JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

דו"ח זה מתאר שיטה למדידת זמן Drosophila melanogaster בוגר להפלה באמצעות מוניטור פעילות דרוזופילה (DAM2) בתגובה ללחץ חום בהולכת אוויר בתוך תא אינקובטור. DAM2 מודד פעילות על ידי רישום תנועות זבוב בודדות כאשר הן חוצות קרן אינפרא אדום. ניתוח הנתונים מקל על ידי קובץ הפעלה חדשני שנוצר על ידי המחברים.

Abstract

המחקר של עמידות לחום ב- Drosophila melanogaster היה מעניין במיוחד לחוקרים במשך עשרות שנים, עם גישה נפוצה להערכת סובלנות לחום היא לפקח על הזמן להפיל (TKD) לאחר חשיפה לטמפרטורה גבוהה. באופן קלאסי, זבובים שוכנים בבקבוקונים בודדים וממוקמים בתוך אמבט מים מחומם. לאחר מכן TKD מנוטר באופן ידני על ידי חוקרים. בעוד מבוסס היטב, נותרו בעיות של סובייקטיביות ויישום עקבי של הגדרה מוחשית של הפסקת כל תנועה, כולל התכווצויות שרירים, בעת יישום בדיקות ידניות אלה. פיתחנו שיטה בעלת תפוקה גבוהה לאוטומציה של בדיקות עמידות לחום באמצעות TriKinetics Drosophila Activity Monitors (DAM2). כדי ללוות את מערכת DAM2, כתבנו תוכנית ויצרנו קובץ הפעלה קל לשימוש כדי לקרוא באופן אוטומטי את הזמן האחרון של התנועה מנתוני הפעילות שנוצרו. סקריפט זה כותב לקובץ .csv את הזמן לשיתוק חום (TKD) עבור כל זבוב. הנתונים שלנו מראים ששיטת DAM2 אוטומטית זו עקבית ואמינה. בינתיים, פרופילי פעילות שנוצרו מנתוני ספירת הפעילות מעניינים. פרופילי פעילות אלה ניתנים להידור ויש להם פוטנציאל להרחיב את מבחני סבילות החום כך שיכללו את המרכיבים ההתנהגותיים שלא נחקרו יחסית של עמידות לחום. פרוטוקול זה יתאר בפירוט כיצד להשתמש במערכת DAM2 וב- HoTDAM! תוכנה להערכת עמידות לחום ב- D. melanogaster.

Introduction

אקטותרמים מגיבים בדרך כלל ללחץ חום עם פעילות מוטורית מוגברת. תופעה זו הייתה ברורה לחוקרים במשך עשרות שנים, עם התגובה ההתנהגותית האופיינית שתוארה על ידי קאולס ובוגרט בשנת 19441. הם תיארו כיצד אורגניזם תחת לחץ חום יראה תחילה תנועה מוטורית מוגברת. ככל שעומס החום מצטבר, התפרצויות קצרות של פעילות משולבות בתקופות של חוסר פעילות. הטמפרטורה שבה האורגניזם אינו יכול עוד להראות תנועה מתואמת היא המקסימום התרמי הקריטי (CTmax). ספאם שרירי עוקב, ובסופו של דבר האורגניזם קורס 1,2. קשה להגדיר קריסה זו והיא מייצגת משהו הדומה ל"קפדנות חום, תרדמת או מוות"2. כאן נשתמש במונח קריסה פיזיולוגית כדי להתייחס באופן תיאורטי לנקודת קצה מטושטשת זו של עקת חום.

דרוזופילה מלנוגסטר וחרקים קטנים אחרים היו מודלים חשובים לחקר עקת חום. כדי להעריך לפחות חלק מהאוסף המורכב של תכונות המהוות עמידות לחום, חוקרים רבים צפו ידנית בזמן ובטמפרטורה שבהם מתרחשת קריסה פיזיולוגית, המייצגת את הזמן להפלה (TKD) ו- CTmax, בהתאמה. למרות שהן מבוססות היטב, שיטות בדיקה ידניות אלה סובלות מכמה חסרונות. הגדרה אופרטיבית של קריסה פיזיולוגית יכולה להיות קשה להגדרה ויישום הולם לכל המקרים, במיוחד כאשר הצופים מנוסים פחות. לדוגמה, באיזו נקודה האורגניזם עובר מהתכווצויות שרירים להתמוטטות? דפוס התכווצויות השרירים ופעילות ההתקפים לפני ההתמוטטות יכול להיות בלתי צפוי ויכול לסבך תצפית מדויקת 2,3, מאיימת על דיוק ודיוק. בינתיים, הקושי בתצפית גם מגביל את מספר האורגניזמים שניתן לבחון בו זמנית, מה שמגביל את יכולת ההרחבה.

מכיוון שעלייה בפעילות היא תגובה עקבית לחום ו-TKD ו-CTmax הם בסופו של דבר הנקודה שבה הפעילות נפסקת, ביקשנו להשתמש ב-Drosophila Activity Monitors (DAM2) מבית TriKinetics כדי להפוך את בדיקות הסבילות לחום לאוטומטיות. לאחרונה פרסמנו שיטה לבדיקה אוטומטית, יחד עם תוכנה קלה לשימוש, באמצעות מערכת DAM24. הבדיקה אומתה על ידי השוואת מדדים של עמידות לחום במונחים של TKD לבדיקת TKD ידנית קלאסית המבוססת על תצפית על פני מספר גורמים. חקרנו גם את מרכיב הפעילות המוטורית של מבחני TKD כדי לאפיין עוד יותר את פנוטיפ התרמו-סבילות המושרה. קראנו לבדיקה ולתוכנה הנלווית HoTDAM! (בדיקות עמידות לחום באמצעות מערכת ניטור פעילות דרוזופילה). כאן אנו מספקים תיאור מפורט של שיטת בדיקת סובלנות החום האוטומטית באמצעות מערכת DAM2 ו- HoTDAM! תוכנה. הבדיקה קלה לשימוש וניתן להרחבה בקלות כדי לאפשר מדידה של אורגניזמים רבים בו זמנית.

בכתב היד הזה ביצענו מבחני TKD על זבובים מוטנטיים תרמו-חושיים (פוטנציאל קולטן חולף אנקירין 1; TRPA1) והבקרות הגנטיות שלהם (לבן1118; w1118). אורגניזמים אלה נבחרו כדי להדגיש את חשיבות הפעילות המוגברת האופיינית שנצפתה במהלך עקת חום עבור הבדיקה. כלומר, אורגניזמים TRPA1 אינם מראים התנהגות בריחה זו, מה שממחיש את הקשר הפנימי בין תגובות התנהגותיות שמורות לבין הערכות של סובלנות לחום, כגון TKD. ביצענו את הבדיקה הן עבור נקבות והן עבור זכרים, יחד עם יישום טיפול מקדים להקשחת חום. התוצאות המייצגות המוצגות כאן הן נתונים מבדיקות חדשות לחלוטין מאלה ששימשו במבחני האימות המקוריים שפורסמו בעבר.

Protocol

1. גידול זבובים

  1. בחר את מלאי / קו הזבוב המתאים לחקירה.
    הערה: כדי להמחיש את הבדיקה, השתמשנו במלאי הנוקאאוט של פוטנציאל הקולטן הארעי TRPA1 ובבקרה הגנטית שלו, מלאי w1118 .
  2. לשמור על מניות הזבוב בתנאים עקביים לפי הצורך. כדי לעקוב אחר פרוטוקול זה, מלאי הבית ב 25 ° C תחת מחזור יומי 12: 12 על מזון סטנדרטי (קמח תירס, מולסה, שמרי טורולה).
  3. יש להפריד בין זכרים ונקבות בהרדמה קלה.
    הערה: בהתאם לניסוי, ניתן להשתמש בזבובים בתוליים או מזדווגים.
    1. אפשרו לזכרים ונקבות בוגרים (בנפרד עבור שני המלאי) להזדווג ולבצע אוביפוזיט במשך 5 ימים. נקו את המבוגרים מהבקבוקים.
    2. כאשר המבוגרים מתחילים להיסגר מספר ימים לאחר מכן, נקו שוב את הבקבוקים. לאחר יומיים, להפריד את הזכרים והנקבות באמצעות הרדמה אתר אור ולאפשר להם להתבגר בנפרד בצפיפות של 25 זבובים לכל בקבוקון.

2. טיפול מקדים

  1. ליישם את הטיפול המקדים או את המשתנה הבלתי תלוי שיגדיר את קבוצות הניסוי (גנטי, סביבתי, תרופתי או אחר).
    1. כדי לעקוב אחר פרוטוקול זה, להפריד את המבוגרים לפי מין, ולאחר 5 ימים, לטפל מחצית המבוגרים על ידי טבילת בקבוקון אטום המכיל את האורגניזמים באמבט מים ב 37 ° C במשך 1 שעה. שמור את הפקדים באינקובטור ב 25 °C (75 °F). יש לאפשר לזבובים להתאושש במשך 24 שעות לאחר טיפול מקדים, לפני בדיקת סבילות לחום.

3. הגדרת מערכת DAM2

  1. טען את הזבובים לתוך צינורות צג DAM2 וכסה את הצינורות בשני קצותיהם בכותנה. אם יש להעריך את עמידות הזבובים לחום באופן מיידי, אין להשתמש בהרדמה כלשהי בעת העמסת האורגניזמים לתוך צינורות הצג כדי למנוע השפעות מבלבלות פוטנציאליות הקשורות לחשיפה להרדמה. במקום זאת, שאפו זבובים בודדים מבקבוקוני האחיזה לתוך צינורות הצג.
  2. הכנס את צינורות הבדיקה לצגי הפעילות, ושים לב לאילו מספרי חריצים נטענות הקבוצות השונות.
    הערה: אלה עשויים להיות אקראיים בהתאם לניסוי אם מיקום בתוך הצג עשוי להיחשב משתנה מבלבל.
  3. תוכנה לרכישת נתונים DAM2
    הערה: מערכת DAM2 והתוכנה מתוארות ביסודיות בגיליון נתוני התוכנה של DAMSystem3 הזמין באתר האינטרנט של החברה (ראה טבלת חומרים). עיין בהוראות DAM2 לקבלת פתרון בעיות ספציפי ופונקציונליות כללית. כאן אנו מספקים הדרכה לשימוש במערכת בהקשר של בדיקת עמידות החום שלנו.
    1. מערכת DAM2 מנטרת את מספר הפעמים שזבוב בודד בתוך כל צינור שובר קרן אינפרא אדום. לאחר מכן, התוכנה לרכישת נתונים יוצרת אינדקס ומאפסת ספירה זו בכל מרווח זמן מוגדר. תחת העדפות, בחר את מרווח הזמן לקריאה שישמש בבדיקה. מצאנו מרווח קריאה של 15 שניות כדי להשיג איזון טוב בין רזולוציה לשגיאות קריאה.
      הערה: מומלץ שמרווח הקריאה לא יהיה קצר בשניות ממספר הצגים הנמצאים בשימוש. מרווח קריאה קצר יותר ייתן רזולוציה זמנית טובה יותר לבדיקה, אך גם עשוי להגדיל את המקרים של שגיאות קריאה. התוכנה יכולה להישאר מאחור בזמן שהיא מנסה לאנדקס את הקריאות. בנוסף, מחשב חדש ומהיר יותר עושה דרך ארוכה במניעת שגיאות קריאה.
    2. בעת שקילת שגיאות קריאה, ודא שהמחשב המשמש להפעלת תוכנת רכישת הנתונים DAM2 מוגדר למצב שינה או שינה לעולם לא כדי לא להפריע לבדיקה. יתר על כן, ודא שעדכונים אוטומטיים (כולל עדכוני רשת בשליטת מוסד) מוגדרים למצב כבוי בעת איסוף נתונים.
    3. ודא שכל הצגים מחוברים ומתקשרים עם התוכנה. ודא שהמצב של כל צג ירוק תחת כרטיסיית הנתונים הנוכחית .
      הערה: עיין בגליון נתוני התוכנה של DAMSystem3 לקבלת פרטים על הבעיות שאליהן מתייחסים קודי צבע שונים.
    4. תוכנת איסוף הנתונים תכתוב באופן אוטומטי את ספירות הפעילות לקבצי טקסט בתיקיית הנתונים בתוך קבצי המערכת. כדי להקל על ניתוח הנתונים, מחק את כל קבצי הטקסט בתוך תיקיית נתונים זו לפני הפעלת תוכנת איסוף הנתונים עבור כל בדיקה.
      הערה: קבצי הטקסט יאוכלסו באופן אוטומטי, ולכן מותר להסיר אותם מתיקיה זו כדי לנקות נתונים ישנים מבלי לפגוע בתוכנית.

4. בדיקת סובלנות חום

  1. טען את הצגים לחממת הבדיקה.
  2. הפעל את תוכנת הרכישה ותן לתוכנה ליצור אינדקס למשך זמן מוגדר (לדוגמה, 40 אינדקסים או 10 דקות אם מרווח הקריאה מוגדר ל- 15 שניות) לפני הפעלת לחץ החום.
    הערה: הדבר מאפשר הסתגלות מסוימת לצינורות והתאוששות מתנועת הצגים בעת הגדרתם. במיוחד אם הפעילות במהלך הבדיקה מנותחת, זמן הסתגלות זה יבסס פעילות בסיסית לפני השראת עקת חום. בהתאם לאופי הספציפי של הבדיקה המבוצעת, ניתן לדלג על שלב ההתאקלמות הזה, כאשר הצגים ממוקמים ישירות לתוך האינקובטור כבר בטמפרטורת הלחץ.
  3. אם אתה מבצע בדיקה סטטית (TKD), הגדר את האינקובטור לכבוש מהר ככל האפשר לטמפרטורה המזיקה שנקבעה לאחר תקופת ההתאקלמות. משתנה התגובה יופעל כזמן התנועה האחרון שנרשם (כלומר, המדד האחרון שאינו אפס) כדי להעריך TKD.
    1. אם מבצעים בדיקה דינמית, לקבוע את הקצב שבו הטמפרטורה תעלה לאחר תקופת ההתאקלמות. כאן משתנה התגובה שנמדד הוא שוב פעם מבחינה טכנית. הזמן שבו נרשמת התנועה האחרונה יחפוף לטמפרטורה (CTmax), בהתאם לקצב ההשתוללות.
    2. עקוב אחר ספירת הפעילות בזמן אמת בתצוגת מערכת DAM בתוכנת הרכישה או בדוק ישירות את קבצי הטקסט בתיקיית הנתונים בקבצי התוכנית DAMSystem3. העתק את קבצי הטקסט ופתח את העותק בניגוד לקובץ המקורי בתיקיית הנתונים כדי למנוע בעיות בהקלטת נתונים חיים.
    3. לאחר שלא נראית תנועה באף אחד מהזבובים במשך מספר דקות, עצור את תוכנת הרכישה.
      הערה: בבדיקות שלנו, מצאנו כי כמה עד כמה דקות של חוסר פעילות מעידות על קריסה פיזיולוגית עקב לחץ חום דומה לזה שנראה במבחני TKD הידניים הקלאסיים. עם זאת, הדבר תלוי בהתנהגות הבריחה הספונטנית. לכן, שקול משתנים מבלבלים אפשריים אם הטיפול הספציפי בחקירה עשוי לשנות תגובה התנהגותית זו. יתר על כן, בהתאם לפרמטרים הספציפיים של הבדיקה (למשל, טמפרטורה, טיפול), אורך הבדיקה ישתנה כמובן.

5. ארגון וניתוח נתונים

הערה: ראה וידאו משלים S1 לקבלת הדרכה כיצד להוריד את יישום ההפעלה מ- GitHub, כמו גם פונקציונליות בסיסית של התוכנה.

  1. לאחר קבלת הנתונים, סרוק את קובצי הטקסט לאיתור שגיאות באמצעות התוכנה שאליה בוצעה הפניה (עיין בטבלת החומרים) ובחר נקודות התחלה ועצירה ספציפיות לאיחוד נתוני פעילות. אם בוצע מרווח התאקלמות של 10 דקות, התחל את הקישור 10 דקות לתוך הקלטת הפעילות. ראה את הדיון לפרטים נוספים על binning.
  2. פתח את HoTDAM! תוכנת ניתוח וייבא את קבצי נתוני הצג הסרוקים על-ידי לחיצה על קובץ | טען נתוני צג.
    הערה: התוכנה ויישום ההפעלה זמינים מ- GitHub (https://github.com/MatthewR47/HoTDAM) או מאתר האינטרנט של החברה במקטע Analysis Software . שים לב שיישום ההפעלה תואם רק למערכות ההפעלה של Windows בשלב זה.
  3. הוסף הקצאות קבוצות כדי לציין אילו קבוצות טיפול תואמות לאיזה תא בתוך צגי DAM2.
    הערה: פריסת ממשק התוכנה תואמת לפריסת הצגים.
  4. לחץ על התחל הגדרת קבוצות מרובות כדי למשוך תיבת דו-שיח להוספת ייעוד קבוצה שיוחל על תאים מרובים. לאחר קבלת ייעוד הקבוצה, לחץ על התאים כדי להחיל את ייעוד הקבוצה ולאחר מכן לחץ על הפסק ייעוד קבוצות מרובות.
    הערה: התוכנה מארגנת ומייצאת נתוני DAMSystem3 לקבצים .csv לניתוח בתוכנת סטטיסטיקה.
  5. יצא את ה- TKD (כלומר, האינדקס האחרון שאינו אפס) עבור כל זבוב בתוך הצגים לקובץ .csv על-ידי לחיצה על קובץ | ייצוא נתוני Knockdown | יצא את כל הצגים או יצא צגים נבחרים. TKD עבור כל זבוב יאורגן בפלט לפי ייעוד קבוצה.
  6. ייצוא נתוני פעילות עבור כל טיסה על ידי לחיצה על קובץ | ייצוא נתוני פעילות | יצא את כל הצגים או יצא צגים נבחרים לקובץ .csv, תוך שמירה רק על חותמת הזמן וספירת הנתונים, מה שמקל על העבודה עם קובץ הנתונים, תוך הקצאת תוויות קבוצתיות ייעודיות לכל זבוב.
    הערה: העמודות הראשונות בקבצי הנתונים של DAMSystem3 תואמות לנתונים פנימיים של הצגים (לדוגמה, ניטור אור או הודעות שגיאה) במהלך הרכישה. נתוני הספירה נמצאים בעמודות 11-42 (עיין בגיליון הנתונים של DamSystem3 לקבלת פרטים). ייצוא נתוני הפעילות באמצעות תוכנת הניתוח יסיר את כל העמודות מלבד חותמת הזמן ועמודות נתוני הספירה.
  7. אם אתה מבצע ניסוי CTmax, השתמש ב- TKD כדי לקבוע את ה- CTmax באמצעות קצב השתוללות הטמפרטורה.
    figure-protocol-7850
    הערה: תוכנת הניתוח נכתבה באופן מונחה עצמים ב- C# (קוד מקור זמין ב- GitHub; https://github.com/MatthewR47/HoTDAM) כך שניתן לשנות בקלות היבטים של התוכנה כדי לאפשר התאמה אישית כדי לענות על מטרות ספציפיות.

6. סטטיסטיקה

הערה: ניתן להשתמש בבדיקות רבות ושונות כדי לנתח את נתוני TKD, בהתאם לפרטים של מערך הניסוי.

  1. השתמש בניתוח הישרדות (למשל, רגרסיה של קוקס, קפלן-מאייר) כדי להמשיג את ההפלה כאירוע שכל זבוב בתוך הבדיקה יחווה.
    הערה: לסקירה מפורטת, ראה סדרת 4 המאמרים של Bradburn and Clark הדנה בניתוח הישרדות ויישומו 5,6,7,8.
  2. השתמש ב- ANOVA כדי להעריך הבדלים בין קבוצות ולהשוות אופנים, במיוחד בעת אימות הבדיקה האוטומטית עבור תנאים ספציפיים.
  3. נתח את נתוני TKD באמצעות ניתוח הישרדות קפלן-מאייר. פצל את הקובץ לפי מלאי כך שהניתוח יבוצע בנפרד (לדוגמה, עבור קווי מניות TRPA1 ו - W1118 ). בחר את משתנה הזמן כמו TKD ( בדקות), knockdown כמו האירוע, pretreatment כמו הגורם, ומין כמו השכבות.
  4. בצע את בדיקות log-rank, Breslow, ו- Tarone-Ware כדי להשוות טיפול מקדים עבור כל שכבה (כלומר, מין), לצורך המחשה המציגה מספר שיטות.
  5. לבנות חלקות הישרדות.

תוצאות

הניתוחים עבור מניות TRPA1 ו - w1118 בוצעו בנפרד. זמני TKD אחוזון ותיאורים אחרים ניתן למצוא בטבלה 1.

אחוזוניםא
מיןטיפול

Discussion

שיטת בדיקת עמידות החום שאנו מתארים כאן היא רב-תכליתית וניתנת להרחבה. פרסמנו בעבר מחקר תיקוף שבו השווינו את HoTDAM! שיטה לבדיקת TKD קלאסית, מבוססת תצפית, ומצאתי שהבדיקה האוטומטית נותנת מראה את אותה מגמה כללית על פני מספר גורמים4 (איור 3). במילים אחרו...

Disclosures

המחברים מצהירים כי אין להם ניגודי עניינים.

Acknowledgements

הפרויקט המתואר נתמך על ידי מענקי פרס הפיתוח המוסדי (IDeA) מהמכון הלאומי למדעי הרפואה הכלליים של המכונים הלאומיים לבריאות (5P20GM103427 ו- 1U54GM115458). תוכנית עמיתי המחקר לתואר ראשון של UNK ותוכנית מחקר הקיץ של הסטודנטים לרפואה של UNMC.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
14 mL polystyrene test tubesFalcon352057
30 gallon fish tankWal-mart
8 oz bottlesGenesee32-129F
Constant Climate ChamberMemmertHPP750eco
cornmealLab ScientificFLY801010
DAM2  Drosophila Activity MonitorTriKineticsDAM2(DAMSystem3 Data Sheet) https://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Price%20List%202024.7.pdf
DAMSystem data acquisition softwareTriKineticsfree download
Drosophila agarLab ScientificFLY80201
ethanolFisher ScientificBP82011
EtherFisher ScientificE134-4
FileScan softwareTriKineticsfor scanning for text errors, binning data, and output
FlyStuff Flugs for bottlesGenesee49-100
FlyStuff Flugs for vialsGenesee49-102
FlyStuff vialsGenesee32-113RL
HoTDAM softwareGithub or Trikineticshttps://github.com/MatthewR47/HoTDAM
Immersion circulating heaterPolyScienceMX-CA11B
molassesLab ScientificFLY80084
propionic acidFisher ScientificA258-500
Pyrex Glass tubes 5 x 65 mm for DAM2TriKineticsPGT 5x65https://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Price%20List%202024.7.pdf
small paint brushWal-mart
SPSS StatisticsIBM
tegoseptLab ScientificFLY55015
torula yeastMP Biomedicals290308505
TRPA1 mutant stockBloomington Stock center26504w[1118]; TI{w[+mW.hs]=TI}TrpA1[1]
w1118 stockBloomington Stock center3605

References

  1. Cowles, R. B., Bogert, C. M. A preliminary study of the thermal requirements of desert reptiles. Bull Am Mus Nat Hist. 83, 261-296 (1944).
  2. Lutterschmidt, W. I., Hutchison, V. H. The critical thermal maximum: history and critique. Can J Zool. 75, 1561-1574 (1997).
  3. Jørgensen, L. B., Malte, H., Overgaard, J. How to assess Drosophila heat tolerance: Unifying static and dynamic tolerance assays to predict heat distribution limits. Funct Ecol. 33 (4), 629-642 (2019).
  4. Rokusek, B., et al. HoTDAM! An easy-to-use automated assay expands the inducible thermotolerance phenotype in Drosophila melanogaster: Heat hardening reduces motility. Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 286, 111522 (2023).
  5. Bradburn, M. J., Clark, T. G., Love, S. B., Altman, D. G. Survival analysis part III: Multivariate data analysis - Choosing a model and assessing its adequacy and fit. Br J Cancer. 89 (4), 605-611 (2003).
  6. Bradburn, M. J., Clark, T. G., Love, S. B., Altman, D. G. Survival analysis part II: Multivariate data analysis- An introduction to concepts and methods. Br J Cancer. 89 (3), 431-436 (2003).
  7. Clark, T. G., Bradburn, M. J., Love, S. B., Altman, D. G. Survival analysis part IV: Further concepts and methods in survival analysis. Br J Cancer. 89 (5), 781-786 (2003).
  8. Clark, T. G., Bradburn, M. J., Love, S. B., Altman, D. G. Survival analysis part I: Basic concepts and first analyses. Br J Cancer. 89 (2), 232-238 (2003).
  9. Hazra, A., Gogtay, N. Biostatistics series module 9: survival analysis. Indian J Dermatol. 62 (3), 251-257 (2017).
  10. Stevenson, R. D. The relative importance of behavioral and physiological adjustments controlling body temperature in terrestrial ectotherms. Am Nat. 126 (3), 362-386 (1985).
  11. Grigg, G. C., Beard, L. A., Augee, M. L. The evolution of endothermy and its diversity in mammals and birds. Physiol Biochem Zool. 77 (6), 982-997 (2004).
  12. Soto-Padilla, A., et al. Thermosensory perception regulates speed of movement in response to temperature changes in Drosophila melanogaster. J Exp Biol. 221 (10), jeb174151 (2018).
  13. Hoffmann, A. A., Sørensen, J. G., Loeschcke, V. Adaptation of Drosophila to temperature extremes: bringing together quantitative and molecular approaches. J Therm Biol. 28 (3), 175-216 (2003).
  14. Terblanche, J. S., et al. Ecologically relevant measures of tolerance to potentially lethal temperatures. J Exp Biol. 214 (22), 3713-3725 (2011).
  15. Rezende, E. L., Castaneda, L. E., Santos, M. Tolerance landscapes in thermal ecology. Funct Ecol. 28 (4), 799-809 (2014).
  16. MacLean, H. J., Hjort Hansen, J., Sørensen, J. G. Validating the automation of different measures of high temperature tolerance of small terrestrial insects. J Insect Physiol. 137, 104362 (2022).
  17. Gioia, A., Zars, T. Thermotolerance and place memory in adult Drosophila are independent of natural variation at the foraging locus. J Comp Physiol A. 195, 777-782 (2009).
  18. Kjærsgaard, A., et al. The effect of developmental temperature fluctuation on wing traits and stressed locomotor performance in Drosophila melanogaster, and its dependence on heterozygosity. Evol Ecol Res. 14 (7), 803-819 (2012).
  19. Bak, N. K., Rohde, P. D., Kristensen, T. N. Strong sex-dependent effects of malnutrition on life- and healthspan in Drosophila melanogaster. Insects. 15 (1), 9 (2023).
  20. Bettencourt, B. R., et al. Natural variation in Drosophila stressed locomotion meets or exceeds variation caused by Hsp70 mutation: analysis of behavior and performance. Behav Genet. 393, 306-320 (2009).
  21. Kjærsgaard, A., et al. Locomotor activity of Drosophila melanogaster in high temperature environments: plastic and evolutionary responses. Clim Res. 43 (1-2), 127-134 (2010).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

214Time To Knockdown TKDTriKinetics Drosophila Activity Monitor DAM2

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved