يتم اعتماد علامة ماكولي بمنحة إرشادهم التدريب NIH 5T32HL066991 - 07 ويدعم زاندر Wehrens المعاهد الوطنية للصحة / NHLBI المنح 1R01HL091947 - 01A209 - 03S109 و3R01HL089598

1. إعداد مقياس البعد عن الزرع الجراحي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل إدراج مقياس البعد an ECG في الماوس ، فمن المهم للتأكد من أن مقياس البعد ECG غير معقمة وتعمل على نحو جيد. عادة ما يتم توفير أجهزة القياس عن بعد جديد في حالة عقيمة من قبل الشركة المصنعة. يمكن إعادة استخدامها telemeters ECG بشرط تنظيف الجهاز باستخدام Tergazyme حل 1 ٪ على الأقل 4 ساعات. يمكنك شطف مقياس البعد مع الماء المعقم بعد التنظيف مع Tergazyme. بالإضافة إلى ذلك ، استخدم Wavicide - 01 بين عشية وضحاها مطهر لتعقيم مقياس البعد ECG. يجب التأكد من غسل مطهر قبالة مع الماء المعقم قبل 48 ساعة من زرع في الفئران. مخزن في وعاء معقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحقق من مقياس البعد يؤدي لسلامة الأسلاك كل إجراء وغمد العازلة. بدوره على الارسال القياس باستخدام مغناطيس داخل لوح 5 سم من مقياس البعد ، واختبار الإشارة مع راديو AM 530 تردد. وينبغي أن يكون إشارة قوية وواضحة ويجب أن تختلف في شدتها والملعب على أساس التلاعب الأسلاك. تسجيل رقم الطراز ، وعدد مقياس البعد المسلسل ، وقيمة المعايرة ECG. مصنعين كثيرا ما يوصي بأن مقياس البعد ينبغي أن يكون على لمدة 24 ساعة قبل الزرع ، راجع دليل التعليمات لمقياس البعد الخاص للحصول على تفاصيل محددة. في هذا المثال ، سوف نستخدم العلوم البيانات الدولي (DSI) مقياس البعد عن التوطين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن تحقيق مقياس البعد إعداد تؤدي عن طريق خفض السلبية (أبيض) إلى حوالي 3.5 سم والموجب (الحمراء) يؤدي إلى 2.5 سم. هذه هي أطوال الأمثل لغرس القيادة السلبية في صدره الأيسر ، ويؤدي إيجابي في البطن اليسرى (انظر الشكل 2). المقبل ، إزالة غمد العازلة لفضح 7 ملم من الأسلاك. الطلاء نهاية الرصاص المعدني مع superglue العقيمة ، مثل جيمس بوند ، الطبيب البيطري ، ونعلق ثم القبعات تؤدي إلى نصائح المعدنية. وهذه القبعات تجنب تآكل الجلد الناجم عن الرصاص التنسيب. وينبغي أن يتعرض حوالي 2-3 ملم الأسلاك المعدنية للاستشعار عن ضربات القلب الكهربائي الأصلي. </li></ol> 2. الجراحية لزرع مقياس البعد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من اجل استخدام تقنية معقمة في جراحة الفئران ، وسوف تحتاج قفازات معقمة وثنى العقيمة ، والخيوط الجراحية Prolene 6-0. سوف تحتاج أيضا إلى 2 أزواج من ملقط معقم ، 1 زوج من كليلة العضوية مقص ، مشرط ، وسائق الإبرة. ويمكن تعقيم الأدوات الجراحية في كوب حبة تعقيم تسخينه إلى 250 درجة مئوية. يجب التأكد من تعقيم وغسل مقياس البعد كما هو موضح سابقا قبل الاستخدام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الماوس لعملية جراحية بواسطة التخدير لأول مرة الماوس في مربع التعريفي به 3 ٪ في isoflurane 0.5 لتر / دقيقة O2 100 ٪. استخدام وسادة التدفئة ، مثل مضخة - T ، والتي توزع المياه الدافئة ، للحفاظ على درجة حرارة الماوس للتخدير. يمكن رصد درجة الحرارة عن طريق المستقيم التحقيق ، اذا شئت. عندما يكون مخدرا بشكل كاف الماوس ، حلق تماما في البطن والصدر من الفأرة مع كليبرز الكهربائية. إعادة تخدير الفأر مع isoflurane قبل نقل الماوس لأنبوب تدفق مستمر ، مستلق ، مع رئيس والذيل التي تواجه بعيدا نحو لكم. الشريط أسفل الكفوف الماوس على طاولة العمليات الجراحية ساخنة. مسح البطن مع مسحة الكحول لإزالة الشعر ، وحلق لتنظيف الحقل من المنطوق. تطبيق ثلاثة معاطف منفصلة مع مسحات من betadine لتطهير منطقة البطن والصدر. التحقق من المستوى الصحيح للتخدير عن طريق الضغط على الماوس فراش الظفر. بعد أن تم إعداد الماوس لإجراء عملية جراحية ، واستخدام قفازات معقمة وتطبيق ثنى العقيمة إلى الميدان الجراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> داخل الصفاق غرس مقياس البعد يوفر ميزة من التجريب فسيولوجيا التمارين. عن الإدراج داخل الصفاق ، وتبدأ عملية جراحية باستخدام مشرط لإنشاء خط الوسط شق عمودي في الجلد المغطي البطن تقريبا 2.5 سم في الطول. الجلد بعناية منفصلة من الأنسجة الضامة الكامنة باستخدام مقص كليلة العضوية. ثم ، إنشاء شق عمودي في خط الوسط ألبا الخط البريتوني المغطي ، ما يقرب من 1.5 سم في الطول. بالإضافة إلى ذلك ، وخلق حفرة صغيرة في الصفاق أعلاه فقط (الجمجمة) إلى شق البريتوني ، والذي سيكون بمثابة منفذ ليقود تحت الجلد. أثناء تنفيذ عملية جراحية ، والحفاظ على رطوبة موقع الجراحية التي تقطر أحيانا عقيمة المالحة على ميدان التشغيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج مقياس البعد في تجويف البريتوني الحق. ملقط إدراج في الحفرة متفوقة على مقياس البعد وسحب كل من يؤدي ما يصل من خلال ثقب الرصاص بحيث تكون بارزة من البريتوني. الاستخدام المتواصل 6-0 Prolene الغرز لإغلاق 1.5 سم البريتوني شق خط الوسط العمودي. </li></ol> 3. تؤدي زراعة وإغلاق البطن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توضع يؤدي ECG في التكوين الثاني الرصاص. زمام المبادرة مع غمد بيضاء / شفاف هو سلبي ، ويتم وضعها في البطن العلوية اليسرى. أولا ، خلق الجلد 0.5 سم في شق صدره الماوس اليمنى العليا.المقبل ، واستخدام المقص صريحة لإنشاء نفق إلى شق البطن. سحب زمام المبادرة من خلال النفق واستخدام الخيط Prolene 6-0 لترسيخ تؤدي إلى العضلات الصدرية. تأكد من الدرز على رأس الجزء الظاهر من الرصاص ، وإنشاء اتصال جيد بين العضلات يؤدي والكامنة. استخدام الخيط second الأقرب إلى واحد المذكورة آنفا ، إلى شل تؤدي إلى العضلات. إغلاق شق الجلد باستخدام خياطة Prolene 6-0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضعت قيادة الإيجابية (غمد أحمر) في البطن اليسرى تحت الحجاب الحاجز الأيسر وأسفل القلب. يرتكز تؤدي إلى أنسجة البريتوني الكامنة التي خياطة Prolene 6-0 وينبغي أن يكون الاتصال جيدة مع النسيج البريتوني. شق إضافية ليس من الضروري في هذه الخطوة لأن موقع غرس الرصاص على مقربة من خط الوسط شق عمودي ، وبالتالي يمكن الوصول إليها بسهولة مع حقل الجراحية الموجودة. لاحظ أنه يجب رفع الأنسجة البريتوني لتجنب ثقب في الأمعاء الكامنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق اللفافة البطن والجلد بالتتابع مع Prolene 6-0 في طبقات. </li></ol> 4. العناية اللاحقة للعمليات الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعطي الماوس 0.1 مل من [1 ملغ / مل] البوبرينورفين لتسكين فورا بعد الجراحة. السماح للماوس للتعافي من عملية جراحية في لوحة ساخنة. إذا كان لعملية جراحية طويلة الماوس&gt; 30 دقيقة ، أو إذا كان الماوس يظهر الجافة ، قد حقن معقمة المالحة 0،2-0،3 مل في الصفاق لمعالجة الجفاف. لتسكين بعد العملية الجراحية استمرت الممارسة القياسية لتقديم الفئران مع البوبرينورفين مرتين يوميا لمدة ثلاثة أيام ، ومن ثم حسب الحاجة كل ثماني ساعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف قبالة betadine مع مسحة الكحول لتجنب تهيج بعد الجراحة. تذكر لتسجيل الوزن بعد الجراحة لقرار لاحق في مرحلة ما بعد العمليات الجراحية الصحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 8-24 ساعة بعد الجراحة ، ويعطي الماوس تسكين إضافي مع البوبرينورفين عند الحاجة ، حيث سيؤدي ذلك إلى تخفيف الألم والحد من التوظيف يؤدي الفشل في الماوس الخمش في الموقع بعد الجراحة. </li></ol> 5. ممثل النتائج عندما يقوم بشكل صحيح ، يجب أن يكون مغلق الماوس شقوق في البطن تحت الجلد مع يقود تحت الجلد. عادة ، يأخذ الماوس 10-30 دقيقة للتعافي من التخدير. يستغرق حوالي 7-10 أيام قبل أن الفئران قد تعافى تماما من عملية جراحية ، كما يتضح من التعافي من فقدان الوزن بعد الجراحة ، وتطبيع التنقل. المضاعفات الأكثر شيوعا من الجراحة ويؤدي تآكل الأطراف عن طريق الجلد في الأيام ال 10 الأولى بعد الجراحة. ويمكن تفادي هذه المضاعفات المشتركة من خلال الالتزام بحزم تحت الجلد يؤدي إلى الأنسجة تحت الجلد أو الغشاء البريتوني. يؤدي هذا الأسلوب يتجنب الركود ، والتي تخلق الاحتكاك والضغط على الجلد عندما ambulates الماوس. وإن كان من المحتمل أقل شيوعا ، والعدوى والإنتان يحدث من أخطاء في أسلوب عقيم ، أو من عدم اكتمال telemeters التنظيف المستخدمة. قد يتم تسجيل تخطيط القلب الانتاج بمقدار مصفوفة الاستقبال إلى جانب برنامج للحصول على البيانات ، مثل بيانات العلوم الدولية (الطبري). وينبغي أن تتضمن النتائج الموجي موجة ف محددة بوضوح ، وتدل على زوال الاستقطاب الأذيني ، وكذلك موجة QRS مما يدل على الاستقطاب البطيني ، كما هو مبين في الشكل 3 أدناه. وينبغي أن نوعية جيدة وتخطيط القلب تتبع موجة ف محددة بوضوح تسبق موجة QRS محددة بوضوح في نسبة 1:1. يجب أن يكون هناك إشارة الخلفية منخفضة وفترات RR ينبغي العادية في البرية من نوع الفئران. قد يكون ضعف جودة ECG التتبع وغير واضحة أو موجات P QRS ، أو إشارة الخلفية ، التي قد تجعل من الصعب تحليل الكمبيوتر لاحقة. قد تكون ثابتة وتخطيط القلب الفقيرة التي تتبع يؤدي مقياس البعد إعادة زرع ، وعادة في وقت واحد. لإعادة زرع تؤدي مقياس البعد ، ضع الماوس تحت التخدير ، وباستخدام تقنية جراحية ، وجعل شق في الجلد المغطي مباشرة زمام المبادرة في السؤال. عند الوصول إلى الرصاص وقطع خياطة ترسيخ الرصاص ، وتؤدي إلى نقل الموقع المطلوب قبل ترسيخ قيادة مرة أخرى. أخيرا ، على مقربة من موقع الجراحية مع Prolene 6-0. <img src="/files/ftp_upload/1739/1739fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1 : مثال على مقياس البعد مع حيوان صغير يؤدي الإيجابية والسلبية. بشكل عام ، وتؤدي الحمراء هي قيادة إيجابية ، والرصاص الأبيض هو تؤدي سلبية. وينبغي أن يؤدي كل لها غمد العازلة ، ملم 5-7 من الأسلاك المكشوفة والمغطاة تلميح البلاستيكية ، مما يمنع تآكل من الرصاص عن طريق الجلد. <img src="/files/ftp_upload/1739/1739fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2 : يبين الكرتون السليم المواقع غرس مقياس البعد على الماوس. هو مزروع الأبيض (السلبية) الرصاص في صدره الماوس العلوي الأيسر ، ويتم وضع (إيجابي) أحمر يؤدي في البطن اليسرى ، ان هذه الحواس مقياس البعد عن &quot;قيادة اثنين&quot; التكوين. &lt;ع = فئة &quot;jove_content&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1739/1739fig3.jpg" alt="الشكل 3" /> الشكل 3 : الموجي ممثل ماوس في إيقاع الجيوب الأنفية طبيعية. ف موجة الاستقطاب الأذيني ويمثل المركب QRS يمثل الاستقطاب البطيني. وينبغي أن يكون الموجي ذات جودة عالية ومتميزة موجة ف تسبق كل مجمع QRS في نسبة 1:1.

<ol>
	<li>Cerrone, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+ventricular+tachycardia+and+fibrillation+elicited+in+a+knock-in+mouse+model+carrier+of+a+mutation+in+the+cardiac+ryanodine+receptor.">Bidirectional ventricular tachycardia and fibrillation elicited in a knock-in mouse model carrier of a mutation in the cardiac ryanodine receptor.</a> Circ Res. 96 (10), e77-e77 (2005).</li><li>Chelu, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calmodulin+kinase+II-mediated+sarcoplasmic+reticulum+Ca2++leak+promotes+atrial+fibrillation+in+mice.">Calmodulin kinase II-mediated sarcoplasmic reticulum Ca2+ leak promotes atrial fibrillation in mice.</a> J Clin Invest. 119 (7), 1940-1940 (1940).</li><li>Sood, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+calcium+leak+due+to+FKBP12.6+deficiency+in+mice+facilitates+the+inducibility+of+atrial+fibrillation.">Intracellular calcium leak due to FKBP12.6 deficiency in mice facilitates the inducibility of atrial fibrillation.</a> Heart Rhythm. 5 (7), 1047-1047 (2008).</li><li>Swoap, S. J., Gutilla, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+changes+during+daily+torpor+in+the+laboratory+mouse.">Cardiovascular changes during daily torpor in the laboratory mouse.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 297 (3), R769-R769 (2009).</li><li>Costa-Goncalves, d. a., C, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+multidomain+protein+spinophilin+in+blood+pressure+and+cardiac+function+regulation.">Role of the multidomain protein spinophilin in blood pressure and cardiac function regulation.</a> Hypertension. 52 (4), 702-702 (2008).</li><li>Wehrens, X. H., Kirchhoff, S., Doevendans, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+electrocardiography:+an+interval+of+thirty+years.">Mouse electrocardiography: an interval of thirty years.</a> Cardiovasc Res. 45 (1), 231-231 (2000).</li></ol>

الخطوات الحاسمة لهذا الإجراء هي التنظيف السليم وإعداد الماوس قبل الجراحة البقاء. عندما يتم تنظيفها بشكل صحيح مقياس البعد وموقع المنطوق الماوس ، هناك أفضل بكثير بعد الجراحة النتيجة. بالإضافة إلى ذلك ، اهتماما وثيقا لقيادة التنسيب بعد الجراحة يقلل تآكل الجلد. التعديل...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Steri 250 Bead Sterilizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Inotech</td>
<td>IS-250</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blunt-Ended Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5980</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blunt-Ended Forceps (x2)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5138</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Veterinary Anesthesia Vaporizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Surgivet</td>
<td>Isotec 4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T/Pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gaymar</td>
<td>P/N11184-000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propylene Blue Monofilament Suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ethicon</td>
<td>8718</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Povodone Iodine, 10%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Equate</td>
<td>N/A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol Swabs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PDI</td>
<td>B339</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tergazyme</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alconox</td>
<td>21837-118</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wavidicde-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Medical Chemical Corporation</td>
<td>Wavicide-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ECG Telemeter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DataSciences International</td>
<td>EA-F20</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

ambulatory ecg recording in mice

القياس عن بعد تسجيل تخطيط القلب في الفئران أمر ضروري لفهم الآليات الكامنة وراء عدم انتظام ضربات القلب ، واضطرابات التوصيل ، والموت القلبي المفاجئ. على الرغم من الاستفادة من السطح لتخطيط القلب على المدى القصير قياسات فترات الموجي ، أنه ليس من العملي لدراسات طويلة الأجل لتقلب معدل ضربات القلب أو أسر من الحلقات النادرة من عدم انتظام ضربات القلب. زرع telemeters ECG تقديم مزايا زرع جراحية بسيطة ، وعلى المدى الطويل تسجيل electrograms الفئران في العيادات الخارجية ، والتوسع في وقت واحد مع تسجيلات متعددة من الحيوانات. هنا ، نقدم دليل خطوة بخطوة لغرس telemeters لتسجيل تخطيط القلب المتنقلة في الفئران. مطلوب الالتزام الدقيق الأسلوب العقيم لتحقيق نتائج إيجابية مع بقاء إمكانية غرس وتسجيل من اسابيع الى اشهر. وهكذا ، زرع ECG القياس هو أداة قيمة للكشف عن معلومات مهمة عن القلب الكهربية المتنقلة في النماذج الحيوانية مثل الماوس.

Watch this Scientific Journal Video about Ambulatory ECG Recording in Mice at JoVE.com

Ambulatory ECG Recording in Mice

وقد برزت القياس عن بعد ECG بوصفه أداة أساسية في تقييم النماذج الحيوانية لعدم انتظام ضربات القلب والموت المفاجئ بسبب أمراض القلب. هنا ، فإننا نقدم دليلا متدرج للتسجيلات ECG القياس عن بعد للتطبيق في المدى الطويل مراقبة تخطيط القلب المتنقلة في الفئران.

الإسعافية ECG التسجيل في الفئران

Telemetric ECG recording in mice is essential to understanding the mechanisms behind arrhythmias, conduction disorders, and sudden cardiac death. Although ...

Research

JoVE Journal

Biology

23.5K Views.  Baylor College of Medicine (BCM). وقد برزت القياس عن بعد ECG بوصفه أداة أساسية في تقييم النماذج الحيوانية لعدم انتظام ضربات القلب والموت المفاجئ بسبب أمراض القلب. هنا ، فإننا نقدم دليلا متدرج للتسجيلات ECG القياس عن بعد للتطبيق في المدى الطويل مراقبة تخطيط القلب المتنقلة في الفئران.

Video: Ambulatory ECG Recording in Mice

Heterotopic Heart Transplantation in Mice

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable for studying rejection and immune response now that newer transgenic and gene knockout mice are available, and a large number of immunologic reagents have been developed. The heart transplant model is less stringent than the skin transplant models, although technically more challenging. We have developed a modified technique and have completed over 1000 successful cases of heterotopic heart transplantation in mice. When making anastomosis of the ascending aorta and abdominal aorta, two stay sutures are placed at the proximal and distal apexes of recipient abdominal aorta with the donor s ascending aorta, then using 11-0 suture for anastomosis on both side of aorta with continuing sutures. The stay sutures make the anastomosis easier and 11-0 is an ideal suture size to avoid bleeding and thrombosis.
When making anastomosis of pulmonary artery and inferior vena cava, two stay sutures are made at the proximal apex and distal apex of the recipient s inferior vena cava with the donor s pulmonary artery. The left wall of the inferior vena cava and donor s pulmonary artery is closed with continuing sutures in the inside of the inferior vena cava after, one knot with the proximal apex stay suture the right wall of the inferior vena cava and the donor s pulmonary artery are closed with continuing sutures outside the inferior vena cave with 10-0 sutures. This method is easier to perform because anastomosis is made just on the one side of the inferior vena cava and 10-0 sutures is the right size to avoid bleeding and thrombosis. In this article, we provide details of the technique to supplement the video.

The mouse heterotopic heart transplantation model has been proven by many investigators to be an important method for studying mechanisms of rejection and immune response. However, the techniques involved are still challenging. By modifying standard techniques we have had success with more than 1000 transplants.

منتبذ زرع القلب في الفئران

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable ...

Small Bowel Transplantation In Mice

Since 1990, the development of tacrolimus-based immunosuppression and improved surgical techniques, the increased array of potent immunosuppressive medications, infection prophylaxis, and suitable patient selection helped improve actuarial graft and patient survival rates for all types of intestine transplantation. Patients with irreversible intestinal failure and complications of parenteral nutrition should now be routinely considered for small intestine transplantation. However, Survival rates for small intestinal transplantation have been slow to improve compares increasingly favorably with renal, liver, heart and lung. The small bowel transplantation is still unsatisfactory compared with other organs. Further progress may depend on better understanding of immunology and physiology of the graft and can be greatly facilitated by animal models. A wider use of mouse small bowel transplantation model is needed in the study of immunology and physiology of the transplantation gut as well as efficient methods in diagnosing early rejection. However, this model is limited to use because the techniques involved is an extremely technically challenging. We have developed a modified technique. When making anastomosis of portal vein and inferior vena cava, two stay sutures are made at the proximal apex and distal apex of the recipient s inferior vena cava with the donor s portal vein. The left wall of the inferior vena cava and donor s portal vein is closed with continuing sutures in the inside of the inferior vena cava after, after one knot with the proximal apex stay suture the right wall of the inferior vena cava and the donor s portal vein are closed with continuing sutures outside the inferior vena cave with 10-0 sutures. This method is easier to perform because anastomosis is made just on the one side of the inferior vena cava and 10-0 sutures is the right size to avoid bleeding and thrombosis.  In this article, we provide details of the technique to supplement the video.

The mouse small bowel transplantation model has been recognized as an important tool to study mechanismes of immune rejection and screen new immunosuppressive drugs. However, this model is limited to use because the techniques involved is an extremely technically challenge. Now we introduce the modified technique.

زرع الأمعاء الصغيرة في الفئران

Since 1990, the development of tacrolimus-based immunosuppression and improved surgical techniques, the increased array of potent immunosuppressive ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological measurement of single or multiple ion channels in cells. This technique can be applied to ion channels in both their native environment and expressed in heterologous cells, such as oocytes harvested from the African clawed frog, Xenopus laevis. Here, we describe the well-established technique of patch clamp recording from Xenopus oocytes. This technique is used to measure the properties of expressed ion channels either in populations (macropatch) or individually (single-channel recording). We focus on techniques to maximize the quality of oocyte preparation and seal generation. With all factors optimized, this technique gives a probability of successful seal generation over 90 percent. The process may be optimized differently by every researcher based on the factors he or she finds most important, and we present the approach that have lead to the greatest success in our hands.

This is intended as an introduction to patch clamp recording from Xenopus laevis oocytes. It covers vitelline membrane removal, formation of a gigaohm seal (gigaseal), and the optional conversion of the patch to the outside-out topology.

التصحيح تسجيل المشبك من القنوات ايون معبرا عنه البويضات القيطم

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Drive Fabrication

Chronic recording of large populations of neurons is a valuable technique for studying the function of neuronal circuits in awake behaving rats. Lightweight recording devices carrying a high density array of tetrodes allow for the simultaneous monitoring of the activity of tens to hundreds of individual neurons. Here we describe a protocol for the fabrication of a micro-drive array with twenty one independently movable micro-drives. This device has been used successfully to record from hippocampal and cortical neurons in our lab. We show how to prepare a custom designed, 3-D printed plastic base that will hold the micro-drives. We demonstrate how to construct the individual micro-drives and how to assemble the complete micro-drive array. Further preparation of the drive array for surgical implantation, such as the fabrication of tetrodes, loading of tetrodes into the drive array and gold-plating, is covered in a subsequent video article.

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Drive Fabrication

In this protocol we demonstrate how to fabricate a micro-drive array for chronic electrophysiological recordings in rats.

الجزئي للمحرك صفيف المزمنة في الجسم الحي تسجيل : تصنيع محرك

Chronic recording of large populations of neurons is a valuable technique for studying the function of neuronal circuits in awake behaving rats. ...

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly

The tetrode, a bundle of four electrodes, has proven to be a valuable tool for the simultaneous recording of multiple neurons in-vivo.  The differential amplitude of action potential signatures over the channels of a tetrode allows for the isolation of single-unit activity from multi-unit signals.  The ability to precisely control the stereotaxic location and depth of the tetrode is critical for studying coordinated neural activity across brain regions.  In combination with a micro-drive array, it is possible to achieve precise placement and stable control of many tetrodes over the course of days to weeks.  In this protocol, we demonstrate how to fabricate and condition tetrodes using basic tools and materials, install the tetrodes into a multi-drive tetrode array for chronic in-vivo recording in the rat, make ground wire connections to the micro-drive array, and attach a protective cone onto the micro-drive array in order to protect the tetrodes from physical contact with the environment.



Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly

In this protocol we demonstrate how to fabricate and condition tetrodes for use with a micro-drive array, which was designed for chronic electrophysiological recordings in rats. In addition, we illustrate the final stages of micro-drive array construction, which includes installing ground wires and a protective cone.

الجزئي للمحرك صفيف المزمنة في الجسم الحي تسجيل : الجمعية Tetrode

The tetrode, a bundle of four electrodes, has proven to be a valuable tool for the simultaneous recording of multiple neurons in-vivo.  The differential ...

Measuring Blood Pressure in Mice using Volume Pressure Recording, a Tail-cuff Method

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. The CODA tail-cuff system uses Volume Pressure Recording (VPR) to measure the blood pressure by determining the tail blood volume. A specially designed differential pressure transducer and an occlusion tail-cuff measure the total blood volume in the tail without the need to obtain the individual pulse signal. Special attention is afforded to the length of the occlusion cuff in order to derive the most accurate blood pressure readings. VPR can easily obtain readings on dark-skinned rodents, such as C57BL6 mice and is MRI compatible. The CODA system provides you with measurements of six (6) different blood pressure parameters; systolic and diastolic blood pressure, heart rate, mean blood pressure, tail blood flow, and tail blood volume. Measurements can be made on either awake or anesthetized mice or rats. The CODA system includes a controller, laptop computer, software, cuffs, animal holders, infrared warming pads, and an infrared thermometer. There are seven different holder sizes for mice as small as 8 grams to rats as large as 900 grams.

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. This tail-cuff system uses Volume Pressure Recording (VPR) to measure the blood pressure by determining the tail blood volume.

قياس ضغط الدم في الفئران باستخدام تسجيل حجم الضغط ، وهو أسلوب الذيل الكفة

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. The CODA ...

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite isolated from each other, with largely independent histories and scientific communities. However, the interface between these usually disparate fields is the developmental programs underlying acquisition of functional electrical signaling properties and differentiation of functional chemical synapses during the final phases of neural circuit formation. This interface is a critically important area for investigation. In Drosophila, these phases of functional development occur during a period of &lt;8 hours (at 25&deg;C) during the last third of embryogenesis. This late developmental period was long considered intractable to investigation owing to the deposition of a tough, impermeable epidermal cuticle. A breakthrough advance was the application of water-polymerizing surgical glue that can be locally applied to the cuticle to enable controlled dissection of late-stage embryos. With a dorsal longitudinal incision, the embryo can be laid flat, exposing the ventral nerve cord and body wall musculature to experimental investigation. Whole-cell patch-clamp techniques can then be employed to record from individually-identifiable neurons and somatic muscles. These recording configurations have been used to track the appearance and maturation of ionic currents and action potential propagation in both neurons and muscles. Genetic mutants affecting these electrical properties have been characterized to reveal the molecular composition of ion channels and associated signaling complexes, and to begin exploration of the molecular mechanisms of functional differentiation. A particular focus has been the assembly of synaptic connections, both in the central nervous system and periphery. The glutamatergic neuromuscular junction (NMJ) is most accessible to a combination of optical imaging and electrophysiological recording. A glass suction electrode is used to stimulate the peripheral nerve, with excitatory junction current (EJC) recordings made in the voltage-clamped muscle. This recording configuration has been used to chart the functional differentiation of the synapse, and track the appearance and maturation of presynaptic glutamate release properties. In addition, postsynaptic properties can be assayed independently via iontophoretic or pressure application of glutamate directly to the muscle surface, to measure the appearance and maturation of the glutamate receptor fields. Thus, both pre- and postsynaptic elements can be monitored separately or in combination during embryonic synaptogenesis. This system has been heavily used to isolate and characterize genetic mutants that impair embryonic synapse formation, and thus reveal the molecular mechanisms governing the specification and differentiation of synapse connections and functional synaptic signaling properties.

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Electrophysiological recordings from Drosophila embryos allow analyses of developing muscle and neuron electrical properties, as well as characterization of functional synaptogenesis at the glutamatergic neuromuscular junction and central cholinergic and GABAergic synapses.

الكهربية في تسجيل ذبابة الفاكهة الأجنة

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Transverse Aortic Constriction in Mice

Transverse aortic constriction (TAC) in the mouse is a commonly used experimental model for pressure overload-induced cardiac hypertrophy and heart failure.1 TAC initially leads to compensated hypertrophy of the heart, which often is associated with a temporary enhancement of cardiac contractility. Over time, however, the response to the chronic hemodynamic overload becomes maladaptive, resulting in cardiac dilatation and heart failure.2 The murine TAC model was first validated by Rockman et al.1, and has since been extensively used as a valuable tool to mimic human cardiovascular diseases and elucidate fundamental signaling processes involved in the cardiac hypertrophic response and heart failure development. When compared to other experimental models of heart failure, such as complete occlusion of the left anterior descending (LAD) coronary artery, TAC provides a more reproducible model of cardiac hypertrophy and a more gradual time course in the development of heart failure. Here, we describe a step-by-step procedure to perform surgical TAC in mice. To determine the level of pressure overload produced by the aortic ligation, a high frequency Doppler probe is used to measure the ratio between blood flow velocities in the right and left carotid arteries.3, 4 With surgical survival rates of 80-90%, transverse aortic banding is an effective technique of inducing left ventricular hypertrophy and heart failure in mice.

Transverse aortic constriction (TAC) in the mouse is a commonly used experimental model to study mechanisms underlying cardiac hypertrophy and heart failure development. Here, we describe procedures to constrict the aorta to create a reproducible degree of cardiac hypertrophy in mice.

المستعرضة في انقباض الأورطي الفئران

Transverse aortic constriction (TAC) in the mouse is a commonly used experimental model for pressure overload-induced cardiac hypertrophy and heart ...

Recording Multicellular Behavior in Myxococcus xanthus Biofilms using Time-lapse Microcinematography

A swarm of the &delta;-proteobacterium Myxococcus xanthus contains millions of cells that act as a collective, coordinating movement through a series of signals to create complex, dynamic patterns as a response to environmental cues. These patterns are self-organizing and emergent; they cannot be predicted by observing the behavior of the individual cells. Using a time-lapse microcinematography tracking assay, we identified a distinct emergent pattern in M. xanthus called chemotaxis, defined as the directed movement of a swarm up a nutrient gradient toward its source 1.
In order to efficiently characterize chemotaxis via time-lapse microcinematography, we developed a highly modifiable plate complex (Figure 1) and constructed a cluster of 8 microscopes (Figure 2), each capable of capturing time-lapse videos. The assay is rigorous enough to allow consistent replication of quantifiable data, and the resulting videos allow us to observe and track subtle changes in swarm behavior. Once captured, the videos are transferred to an analysis/storage computer with enough memory to process and store thousands of videos. The flexibility of this setup has proven useful to several members of the M. xanthus community.

Recording Multicellular Behavior in Myxococcus xanthus Biofilms using Time-lapse Microcinematography

To study Myxococcus xanthus swarm behavior, we have designed a time-lapse microcinematography protocol that can be modified for different assays. It employs standard growth conditions adapted for microscopy, and yields reproducible results by the use of inexpensive, reusable silicone gaskets. We have used this method to quantify multicellular chemotaxis.

تسجيل متعددة الخلايا في السلوك Myxococcus زانثس الأغشية الحيوية باستخدام الزمن الفاصل بين Microcinematography

A swarm of the &delta;-proteobacterium Myxococcus xanthus contains millions of cells that act as a collective, coordinating movement through a series of ...

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate depends on properties intrinsic to each channel protein as well as the mechanism by which it is generated and controlled and represents an important area of current research. Information about the operational dynamics of ion channel proteins can be obtained by observing long stretches of current produced by a single molecule. Described here is a protocol for obtaining one-channel cell-attached patch-clamp current recordings for a ligand gated ion channel, the NMDA receptor, expressed heterologously in HEK293 cells or natively in cortical neurons. Also provided are instructions on how to adapt the method to other ion channels of interest by presenting the example of the mechano-sensitive channel PIEZO1. This method can provide data regarding the channel&#8217;s conductance properties and the temporal sequence of open-closed conformations that make up the channel&#8217;s activation mechanism, thus helping to understand their functions in health and disease.

Described here is a procedure for obtaining long stretches of current recording from one ion channel with the cell-attached patch-clamp technique. This method allows for observing, in real time, the pattern of open-close channel conformations that underlie the biological signal. These data inform about channel properties in undisturbed biological membranes.

قناة واحدة الخلية المرفقة تسجيل التصحيح، المشبك

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...