סמן מקאולי נתמך על ידי mentored-NIH להעניק הכשרה 5T32HL066991-07 קסנדר Wehrens נתמך על ידי NIH / NHLBI מענקים 1R01HL091947-01A209 3R01HL089598 ו-03S109

1. הכנת מד מרחק להשתלה כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני החדרת מד מרחק א.ק.ג. לתוך העכבר, חשוב לוודא את מד מרחק א.ק.ג. הוא סטרילי תקין. מכשירי טלמטריה ניו ניתנים בדרך כלל במצב סטרילי על ידי היצרן. Telemeters א.ק.ג. ניתן לעשות שימוש חוזר בתנאי התקן הוא ניקה באמצעות פתרון Tergazyme 1% לפחות 4 שעות. אתה יכול לשטוף את מד מרחק עם מים סטריליים לאחר ניקוי עם Tergazyme. בנוסף, השימוש Wavicide-01 חיטוי לילה לעקר את מד מרחק אק&quot;ג. הקפידו לשטוף את חומר חיטוי עם מים סטריליים 48 שעות לפני ההשתלה לעכברים. שומרים בכלי סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק מד מרחק מוביל שלמות של שני חוטים ניצוח את נדן בידוד. הפעל את משדר טלמטריה באמצעות מגנט נופף בתוך 5 ס&quot;מ של מד מרחק, ולבדוק את האות עם רדיו AM בתדר 530. האות צריך להיות חזק וברור צריך להשתנות בעוצמה המגרש המבוססת על מניפולציה של החוטים. רשום את מספר הדגם, המספר הסידורי מד מרחק, והערך כיול אק&quot;ג. יצרנים לעתים קרובות ממליצים מד מרחק צריך להיות על 24 שעות לפני ההשתלה, ראה את הוראות השימוש מד מרחק הספציפי שלך לקבלת פרטים. בדוגמה זו, נשתמש למדעי נתונים בינלאומיים (DSI) מד מרחק להשתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת מד מרחק להוביל עשויה להיות מושגת על ידי חיתוך להוביל שלילי (לבן) של כ 3.5 ס&quot;מ להוביל חיובי (אדום) עד 2.5 ס&quot;מ. אלה הם אורכים אופטימליים עבור השתלת להוביל השלילי בבית החזה הימני, להוביל חיובי בבטן השמאלי (ראה איור 2). בשלב הבא, להסיר את נדן בידוד לחשוף 7 מ&quot;מ של חוט. צייר את הקצה של עופרת המתכת עם דבק מגע סטרילית, כגון בונד וטרינר, ולאחר מכן לצרף כמוסות להוביל את הטיפים מתכת. כמוסות אלו ימנע שחיקה העור בשל להוביל השמה. כ 2-3 מ&quot;מ חוט מתכת צריך להיות חשוף חישה חשמלי של קצב הלב הילידים. </li></ol> 2. השתלה ניתוחית של מד מרחק <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להשתמש בטכניקה סטרילית בכירורגיה Murine, תצטרך כפפות סטריליות, וילון סטרילי, 6-0 תפרים Prolene. אתה גם צריך 2 זוגות של מלקחיים מעוקרות, 1 זוג בוטה, הסתיים מספריים, אזמל, ונהג מחט. מכשירי ניתוח עשויים להיות מעוקרים מעקר חרוז זכוכית מחומם ל 250 מעלות צלזיוס. הקפד לחטא ולשטוף את מד מרחק כפי שתואר לעיל לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכינו את העכבר לניתוח על ידי הראשון הרדמה העכבר בתיבה באמצעות אינדוקציה 3% isoflurane ב L 0.5 / min O2 100%. השתמש כרית חימום, כגון משאבת-T, אשר מפיצה מים חמים, כדי לשמור על הטמפרטורה של העכבר בהרדמה. הטמפרטורה עשויה להיות במעקב על ידי בדיקה רקטלית, אם תרצה בכך. כאשר העכבר מסומם כראוי, לחלוטין לגלח את הבטן והחזה של העכבר עם קוצץ חשמלי. Re-להרדים את העכבר עם isoflurane לפני העברת העכבר צינור זרימה קבועה, פרקדן, עם הראש פונה משם בזנב כלפיך. קלטת את הכפות של העכבר לשולחן כירורגי מחומם. נגבו את הבטן עם ספוגית אלכוהול כדי להסיר שיער מגולח לנקות את שדה הניתוח. החל בשלוש שכבות נפרדות של בבטאדין עם מטליות לחטא את הבטן והחזה. ודא רמת הנכונות של הרדמה על ידי הפעלת לחץ על הציפורן העכבר. לאחר עכבר הוכן לניתוח, להשתמש בכפפות סטריליות וליישם את וילון סטרילי לתחום כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההשתלה מד מרחק intraperitoneal מציעה את היתרון של ניסויים הפיזיולוגיה תרגיל. עבור הכניסה intraperitoneal, להתחיל ניתוח באמצעות אזמל כדי ליצור חתך קו האמצע האנכי של העור המכסה את הבטן בערך 2.5 ס&quot;מ אורך. בזהירות העור להפריד רקמות החיבור הבסיסי באמצעות בוטה, הסתיים מספריים. לאחר מכן, ליצור חתך קו האמצע האנכי של Linea alba שמעל הצפק, בערך 1.5 ס&quot;מ אורך. בנוסף, ליצור חור קטן בדיוק מעל הצפק (הגולגולת) כדי חתך הצפק, אשר תשמש פורקן תת עורי מוביל. בזמן ביצוע הניתוח, לשמור על לחות אתר כירורגית מפעם לפעם על ידי טפטוף תמיסת מלח סטרילית למגרש ההפעלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את מד מרחק לתוך חלל הצפק הנכון. הכנס מלקחיים לתוך החור מעולה מד מרחק ולמשוך גם מוביל את דרך החור להוביל ולכן הם בולטים מן הצפק. שימוש מתמשך 6-0 תפרים Prolene כדי לסגור את קו האמצע 1.5 ס&quot;מ הצפק חתך אנכי. </li></ol> 3. עופרת השרשה וסגירת בטן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוביל א.ק.ג. ממוקמות בתצורה השנייה להוביל. להוביל עם נדן לבן / שקוף הוא שלילי, ממוקם בבטן הימנית העליונה. ראשית, ליצור 0.5 ס&quot;מ העור חתך בחזה הימני העליון של העכבר.בשלב הבא, להשתמש במספריים בוטה כדי ליצור מנהרה חזרה החתך בבטן. משוך את ההובלה במנהרה ולהשתמש תפר 6-0 Prolene לעגן את להוביל שריר החזה. ודא תפר הוא על גבי החלק החשוף של עופרת, ויוצר קשר טוב בין שריר להוביל הבסיסית. השתמש תפר second בקרבה אחד הנ&quot;ל, כדי לשתק את להוביל השריר. סגירת החתך בעור באמצעות תפר 6-0 Prolene. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוביל חיובי (נדן אדום) ממוקם בבטן הימנית מתחת לסרעפת שמאל מתחת ללב. להוביל מעוגן לרקמת הצפק הבסיסית על ידי תפר 6-0 ו Prolene צריך קשר טוב עם רקמת הצפק. חתך נוסף אין צורך בשלב זה כי באתר של ההשתלה להוביל קרוב החתך קו האמצע האנכי, וכך ניתן לגשת בקלות עם שדה הניתוח הקיים. ראוי לציין, כי רקמת הצפק יש הרים, כדי למנוע ניקוב של המעי הבסיסית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את fascia עור הבטן ברצף עם Prolene 6-0 שכבות. </li></ol> 4. לאחר הניתוח טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן 0.1 מ&quot;ל של עכבר [1 מ&quot;ג / מ&quot;ל] עצירות עבור כאבים מיד לאחר הניתוח. אפשר בעכבר כדי להתאושש מניתוח על משטח לוהט. אם העכבר עבר ניתוח ממושך&gt; 30 דקות, או אם העכבר נראה יבש, ניתן להזריק 0.2-0.3 מ&quot;ל סליין סטרילי אל תוך הצפק עבור להחזרת נוזלים. עבור כאבים שלאחר הניתוח המשיך מקובל לספק עכברים עם עצירות פעמיים ביום למשך שלושה ימים, ולאחר מכן לפי הצורך כל שמונה שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקו את בבטאדין עם ספוגית אלכוהול, כדי למנוע גירוי לאחר ניתוח. זכור לרשום את משקל לאחר ניתוח לקביעת הבאות של בריאות לאחר ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 8-24 שעות לאחר הניתוח, לתת את העכבר כאבים עם עצירות נוספות בעת הצורך, כמו זה יהיה להפחית את הכאב ולהפחית להוביל לכישלון ההשמה של העכבר לופתת את האתר לאחר ניתוח. </li></ol> 5. נציג תוצאות כאשר מבוצע כהלכה, העכבר צריך להיות סגור חתכים בבטן עם תת עורי מוביל מתחת לעור. בדרך כלל, העכבר לוקח 10-30 דקות כדי להתאושש מן ההרדמה. זה לוקח בערך 7-10 ימים לפני העכברים התאוששו לחלוטין מהניתוח, כפי שמעידים ההתאוששות של אובדן שלאחר הניתוח במשקל הנורמליזציה של הניידות. הסיבוך השכיח ביותר של הניתוח הוא מוביל לשחיקה של איבר דרך העור ב 10 הימים הראשונים לאחר הניתוח. סיבוך זה שכיח ניתן להימנע על ידי הקפדה בתוקף תת עורי מוביל רקמות תת עורית או הצפק. טכניקה זו מונעת מוביל הרפיון, אשר ליצור לחץ וחיכוך על העור כאשר העכבר ambulates. אמנם פחות שכיח, זיהום אלח דם עלולה להתרחש טעויות בטכניקה סטרילית, או ניקוי שלם של telemeters בשימוש. פלט א.ק. ג עשוי להיות מוקלט על ידי מטריקס מקלט יחד עם רכישת התוכנה נתונים, כגון נתונים למדעים הבינלאומי (DSI). תוצאות Waveform לכלול גל מוגדרים P, המציין שלילת קוטביות פרוזדורים, וגם גל QRS המסמל שלילת קוטביות חדרית, כפי שמוצג באיור 3 להלן. איכות טובה א.ק.ג. עקבות צריך גל מוגדרים P שלפני ברורים גל QRS ביחס של 1:1. לא צריך להיות אות רקע נמוך מרווחי RR צריך להיות קבוע wild-type עכברים. איכות עניים א.ק.ג. עקבות ייתכן P ברור או גלי QRS, או אות הרקע, אשר עשוי להפוך את המחשב בעקבות ניתוח קשה. א.ק.ג. עני זכר יכול להיות קבוע על ידי מחדש השתלת מוביל מד מרחק, בדרך כלל אחד בכל פעם. כדי לחדש את השתל להוביל מד מרחק, במקום את העכבר תחת הרדמה, באמצעות טכניקה כירורגית, לעשות חתך בעור ישירות המכסה את ההובלה השאלה. כאשר להוביל הגישה, לחתוך את תפר עיגון להוביל, ולהמשיך להוביל למיקום הרצוי לפני עיגון להוביל שוב. לבסוף, לסגור את האתר כירורגית עם Prolene 6-0. <img src="/files/ftp_upload/1739/1739fig1.jpg" alt="איור 1" /> איור 1: דוגמה מד מרחק חיה קטנה עם מוביל חיוביים ושליליים. באופן כללי, להוביל אדום הוא להוביל חיובית, את ההובלה לבן הוא להוביל שלילי. להוביל כל אחד צריך בידוד, נדן 5-7 מ&quot;מ של חוט חשוף, ועל קצה כתרים מפלסטיק, אשר מונע שחיקת להוביל את דרך העור. <img src="/files/ftp_upload/1739/1739fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2: קריקטורה המראה הנכון ההשתלה מד מרחק אתרים על עכבר. להוביל לבן (שלילי) הוא מושתל בחזה העליון הימני של העכבר, את ההובלה (חיובי) אדום ממוקם בבטן הימנית, כך החושים מד מרחק &quot;שתי להוביל&quot; תצורה. &lt;בכיתה p = &quot;jove_content&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1739/1739fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3: waveform נציג עכבר קצב סינוס נורמלי. גל P מייצג שלילת קוטביות פרוזדורים QRS קומפלקס מייצג שלילת קוטביות חדרית. Waveform באיכות גבוהה צריך גל P ברור שלפני כל מורכבות QRS ביחס 01:01.

<ol>
	<li>Cerrone, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+ventricular+tachycardia+and+fibrillation+elicited+in+a+knock-in+mouse+model+carrier+of+a+mutation+in+the+cardiac+ryanodine+receptor.">Bidirectional ventricular tachycardia and fibrillation elicited in a knock-in mouse model carrier of a mutation in the cardiac ryanodine receptor.</a> Circ Res. 96 (10), e77-e77 (2005).</li><li>Chelu, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calmodulin+kinase+II-mediated+sarcoplasmic+reticulum+Ca2++leak+promotes+atrial+fibrillation+in+mice.">Calmodulin kinase II-mediated sarcoplasmic reticulum Ca2+ leak promotes atrial fibrillation in mice.</a> J Clin Invest. 119 (7), 1940-1940 (1940).</li><li>Sood, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+calcium+leak+due+to+FKBP12.6+deficiency+in+mice+facilitates+the+inducibility+of+atrial+fibrillation.">Intracellular calcium leak due to FKBP12.6 deficiency in mice facilitates the inducibility of atrial fibrillation.</a> Heart Rhythm. 5 (7), 1047-1047 (2008).</li><li>Swoap, S. J., Gutilla, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+changes+during+daily+torpor+in+the+laboratory+mouse.">Cardiovascular changes during daily torpor in the laboratory mouse.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 297 (3), R769-R769 (2009).</li><li>Costa-Goncalves, d. a., C, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+multidomain+protein+spinophilin+in+blood+pressure+and+cardiac+function+regulation.">Role of the multidomain protein spinophilin in blood pressure and cardiac function regulation.</a> Hypertension. 52 (4), 702-702 (2008).</li><li>Wehrens, X. H., Kirchhoff, S., Doevendans, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+electrocardiography:+an+interval+of+thirty+years.">Mouse electrocardiography: an interval of thirty years.</a> Cardiovasc Res. 45 (1), 231-231 (2000).</li></ol>

השלבים הקריטיים של הליך זה מנקים הכנה נכונה של העכבר לפני הניתוח הישרדות. כאשר מד מרחק ואת אתר פעיל עכבר מנקים כמו שצריך, יש הרבה יותר טוב לאחר ניתוח התוצאות. בנוסף, תשומת לב להוביל מיקום מפחית לאחר ניתוח שחיקת העור. שינויים אפשריים לטכניקה כוללים תצורות חלופיות להערכ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Steri 250 Bead Sterilizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Inotech</td>
<td>IS-250</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blunt-Ended Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5980</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blunt-Ended Forceps (x2)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5138</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Veterinary Anesthesia Vaporizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Surgivet</td>
<td>Isotec 4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T/Pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gaymar</td>
<td>P/N11184-000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propylene Blue Monofilament Suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ethicon</td>
<td>8718</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Povodone Iodine, 10%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Equate</td>
<td>N/A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol Swabs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PDI</td>
<td>B339</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tergazyme</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alconox</td>
<td>21837-118</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wavidicde-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Medical Chemical Corporation</td>
<td>Wavicide-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ECG Telemeter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DataSciences International</td>
<td>EA-F20</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

ambulatory ecg recording in mice

Telemetric הקלטה א.ק.ג. בעכברים חיוני להבנת המנגנונים מאחורי הפרעות קצב, הפרעות הולכה, ועל למוות קרדיאלי פתאומי. למרות השטח א.ק.ג. ישמש לטווח קצר מדידות של מרווחי waveform, אין זה מעשי מחקרים ארוכי טווח של השתנות קצב הלב, או ללכוד פרקים נדירים של הפרעות קצב. מושתלת telemeters א.ק.ג. מציעים את היתרונות של השתלה כירורגית פשוטה, ארוכת טווח הקלטה של ​​electrograms בעכברים אמבולטורי, ויכולת הרחבה עם הקלטות סימולטני של מספר רב של בעלי חיים. כאן, אנו מציגים מדריך צעד אחר צעד עד ההשתלה של telemeters הקלטה א.ק.ג. אמבולטורי בעכברים. היצמדות קפדנית על טכניקה aseptic נדרש תוצאות ההישרדות נוחים עם אפשרות של השתלת הקלטה של ​​שבועות עד חודשים. לפיכך, מושתלת טלמטריה אק&quot;ג הוא כלי רב ערך לגילוי של מידע קריטי על electrophysiology לב במודלים של בעלי חיים אמבולטוריים כגון העכבר.

Watch this Scientific Journal Video about Ambulatory ECG Recording in Mice at JoVE.com

Ambulatory ECG Recording in Mice

Telemetric א.ק.ג. התפתחה ככלי חיוני להערכת במודלים של בעלי חיים על הפרעות בקצב הלב או מוות קרדיאלי פתאומי. כאן, אנו מציגים מדריך בשלבים להקלטות telemetric א.ק.ג. עבור היישום לניטור ארוך טווח א.ק.ג. אמבולטורי בעכברים.

רישום א.ק.ג. אמבולטורי ב עכברים

Telemetric ECG recording in mice is essential to understanding the mechanisms behind arrhythmias, conduction disorders, and sudden cardiac death. Although ...

Research

JoVE Journal

Biology

23.5K Views.  Baylor College of Medicine (BCM). Telemetric א.ק.ג. התפתחה ככלי חיוני להערכת במודלים של בעלי חיים על הפרעות בקצב הלב או מוות קרדיאלי פתאומי. כאן, אנו מציגים מדריך בשלבים להקלטות telemetric א.ק.ג. עבור היישום לניטור ארוך טווח א.ק.ג. אמבולטורי בעכברים.

Video: Ambulatory ECG Recording in Mice

Heterotopic Heart Transplantation in Mice

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable for studying rejection and immune response now that newer transgenic and gene knockout mice are available, and a large number of immunologic reagents have been developed. The heart transplant model is less stringent than the skin transplant models, although technically more challenging. We have developed a modified technique and have completed over 1000 successful cases of heterotopic heart transplantation in mice. When making anastomosis of the ascending aorta and abdominal aorta, two stay sutures are placed at the proximal and distal apexes of recipient abdominal aorta with the donor s ascending aorta, then using 11-0 suture for anastomosis on both side of aorta with continuing sutures. The stay sutures make the anastomosis easier and 11-0 is an ideal suture size to avoid bleeding and thrombosis.
When making anastomosis of pulmonary artery and inferior vena cava, two stay sutures are made at the proximal apex and distal apex of the recipient s inferior vena cava with the donor s pulmonary artery. The left wall of the inferior vena cava and donor s pulmonary artery is closed with continuing sutures in the inside of the inferior vena cava after, one knot with the proximal apex stay suture the right wall of the inferior vena cava and the donor s pulmonary artery are closed with continuing sutures outside the inferior vena cave with 10-0 sutures. This method is easier to perform because anastomosis is made just on the one side of the inferior vena cava and 10-0 sutures is the right size to avoid bleeding and thrombosis. In this article, we provide details of the technique to supplement the video.

The mouse heterotopic heart transplantation model has been proven by many investigators to be an important method for studying mechanisms of rejection and immune response. However, the techniques involved are still challenging. By modifying standard techniques we have had success with more than 1000 transplants.

השתלת הלב Heterotopic ב עכברים

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable ...

Small Bowel Transplantation In Mice

Since 1990, the development of tacrolimus-based immunosuppression and improved surgical techniques, the increased array of potent immunosuppressive medications, infection prophylaxis, and suitable patient selection helped improve actuarial graft and patient survival rates for all types of intestine transplantation. Patients with irreversible intestinal failure and complications of parenteral nutrition should now be routinely considered for small intestine transplantation. However, Survival rates for small intestinal transplantation have been slow to improve compares increasingly favorably with renal, liver, heart and lung. The small bowel transplantation is still unsatisfactory compared with other organs. Further progress may depend on better understanding of immunology and physiology of the graft and can be greatly facilitated by animal models. A wider use of mouse small bowel transplantation model is needed in the study of immunology and physiology of the transplantation gut as well as efficient methods in diagnosing early rejection. However, this model is limited to use because the techniques involved is an extremely technically challenging. We have developed a modified technique. When making anastomosis of portal vein and inferior vena cava, two stay sutures are made at the proximal apex and distal apex of the recipient s inferior vena cava with the donor s portal vein. The left wall of the inferior vena cava and donor s portal vein is closed with continuing sutures in the inside of the inferior vena cava after, after one knot with the proximal apex stay suture the right wall of the inferior vena cava and the donor s portal vein are closed with continuing sutures outside the inferior vena cave with 10-0 sutures. This method is easier to perform because anastomosis is made just on the one side of the inferior vena cava and 10-0 sutures is the right size to avoid bleeding and thrombosis.  In this article, we provide details of the technique to supplement the video.

The mouse small bowel transplantation model has been recognized as an important tool to study mechanismes of immune rejection and screen new immunosuppressive drugs. However, this model is limited to use because the techniques involved is an extremely technically challenge. Now we introduce the modified technique.

מעי והשתלות קטן עכברים

Since 1990, the development of tacrolimus-based immunosuppression and improved surgical techniques, the increased array of potent immunosuppressive ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological measurement of single or multiple ion channels in cells. This technique can be applied to ion channels in both their native environment and expressed in heterologous cells, such as oocytes harvested from the African clawed frog, Xenopus laevis. Here, we describe the well-established technique of patch clamp recording from Xenopus oocytes. This technique is used to measure the properties of expressed ion channels either in populations (macropatch) or individually (single-channel recording). We focus on techniques to maximize the quality of oocyte preparation and seal generation. With all factors optimized, this technique gives a probability of successful seal generation over 90 percent. The process may be optimized differently by every researcher based on the factors he or she finds most important, and we present the approach that have lead to the greatest success in our hands.

This is intended as an introduction to patch clamp recording from Xenopus laevis oocytes. It covers vitelline membrane removal, formation of a gigaohm seal (gigaseal), and the optional conversion of the patch to the outside-out topology.

הצמד תיקון הקלטה של ​​תעלות יונים מתבטא ביציות Xenopus

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Drive Fabrication

Chronic recording of large populations of neurons is a valuable technique for studying the function of neuronal circuits in awake behaving rats. Lightweight recording devices carrying a high density array of tetrodes allow for the simultaneous monitoring of the activity of tens to hundreds of individual neurons. Here we describe a protocol for the fabrication of a micro-drive array with twenty one independently movable micro-drives. This device has been used successfully to record from hippocampal and cortical neurons in our lab. We show how to prepare a custom designed, 3-D printed plastic base that will hold the micro-drives. We demonstrate how to construct the individual micro-drives and how to assemble the complete micro-drive array. Further preparation of the drive array for surgical implantation, such as the fabrication of tetrodes, loading of tetrodes into the drive array and gold-plating, is covered in a subsequent video article.

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Drive Fabrication

In this protocol we demonstrate how to fabricate a micro-drive array for chronic electrophysiological recordings in rats.

Micro-Drive Array עבור כרונית In vivo</emהקלטה>: כונן ייצור

Chronic recording of large populations of neurons is a valuable technique for studying the function of neuronal circuits in awake behaving rats. ...

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly

The tetrode, a bundle of four electrodes, has proven to be a valuable tool for the simultaneous recording of multiple neurons in-vivo.  The differential amplitude of action potential signatures over the channels of a tetrode allows for the isolation of single-unit activity from multi-unit signals.  The ability to precisely control the stereotaxic location and depth of the tetrode is critical for studying coordinated neural activity across brain regions.  In combination with a micro-drive array, it is possible to achieve precise placement and stable control of many tetrodes over the course of days to weeks.  In this protocol, we demonstrate how to fabricate and condition tetrodes using basic tools and materials, install the tetrodes into a multi-drive tetrode array for chronic in-vivo recording in the rat, make ground wire connections to the micro-drive array, and attach a protective cone onto the micro-drive array in order to protect the tetrodes from physical contact with the environment.



Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly

In this protocol we demonstrate how to fabricate and condition tetrodes for use with a micro-drive array, which was designed for chronic electrophysiological recordings in rats. In addition, we illustrate the final stages of micro-drive array construction, which includes installing ground wires and a protective cone.

Micro-Drive Array עבור כרונית In vivo</emהקלטה>: Tetrode האסיפה

The tetrode, a bundle of four electrodes, has proven to be a valuable tool for the simultaneous recording of multiple neurons in-vivo.  The differential ...

Measuring Blood Pressure in Mice using Volume Pressure Recording, a Tail-cuff Method

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. The CODA tail-cuff system uses Volume Pressure Recording (VPR) to measure the blood pressure by determining the tail blood volume. A specially designed differential pressure transducer and an occlusion tail-cuff measure the total blood volume in the tail without the need to obtain the individual pulse signal. Special attention is afforded to the length of the occlusion cuff in order to derive the most accurate blood pressure readings. VPR can easily obtain readings on dark-skinned rodents, such as C57BL6 mice and is MRI compatible. The CODA system provides you with measurements of six (6) different blood pressure parameters; systolic and diastolic blood pressure, heart rate, mean blood pressure, tail blood flow, and tail blood volume. Measurements can be made on either awake or anesthetized mice or rats. The CODA system includes a controller, laptop computer, software, cuffs, animal holders, infrared warming pads, and an infrared thermometer. There are seven different holder sizes for mice as small as 8 grams to rats as large as 900 grams.

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. This tail-cuff system uses Volume Pressure Recording (VPR) to measure the blood pressure by determining the tail blood volume.

מדידת לחץ דם בעכברים באמצעות לחץ נפח הקלטה, שיטת זנב השרוול

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. The CODA ...

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite isolated from each other, with largely independent histories and scientific communities. However, the interface between these usually disparate fields is the developmental programs underlying acquisition of functional electrical signaling properties and differentiation of functional chemical synapses during the final phases of neural circuit formation. This interface is a critically important area for investigation. In Drosophila, these phases of functional development occur during a period of &lt;8 hours (at 25&deg;C) during the last third of embryogenesis. This late developmental period was long considered intractable to investigation owing to the deposition of a tough, impermeable epidermal cuticle. A breakthrough advance was the application of water-polymerizing surgical glue that can be locally applied to the cuticle to enable controlled dissection of late-stage embryos. With a dorsal longitudinal incision, the embryo can be laid flat, exposing the ventral nerve cord and body wall musculature to experimental investigation. Whole-cell patch-clamp techniques can then be employed to record from individually-identifiable neurons and somatic muscles. These recording configurations have been used to track the appearance and maturation of ionic currents and action potential propagation in both neurons and muscles. Genetic mutants affecting these electrical properties have been characterized to reveal the molecular composition of ion channels and associated signaling complexes, and to begin exploration of the molecular mechanisms of functional differentiation. A particular focus has been the assembly of synaptic connections, both in the central nervous system and periphery. The glutamatergic neuromuscular junction (NMJ) is most accessible to a combination of optical imaging and electrophysiological recording. A glass suction electrode is used to stimulate the peripheral nerve, with excitatory junction current (EJC) recordings made in the voltage-clamped muscle. This recording configuration has been used to chart the functional differentiation of the synapse, and track the appearance and maturation of presynaptic glutamate release properties. In addition, postsynaptic properties can be assayed independently via iontophoretic or pressure application of glutamate directly to the muscle surface, to measure the appearance and maturation of the glutamate receptor fields. Thus, both pre- and postsynaptic elements can be monitored separately or in combination during embryonic synaptogenesis. This system has been heavily used to isolate and characterize genetic mutants that impair embryonic synapse formation, and thus reveal the molecular mechanisms governing the specification and differentiation of synapse connections and functional synaptic signaling properties.

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Electrophysiological recordings from Drosophila embryos allow analyses of developing muscle and neuron electrical properties, as well as characterization of functional synaptogenesis at the glutamatergic neuromuscular junction and central cholinergic and GABAergic synapses.

הקלטה של ​​אלקטרו תסיסנית עובריים

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Transverse Aortic Constriction in Mice

Transverse aortic constriction (TAC) in the mouse is a commonly used experimental model for pressure overload-induced cardiac hypertrophy and heart failure.1 TAC initially leads to compensated hypertrophy of the heart, which often is associated with a temporary enhancement of cardiac contractility. Over time, however, the response to the chronic hemodynamic overload becomes maladaptive, resulting in cardiac dilatation and heart failure.2 The murine TAC model was first validated by Rockman et al.1, and has since been extensively used as a valuable tool to mimic human cardiovascular diseases and elucidate fundamental signaling processes involved in the cardiac hypertrophic response and heart failure development. When compared to other experimental models of heart failure, such as complete occlusion of the left anterior descending (LAD) coronary artery, TAC provides a more reproducible model of cardiac hypertrophy and a more gradual time course in the development of heart failure. Here, we describe a step-by-step procedure to perform surgical TAC in mice. To determine the level of pressure overload produced by the aortic ligation, a high frequency Doppler probe is used to measure the ratio between blood flow velocities in the right and left carotid arteries.3, 4 With surgical survival rates of 80-90%, transverse aortic banding is an effective technique of inducing left ventricular hypertrophy and heart failure in mice.

Transverse aortic constriction (TAC) in the mouse is a commonly used experimental model to study mechanisms underlying cardiac hypertrophy and heart failure development. Here, we describe procedures to constrict the aorta to create a reproducible degree of cardiac hypertrophy in mice.

אבי העורקים צמצום רוחבי של עכברים

Transverse aortic constriction (TAC) in the mouse is a commonly used experimental model for pressure overload-induced cardiac hypertrophy and heart ...

Recording Multicellular Behavior in Myxococcus xanthus Biofilms using Time-lapse Microcinematography

A swarm of the &delta;-proteobacterium Myxococcus xanthus contains millions of cells that act as a collective, coordinating movement through a series of signals to create complex, dynamic patterns as a response to environmental cues. These patterns are self-organizing and emergent; they cannot be predicted by observing the behavior of the individual cells. Using a time-lapse microcinematography tracking assay, we identified a distinct emergent pattern in M. xanthus called chemotaxis, defined as the directed movement of a swarm up a nutrient gradient toward its source 1.
In order to efficiently characterize chemotaxis via time-lapse microcinematography, we developed a highly modifiable plate complex (Figure 1) and constructed a cluster of 8 microscopes (Figure 2), each capable of capturing time-lapse videos. The assay is rigorous enough to allow consistent replication of quantifiable data, and the resulting videos allow us to observe and track subtle changes in swarm behavior. Once captured, the videos are transferred to an analysis/storage computer with enough memory to process and store thousands of videos. The flexibility of this setup has proven useful to several members of the M. xanthus community.

Recording Multicellular Behavior in Myxococcus xanthus Biofilms using Time-lapse Microcinematography

To study Myxococcus xanthus swarm behavior, we have designed a time-lapse microcinematography protocol that can be modified for different assays. It employs standard growth conditions adapted for microscopy, and yields reproducible results by the use of inexpensive, reusable silicone gaskets. We have used this method to quantify multicellular chemotaxis.

הקלטה התנהגות תאיים ב Myxococcus xanthus Biofilms באמצעות זמן לשגות Microcinematography

A swarm of the &delta;-proteobacterium Myxococcus xanthus contains millions of cells that act as a collective, coordinating movement through a series of ...

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate depends on properties intrinsic to each channel protein as well as the mechanism by which it is generated and controlled and represents an important area of current research. Information about the operational dynamics of ion channel proteins can be obtained by observing long stretches of current produced by a single molecule. Described here is a protocol for obtaining one-channel cell-attached patch-clamp current recordings for a ligand gated ion channel, the NMDA receptor, expressed heterologously in HEK293 cells or natively in cortical neurons. Also provided are instructions on how to adapt the method to other ion channels of interest by presenting the example of the mechano-sensitive channel PIEZO1. This method can provide data regarding the channel&#8217;s conductance properties and the temporal sequence of open-closed conformations that make up the channel&#8217;s activation mechanism, thus helping to understand their functions in health and disease.

Described here is a procedure for obtaining long stretches of current recording from one ion channel with the cell-attached patch-clamp technique. This method allows for observing, in real time, the pattern of open-close channel conformations that underlie the biological signal. These data inform about channel properties in undisturbed biological membranes.

הקלטת תיקון מהדק מצורף תא אחד ערוצים

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...