A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
يصف هذا البروتوكول طريقة فريدة لبناء نموذج تقويم العظام لسرطان المثانة السطحي.
تقدم هذه الدراسة طريقة مبتكرة لإنشاء نموذج ورم مثانة الفئران تقويم العظام بكفاءة عالية وتوطين دقيق للورم. بعد تخدير إناث الفئران C57BL / 6J في وضع ضعيف ، يتم إدخال إبرة وريدية 24 جم في المثانة لإخلاء محتوياتها. ثم يتم إدخال إبرة توزيع 34 جم من خلال القسطرة ، ويتم تدويرها خمس مرات لإحداث إصابة بؤرية في الغشاء المخاطي لقبة المثانة ، ثم إزالتها لاحقا. يتم شفط معلق الخلية MB49 وتوصيله بإبرة توزيع 30 G ، والتي يتم إدخالها في المثانة عبر القسطرة. يتم حقن الخلايا السرطانية تحت المخاطية في المثانة تحت الضغط. تؤدي هذه التقنية إلى الحد الأدنى من الصدمة للفئران ، ومعدل ارتفاع الورم ، وموقع الورم الثابت. يتميز بالبساطة والاستنساخ الممتاز. يوفر هذا النموذج منصة تجريبية مثالية لتطوير العلاجات داخل المثانة لسرطان المثانة ، مما يسهل تطوير وتحسين استراتيجيات العلاج لهذا الورم الخبيث.
يمثل سرطان المثانة عبئا صحيا عالميا كبيرا ، مع تفاوتات ملحوظة حسب الجنس في الإصابة والتشخيص. يتميز هذا الورم الخبيث بأنواع فرعية جزيئية مميزة ، يرتبط كل منها بمسارات مسببة للأمراض متنوعة. تختلف السمات الجزيئية والمرضية اختلافا كبيرا بين سرطان المثانة غير الغازي للعضلات (NMIBC) وسرطان المثانة الغازي للعضلات (MIBC) 1،2. يمثل NMIBC ما يقرب من 75٪ من الحالات ، ويضم أورام من أصل ظهاري انتقالي تظل موضعية دون ورم خبيث أو انتشار. على العكس من ذلك ، يتميز MIBC بتسلل الخلايا السرطانية إلى طبقة عضلات المثانة ، مصحوبا بخطر كبير للانتشار ، مما يستلزم في كثير من الأحيان استئصال المثانة في الممارسة السريرية3.
في الأبحاث قبل السريرية ، تعتبر النماذج التي تمثل بدقة المرحلة السطحية للمرض ضرورية لتقييم العلاجات الدوائية. لذلك ، فإن إنشاء نموذج لسرطان المثانة السطحي في الموقع له أهمية قصوى ، حيث يعمل كأداة بحثية حاسمة لتطوير الأدوية السريرية وعلاجات التقطير المبتكرة.
واجه تطوير نماذج سرطان المثانة تقويم العظام للفئران تقليديا تحديات. غالبا ما تبدأ النماذج المستحثة كيميائيا كأورام سطحية ولكنها قد تتطور إلى أشكال غازية ، مع تباين يحد من فائدتها في التجارب واسعة النطاق4. تكافح نماذج زرع تقويم العظام التقليدية ، التي تعتمد على حقن الخلايا السرطانية من خلال جدار المثانة5 ، لإعادة إنتاج سرطان المثانة السطحي بأمانة. تمت تجربة طرق بديلة ، بما في ذلك إصابة الغشاء المخاطي جنبا إلى جنب مع تقطير الخلايا السرطانية6،7،8،9،10 ، ولكنها محدودة بسبب معدلات الوفيات العالية ومعدلات أخذ الورم المنخفضة ، مما يعيق تطبيقها على نطاق أوسع.
تهدف هذه الدراسة إلى تطوير طريقة جديدة لبناء نموذج سرطان المثانة السطحي الذي يوضح استقرارا أكبر ووفيات أقل ووضعا ثابتا للورم مقارنة بالنماذج الحالية. من خلال تحقيق تمثيل أكثر دقة للمرض في مراحله المبكرة ، يستعد النموذج الحالي لتعزيز التقييم الدقيق للتدخلات الوقائية والعلاجية ، وبالتالي تطوير علاج سرطان المثانة.
تمت الموافقة على جميع بروتوكولات وإجراءات التجارب الحيوانية من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية للتجارب على التابعة لجامعة تيانجين الطبية ، تيانجين ، الصين (رقم الموافقة SYXK: 2020-0010). تم استخدام إناث الفئران C57BL / 6J التي تتراوح أعمارها بين ستة إلى ثمانية أسابيع في هذه الدراسة. تم إيواء في ظروف بيئية خاضعة للرقابة ، بما في ذلك دورة الضوء والظلام لمدة 12 ساعة ، ودرجات حرارة تتراوح بين 21-25 درجة مئوية ، ومستويات رطوبة قابلة للتعديل بين 30٪ -70٪ ، والوصول غير المقيد إلى الطعام والماء ما لم ينص على خلاف ذلك. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.
1. تحضير الخلية
2. تحضير
3. توليد نموذج ورم تقويم العظام الحيواني
4. مراقبة ما بعد الجراحة
تم تقييم فعالية الحقن تحت المخاطية في البداية من خلال إعطاء Trypan Blue. بعد الحقن ، تم تصور توزيع الصبغة داخل الطبقة تحت المخاطية بوضوح ، مما يؤكد التوصيل الدقيق والخاضع للرقابة للمواد المحقونة (الشكل 1).
تم تتبع تطور الورم بدقة. بعد حوالي 14 يوما...
تعتمد الأبحاث حول سرطان المثانة على النماذج الحيوانية ، والتي لا غنى عنها لكل من البحوث الأساسية والتطبيقية. لتقليد بيئة نمو الورم بشكل أفضل ، توفر نماذج أورام المثانة التقويمية نهجا متفوقا مقارنة بنماذج الأورام تحت الجلد11.
حاليا ، يمكن تصني...
ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم مصالح متنافسة.
تم دعم هذه الدراسة من قبل صندوق المشروع الرئيسي لصناعة الصحة في بلدية تيانجين (رقم المنحة. TJWJ2022XK014) ، صندوق مشروع البحث العلمي للجنة التعليم ببلدية تيانجين (المنحة رقم 2022ZD069) ، برنامج تمويل المواهب في معهد تيانجين لجراحة المسالك البولية (المنحة رقم. MYSRC202310) ، صندوق مشروع أبحاث الطب السريري للمستشفى الثاني بجامعة تيانجين الطبية (المنحة رقم 2023LC03) ، وصندوق الشباب للمستشفى الثاني بجامعة تيانجين الطبية (المنحة رقم 2022ydey15) ، ومشروع تنمية المواهب لقسم المسالك البولية ، المستشفى الثاني بجامعة تيانجين الطبية (رقم المنحة. MNRC202313). لعب الرعاة دورا في إعداد المخطوطة ومراجعتها والموافقة عليها.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
34 G dispensing needle | Suzhou Haorun Fluid Technology Co., Ltd., Suzhou, China | SGL-362 | |
30 G dispensing needle | Suzhou Haorun Fluid Technology Co., Ltd., Suzhou, China | SGL-362 | |
Avertin | Sigma-Aldrich LLC | T48402 | |
Trypan blue | Sigma-Aldrich LLC | 302643 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved