A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
فحوصات تحمل الحرارة باستخدام نظام مراقبة نشاط ذبابة الفاكهة : دليل لتطبيق قابل للتنفيذ لتحليل البيانات
In This Article
Summary
يصف هذا التقرير طريقة لقياس ذبابة الفاكهة السوداء البالغة وقت الضربة القاضية باستخدام مراقب نشاط ذبابة الفاكهة (DAM2) استجابة لضغط حراري لتوصيل الهواء داخل غرفة الحاضنة. يقيس DAM2 النشاط عن طريق تسجيل حركات الذباب الفردية أثناء عبورها شعاع الأشعة تحت الحمراء. يتم تسهيل تحليل البيانات من خلال ملف تنفيذي جديد تم إنشاؤه بواسطة المؤلفين.
Abstract
كانت دراسة تحمل الحرارة في ذبابة الفاكهة السوداء ذات أهمية خاصة للباحثين لعقود من الزمن ، مع اتباع نهج شائع لتقييم تحمل الحرارة وهو مراقبة وقت الضربة القاضية (TKD) بعد التعرض لدرجة حرارة مرتفعة. بشكل كلاسيكي ، يتم وضع الذباب في قوارير فردية ويوضع داخل حمام مائي ساخن. ثم يتم رصد TKD يدويا من قبل الباحثين. على الرغم من أنها راسخة للغاية ، إلا أنها لا تزال هناك مشاكل ذاتية وتطبيق ثابت لتعريف ملموس لوقف كل حركة ، بما في ذلك التشنجات العضلية ، عند تنفيذ هذه المقايسات اليدوية. لقد طورنا طريقة عالية الإنتاجية لأتمتة فحوصات تحمل الحرارة باستخدام أجهزة مراقبة نشاط ذبابة الفاكهة TriKinetics (DAM2). لمرافقة نظام DAM2 ، قمنا بكتابة برنامج وأنشأنا ملف تنفيذي سهل الاستخدام لقراءة آخر مرة للحركة تلقائيا من بيانات النشاط التي تم إنشاؤها. ثم يكتب هذا البرنامج النصي إلى ملف .csv وقت الشلل الحراري (TKD) لكل ذبابة. تظهر بياناتنا أن طريقة DAM2 الآلية هذه متسقة وموثوقة. وفي الوقت نفسه ، فإن ملفات تعريف النشاط التي تم إنشاؤها من بيانات عدد الأنشطة ذات أهمية. يمكن تجميع ملفات تعريف النشاط هذه ولديها القدرة على توسيع فحوصات تحمل الحرارة لتشمل المكونات السلوكية غير المدروسة نسبيا لتحمل الحرارة. سيصف هذا البروتوكول بالتفصيل كيفية استخدام نظام DAM2 و HoTDAM! برنامج لتقدير تحمل الحرارة في D. melanogaster.
Introduction
تستجيب الحرارة الخارجية عادة للإجهاد الحراري مع زيادة النشاط الحركي. كانت هذه الظاهرة واضحة للباحثين لعقود من الزمن ، مع الاستجابة السلوكية المميزة التي وصفها كاولز وبوجيرت في عام 19441. وصفوا كيف سيظهر الكائن الحي الخاضع للإجهاد الحراري أولا زيادة في الحركة الحركية. مع تزايد الإجهاد الحراري ، تتخللها رشقات نارية قصيرة من النشاط فترات من الخمول. درجة الحرارة التي لم يعد بإمكان الكائن الحي أن يظهر عندها حركة منسقة هي الحد الأقصى الحراري الحرج (CTmax). تتبع البريد العشوائي العضلي ، وفي النهاية ينهار الكائن الحي1،2. يصعب تعريف هذا الانهيار ويمثل شيئا يشبه "الصرامة الحرارية أو الغيبوبة أو الموت"2. هنا سنستخدم مصطلح الانهيار الفسيولوجي للإشارة نظريا إلى نقطة النهاية الضبابية هذه للإجهاد الحراري.
ذبابة الفاكهة السوداء والحشرات الصغيرة الأخرى كانت نماذج قيمة لدراسة الإجهاد الحراري. لتقدير جزء على الأقل من المجموعة المعقدة من السمات التي تشكل تحمل الحرارة ، لاحظ العديد من الباحثين يدويا الوقت ودرجة الحرارة التي يحدث فيها الانهيار الفسيولوجي ، مما يمثل وقت الضربة القاضية (TKD) و CTmax ، على التوالي. على الرغم من أنها راسخة جدا ، إلا أن طرق الفحص اليدوي هذه تعاني من بعض العيوب. قد يكون من الصعب إنشاء تعريف تشغيلي للانهيار الفسيولوجي وتطبيقه بشكل مناسب على جميع الحالات ، خاصة عندما يكون المراقبون أقل خبرة. على سبيل المثال ، في أي نقطة ينتقل الكائن الحي من التشنجات العضلية إلى الانهيار؟ يمكن أن يكون نمط التشنجات العضلية ونشاط النوبات قبل الانهيار غير متوقع ويمكن أن يعقد الملاحظة الدقيقة2،3 ، مما يهدد الدقة والدقة. وفي الوقت نفسه ، فإن صعوبة الملاحظة تحد أيضا من عدد الكائنات الحية التي يمكن فحصها في وقت واحد ، مما يحد من قابلية التوسع.
نظرا لأن الزيادة في النشاط هي استجابة ثابتة للحرارة و TKD و CTmax هما في النهاية النقطة التي يتوقف عندها النشاط ، فقد سعينا إلى استخدام أجهزة مراقبة نشاط ذبابة الفاكهة (DAM2) من TriKinetics لأتمتة فحوصات تحمل الحرارة. لقد نشرنا مؤخرا طريقة للفحص الآلي ، جنبا إلى جنب مع برنامج سهل الاستخدام ، باستخدام نظام DAM24. تم التحقق من صحة الاختبار من خلال مقارنة مقاييس تحمل الحرارة من حيث TKD بمقايسة TKD الكلاسيكية القائمة على المراقبة اليدوية عبر عدة عوامل. استكشفنا أيضا مكون النشاط الحركي لمقايسات TKD لتوصيف النمط الظاهري للتحمل الحراري المحفز. أطلقنا على الفحص والبرنامج المصاحب HoTDAM! (فحوصات تحمل الحرارة باستخدام نظام مراقبة نشاط ذبابة الفاكهة). نقدم هنا وصفا تفصيليا لطريقة فحص تحمل الحرارة الآلي باستخدام نظام DAM2 و HoTDAM! برمجيات. الاختبار سهل الاستخدام وقابل للتطوير بسهولة للسماح بقياس العديد من الكائنات الحية في وقت واحد.
في هذه المخطوطة ، أجرينا فحوصات TKD على الذباب المتحور الحسي الحراري (مستقبلات عابرة محتملة ankyrin 1 ؛ TRPA1) وضوابطها الجينية (أبيض1118 ؛ ث1118). تم اختيار هذه الكائنات الحية للتأكيد على أهمية النشاط المتزايد المميز الذي شوهد أثناء الإجهاد الحراري للمقايس. وهي أن كائنات TRPA1 لا تظهر سلوك الهروب هذا، مما يوضح العلاقة الجوهرية بين الاستجابات السلوكية المحفوظة وتقديرات تحمل الحرارة، مثل المعارف التقليدية التقليدية. أجرينا الفحص لكل من الإناث والذكور ، جنبا إلى جنب مع تنفيذ معالجة مسبقة للتصلب الحراري. النتائج التمثيلية المعروضة هنا هي بيانات من فحوصات جديدة تماما من تلك المستخدمة في فحوصات التحقق الأصلية المنشورة سابقا.
Protocol
1. تربية الذباب
- اختر مخزون / خط الذباب المناسب للتحقيق.
ملاحظة: لتوضيح الفحص ، استخدمنا مخزون الضربة القاضية المحتمل للمستقبلات العابرة TRPA1 والتحكم الجيني فيه ، مخزون w1118 . - الحفاظ على مخزون الذباب في ظل ظروف متسقة حسب الاقتضاء. لاتباع هذا البروتوكول ، يتم تخزين المنزل عند 25 درجة مئوية تحت دورة نهارية 12:12 على الطعام القياسي (دقيق الذرة والدبس وخميرة التورولا).
- افصل بين الذكور والإناث بالتخدير الخفيف.
ملاحظة: اعتمادا على التجربة ، يمكن استخدام الذباب البكر أو المتزاوج.- اسمح للذكور والإناث البالغين (بشكل منفصل لكلا السلالتين) بالتزاوج والبيض لمدة 5 أيام. امسح البالغين من الزجاجات.
- عندما يبدأ البالغون في الإغلاق بعد عدة أيام ، قم بمسح الزجاجات مرة أخرى. بعد يومين ، افصل بين الذكور والإناث باستخدام تخدير الأثير الخفيف واتركهم ينضجون بشكل منفصل بكثافة 25 ذبابة لكل قارورة.
2. المعالجة المسبقة
- قم بتطبيق المعالجة المسبقة أو المتغير المستقل الذي سيحدد المجموعات التجريبية (الوراثية أو البيئية أو الدوائية أو غير ذلك).
- لاتباع هذا البروتوكول ، افصل البالغين حسب الجنس ، وبعد 5 أيام ، قم بمعالجة نصف البالغين مسبقا عن طريق غمر قارورة محكمة الغلق تحتوي على الكائنات الحية في حمام مائي عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. احتفظ بأدوات التحكم في الحاضنة عند 25 درجة مئوية. اسمح للذباب بالتعافي لمدة 24 ساعة بعد المعالجة المسبقة ، قبل فحص تحمل الحرارة.
3. إعداد نظام DAM2
- قم بتحميل الذباب في أنابيب مراقبة DAM2 وقم بتغطية الأنابيب في كلا الطرفين بالقطن. إذا كان سيتم تقييم الذباب لتحمل الحرارة على الفور ، فلا تستخدم أي تخدير أثناء تحميل الكائنات الحية في أنابيب الشاشة لتجنب أي آثار مربكة محتملة مرتبطة بالتعرض للتخدير. بدلا من ذلك ، قم بشفط الذباب الفردي من قوارير التثبيت إلى أنابيب الشاشة.
- ضع أنابيب الفحص في شاشات النشاط ، مع ملاحظة أرقام الفتحات التي يتم تحميل المجموعات المختلفة.
ملاحظة: قد تكون عشوائية اعتمادا على التجربة إذا كان الموقع داخل الشاشة يمكن اعتباره متغيرا مربكا. - برنامج الحصول على البيانات DAM2
ملاحظة: تم وصف نظام وبرنامج DAM2 بدقة في ورقة بيانات برنامج DAMSystem3 المتوفرة على موقع الشركة على الويب (انظر جدول المواد). ارجع إلى إرشادات DAM2 لاستكشاف الأخطاء وإصلاحها المحددة والوظائف العامة. نقدم هنا إرشادات لاستخدام النظام في سياق اختبار تحمل الحرارة لدينا.- يراقب نظام DAM2 عدد المرات التي تكسر فيها ذبابة فردية داخل كل أنبوب شعاع الأشعة تحت الحمراء. ثم يقوم برنامج الحصول على البيانات بفهرسة هذا العدد وإعادة تعيينه في كل فترة زمنية محددة. ضمن التفضيلات، حدد الفاصل الزمني للقراءة لاستخدامه في المقايسة. لقد وجدنا فاصلا زمنيا للقراءة يبلغ 15 ثانية لتحقيق توازن جيد بين الدقة وأخطاء القراءة.
ملاحظة: يوصى بألا يكون الفاصل الزمني للقراءة أقصر بالثواني من عدد الشاشات المستخدمة. سيعطي الفاصل الزمني الأقصر للقراءة دقة زمنية أفضل للمقايسة ولكن من المحتمل أيضا أن يزيد من حالات أخطاء القراءة. يمكن أن يتخلف البرنامج عن الركب أثناء محاولة فهرسة القراءات. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الكمبيوتر الأحدث والأسرع يقطع شوطا طويلا في منع أخطاء القراءة. - أثناء التفكير في أخطاء القراءة ، تأكد من ضبط الكمبيوتر المستخدم لتشغيل برنامج الحصول على بيانات DAM2 على عدم السكون أو السبات أبدا حتى لا يقاطع الفحص. علاوة على ذلك، تأكد من تعيين التحديثات التلقائية (بما في ذلك أي تحديثات شبكة تسيطر عليها المؤسسة) إلى إيقاف التشغيل أثناء جمع البيانات.
- تحقق من أن جميع الشاشات متصلة وتتواصل مع البرنامج. تأكد من أن حالة كل جهاز عرض خضراء ضمن علامة تبويب البيانات الحالية .
ملاحظة: راجع ورقة بيانات برنامج DAMSystem3 للحصول على تفاصيل حول المشكلات التي تشير إليها رموز الألوان المختلفة. - سيقوم برنامج الحصول على البيانات تلقائيا بكتابة أعداد الأنشطة إلى الملفات النصية في مجلد البيانات داخل ملفات النظام. لتسهيل تحليل البيانات ، احذف أي ملفات نصية داخل مجلد البيانات هذا قبل بدء تشغيل برنامج الحصول على البيانات لأي فحص.
ملاحظة: سيتم ملء الملفات النصية تلقائيا ، لذلك يجوز إزالتها من هذا المجلد لمسح البيانات القديمة دون إعاقة البرنامج.
- يراقب نظام DAM2 عدد المرات التي تكسر فيها ذبابة فردية داخل كل أنبوب شعاع الأشعة تحت الحمراء. ثم يقوم برنامج الحصول على البيانات بفهرسة هذا العدد وإعادة تعيينه في كل فترة زمنية محددة. ضمن التفضيلات، حدد الفاصل الزمني للقراءة لاستخدامه في المقايسة. لقد وجدنا فاصلا زمنيا للقراءة يبلغ 15 ثانية لتحقيق توازن جيد بين الدقة وأخطاء القراءة.
4. فحص تحمل الحرارة
- قم بتحميل الشاشات في حاضنة الفحص.
- ابدأ تشغيل برنامج الاستحواذ واترك فهرس البرنامج لفترة زمنية محددة (على سبيل المثال ، 40 فهرسا أو 10 دقائق إذا تم ضبط الفاصل الزمني للقراءة على 15 ثانية) قبل تطبيق الإجهاد الحراري.
ملاحظة: هذا يسمح ببعض التأقلم مع الأنابيب والتعافي من حركة الشاشات أثناء إعدادها. خاصة إذا تم تحليل النشاط أثناء الفحص ، فإن وقت التأقلم هذا سيؤسس نشاطا أساسيا قبل تحريض الإجهاد الحراري. اعتمادا على الطبيعة المحددة للفحص الذي يتم إجراؤه ، يمكن تخطي مرحلة التأقلم هذه ، مع وضع الشاشات مباشرة في الحاضنة بالفعل في درجة حرارة الإجهاد. - في حالة إجراء اختبار ثابت (TKD) ، اضبط الحاضنة على المنحدر في أسرع وقت ممكن إلى درجة الحرارة الضارة المحددة بعد فترة التأقلم. وسيبدأ تشغيل متغير الاستجابة باعتباره آخر وقت مسجل للحركة (أي آخر مؤشر غير صفر) لتقدير المعارف التقليدية.
- في حالة إجراء فحص ديناميكي ، حدد معدل زيادة درجة الحرارة بعد فترة التأقلم. هنا يكون متغير الاستجابة المقاس تقنيا وقت ثانية. سيتزامن الوقت الذي يتم فيه تسجيل الحركة الأخيرة مع درجة حرارة (CTmax) ، اعتمادا على معدل الارتفاع.
- راقب عدد النشاط في الوقت الفعلي على شاشة نظام DAM في برنامج الاستحواذ أو افحص الملفات النصية مباشرة في مجلد البيانات في ملفات برنامج DAMSystem3. انسخ الملفات النصية وافتح النسخة بدلا من الملف الأصلي داخل مجلد البيانات لتجنب التسبب في أي مشاكل في تسجيل البيانات الحية.
- بعد عدم رؤية أي حركة في أي من الذباب لعدة دقائق ، أوقف برنامج الاستحواذ.
ملاحظة: من خلال فحوصاتنا ، وجدنا أن بضع إلى عدة دقائق من الخمول يدل على الانهيار الفسيولوجي بسبب الإجهاد الحراري المشابه لتلك التي شوهدت في فحوصات TKD اليدوية الكلاسيكية. ومع ذلك ، فإن هذا يعتمد على سلوك الهروب التلقائي. على هذا النحو ، ضع في اعتبارك المتغيرات المربكة المحتملة إذا كان العلاج المحدد في التحقيق قد يغير هذه الاستجابة السلوكية. علاوة على ذلك ، اعتمادا على المعلمات المحددة للفحص (على سبيل المثال ، درجة الحرارة والعلاج) ، من الواضح أن طول الفحص سيختلف
5. تنظيم البيانات وتحليلها
ملاحظة: راجع الفيديو التكميلي S1 للحصول على إرشادات حول كيفية تنزيل التطبيق القابل للتنفيذ من GitHub ، بالإضافة إلى الوظائف الأساسية للبرنامج.
- بمجرد الحصول على البيانات، امسح الملفات النصية بحثا عن الأخطاء باستخدام البرنامج المشار إليه (راجع جدول المواد) وحدد نقاط بدء وإيقاف محددة لتجميع بيانات النشاط. إذا تم تنفيذ فاصل زمني للتأقلم مدته 10 دقائق، فابدأ التجميع لمدة 10 دقائق في تسجيل النشاط. راجع المناقشة للحصول على مزيد من التفاصيل حول binning.
- افتح HoTDAM! برنامج التحليل واستيراد ملفات بيانات الشاشة الممسوحة ضوئيا بالنقر فوق ملف | تحميل بيانات المراقبة.
ملاحظة: يتوفر البرنامج والتطبيق القابل للتنفيذ من GitHub (https://github.com/MatthewR47/HoTDAM) أو من موقع الشركة على الويب ضمن قسم برامج التحليل . لاحظ أن التطبيق القابل للتنفيذ متوافق فقط مع أنظمة تشغيل Windows في الوقت الحالي. - أضف تسميات المجموعة للإشارة إلى مجموعات العلاج التي تتوافق مع الخلية الموجودة داخل شاشات DAM2.
ملاحظة: يتوافق تخطيط واجهة البرنامج مع تخطيط الشاشات. - انقر فوق بدء تعريف المجموعات المتعددة لسحب مربع حوار لإضافة تعيين مجموعة سيتم تطبيقه على خلايا متعددة. بمجرد قبول تعيين المجموعة ، انقر فوق الخلايا لتطبيق تعيين المجموعة ، ثم انقر فوق إيقاف تعيين المجموعة المتعددة.
ملاحظة: يقوم البرنامج بتنظيم وتصدير بيانات DAMSystem3 إلى ملفات .csv لتحليلها في برامج الإحصاء. - قم بتصدير TKD (أي آخر فهرس غير صفر) لكل ذبابة داخل الشاشات إلى ملف .csv بالنقر فوق ملف | تصدير بيانات الضربة القاضية | تصدير جميع الشاشات أو تصدير الشاشات المحددة. سيتم تنظيم TKD لكل ذبابة في الإخراج حسب تعيين المجموعة.
- تصدير بيانات النشاط لكل ذبابة بالنقر فوق ملف | بيانات نشاط التصدير | قم بتصدير جميع الشاشات أو تصدير الشاشات المحددة إلى ملف .csv ، مع الاحتفاظ فقط بالطابع الزمني وبيانات العد ، مما يجعل ملف البيانات أسهل في العمل معه ، مع تعيين تسميات مجموعة مخصصة لكل ذبابة.
ملاحظة: تتوافق الأعمدة العديدة الأولى في ملفات بيانات DAMSystem3 مع البيانات الداخلية للشاشات (على سبيل المثال ، مراقبة الضوء أو رسائل الخطأ) أثناء الاستحواذ. توجد بيانات العد في الأعمدة 11-42 (راجع ورقة بيانات DamSystem3 للحصول على التفاصيل). سيؤدي تصدير بيانات النشاط باستخدام برنامج التحليل إلى إزالة جميع الأعمدة باستثناء عمودي الطابع الزمني وبيانات العدد. - في حالة إجراء تجربة CTmax، استخدم TKD لتحديد CTmax باستخدام معدل تكثيف درجة الحرارة.
ملاحظة: تمت كتابة برنامج التحليل بطريقة موجهة للكائنات في C # (كود المصدر المتاح على GitHub ؛ https://github.com/MatthewR47/HoTDAM) بحيث يمكن تعديل جوانب البرنامج بسهولة للسماح بالتخصيص لتلبية أغراض محددة.
6. الإحصاء
ملاحظة: يمكن استخدام العديد من الاختبارات المختلفة لتحليل بيانات TKD، اعتمادا على تفاصيل الإعداد التجريبي.
- استخدم تحليل البقاء على قيد الحياة (على سبيل المثال ، انحدار كوكس ، كابلان ماير) لتصور الضربة القاضية على أنه حدث ستواجهه كل ذبابة داخل الفحص.
ملاحظة: للحصول على مراجعة مفصلة ، راجع سلسلة برادبورن وكلارك المكونة من 4 أوراق تناقش تحليل البقاء على قيد الحياة وتنفيذه5،6،7،8. - استخدم ANOVA لتقييم الاختلافات في المجموعة ومقارنة الطرائق ، خاصة عند التحقق من صحة الفحص الآلي لظروف معينة.
- تحليل بيانات TKD باستخدام تحليل بقاء كابلان ماير. قم بتقسيم الملف حسب المخزون بحيث يتم إجراء التحليل بشكل منفصل (على سبيل المثال ، لخطوط الأسهم TRPA1 و w1118). اختر متغير الوقت ك TKD (بالدقيقة) ، والضربة القاضية كحدث ، والمعالجة المسبقة كعامل ، والجنس كطبقات.
- قم بإجراء اختبارات رتبة السجل ، و Breslow ، و Tarone-Ware لمقارنة المعالجة المسبقة لكل طبقة (أي الجنس) ، لأغراض توضيحية توضح عدة طرق.
- بناء مؤامرات البقاء على قيد الحياة.
النتائج
أجريت تحليلات مخزونات TRPA1 و w1118 بشكل منفصل. يمكن العثور على أوقات TKD المئوية وغيرها من الأوصاف في الجدول 1.
| النسبالمئوية أ | ||||||||
| جنس | ا... | |||||||
Discussion
طريقة فحص تحمل الحرارة التي نصفها هنا متعددة الاستخدامات وقابلة للتطوير. لقد نشرنا سابقا دراسة التحقق حيث قارنا HoTDAM! إلى اختبار TKD الكلاسيكي القائم على الملاحظة ووجد أن الاختبار الآلي يعطي نفس الاتجاه العام عبر عدة عوامل4 (الشكل 3). بمعنى آخر ?...
Disclosures
ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.
Acknowledgements
تم دعم المشروع الموصوف من خلال منح جائزة التطوير المؤسسي (IDeA) من المعهد الوطني للعلوم الطبية العامة التابع للمعاهد الوطنية للصحة (5P20GM103427 و 1U54GM115458). برنامج زملاء الباحثين الجامعيين في جامعة الأمم المتحدة وبرنامج الأبحاث الصيفي لطلاب الطب بجامعة UNMC.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 14 mL polystyrene test tubes | Falcon | 352057 | |
| 30 gallon fish tank | Wal-mart | ||
| 8 oz bottles | Genesee | 32-129F | |
| Constant Climate Chamber | Memmert | HPP750eco | |
| cornmeal | Lab Scientific | FLY801010 | |
| DAM2 Drosophila Activity Monitor | TriKinetics | DAM2 | (DAMSystem3 Data Sheet) https://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Price%20List%202024.7.pdf |
| DAMSystem data acquisition software | TriKinetics | free download | |
| Drosophila agar | Lab Scientific | FLY80201 | |
| ethanol | Fisher Scientific | BP82011 | |
| Ether | Fisher Scientific | E134-4 | |
| FileScan software | TriKinetics | for scanning for text errors, binning data, and output | |
| FlyStuff Flugs for bottles | Genesee | 49-100 | |
| FlyStuff Flugs for vials | Genesee | 49-102 | |
| FlyStuff vials | Genesee | 32-113RL | |
| HoTDAM software | Github or Trikinetics | https://github.com/MatthewR47/HoTDAM | |
| Immersion circulating heater | PolyScience | MX-CA11B | |
| molasses | Lab Scientific | FLY80084 | |
| propionic acid | Fisher Scientific | A258-500 | |
| Pyrex Glass tubes 5 x 65 mm for DAM2 | TriKinetics | PGT 5x65 | https://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Price%20List%202024.7.pdf |
| small paint brush | Wal-mart | ||
| SPSS Statistics | IBM | ||
| tegosept | Lab Scientific | FLY55015 | |
| torula yeast | MP Biomedicals | 290308505 | |
| TRPA1 mutant stock | Bloomington Stock center | 26504 | w[1118]; TI{w[+mW.hs]=TI}TrpA1[1] |
| w1118 stock | Bloomington Stock center | 3605 |
References
- Cowles, R. B., Bogert, C. M. A preliminary study of the thermal requirements of desert reptiles. Bull Am Mus Nat Hist. 83, 261-296 (1944).
- Lutterschmidt, W. I., Hutchison, V. H. The critical thermal maximum: history and critique. Can J Zool. 75, 1561-1574 (1997).
- Jørgensen, L. B., Malte, H., Overgaard, J. How to assess Drosophila heat tolerance: Unifying static and dynamic tolerance assays to predict heat distribution limits. Funct Ecol. 33 (4), 629-642 (2019).
- Rokusek, B., et al. HoTDAM! An easy-to-use automated assay expands the inducible thermotolerance phenotype in Drosophila melanogaster: Heat hardening reduces motility. Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 286, 111522 (2023).
- Bradburn, M. J., Clark, T. G., Love, S. B., Altman, D. G. Survival analysis part III: Multivariate data analysis - Choosing a model and assessing its adequacy and fit. Br J Cancer. 89 (4), 605-611 (2003).
- Bradburn, M. J., Clark, T. G., Love, S. B., Altman, D. G. Survival analysis part II: Multivariate data analysis- An introduction to concepts and methods. Br J Cancer. 89 (3), 431-436 (2003).
- Clark, T. G., Bradburn, M. J., Love, S. B., Altman, D. G. Survival analysis part IV: Further concepts and methods in survival analysis. Br J Cancer. 89 (5), 781-786 (2003).
- Clark, T. G., Bradburn, M. J., Love, S. B., Altman, D. G. Survival analysis part I: Basic concepts and first analyses. Br J Cancer. 89 (2), 232-238 (2003).
- Hazra, A., Gogtay, N. Biostatistics series module 9: survival analysis. Indian J Dermatol. 62 (3), 251-257 (2017).
- Stevenson, R. D. The relative importance of behavioral and physiological adjustments controlling body temperature in terrestrial ectotherms. Am Nat. 126 (3), 362-386 (1985).
- Grigg, G. C., Beard, L. A., Augee, M. L. The evolution of endothermy and its diversity in mammals and birds. Physiol Biochem Zool. 77 (6), 982-997 (2004).
- Soto-Padilla, A., et al. Thermosensory perception regulates speed of movement in response to temperature changes in Drosophila melanogaster. J Exp Biol. 221 (10), jeb174151 (2018).
- Hoffmann, A. A., Sørensen, J. G., Loeschcke, V. Adaptation of Drosophila to temperature extremes: bringing together quantitative and molecular approaches. J Therm Biol. 28 (3), 175-216 (2003).
- Terblanche, J. S., et al. Ecologically relevant measures of tolerance to potentially lethal temperatures. J Exp Biol. 214 (22), 3713-3725 (2011).
- Rezende, E. L., Castaneda, L. E., Santos, M. Tolerance landscapes in thermal ecology. Funct Ecol. 28 (4), 799-809 (2014).
- MacLean, H. J., Hjort Hansen, J., Sørensen, J. G. Validating the automation of different measures of high temperature tolerance of small terrestrial insects. J Insect Physiol. 137, 104362 (2022).
- Gioia, A., Zars, T. Thermotolerance and place memory in adult Drosophila are independent of natural variation at the foraging locus. J Comp Physiol A. 195, 777-782 (2009).
- Kjærsgaard, A., et al. The effect of developmental temperature fluctuation on wing traits and stressed locomotor performance in Drosophila melanogaster, and its dependence on heterozygosity. Evol Ecol Res. 14 (7), 803-819 (2012).
- Bak, N. K., Rohde, P. D., Kristensen, T. N. Strong sex-dependent effects of malnutrition on life- and healthspan in Drosophila melanogaster. Insects. 15 (1), 9 (2023).
- Bettencourt, B. R., et al. Natural variation in Drosophila stressed locomotion meets or exceeds variation caused by Hsp70 mutation: analysis of behavior and performance. Behav Genet. 393, 306-320 (2009).
- Kjærsgaard, A., et al. Locomotor activity of Drosophila melanogaster in high temperature environments: plastic and evolutionary responses. Clim Res. 43 (1-2), 127-134 (2010).
Reprints and Permissions
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved