마크 맥컬리는 NIH 가르치고 - 교육 교부금 5T32HL066991 - 07에 의해 지원됩니다 젠더 Wehrens는 NIH / NHLBI 보조금 1R01HL091947 - 01A209 및 3R01HL089598 - 03S109에서 지원

1. 외과 이식을위한 측거기의 준비 <ol><li> 마우스로 ECG 측거기를 삽입하기 전에, 그것은 ECG 측거기가 불임 좋은 작업 순서에 있는지 확인하는 것이 중요합니다. 새 원격 장치는 일반적으로 제조 업체가 살균 상태로 제공됩니다. ECG의 telemeters는 장치가 최소한 4 시간 동안 Tergazyme 1 % 용액을 사용하여 세척 제공 활용할 수 있습니다. 당신은 Tergazyme와 세척 후 살균 물을 측거기를 헹굴 수 있습니다. 또한, ECG 측거기을 소독하기 위해 밤새 Wavicide - 01 살균제를 사용합니다. 48시간 생쥐에 주입하기 전에 물을 살균 소독제 씻어주십시오. 멸균 용기에 보관하십시오. </li><li> 측거기가 실시 와이어 모두의 무결성 및 단열 피복의 리드 확인합니다. 자석 측거기의 5cm 이내에 흔들를 사용하여 원격 측정 송신기를 켜고, 그리고 AM 라디오, 주파수 530로 신호를 테스트합니다. 신호는 강하고 명확해야하고 강도 및 와이어의 조작에 따라 피치 다양합니다. 모델 번호, 일련 번호 측거기 및 ECG 보정 값을 기록합니다. 제조 업체들은 종종 측거기가 주입하기 전에 24 시간 동안에있을 자세한 내용은 특정 측거기에 대한 설명서를 참조해야하는 것이 좋습니다. 이 예제에서, 우리는 이식을위한 데이터 과학 국제 (DSI) 측거기를 사용합니다. </li><li> 측거기 리드 준비는 약 3.5 ㎝와 2.5 cm에 긍정적인 (적색) 리드에 대한 부정적인 (흰색) 리드를 절단하여 얻을 수 있습니다. 이것은 오른쪽 가슴에있는 부정적인 리드의 주입을위한 최적의 길이, 그리고 왼쪽 복부에 긍정적인 리드 (그림 2 참조)입니다. 다음 와이어 7mm를 노출하기 위해 절연 피복을 제거합니다. 이러한 베트 - 본드와 같은 무균 superglue과 금속 리드의 끝 부분을 페인트 다음 금속 팁을 초래할 뚜껑을 부착합니다. 이 모자는 위치를 이끌로 인해 피부 부식을 방지합니다. 약 2-3mm 금속 와이어는 기본 심장 리듬의 전기 감지에 대한 노출되어야합니다. </li></ol> 2. 측거기의 수술 주입 <ol><li> murine 수술의 살균 기술을 사용하기 위해서는 멸균 장갑, 멸균 드레이프와 6-0 Prolene의 봉합이 필요합니다. 당신은 또한 1 무딘 종단 가위의 쌍을, 메스와 바늘 드라이버 소독 집게의 이쌍해야합니다. 외과 용구는 섭씨 250 도까지 가열 유리 비드 살균기에 소독 수 있습니다. 이전에 사용하기 전에 설명한대로 측거기을 소독하고 씻어주십시오. </li><li> 첫번째 0.5 L / 분, 100 % O2 안에 isoflurane 3 % 사용하여 유도 상자에 마우스를 anesthetizing하여 수술 마우스를 준비합니다. anesthetized 마우스의 온도를 유지하는 등 따뜻한 물을 순환 T - 펌프로, 가열 패드를 사용합니다. 원하는 경우 온도, 직장 탐침에 의해 모니터할 수 있습니다. 마우스가 충분히 진정되면 완전히 전기 면도기와 마우스의 복부와 가슴 면도. 머리가 떨어져 직면하고 향해 꼬리, 부정사, 지속적인 흐름 관에 마우스를 전송하기 전에 isoflurane으로 마우스를 다시 마취. 가열 수술 테이블에 마우스 발냄새 아래 테이프. 면도 머리를 제거하고 수술 현장을 청소 알코올 면봉으로 복부를 닦아주십시오. 복부와 가슴을 소독하기 위해 면봉과 betadine 세 별도의 코팅을 적용합니다. 마우스 손톱 침대에서 압력을 적용하여 마취의 정확한 수준을 확인합니다. 마우스가 수술 준비되고 나면, 멸균 장갑을 사용하여 수술 부위에 멸균 드레이프를 적용합니다. </li><li> Intraperitoneal 측거기 주​​입은 운동 생리학의 실험의 장점을 제공합니다. intraperitoneal 삽입 들어, 약 2.5 cm 길이의 복부를 overlying 피부에 수직으로 정중선 절개를 생성하기 위해 메스를 사용하여 수술을 시작합니다. 무딘 종단 가위를 사용하여 기본 결합 조직에서 조심스럽게 분리 피부. 그런 다음, 길이 약 1.5 cm를 복막을 overlying linea 알바에 수직으로 정중선 절개를 만듭니다. 또한 피하위한 콘센트가 연결 될 것입니다 복막 절개로 (두개골) 위의 복막에 작은 구멍을 만들 수 있습니다. 수술을 수행하는 동안, 때때로 운영 분야에 멸균 생리 드리핑하여 수술 사이트 촉촉한을 유지. </li><li> 오른쪽 복막 구멍에 측거기를 넣습니다. 측거기 우수 구멍에 집게를 삽입하고 그들이 복막에서 protruding하므로 모두 선두 구멍 통해 연결 당기십시오. 1.5 cm 복막 수직 정중선 절개를 닫습 연속 6-0 Prolene 봉합을 사용합니다. </li></ol> 3. 이식 및 복부 폐쇄 리드 <ol><li> ECG 리드는 리드 II 구성에 배치됩니다. 투명 / 백색 피복있는 단서는 부정적이며, 왼쪽 상단 복부에 저장됩니다. 첫째, 마우스의 오른쪽 상단 가슴에 0.5 cm의 피부 절개를 만듭니다.다음, 복부 절개로 터널을 만들 수있는 무딘 가위를 사용합니다. 터널을 통해 리드를 당겨하고 가슴 근육에 리드를 앵커에 6-0 Prolene의 치료를 사용합니다. 봉합사는 리드의 노출 부분의 맨 위에 있으며, 리드 및 기본 근육 사이 좋은 접촉을 생성되었는지 확인합니다. 근육에 리드를 고정하기 위해, 상기 한 근위 두 번째 치료를 사용합니다. 6-0 Prolene의 봉합사를 사용하여 피부 절개를 닫습니다. </li><li> 긍정적인 리드 (빨간색 껍질)은 왼쪽 횡경막 아래의 왼쪽 복부와 심장 아래에 배치됩니다. 리드는 6-0 Prolene의 봉합에 의해 기본 복막 조직 정박하며 복막 조직과 잘 접촉이 있어야합니다. 리드 이식의 사이트가 가까이 수직 정중선 절개에 따라서 쉽게 기존의 수술 현장으로 액세스할 수 있기 때문에 추가적인 절개가이 단계에서 필요하지 않습니다. 복막 조직이 기본 대장의 천공을 피하기 위해 해제해야합니다. </li><li> 레이어에 6-0 Prolene와 함께 순차적으로 복부 근막과 피부를 닫습니다. </li></ol> 4. 포스트 수술 케어 <ol><li> [1 MG / ML] 즉시 수술 후 진통제에 대한 buprenorphine의 마우스 0.1 ML주세요. 온수 패드에 수술에서 회복하기 위해 마우스를 허용합니다. 마우스는 장시간 수술&gt; 30 분, 또는 마우스가 건조 나타나는 경우, 당신이 rehydration 위해 복막에 0.2-0.3 ML 멸균 생리를 주입 수를 가지고있는 경우. 지속적인 사후 수술 진통제의 경우는 사흘 동안 회 buprenorphine와 마우스를 제공하기 위해 표준 관행이며, 다음 각 여덟 시간이나 필요에 따라. </li><li> 후 수술 자극을 피하기 위해 알코올 면봉과 betadine를 청소하십시오. 이후 수술 건강 후속 결정에 대한 사후 수술 무게를 기록해야합니다. </li><li> 수술 후 8-24시간이 고통을 줄이고 마우스가 사후 수술 사이트에서 긁어 대고에서 리드 배치 실패를 줄일 수 있듯이, 마우스에게 필요한 buprenorphine와 추가 진통제를 제공합니다. </li></ol> 5. 대표 결과 피하이 피부 아래의 리드와 함께 제대로 수행되면, 마우스는 복부 incisions를 닫았한다. 보통 마우스는 마취에서 회복하기 위해 10-30분 걸립니다. 생쥐가 완전히 수술에서 회복하기 전에는 이동성의 게시물 수술 체중 감소 및 정상화의 회복에 의해 입증에 대해 7~10일 소요됩니다. 수술의 가장 흔한 합병증은 수술 후 처음 10 일 동안 피부를 통해서 사지 리드의 침식이다. 이것은 일반적인 합병증은 확고하게 피하가 피하 조직이나 복막에 이르게 준수하여 피할 수 있습니다. 이 기술은 마우스 ambulates 때 피부에 압력과 마찰을 만들 느슨하게 리드를 방지합니다. 많이, 감염 및 패혈증 살균 기술에, 또는 사용 telemeters의 불완전 청소부터 오류에서 발생할 수 있지만. ECG 출력 데이터 등 과학 국제 (DSI)와 같은 데이터 수집 소프트웨어와 결합하여 수신기 매트릭스에 의해 기록될 수 있습니다. 파형 결과는 아래 그림 3과 같이 명확하게 정의된 P 파, 심방 탈분극을 나타내는, 또한 심실 탈분극를 나타냅니다 QRS 파를 포함해야합니다. 양질의 ECG 흔적이 1:1 비율로 명확하게 정의된 QRS 파도 앞에 명확하게 정의된 P 파 있어야합니다. 가 낮은 백그라운드 신호이어야하며 RR 간격은 야생 형 생쥐의 정규해야합니다. 품질이 ECG 추적은 이후 컴퓨터 분석을 어렵게 할 수 있습니다 이것은 P 또는 QRS 파, 또는 배경 신호를 가질 수 있습니다. 가난한 ECG 추적은 일반적으로 다시 이온 주입 측거기 리드, 한 번에 하나의 고정된 수 있습니다. 측거기 리드를 다시 삽입하려면, 마취에서 마우스를 장소, 수술 기법을 사용, 직접 문제의 선두 overlying 피부에 절개를합니다. 선두에 액세스할 때 리드를 고정 봉합사를 잘라, 다시 리드를 고정하기 전에 원하는 위치로 리드를 이동합니다. 마지막으로, 6-0 Prolene으로 외과 사이트를 닫습니다. <img src="/files/ftp_upload/1739/1739fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1 : 긍정적이고 부정적인 리드와 작은 동물 측거기의 예. 일반적으로 적색 리드는 긍정적인 리드이고, 떡밥은 부정적인 리드입니다. 각각의 리드는 노출 전선의 절연 피복 5-7 음, 그리고 피부를 통해 리드의 침식을 방지 비닐 덮인 팁을 보유해야합니다. <img src="/files/ftp_upload/1739/1739fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2 : 마우스 적절한 측거기 주입 사이트를 보여주는 만화. 흰색 (음수) 리드는 마우스의 오른쪽 상단 가슴에 이식이며, 빨간색 (긍정적인) 리드는 왼쪽 복부, 등 그 측거기의 감각이 &quot;리드 두&quot;구성에 배치됩니다. &lt;P 클래스 = &quot;jove_content&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1739/1739fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3 : 정상 부비동 리듬에 마우스의 대표 파형. P 파는 심방 탈분극을 나타내고 QRS 복합은 심실 탈분극를 나타냅니다. 고품질의 파형은 1:1 비율의 각 QRS 복합 앞에 고유 P 파 있어야합니다.

<ol>
	<li>Cerrone, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+ventricular+tachycardia+and+fibrillation+elicited+in+a+knock-in+mouse+model+carrier+of+a+mutation+in+the+cardiac+ryanodine+receptor.">Bidirectional ventricular tachycardia and fibrillation elicited in a knock-in mouse model carrier of a mutation in the cardiac ryanodine receptor.</a> Circ Res. 96 (10), e77-e77 (2005).</li><li>Chelu, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calmodulin+kinase+II-mediated+sarcoplasmic+reticulum+Ca2++leak+promotes+atrial+fibrillation+in+mice.">Calmodulin kinase II-mediated sarcoplasmic reticulum Ca2+ leak promotes atrial fibrillation in mice.</a> J Clin Invest. 119 (7), 1940-1940 (1940).</li><li>Sood, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+calcium+leak+due+to+FKBP12.6+deficiency+in+mice+facilitates+the+inducibility+of+atrial+fibrillation.">Intracellular calcium leak due to FKBP12.6 deficiency in mice facilitates the inducibility of atrial fibrillation.</a> Heart Rhythm. 5 (7), 1047-1047 (2008).</li><li>Swoap, S. J., Gutilla, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+changes+during+daily+torpor+in+the+laboratory+mouse.">Cardiovascular changes during daily torpor in the laboratory mouse.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 297 (3), R769-R769 (2009).</li><li>Costa-Goncalves, d. a., C, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+multidomain+protein+spinophilin+in+blood+pressure+and+cardiac+function+regulation.">Role of the multidomain protein spinophilin in blood pressure and cardiac function regulation.</a> Hypertension. 52 (4), 702-702 (2008).</li><li>Wehrens, X. H., Kirchhoff, S., Doevendans, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+electrocardiography:+an+interval+of+thirty+years.">Mouse electrocardiography: an interval of thirty years.</a> Cardiovasc Res. 45 (1), 231-231 (2000).</li></ol>

이 절차의 중요한 단계는 생존 수술하기 전에 마우스의 적절한 청소하고 준비하고 있습니다. 측거기와 마우스 조직 사이트가 깨끗한지 때, 훨씬 더 이후의 수술 결과가 있습니다. 또한, 배치를 이끌주의는 이후 수술 피부 부식을 줄일 수 있습니다. 기술하는 것이 가능 개조 측면 LV 벽 기능 (I 구성을 리드), 또는뿐만 아니라 ECG 파형 분석을위한 원격 계측기로 송신하다의 사용을 평가하는 다른 구?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Steri 250 Bead Sterilizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Inotech</td>
<td>IS-250</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blunt-Ended Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5980</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blunt-Ended Forceps (x2)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5138</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Veterinary Anesthesia Vaporizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Surgivet</td>
<td>Isotec 4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T/Pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gaymar</td>
<td>P/N11184-000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propylene Blue Monofilament Suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ethicon</td>
<td>8718</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Povodone Iodine, 10%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Equate</td>
<td>N/A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol Swabs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PDI</td>
<td>B339</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tergazyme</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alconox</td>
<td>21837-118</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wavidicde-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Medical Chemical Corporation</td>
<td>Wavicide-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ECG Telemeter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DataSciences International</td>
<td>EA-F20</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

ambulatory ecg recording in mice

생쥐에서 Telemetric ECG 기록은 arrhythmias 뒤에 메커니즘, 전도 장애, 그리고 갑작스런 심장 죽음을 이해하는 것이 필수적입니다. 표면 ECG가 파형 간격의 단기 측정에 이용되지만, 그것은 심장 박동의 변화 또는 arrhythmias 희귀한 에피소드의 촬영의 장기 연구 실용적되지 않습니다. Implantable ECG의 telemeters 간단한 외과 이식, 외래 생쥐의 electrograms의 장기 저장, 여러 동물의 동시 녹음과 확장성의 장점을 제공합니다. 여기, 우리는 생쥐에서 외래 ECG 기록에 대한 telemeters의 주입에 대한 단계별 가이드를 제시한다. 무균 기술을 조심해, 준수는 주간 개월 주입 및 녹음의 가능성과 유리한 생존 결과에 필요합니다. 따라서, implantable ECG의 원격 측정에는 마우스와 같은 외래 동물 모델에서 심장 전기 생리학에 대한 중요 정보를 감지를위한 유용한 도구입니다.

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Ambulatory ECG Recording in Mice

Telemetric ECG는 심장 arrhythmias과 갑작스런 심장 죽음에 대한 동물 모델을 평가 필수적인 도구로 떠오르고있다. 여기, 우리는 생쥐의 장기 외래 ECG 모니터링 응용 프로그램에 대한 telemetric ECG 녹음에 stepwise 가이드를 제시한다.

마우스의 외래 ECG 기록

Telemetric ECG recording in mice is essential to understanding the mechanisms behind arrhythmias, conduction disorders, and sudden cardiac death. Although ...

Research

JoVE Journal

Biology

23.5K 조회수.  Baylor College of Medicine (BCM). Telemetric ECG는 심장 arrhythmias과 갑작스런 심장 죽음에 대한 동물 모델을 평가 필수적인 도구로 떠오르고있다. 여기, 우리는 생쥐의 장기 외래 ECG 모니터링 응용 프로그램에 대한 telemetric ECG 녹음에 stepwise 가이드를 제시한다.

비디오: Ambulatory ECG Recording in Mice

Heterotopic Heart Transplantation in Mice

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable for studying rejection and immune response now that newer transgenic and gene knockout mice are available, and a large number of immunologic reagents have been developed. The heart transplant model is less stringent than the skin transplant models, although technically more challenging. We have developed a modified technique and have completed over 1000 successful cases of heterotopic heart transplantation in mice. When making anastomosis of the ascending aorta and abdominal aorta, two stay sutures are placed at the proximal and distal apexes of recipient abdominal aorta with the donor s ascending aorta, then using 11-0 suture for anastomosis on both side of aorta with continuing sutures. The stay sutures make the anastomosis easier and 11-0 is an ideal suture size to avoid bleeding and thrombosis.
When making anastomosis of pulmonary artery and inferior vena cava, two stay sutures are made at the proximal apex and distal apex of the recipient s inferior vena cava with the donor s pulmonary artery. The left wall of the inferior vena cava and donor s pulmonary artery is closed with continuing sutures in the inside of the inferior vena cava after, one knot with the proximal apex stay suture the right wall of the inferior vena cava and the donor s pulmonary artery are closed with continuing sutures outside the inferior vena cave with 10-0 sutures. This method is easier to perform because anastomosis is made just on the one side of the inferior vena cava and 10-0 sutures is the right size to avoid bleeding and thrombosis. In this article, we provide details of the technique to supplement the video.

The mouse heterotopic heart transplantation model has been proven by many investigators to be an important method for studying mechanisms of rejection and immune response. However, the techniques involved are still challenging. By modifying standard techniques we have had success with more than 1000 transplants.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable ...

연구

생물학

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological measurement of single or multiple ion channels in cells. This technique can be applied to ion channels in both their native environment and expressed in heterologous cells, such as oocytes harvested from the African clawed frog, Xenopus laevis. Here, we describe the well-established technique of patch clamp recording from Xenopus oocytes. This technique is used to measure the properties of expressed ion channels either in populations (macropatch) or individually (single-channel recording). We focus on techniques to maximize the quality of oocyte preparation and seal generation. With all factors optimized, this technique gives a probability of successful seal generation over 90 percent. The process may be optimized differently by every researcher based on the factors he or she finds most important, and we present the approach that have lead to the greatest success in our hands.

This is intended as an introduction to patch clamp recording from Xenopus laevis oocytes. It covers vitelline membrane removal, formation of a gigaohm seal (gigaseal), and the optional conversion of the patch to the outside-out topology.

Xenopus Oocytes의 표현 이온 채널 패치 클램프 녹음

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Drive Fabrication

Chronic recording of large populations of neurons is a valuable technique for studying the function of neuronal circuits in awake behaving rats. Lightweight recording devices carrying a high density array of tetrodes allow for the simultaneous monitoring of the activity of tens to hundreds of individual neurons. Here we describe a protocol for the fabrication of a micro-drive array with twenty one independently movable micro-drives. This device has been used successfully to record from hippocampal and cortical neurons in our lab. We show how to prepare a custom designed, 3-D printed plastic base that will hold the micro-drives. We demonstrate how to construct the individual micro-drives and how to assemble the complete micro-drive array. Further preparation of the drive array for surgical implantation, such as the fabrication of tetrodes, loading of tetrodes into the drive array and gold-plating, is covered in a subsequent video article.

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Drive Fabrication

In this protocol we demonstrate how to fabricate a micro-drive array for chronic electrophysiological recordings in rats.

만성에 대한 마이크로 드라이브 배열 생체내에 녹화 : 드라이브 제작

Chronic recording of large populations of neurons is a valuable technique for studying the function of neuronal circuits in awake behaving rats. ...

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly

The tetrode, a bundle of four electrodes, has proven to be a valuable tool for the simultaneous recording of multiple neurons in-vivo.  The differential amplitude of action potential signatures over the channels of a tetrode allows for the isolation of single-unit activity from multi-unit signals.  The ability to precisely control the stereotaxic location and depth of the tetrode is critical for studying coordinated neural activity across brain regions.  In combination with a micro-drive array, it is possible to achieve precise placement and stable control of many tetrodes over the course of days to weeks.  In this protocol, we demonstrate how to fabricate and condition tetrodes using basic tools and materials, install the tetrodes into a multi-drive tetrode array for chronic in-vivo recording in the rat, make ground wire connections to the micro-drive array, and attach a protective cone onto the micro-drive array in order to protect the tetrodes from physical contact with the environment.



Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly

In this protocol we demonstrate how to fabricate and condition tetrodes for use with a micro-drive array, which was designed for chronic electrophysiological recordings in rats. In addition, we illustrate the final stages of micro-drive array construction, which includes installing ground wires and a protective cone.

만성에 대한 마이크로 드라이브 배열 생체내에 녹화 : Tetrode 조립

The tetrode, a bundle of four electrodes, has proven to be a valuable tool for the simultaneous recording of multiple neurons in-vivo.  The differential ...

Measuring Blood Pressure in Mice using Volume Pressure Recording, a Tail-cuff Method

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. The CODA tail-cuff system uses Volume Pressure Recording (VPR) to measure the blood pressure by determining the tail blood volume. A specially designed differential pressure transducer and an occlusion tail-cuff measure the total blood volume in the tail without the need to obtain the individual pulse signal. Special attention is afforded to the length of the occlusion cuff in order to derive the most accurate blood pressure readings. VPR can easily obtain readings on dark-skinned rodents, such as C57BL6 mice and is MRI compatible. The CODA system provides you with measurements of six (6) different blood pressure parameters; systolic and diastolic blood pressure, heart rate, mean blood pressure, tail blood flow, and tail blood volume. Measurements can be made on either awake or anesthetized mice or rats. The CODA system includes a controller, laptop computer, software, cuffs, animal holders, infrared warming pads, and an infrared thermometer. There are seven different holder sizes for mice as small as 8 grams to rats as large as 900 grams.

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. This tail-cuff system uses Volume Pressure Recording (VPR) to measure the blood pressure by determining the tail blood volume.

볼륨 압력 녹음, 꼬리 즉석 방법을 사용하여 마우스의 측정 혈압

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. The CODA ...

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite isolated from each other, with largely independent histories and scientific communities. However, the interface between these usually disparate fields is the developmental programs underlying acquisition of functional electrical signaling properties and differentiation of functional chemical synapses during the final phases of neural circuit formation. This interface is a critically important area for investigation. In Drosophila, these phases of functional development occur during a period of &lt;8 hours (at 25&deg;C) during the last third of embryogenesis. This late developmental period was long considered intractable to investigation owing to the deposition of a tough, impermeable epidermal cuticle. A breakthrough advance was the application of water-polymerizing surgical glue that can be locally applied to the cuticle to enable controlled dissection of late-stage embryos. With a dorsal longitudinal incision, the embryo can be laid flat, exposing the ventral nerve cord and body wall musculature to experimental investigation. Whole-cell patch-clamp techniques can then be employed to record from individually-identifiable neurons and somatic muscles. These recording configurations have been used to track the appearance and maturation of ionic currents and action potential propagation in both neurons and muscles. Genetic mutants affecting these electrical properties have been characterized to reveal the molecular composition of ion channels and associated signaling complexes, and to begin exploration of the molecular mechanisms of functional differentiation. A particular focus has been the assembly of synaptic connections, both in the central nervous system and periphery. The glutamatergic neuromuscular junction (NMJ) is most accessible to a combination of optical imaging and electrophysiological recording. A glass suction electrode is used to stimulate the peripheral nerve, with excitatory junction current (EJC) recordings made in the voltage-clamped muscle. This recording configuration has been used to chart the functional differentiation of the synapse, and track the appearance and maturation of presynaptic glutamate release properties. In addition, postsynaptic properties can be assayed independently via iontophoretic or pressure application of glutamate directly to the muscle surface, to measure the appearance and maturation of the glutamate receptor fields. Thus, both pre- and postsynaptic elements can be monitored separately or in combination during embryonic synaptogenesis. This system has been heavily used to isolate and characterize genetic mutants that impair embryonic synapse formation, and thus reveal the molecular mechanisms governing the specification and differentiation of synapse connections and functional synaptic signaling properties.

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Electrophysiological recordings from Drosophila embryos allow analyses of developing muscle and neuron electrical properties, as well as characterization of functional synaptogenesis at the glutamatergic neuromuscular junction and central cholinergic and GABAergic synapses.

에 Electrophysiological 녹음 Drosophila 엠브료

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Transverse Aortic Constriction in Mice

Transverse aortic constriction (TAC) in the mouse is a commonly used experimental model for pressure overload-induced cardiac hypertrophy and heart failure.1 TAC initially leads to compensated hypertrophy of the heart, which often is associated with a temporary enhancement of cardiac contractility. Over time, however, the response to the chronic hemodynamic overload becomes maladaptive, resulting in cardiac dilatation and heart failure.2 The murine TAC model was first validated by Rockman et al.1, and has since been extensively used as a valuable tool to mimic human cardiovascular diseases and elucidate fundamental signaling processes involved in the cardiac hypertrophic response and heart failure development. When compared to other experimental models of heart failure, such as complete occlusion of the left anterior descending (LAD) coronary artery, TAC provides a more reproducible model of cardiac hypertrophy and a more gradual time course in the development of heart failure. Here, we describe a step-by-step procedure to perform surgical TAC in mice. To determine the level of pressure overload produced by the aortic ligation, a high frequency Doppler probe is used to measure the ratio between blood flow velocities in the right and left carotid arteries.3, 4 With surgical survival rates of 80-90%, transverse aortic banding is an effective technique of inducing left ventricular hypertrophy and heart failure in mice.

Transverse aortic constriction (TAC) in the mouse is a commonly used experimental model to study mechanisms underlying cardiac hypertrophy and heart failure development. Here, we describe procedures to constrict the aorta to create a reproducible degree of cardiac hypertrophy in mice.

마우스의 가로 대동맥 수축

Transverse aortic constriction (TAC) in the mouse is a commonly used experimental model for pressure overload-induced cardiac hypertrophy and heart ...

Recording Multicellular Behavior in Myxococcus xanthus Biofilms using Time-lapse Microcinematography

A swarm of the &delta;-proteobacterium Myxococcus xanthus contains millions of cells that act as a collective, coordinating movement through a series of signals to create complex, dynamic patterns as a response to environmental cues. These patterns are self-organizing and emergent; they cannot be predicted by observing the behavior of the individual cells. Using a time-lapse microcinematography tracking assay, we identified a distinct emergent pattern in M. xanthus called chemotaxis, defined as the directed movement of a swarm up a nutrient gradient toward its source 1.
In order to efficiently characterize chemotaxis via time-lapse microcinematography, we developed a highly modifiable plate complex (Figure 1) and constructed a cluster of 8 microscopes (Figure 2), each capable of capturing time-lapse videos. The assay is rigorous enough to allow consistent replication of quantifiable data, and the resulting videos allow us to observe and track subtle changes in swarm behavior. Once captured, the videos are transferred to an analysis/storage computer with enough memory to process and store thousands of videos. The flexibility of this setup has proven useful to several members of the M. xanthus community.

Recording Multicellular Behavior in Myxococcus xanthus Biofilms using Time-lapse Microcinematography

To study Myxococcus xanthus swarm behavior, we have designed a time-lapse microcinematography protocol that can be modified for different assays. It employs standard growth conditions adapted for microscopy, and yields reproducible results by the use of inexpensive, reusable silicone gaskets. We have used this method to quantify multicellular chemotaxis.

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A swarm of the &delta;-proteobacterium Myxococcus xanthus contains millions of cells that act as a collective, coordinating movement through a series of ...

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate depends on properties intrinsic to each channel protein as well as the mechanism by which it is generated and controlled and represents an important area of current research. Information about the operational dynamics of ion channel proteins can be obtained by observing long stretches of current produced by a single molecule. Described here is a protocol for obtaining one-channel cell-attached patch-clamp current recordings for a ligand gated ion channel, the NMDA receptor, expressed heterologously in HEK293 cells or natively in cortical neurons. Also provided are instructions on how to adapt the method to other ion channels of interest by presenting the example of the mechano-sensitive channel PIEZO1. This method can provide data regarding the channel&#8217;s conductance properties and the temporal sequence of open-closed conformations that make up the channel&#8217;s activation mechanism, thus helping to understand their functions in health and disease.

Described here is a procedure for obtaining long stretches of current recording from one ion channel with the cell-attached patch-clamp technique. This method allows for observing, in real time, the pattern of open-close channel conformations that underlie the biological signal. These data inform about channel properties in undisturbed biological membranes.

1 채널의 세포 부착 된 패치 클램프 녹음

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...

Intracavernosal Pressure Recording to Evaluate Erectile Function in Rodents

Erectile dysfunction (ED) is defined as the inability to attain or keep an erection of the penis, and this has become a prevalent male sexual disorder. Rodents are employed by many studies to research the physiology/pathology of erectile function. Erectile function in rodents can be evaluated by measuring the intracavernosal pressure (ICP). In practice, ICP can be monitored following electrical stimulation of the cavernous nerves (CNs). The arterial pressure of the carotid artery (the mean arterial pressure) is used as the reference for ICP. Using ICP recording protocols, many key parameters of erectile function can be measured from the ICP response curve. The ICP measurement provides more information than the apomorphine-induced penile erection test, and is cheaper than telemetric monitoring of the corpus spongiosum penis, making this method the most popular one to evaluate erectile function. However, compared to the easily-performed APO-induced erectile function test, successful ICP recordings require attention to detail, practice, and adherence to the operation method. In this work, an introduction to ICP recording in rats is provided to complement the procedure efficiently.

Intracavernosal pressure recording (ICP) is an important method to evaluate the erectile function of experimental animals. Here, a detailed protocol is demonstrated for the recording procedure of ICP by catheterizing the crura penis and then electrically stimulating the cavernous nerves in rats.

Intracavernosal 압력 기록 설치류에 발기 기능을 평가 하

Erectile dysfunction (ED) is defined as the inability to attain or keep an erection of the penis, and this has become a prevalent male sexual disorder. ...