخدم PBS لشطف وإزالة الإيثانول المتبقي من المحقنة.

3. تحضير محلول الاستراديول

  1. باستخدام مقياس يمكنه قياس ملليغرام من مادة ما بدقة ، قم بوزن 7 مجم من مسحوق الاستراديول في أنبوب سعة 1.5 مل.
  2. أضف 700 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 100٪ إلى 7 مجم من مسحوق الاستراديول. ضع الأنبوب سعة 1.5 مل على شاكر لطيف لمدة ساعة واحدة تقريبا في درجة حرارة الغرفة (RT) أو حتى يذوب مسحوق الاستراديول تماما.
  3. قم بتقسيم المحلول عبر عشرة أنابيب سعة 1.5 مل ، يحتوي كل منها على 70 ميكرولتر من محلول الإيثانول - الاستراديول. ضع الأنابيب عند -20 درجة مئوية للاستخدام في المستقبل.
    ملاحظة: يمكن الاحتفاظ بمخزون الاستراديول الإيثانول عند -20 درجة مئوية لمدة أسبوعين تقريبا.

4. الحقن تحت الجلد لمحلول الاستراديول

  1. في اليوم الذي يلزم فيه حقن الاستراديول ، اصنع الخليط التالي طازجا. امزج 630 ميكرولتر من زيت الذرة كمركبة في أنبوب سعة 1.5 مل يحتوي على 70 ميكرولتر من محلول الإيثانول والاستراديول. قم بتدوير المحلول حتى يتجانس ، مع التأكد من عدم انفصال الإيثانول وتشكيل طبقة في الجزء العلوي من زيت السيارة.
    ملاحظة: ينتج عن هذا 700 ميكرولتر من زيت الذرة 20 ميكروغرام / 20 ميكرولتر: الإيثانول ، محلول 9: 1. يتلقى كل فأر 20 ميكرولتر من هذا المحلول. اصنع دائما محلولا إضافيا لأن الزيت الموجود في الخليط يميل إلى الالتصاق بالجزء الخارجي من المحقنة وعلى جوانب أنبوب سعة 1.5 مل بسبب لزوجته (على سبيل المثال ، بالنسبة ل 20 فأرا ، على الرغم من أن 400 ميكرولتر ستكون كافية ، مما يجعل الكمية تقريبا ضعف (700 ميكرولتر) توفر مساحة كافية للخطأ).
  2. باستخدام إبرة 29 جم متصلة بحقنة الأنسولين ، اسحب ببطء 20 ميكرولتر من محلول الاستراديول.
    ملاحظة: نظرا لأن المحلول يحتوي على 9 أجزاء من الزيت إلى جزء واحد من الاستراديول والإيثانول ، فإن الخليط سيستغرق وقتا للسحب إلى المحقنة.
  3. الفئران التي يتم حقنها بمحلول الاستراديول هي تلك التي تؤوي أورام تعبر عن ERα ، وبالتالي تعتمد على هرمون الاستروجين للنمو (MCF-7 في هذه الدراسة). الفئران التي تؤوي أورام لا تعبر عن ERα (MDA-MB-231 في هذه الدراسة) لا تتلقى محلول الاستراديول. ضع الفأر برفق المراد حقنه في المقدمة ، ويفضل أن يكون ذلك على منشفة ، لمنع إيذاء أطرافه أثناء التقييد.
  4. باستخدام اليد غير المهيمنة ، قم بتقييد الماوس عن طريق إمساك الجزء العلوي من ذيله بين الخاتم والإصبع الصغير. استخدم الإبهام والسبابة لرفع الجلد المترهل بالقرب من عنق الفأر لتشكيل "خيمة" في الجلد للحقن تحت الجلد لمحلول الاستراديول.
  5. مع إبقاء الماوس في هذا الضبط ، استخدم اليد المهيمنة لحقن الماوس بمحلول الاستراديول. مع توجيه شطبة الإبرة لأعلى ، ادفع الإبرة أسفل "خيمة" الجلد حتى يظهر أقل من نصف الإبرة.
    ملاحظة: أثناء حقن المحلول ، يجب أن ينتفخ الجلد بشكل واضح.
  6. لمنع أي ارتجاع للمحلول ، احتفظ بالإبرة تحت الجلد لبضع ثوان. في حالة حدوث أي تدفق عكسي ، جفف المنطقة برفق بمنديل لإزالة المحلول المتبقي.
    ملاحظة: في بعض التجارب ، تم استخدام الاستراديول مع زيت السمسم لإدارة الهرمون. يؤدي استخدام زيت السمسم كوسيلة إلى التهاب موضعي تحت الجلد في مواقع حقن الاستراديول. على هذا النحو ، تم اختيار زيت الذرة كوسيلة للتجارب اللاحقة ، حيث كانت علامات الالتهاب في مواقع حقن الاستراديول غائبة أو الحد الأدنى22. انظر المناقشة لمزيد من التفاصيل.
  7. بعد إزالة الإبرة ، امسح موقع الحقن برفق بمطهر موضعي باستخدام برعم قطني. هذا لمنع الالتهاب على السطح في موقع الحقن بسبب إدخال / إزالة الإبرة من خلال جلد الفأر.
  8. حقن الفئران التي تحتوي على أورام تعبر عن ERα (MCF-7) بحقن الاستراديول تحت الجلد قبل 3 أيام من حقن الخلية ، متبوعة 5 مرات في الأسبوع لمدة 5 أسابيع (الشكل 1). توقف عن حقن الاستراديول قبل يومين من يوم التصوير لتجنب الارتباط التنافسي بمسبار 18F-FES لهدفه ، ERα.
    ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم حقن الفئران التي تؤوي أورام MCF-7 بالاستراديول يوميا من الاثنين إلى الجمعة. إذا تم تصويرهم في الأسبوع التالي يوم الأربعاء ، استمرت حقن الاستراديول يومي السبت والأحد. لم يتم إعطاء استراديول يومي الاثنين والثلاثاء قبل تصوير الفئران يوم الأربعاء.

5. 18تصوير F-FES PET والتصوير بالرنين المغناطيسي للفئران المبيضة

تنبيه: استخدم معدات الحماية عند التعامل مع النشاط الإشعاعي. اتبع جميع الإجراءات التنظيمية المعمول بها عند التعامل مع النشاط الإشعاعي.

  1. قم بوزن الماوس وتسجيل وزنه.
  2. في هذه الدراسة ، تم تصنيع 18F-FES وصياغتها في الدرجةالسريرية 23 (تم الحصول عليها من قسم التصوير الجزيئي والعلاج ، أوستن هيلث) لاستخدامها في النماذج الحيوانية. تمييع 18F-FES (109 دقائق نصف عمر مشع) في محلول الإيثانول الملحي بنسبة 10٪ وزن / حجم بتركيز حقن مصحح للاضمحلال يبلغ حوالي 150-300 ميكرو Ci / 100 ميكرولتر.
    ملاحظة: يكفي نشاط محدد قدره 1000 Ci/mmol لتصوير PET في الجسم الحي ل ERα24، وكان ل 18F-FES التي تم تلقيها نشاط محدد أعلى من قيمة خط الأساس هذه.
  3. ارسم 100 ميكرولتر بحقنة الأنسولين بإبرة 29 جرام. استخدم معاير الجرعة لقياس وتسجيل جرعة النشاط الإشعاعي والوقت. ضع المحقنة خلف واقي من الرصاص حتى وقت الحقن.
    ملاحظة: قم بقياس كمية 18نشاطا إشعاعيا من F-FES في كل جرعة باستخدام معاير الجرعة. يجب معايرة الجرعة مقابل مادة مرجعية قياسية ، مثل السيزيوم 137 ، وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة. من المهم تسجيل وقت القراءة لتحديد تصحيح الاضمحلال. تأكد من أن الوقت الموضح على جهاز المعايرة يطابق الوقت على الكمبيوتر المستخدم للحصول على PET.
  4. لتوسيع أوردة الذيل للحقن في الوريد ، ضع الماوس تحت عنصر تسخين على مسافة 30 سم لمدة دقيقتين. امسح الذيل بنسبة 70٪ وزن / حجم من الإيثانول لتطهير المنطقة قبل الحقن.
  5. قم بإعطاء 100 ميكرولتر من 18F-FES (الحجم الكامل في المحقنة) بحقن البلعة عبر وريد الذيل الجانبي وسجل وقت الحقن. اضغط على موقع الحقن بمنديل لمنع نزيف وريد الذيل.
  6. قم بقياس الجرعة المتبقية في المحقنة بالإضافة إلى الأنسجة باستخدام معاير الجرعة وسجل القياس والوقت. حقن الفئران المتداخلة على دفعات من قسمين للسماح بالتصوير باستخدام الغرف المتعددة.
    ملاحظة: سيتم ترك بعض المسبار في المحقنة. يفضل استخدام محاقن الأنسولين على المحاقن المتصلة بالإبر عبر أقفال لور بسبب انخفاض حجم الجرعة المحاصرة في المحقنة / الإبرة بعد إعطاء الحقن. بالإضافة إلى ذلك ، يتم قياس النشاط الإشعاعي في الأنسجة المستخدمة لوقف أي نزيف قد يحدث بعد الحقن الوريدي للمسبار. وذلك لأن التدفق العكسي للدم الذي تمتصه الأنسجة قد يحتوي على بعض النشاط الإشعاعي من 18F-FES. بالإضافة إلى ذلك ، يعتمد الوقت المستغرق لتدفئة أوردة الذيل الجانبية على متغيرات مثل شدة مصدر الحرارة ومدى قربه من الفئران. بالنسبة للمصابيح الحرارية القياسية ، قد يستغرق تمدد الأوردة ما يصل إلى 15 دقيقة. يجب مراقبة الفئران عن كثب بحثا عن علامات ارتفاع درجة الحرارة وإزالتها من مصدر التسخين بين الحقن إذا لزم الأمر.
  7. بالنسبة للفئران المخصصة للنوم بعد الحقن ، ضع الفأر المحقون في غرفة التخدير المحفوظة تحت مستوى صيانة من الأيزوفلوران (2٪ -2.5٪) والأكسجين (2 لتر / دقيقة) لمدة ساعة واحدة على وسادة تسخين للسماح بتوزيع المسبار عبر الدورة الدموية الجهازية للفأر قبل فحص التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني. اسمح للفئران الأخرى في المجموعة بالسير بحرية في قفصها لمدة 1-1.5 ساعة حتى فحص التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني.
  8. بعد 1-1.5 ساعة ، ضع الفأر في غرفة التصوير تحت تخدير الأيزوفلوران المخروطي للأنف. قم بتشغيل سخان السرير على 32 درجة مئوية ، وحدد إعدادا متعدد الغرف وقم بتشغيل نظام مراقبة الجهاز التنفسي. ضع الفأرين المراد تصويرهما في وضع الانبطاح. ضع حجرة التصوير في جهاز التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني / التصوير بالرنين المغناطيسي.
  9. راقب تنفس الماوس أثناء الحصول على الصور. استخدم مخطط التنفس لضمان 60-80 نفسا في الدقيقة في أي وقت أثناء الفحص. إذا انخفض معدل التنفس عن النطاق المطلوب أو أعلى منه، اضبط جرعة الأيزوفلوران حسب الحاجة.
    ملاحظة: يمكن مراقبة تنفس بسبب وجود جهاز استشعار في غرفة التصوير.
  10. قم بإقران عملية اكتساب PET ثابتة لمدة 15 دقيقة مع فحص التصوير بالرنين المغناطيسي المحوري ثلاثي الأبعاد Gradient Echo (GRE). انظر أدناه للحصول على معلمات الاستحواذ:
    1. لإعداد بروتوكول التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني، افتح نافذة محرر المستحضرات الصيدلانية المشعة في البرنامج ذي الصلة. حدد النظير المستخدم ونشاط المحقنة (MBq) ووقت الحقن والنشاط المطبق (MBq) ووزن الجسم. كل هذه المعلمات ضرورية للمساعدة في حساب وتحديد امتصاص المسبار في الأنسجة ذات الاهتمام.
    2. للتأكد من وضع الماوس بشكل صحيح للتصوير ، استخدم تسلسل 2D Scout (الأمامي والخلفي) لتحديد مجال رؤية PET. انتقل إلى الحصول على PET ثابت لمدة 15 دقيقة باستخدام نافذة طاقة من 400-600 كيلو فولت ، ووضع الصدفة من 1-5 ، 5 نانوثانية. قم بإجراء فحص التصوير بالرنين المغناطيسي المحوري GRE3D لمدة 27 دقيقة تقريبا بعد ذلك.
  11. إعادة بناء الصور المكتسبة باستخدام البرامج ذات الصلة.
    1. قم بإجراء إعادة بناء ثابتة لصورة التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني / التصوير بالرنين المغناطيسي واستخدم المخطط الهندسي لتعديل منطقة إعادة الإعمار للتأكد من أنها تغطي الماوس بالكامل ، مما يضمن وقت إعادة البناء الأمثل.
    2. ضمن نافذة تحديد النتائج ، قم بتبديل التصحيحات العشوائية وتصحيح التوهين (AC) + التشتت ونطاق الموضع إلى تشغيل. قم بتعيين الوقت المرجعي للاضمحلال إلى ADMIN. اضبط عتبة الجسم والهواء على 30٪ وقم بتأسيس تصحيح التوهين على خريطة المواد.
  12. استخدم البرامج ذات الصلة لفصل الصور متعددة الغرف والتسجيل المشترك ورسم مناطق الاهتمام (ROIs). للتسجيل المشترك، أعد محاذاة التصوير بالرنين المغناطيسي ليناسب التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني، وأعد بناء صورة التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني.
  13. لفصل الصور متعددة الغرف ، انقر فوق معالجة الصور > تجزئة > فاصل الفنادق. قم بتشغيل الوضع العلمي واضبط معلمات الحد والحجم حسب الحاجة حتى يتم العثور على كائنين.
  14. أدخل الجرعة في وقت الحقن بعد حساب أي جرعة متبقية في المحقنة لتحويل بيانات البولي إيزيتروني إلى وحدة النسبة المئوية للجرعة المحقونة لكل جرام (٪ ID/g) أو بالإضافة إلى إدخال وزن الشخص لتحويل بيانات PET إلى وحدة قيمة الامتصاص المعيارية (SUV). قم بإجراء هذا التحويل عن طريق النقر بزر الماوس الأيمن على مجموعة بيانات الإصدار البوزيتروني وتحديد موقع حقل ٪ID/g في علامة التبويب المعلومات الأساسية . أدخل ٪ID/g المسجل سابقا.
  15. لرسم عائد استثمار على أقسام الورم ، انقر فوق علامة التبويب القياسات على الجانب الأيسر من نافذة البرنامج. ارسم عائد الاستثمار باستخدام المضلع أو الأداة اليدوية . ارسم بعناية حول محيط الورم ، مع التأكد من تنفيذ الإجراء أثناء وجود صورة التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني في النافذة النشطة (تحقق باستخدام Fn-A). تعطي النتيجة قيمة عائد الاستثمار على النحو التالي٪ ID/g.
    ملاحظة: يعطي تحليل عائد الاستثمار تقديرا جيدا لل٪ID/g. يجب أن تعطي الكاميرا التي تمت معايرتها جيدا دقة تبلغ ±5٪ مقارنة ببيانات التوزيع الحيوي خارج الجسم الحي .

6. حصاد وتثبيت أنسجة الورم للكيمياء المناعية

  1. في نقطة النهاية التجريبية ، قتل الفأر باستخدام الاستنشاق المميت للإيزوفلوران بنسبة 4٪ -5٪ أو الإفراط في استنشاق ثاني أكسيد الكربون2.
  2. باستخدام المقص والملاقط الجراحية ، قم بعمل شق صغير بعناية بالقرب من سطح الورم واستئصال أنسجة الورم. إذا كان الجلد متصطا بأنسجة الورم، فاستخدم شفرة مشرط لفصل الجلد عن الورم برفق.
  3. ضع أنسجة الورم في قارورة سعة 5 مل تحتوي على حوالي 3 مل من الفورمالين المحايد 10٪. تأكد من تغطية الأنسجة بالكامل بمحلول لتسهيل تثبيت الأنسجة. احتفظ بالأنسجة مغمورة في الفورمالين لمدة 24 ساعة.
  4. في اليوم التالي ، انقل أنسجة الورم الثابتة إلى قارورة سعة 5 مل تحتوي على 70٪ إيثانول. قم بتسمية كاسيت الأنسجة الخاص بأنسجة الورم استعدادا لتضمين البارافين.
  5. ضع أنسجة الورم في كاسيت مناديل وقم بتخزينها في محلول إيثانول بنسبة 70٪ حتى يتم تضمين البارافين.
    ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم إجراء تضمين البارافين من قبل علماء الأمراض التشريحية من أوستن هيلث.

7. الكيمياء المناعية للكشف عن مستقبلات هرمون الاستروجين ألفا (ERα)

  1. باستخدام ميكروتوم ، قم بقطع أجزاء بسمك 4 ميكرومتر من أنسجة الورم المطلوبة للتلطيخ ، باتباع الإجراءات القياسية.
  2. ضع شرائح المجهر الزجاجي مع أقسام الورم المقطوعة في رف منزلق وضع الرف في فرن 37 درجة مئوية حتى يجف طوال الليل ولضمان التصاق الأنسجة بالشرائح قبل تلطيخها.
  3. في صباح اليوم التالي ، ضع الرف الذي يحتوي على شرائح تحتوي على أقسام الورم المقطوعة في فرن 60 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لتسهيل عملية إزالة الشمع.
    ملاحظة: يجب أن تكون الشرائح الزجاجية متجهة لأعلى أثناء الخبز. هذا يضمن التصاق الأنسجة ، وأي شمع يذوب يذوب على منزلقه الخاص بدلا من الشرائح المجاورة.
  4. لإعادة ترطيب الأقسام ، اغمر الأقسام المخبوزة في الزيلين مرتين ، 5 دقائق لكل منهما (2 × 5 دقائق) 100٪ إيثانول لمدة 2 × 5 دقائق ثم 70٪ إيثانول لمدة 1 × 5 دقائق. اغسل الشرائح بالماء المقطر لمدة 5 دقائق.
  5. لاسترجاع المستضد ، اغمر الشرائح في وعاء 1x EDTA المؤقت ، درجة الحموضة 8 ، لمدة 25-30 دقيقة في حمام مائي 100 درجة مئوية. قم بإزالة الشرائح من الحمام المائي واترك الشرائح في RT لمدة ساعة واحدة على الأقل. بمجرد أن تبرد الشرائح ، اغسلها في ماء الصنبور الجاري لمدة دقيقتين ثم TBST (TBS مع 0.01٪ Tween20) لمدة 2 × 5 دقائق.
  6. باستخدام قلم حاجز كاره للماء ، ارسم دائرة حول الأقسام الموجودة على الشرائح.
  7. قم بإخماد البيروكسيديز الداخلي عن طريق وضع ما يقرب من 100 ميكرولتر من محلول 3٪ H2O2 (مخفف في الماء المقطر) على أقسام لمدة 10 دقائق في RT. اغسل الشرائح في ماء الصنبور الجاري لمدة دقيقتين ثم TBST لمدة 2 × 5 دقائق.
  8. أقسام الكتلة التي تحتوي على حوالي 100 ميكرولتر/قسم من المخزن المؤقت المانع (5٪ ألبومين مصل بقري (BSA) في TBST) لمدة 30 دقيقة عند RT.
  9. قم بتصريف المخزن المؤقت للحجب عن طريق تحريك المحلول الزائد برفق في صينية الحضانة. أضف ما يقرب من 100 ميكرولتر من الجسم المضاد الأولي (المضاد ل ERα البشري الذي تم رفعه في الأرانب) إلى الأقسام عند تخفيف 1: 300 (أو عند التخفيف الأمثل المحدد مسبقا الخاص بالجسم المضاد المستخدم). قم بتكوين تخفيفات الأجسام المضادة في 1٪ BSA TBST وضع الشرائح لاحتضانها مع الجسم المضاد عند 4 درجات مئوية طوال الليل.
    ملاحظة: يجب ملء صينية الحضانة بالماء في الأسفل لضمان عدم جفاف الأقسام طوال الليل.
  10. في صباح اليوم التالي ، اغسل الشرائح باستخدام TBST لمدة 3 × 5 دقائق. أضف ما يقرب من 100 ميكرولتر من الجسم المضاد الثانوي المضاد للأرانب على الأقسام واتركه لمدة 45 دقيقة في RT. اغسل الشرائح باستخدام TBST لمدة 3 × 5 دقائق.
  11. في غطاء الدخان ، أضف ما يقرب من 100 ميكرولتر من كاشف 3,3'-diaminobenzidine (DAB) على الأقسام واحتفظ بالمحلول لمدة 3 دقائق تقريبا لكل قسم. تمنع تفاعل DAB عن طريق غسل الشرائح بماء الصنبور الجاري لمدة 10 دقائق.
  12. ضعف الشرائح المضادة مع الهيماتوكسيلين لمدة 1 دقيقة ، واشطفها بماء الصنبور الجاري لمدة دقيقتين. اغمر الشرائح في ماء سكوت لمدة 1 دقيقة ، ثم اشطفها بماء الصنبور الجاري لمدة دقيقتين أخريين.
  13. لتجفيف الأقسام ، اغمر الأقسام في 70٪ إيثانول لمدة دقيقتين ، و 100٪ إيثانول لمدة 2 × 2 دقيقة ، ثم الزيلين لمدة 2 × 2 دقيقة.
  14. في غطاء الدخان ، قم بتركيب أقسام بعناية من ثنائي بوتيل فثالات البوليسترين زيلين (DPX) وضع غطاء فوق الأقسام ، مما يضمن عدم احتجاز الفقاعات فوق الأنسجة ذات الأهمية. اترك الشرائح لتجف طوال الليل في غطاء الدخان.
  15. في اليوم التالي ، استخدم ماسح ضوئي للشرائح لالتقاط الصور وتصور التلوين.

النتائج

لتحديد الموقع الذي يمكن من خلاله تصور الأورام الإيجابية ERα بوضوح باستخدام 18F-FES PET ، تم استخدام ثلاث مجموعات من الفئران المبيضة في هذه الدراسة (الشكل 1). تم حقن مجموعتين من الفئران بخلايا MCF-7 - خط خلايا سرطان الثدي إيجابي ERα - إما صندوق النقد الدولي أو ف?...

Discussion

هنا ، نصف فائدة 18F-FES PET / MRI في الكشف عن أورام الثدي التي تتميز بتعبير ERα. على سبيل المثال ، نوضح أن أحد المواقع التي يمكن تصور فيها الأورام الإيجابية ERα هو كتف الفئران - يمكن تحديد هذه الأورام بوضوح من خلال امتصاص 18F-FES ، مقارنة بالأورام الموجودة داخل وسادة الدهون...

Disclosures

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية لسرطان الثدي (IIRS-22-071). نحن نقدر برنامج دعم البنية التحتية التشغيلية لحكومة ولاية فيكتوريا. تم إجراء هذا البحث أيضا باستخدام مختبر الهدف الصلب ، وهو شراكة ANSTO-Austin-LICR ، بدعم من مرفق التصوير الوطني وحكومة فيكتوريا. يقر المؤلفون بالمساعدة العلمية والتقنية التي يقدمها المرفق الوطني للتصوير ، وهو قدرة على البنية التحتية للبحوث التعاونية الوطنية (NCRIS) ، في عقدة La Trobe-ONJCRI ، معهد أوليفيا نيوتن جون لأبحاث السرطان (ONJCRI). تم عمل الشكلين 1 و 3 باستخدام BioRender.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
2.5% Trypsin (10x)Gibco15090-046
27 G x 13 mm 0.5 mL insulin syringeTerumoSS*05M2713KAFor cell injections
29 G x 13 mm 0.5 mL insulin syringeTerumoSS*05M2913KAFor estradiol injections
30% H2O2Chem-SupplyHA154Diluted to a 3% working solution with distilled water
Corn oilSigmaC8267
DAB Substrate KitAbcamab64238
Dako anti-rabbit-HRP, 110 mLAligent-DakoK4003Secondary antibody used for IHC
DMEM/F-12 MediumGibco11320033
Dose calibratorCapintec5130-3216
Estradiol SigmaE2758
Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAbCell Signalling Technology#8644Primary antibody used for IHC
FBSBovogenSFBS
Heat element (Infra Red Lamp)Amcal12400For tail vein dilation
MatrigelCorning356225
MultiCell 4 Channel Monitoring kit for triple- or quadruple-mouse imaging chamberMedisoPR-MC900200For monitoring of mouse respiration
NanoScan PET/MRI 3T SystemMedisoPR-RD000000For PET/MRI acquistion
PBS (1x)Gibco14190-144
TBSTThermoFisher#28360Wash buffer for IHC
Three mice imaging chamberMedisoPR-MC407300For PET/MRI acquistion

References

  1. Perou, C. M., et al. Molecular portraits of human breast tumours. Nature. 406 (6797), 747-752 (2000).
  2. Ignatov, A., Eggemann, H., Burger, E., Ignatov, T. Patterns of breast cancer relapse in accordance to biological subtype. J Cancer Res Clin Oncol. 144 (7), 1347-1355 (2018).
  3. Siegel, R. L., Giaquinto, A. N., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 74 (1), 12-49 (2024).
  4. Gnant, M., Turner, N. C., Hernando, C. Managing a long and winding road: Estrogen receptor-positive breast cancer. Am Soc Clin Oncol Educ Book. 43, e390922 (2023).
  5. Thomsen, C., Nielsen, S., Nielsen, B. S., Pedersen, S. H., Vyberg, M. Estrogen receptor-α quantification in breast cancer: Concordance between immunohistochemical assays and mRNA-in situ hybridization for ESR1 gene. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 28 (5), 347-353 (2020).
  6. Shafi, S., et al. Integrating and validating automated digital imaging analysis of estrogen receptor immunohistochemistry in a fully digital workflow for clinical use. J Pathol Inform. 13, 100122 (2022).
  7. Harvey, J. M., Clark, G. M., Osborne, C. K., Allred, D. C. Estrogen receptor status by immunohistochemistry is superior to the ligand-binding assay for predicting response to adjuvant endocrine therapy in breast cancer. J Clin Oncol. 17 (5), 1474-1474 (1999).
  8. Caruana, D., Wei, W., Martinez-Morilla, S., Rimm, D. L., Reisenbichler, E. S. Association between low estrogen receptor positive breast cancer and staining performance. NPJ Breast Cancer. 6 (1), 5 (2020).
  9. Goldstein, N. S., Ferkowicz, M., Odish, E., Mani, A., Hastah, F. Minimum formalin fixation time for consistent estrogen receptor immunohistochemical staining of invasive breast carcinoma. Am J Clin Pathol. 120 (1), 86-92 (2003).
  10. Hammond, M. E. H., et al. American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for immunohistochemical testing of estrogen and progesterone receptors in breast cancer. Arch Pathol Lab Med. 134 (6), 907-922 (2010).
  11. Allison, K. H., et al. Estrogen and progesterone receptor testing in breast cancer: ASCO/CAP guideline update. J Clin Oncol. 38 (12), 1346-1366 (2020).
  12. Amir, E., et al. Tissue confirmation of disease recurrence in breast cancer patients: Pooled analysis of multi-centre, multi-disciplinary prospective studies. Cancer Treat Rev. 38 (6), 708-714 (2012).
  13. Cardoso, F., Senkus-Konefka, E., Fallowfield, L., Costa, A., Castiglione, M. Locally recurrent or metastatic breast cancer: ESMO clinical practice guidelines for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol. 21 (Suppl 5), v15-v19 (2010).
  14. Cardoso, F., et al. 5th ESO-ESMO international consensus guidelines for advanced breast cancer (ABC 5). Ann Oncol. 31 (12), 1623-1649 (2020).
  15. James, W. F., et al. Recommendations on the use of 18F-FDG PET in oncology. J Nucl Med. 49 (3), 480-508 (2008).
  16. Pedersen, M. A., et al. Dynamic whole-body [18F]FES PET/CT increases lesion visibility in patients with metastatic breast cancer. EJNMMI Res. 14 (1), 24 (2024).
  17. Grabher, B. J. 18F-FES whole-body imaging protocol for evaluating tumor estrogen receptor status in patients with recurrent or metastatic breast cancer. J Nucl Med Technol. 51 (3), 188-193 (2023).
  18. Van Kruchten, M., et al. PET imaging of estrogen receptors as a diagnostic tool for breast cancer patients presenting with a clinical dilemma. J Nucl Med. 53 (2), 182-190 (2012).
  19. Ulaner, G. A., et al. Summary: Appropriate use criteria for estrogen receptor-targeted pet imaging with 16α-18F-fluoro-17β-fluoroestradiol. J Nucl Med. 64 (3), 351-354 (2023).
  20. He, S., Wang, M., Zhang, Y., Luo, J., Zhang, Y. Monitoring the early response of fulvestrant plus tanshinone IIA combination therapy to estrogen receptor-positive breast cancer by longitudinal 18F-FES PET/CT. Contrast Media Mol Imaging. 2019 (1), 2374565 (2019).
  21. Joseph, J. D., et al. The selective estrogen receptor downregulator GDC-0810 is efficacious in diverse models of ER+ breast cancer. eLife. 5, e15828 (2016).
  22. Alsina-Sanchis, E., et al. Intraperitoneal oil application causes local inflammation with depletion of resident peritoneal macrophages. Mol Cancer Res. 19 (2), 288-300 (2021).
  23. Sluka, P., et al. Characterization of an estrogen receptor α-selective 18F-estradiol PET tracer. World J Nucl Med. 23 (03), 153-160 (2024).
  24. Katzenellenbogen, J. A. The quest for improving the management of breast cancer by functional imaging: The discovery and development of 16α-[18f]fluoroestradiol (fes), a pet radiotracer for the estrogen receptor, a historical review. Nucl Med Biol. 92, 24-37 (2021).
  25. Boers, J., et al. Image quality and interpretation of [18F]-FES-PET: Is there any effect of food intake. Diagnostics (Basel). 10 (10), 756 (2020).
  26. Caceres, S., et al. Tumor growth progression in ectopic and orthotopic xenografts from inflammatory breast cancer cell lines. Vet Sci. 8 (9), 194 (2021).
  27. Kumar, M., Salem, K., Jeffery, J. J., Fowler, A. M. PET Imaging of Estrogen Receptors Using 18F-Based Radioligands. Estrogen Receptors. , (2022).
  28. Zhang, W., et al. Comparative study of subcutaneous and orthotopic mouse models of prostate cancer: Vascular perfusion, vasculature density, hypoxic burden and BB2r-targeting efficacy. Sci Rep. 9 (1), 11117 (2019).
  29. Lee, A. V., Oesterreich, S., Davidson, N. E. MCF-7 cells-changing the course of breast cancer research and care for 45 years. J Natl Cancer Inst. 107 (7), djv073 (2015).
  30. Pedram, H., et al. 18F-fluoroestradiol PET guides dosing of selective estrogen receptor degraders. J Nucl Med. 55 (supplement 1), 11 (2014).
  31. Ingberg, E., Theodorsson, A., Theodorsson, E., Strom, J. O. Methods for long-term 17β-estradiol administration to mice. Gen Comp Endocrinol. 175 (1), 188-193 (2012).
  32. Luengo-Mateos, M., et al. Protocol for ovariectomy and estradiol replacement in mice. STAR Protoc. 5 (1), 102910 (2024).
  33. Yang, Z., et al. High specific activity is not optimal: 18F-fluoroestradio positron emission tomography-computed tomography results in a breast cancer xenograft. J Labelled Comp Radiopharm. 59 (13), 576-581 (2016).
  34. Aliaga, A., et al. Breast cancer models to study the expression of estrogen receptors with small animal PET imaging. Nucl Med Biol. 31 (6), 761-770 (2004).
  35. Ström, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. -. M., Theodorsson, E. Ovariectomy and 17β-estradiol replacement in rats and mice: A visual demonstration. J Vis Exp. 64, e4013 (2012).
  36. Pisaneschi, F., et al. Automated, resin-based method to enhance the specific activity of fluorine-18 clicked PET radiotracers. Bioconjug Chem. 28 (2), 583-589 (2017).
  37. Johannes, N., et al. Variation of specific activities of 68Ga-aquibeprin and 68Ga-avebetrin enables selective PET imaging of different expression levels of integrins α5β1 and αvβ3. J Nucl Med. 57 (10), 1618-1624 (2016).
  38. Liu, C., Ma, G., Xu, X., Song, S., Yang, Z. Can 18F-FES PET improve the evaluation of 18F-FDG PET in patients with metastatic invasive lobular carcinoma. Clin Nucl Med. 49 (4), 301-307 (2024).
  39. Heidari, P., et al. Pharmacodynamic imaging guides dosing of a selective estrogen receptor degrader. Clin Cancer Res. 21 (6), 1340-1347 (2015).
  40. Roswall, P., et al. Microenvironmental control of breast cancer subtype elicited through paracrine platelet-derived growth factor-CC signaling. Nat Med. 24 (4), 463-473 (2018).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

18F FES MCF 7 ER BALB c

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved