تنقية منتج الربط والتضخيم وتنقية المكتبة للكشف عن SNP متعدد الجينات في سرطان المعدة

للبدء ، قم بإزالة الخرزات المغناطيسية لتنقية الحمض النووي من الثلاجة من درجتين إلى ثماني درجات مئوية. أجهزة الطرد المركزي الخرز لمدة 10 ثوان في 2 ، 500G بعد الخلط. انقل منتج التفاعل المرتبط بالمحول إلى أنبوب طرد مركزي صغير منخفض الامتصاص سعة 1.5 ملليلتر.

أضف 45 ميكرولترا من الخرز المغناطيسي المنقى من الحمض النووي إلى كل أنبوب. بعد دوامة المكونات ، قم بطرد الأنبوب لمدة 10 ثوان ، ثم ضع الأنبوب على رف مغناطيسي لمدة ثلاث دقائق. تخلص بعناية من المادة الطافية دون سحب الخرز.

الآن نقل 300 ميكرولتر من 75٪ من الإيثانول الطازج في كل أنبوب طرد مركزي صغير. قم بتدوير الأنابيب برفق أربع مرات عند 180 درجة. بمجرد أن يزول المحلول ، تخلص من المادة الطافية على الفور مع تجنب سحب الخرز.

ثم أجهزة الطرد المركزي الأنابيب لفترة وجيزة بعد إزالة الأنابيب من رف المغناطيس. ضع الأنابيب على رف المغناطيس وماصة أي سائل متبقي. افتح أغطية أنابيب الطرد المركزي الصغيرة سعة 1.5 ملليلتر واترك الخرزات تجف في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق.

بعد إذابة ودوامات الكواشف ذات الصلة PCR ، أجهزة الطرد المركزي الكواشف لمدة 10 ثوان. قم بإزالة أنبوب الطرد المركزي الصغير سعة 1.5 ملليلتر من رف المغناطيس وأضف كواشف PCR. أجهزة الطرد المركزي أنبوب دوامة لفترة وجيزة لتجنب قطرات السائل على جدار الأنبوب والغطاء.

ثم انقل منتج PCR إلى أنبوب PCR جديد. احتضان على دورة حرارية وتشغيل برنامج التضخيم لعينات الحمض النووي و CDNA. بعد الحضانة ، قم بطرد أنبوب PCR لمدة 10 ثوان ونقل المنتج إلى أنبوب طرد مركزي صغير جديد منخفض الامتصاص سعة 1.5 ملليلتر.

أضف 25 ميكرولترا من الخرز المغناطيسي المنقى من الحمض النووي إلى كل أنبوب ، واخلطه جيدا عن طريق الدوامة. أجهزة الطرد المركزي الأنبوب بسرعة منخفضة واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق. ثم ضع الأنابيب على رف مغناطيسي لمدة ثلاث دقائق حتى يزيل المحلول.

انقل المادة الطافية إلى أنابيب طرد مركزي صغيرة جديدة ، وتجنب سحب الخرز. انقل 300 ميكرولتر من الإيثانول الطازج بنسبة 75٪ إلى الأنابيب واغسل الخرزات مرتين باستخدام رف مغناطيسي كما هو موضح سابقا. بعد طرد الأنابيب لفترة وجيزة ، ضع الأنابيب على الرف وأخرج أي سائل متبقي.

افتح أغطية أنابيب 1.5 ملليلتر وجفف الخرز في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق. ماصة 50 ميكرولتر من eluant في الأنابيب. إجراء طرد مركزي قصير بعد دوامية الأنابيب.

ضع الأنابيب على رف مغناطيسي لمدة ثلاث دقائق حتى يصبح المحلول واضحا. انقل السائل بعناية إلى أنبوب جديد وقم بتسميته باسم المكتبة.