الدكتور Rountree يعترف الدعم الحالي من شبكة معجزة الأطفال، المعهد الوطني للصحة، وK08DK080928 R03DK088013، والجمعية الأميركية للسرطان بحوث جائزة الباحث، MGO-11651. الدكتور Rountree يعترف التي تم تطويرها في البداية هذا الإجراء وصقلها في حين تمول من برنامج عالم الأطفال التنمية (معاهد الصحة القومية منح جائزة K12-HD00850).

<ol>
	<li>Rountree, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CD133-expressing+murine+liver+oval+cell+population+with+bilineage+potential.">A CD133-expressing murine liver oval cell population with bilineage potential.</a> Stem Cells. 25, 2419-2429 (2007).</li><li>Ding, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD133++liver+cancer+stem+cells+from+methionine+adenosyl+transferase+1A-deficient+mice+demonstrate+resistance+to+transforming+growth+factor+(TGF)-beta-induced+apoptosis.">CD133+ liver cancer stem cells from methionine adenosyl transferase 1A-deficient mice demonstrate resistance to transforming growth factor (TGF)-beta-induced apoptosis.</a> Hepatology. 49, 1277-1286 (2009).</li><li>Rountree, C. B., Ding, W., He, L., Stiles, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+CD133-expressing+liver+cancer+stem+cells+in+liver-specific+phosphatase+and+tensin+homolog+deleted+on+chromosome+10-deleted+mice.">Expansion of CD133-expressing liver cancer stem cells in liver-specific phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10-deleted mice.</a> Stem Cells. 27, 290-299 (2009).</li><li>Rountree, C. B., Senadheera, S., Mato, J. M., Crooks, G. M., Lu, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+liver+cancer+stem+cells+during+aging+in+methionine+adenosyltransferase+1A-deficient+mice.">Expansion of liver cancer stem cells during aging in methionine adenosyltransferase 1A-deficient mice.</a> Hepatology. 47, 1288-1297 (2008).</li><li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+regeneration.">Liver regeneration.</a> J. Cell. Physiol. 213, 286-300 (2007).</li><li>Fausto, N., Campbell, J. S., Riehle, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+regeneration.">Liver regeneration.</a> Hepatology. 43, 45-53 (2006).</li><li>Theise, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+Stem+Cells.+III.+Emergent+themes+of+liver+stem+cell+biology:+niche,+quiescence,+self-renewal,+and+plasticity.">Gastrointestinal Stem Cells. III. Emergent themes of liver stem cell biology: niche, quiescence, self-renewal, and plasticity.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 290, 189-193 (2006).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+and+liver+repopulating+capacity+of+murine+oval+cells.">The origin and liver repopulating capacity of murine oval cells.</a> Proc Natl Acad Sci U. S. A. 100, 11881-11888 (2003).</li><li>Greenbaum, L. E., Wells, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+stem+cells+in+liver+repair+and+fibrosis.">The role of stem cells in liver repair and fibrosis.</a> Int. J. Biochem. Cell Biol. 43, 222-229 (2011).</li><li>Choi, S. S., Omenetti, A., Syn, W. K., Diehl, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+Hedgehog+signaling+in+fibrogenic+liver+repair.">The role of Hedgehog signaling in fibrogenic liver repair.</a> Int. J. Biochem. Cell. Biol. 43, 238-244 (2011).</li><li>Khurana, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scopolamine+treatment+and+muscarinic+receptor+subtype-3+gene+ablation+augment+azoxymethane-induced+murine+liver+injury.">Scopolamine treatment and muscarinic receptor subtype-3 gene ablation augment azoxymethane-induced murine liver injury.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 333, 639-649 (2010).</li><li>Sell, S., Leffert, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+cancer+stem+cells.">Liver cancer stem cells.</a> J. Clin. Oncol. 26, 2800-2805 (2008).</li><li>Lee, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+prognostic+subtype+of+human+hepatocellular+carcinoma+derived+from+hepatic+progenitor+cells.">A novel prognostic subtype of human hepatocellular carcinoma derived from hepatic progenitor cells.</a> Nat. Med. 12, 410-416 (2006).</li><li>Sell, S., Dunsford, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+the+stem+cell+origin+of+hepatocellular+carcinoma+and+cholangiocarcinoma.">Evidence for the stem cell origin of hepatocellular carcinoma and cholangiocarcinoma.</a> Am. J. Pathol. 134, 1347-1363 (1989).</li><li>Amin, R., Mishra, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+stem+cells+and+tgf-Beta+in+hepatic+carcinogenesis.">Liver stem cells and tgf-Beta in hepatic carcinogenesis.</a> Gastrointest Cancer Res. 2, 27-30 (2008).</li><li>Tang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor/stem+cells+give+rise+to+liver+cancer+due+to+aberrant+TGF-beta+and+IL-6+signaling.">Progenitor/stem cells give rise to liver cancer due to aberrant TGF-beta and IL-6 signaling.</a> Proc Natl Acad Sci. 105, 2445-2450 (2008).</li><li>Kitisin, K., Pishvaian, M. J., Johnson, L. B., Mishra, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+stem+cells+and+molecular+signaling+pathways+in+hepatocellular+carcinoma.">Liver stem cells and molecular signaling pathways in hepatocellular carcinoma.</a> Gastrointest Cancer Res. 1, 13-21 (2007).</li><li>Rountree, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow+fails+to+differentiate+into+liver+epithelium+during+murine+development+and+regeneration.">Bone marrow fails to differentiate into liver epithelium during murine development and regeneration.</a> Hepatology. 45, 1250-1260 (2007).</li><li>Shimano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+oval+cells+have+the+side+population+phenotype+defined+by+expression+of+ATP-binding+cassette+transporter+ABCG2/BCRP1.">Hepatic oval cells have the side population phenotype defined by expression of ATP-binding cassette transporter ABCG2/BCRP1.</a> Am J Pathol. 163, 3-9 (2003).</li><li>Suzuki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+isolation+and+clonal+identification+of+self-renewing+bipotent+hepatic+progenitor+cells+in+adult+mouse+liver.">Flow cytometric isolation and clonal identification of self-renewing bipotent hepatic progenitor cells in adult mouse liver.</a> Hepatology. , (2008).</li><li>Suzuki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+identification+and+characterization+of+self-renewing+pluripotent+stem+cells+in+the+developing+liver.">Clonal identification and characterization of self-renewing pluripotent stem cells in the developing liver.</a> J Cell Biol. 156, 173-184 (2002).</li><li>Yamashita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EpCAM-positive+hepatocellular+carcinoma+cells+are+tumor-initiating+cells+with+stem/progenitor+cell+features.">EpCAM-positive hepatocellular carcinoma cells are tumor-initiating cells with stem/progenitor cell features.</a> Gastroenterology. 136, 1012-1024 (2009).</li><li>Yamashita, T., Budhu, A., Forgues, M., Wang, X. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+hepatic+stem+cell+marker+EpCAM+by+Wnt-beta-catenin+signaling+in+hepatocellular+carcinoma.">Activation of hepatic stem cell marker EpCAM by Wnt-beta-catenin signaling in hepatocellular carcinoma.</a> Cancer Res. 67, 10831-10839 (2007).</li><li>Furuyama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+cell+supply+from+a+Sox9-expressing+progenitor+zone+in+adult+liver,+exocrine+pancreas+and+intestine.">Continuous cell supply from a Sox9-expressing progenitor zone in adult liver, exocrine pancreas and intestine.</a> Nat Genet. 43, 34-41 (2011).</li><li>Kordes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD133++hepatic+stellate+cells+are+progenitor+cells.">CD133+ hepatic stellate cells are progenitor cells.</a> Biochem Biophys Res Commun. 352, 410-417 (2007).</li><li>Berg, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+Growth+Factor+10+is+critical+for+liver+growth+during+embryogenesis+and+controls+of+hepatoblast+survival+via+b-catenin+activation.">Fibroblast Growth Factor 10 is critical for liver growth during embryogenesis and controls of hepatoblast survival via b-catenin activation.</a> Hepatology. , (2007).</li><li>Turner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatic+stem+cell+and+maturational+liver+lineage+biology.">Human hepatic stem cell and maturational liver lineage biology.</a> Hepatology. 53, 1035-1045 (2011).</li><li>Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+restriction+of+human+hepatic+stem+cells+to+mature+fates+is+made+efficient+by+tissue-specific+biomatrix+scaffolds.">Lineage restriction of human hepatic stem cells to mature fates is made efficient by tissue-specific biomatrix scaffolds.</a> Hepatology. 53, 293-305 (2011).</li><li>Galicia, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+hepatic+tumor+progenitor+cells+in+Pten-null+mice+requires+liver+injury+and+is+reversed+by+loss+of+AKT2.">Expansion of hepatic tumor progenitor cells in Pten-null mice requires liver injury and is reversed by loss of AKT2.</a> Gastroenterology. 139, 2170-2182 (2010).</li><li>Ding, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial-to-mesenchymal+transition+of+murine+liver+tumor+cells+promotes+invasion.">Epithelial-to-mesenchymal transition of murine liver tumor cells promotes invasion.</a> Hepatology. 52, 945-953 (2010).</li></ol>

الدكتور Rountree يتلقى الدعم من المستحضرات الصيدلانية باير البحوث. دائرة الاستعلام والأمن. قرع والمحتالون والسيدة دانغ وVanKirk السيدة ليس لديهم الكشف عن أن يقدم.

وخلافا للنظام المكونة للدم، والخلايا الجذعية المكونة للدم والتي هي المسؤولة عن الحفاظ على نظام تمايز الخلايا التي replacesnormal الفسيولوجية تسليم أكثر من الكريات البيض، وخلايا الدم الحمراء، والصفائح الدموية والكبد الخلايا الجذعية، أو الخلايا الاصلية الكبار الكبد، لا تشارك في الكبد طبيعية التوازن. 5،6 بعد اصابة الكبد الحاد أو استئصال الكبد الجزئي، خلايا الكبد، والكبد ظهارة متباينة، والخضوع عدة جولات من الانتشار الشامل لتحل محل الكبد المفقودة. 5،6 فقط خلال الإصابة المزمنة هي الخلايا الجذعية الكبد لوحظ في الانتشار. 1،5 وتقترح هذه -11 الكبار، وخلايا جذعية محددة الجهاز على التمايز إلى خلايا الكبد على حد سواء وcholangiocytes. 1،5-8 ومن المثير للاهتمام، أن الغالبية العظمى من سرطان الكبد يتطور على خلفية إصابة مزمنة، وبالتالي يتم الافتراض أيضا الخلايا الجذعية لتكون الكبد السلائف لمجموعة فرعية من سرطان الكبد. 2-4،12-17 Oشمال شرق التحديات كبيرة لوقف العمل في خلية الكبد هو عزل السكان نادرة من الخلايا لتحليل وظيفي. على سبيل المثال، فإن الغالبية العظمى من الخلايا في الكبد هي خلايا الكبد، والتي هي أكبر بكثير من cholangiocytes وأصغر الخلايا الأخرى غير متني. عن طريق كسر الكبد كله الى حجرات خلية (خلايا الكبد كبيرة - جزء متني وأصغر الخلايا - غير متني آسر)، وأخرى لاختيار الخلايا CD45 السلبية (غير المكونة للدم الخلايا)، ونحن قادرون على إثراء السكان بدءا من الخلايا الجذعية أكثر من مرة-600. 1،18-21 وتجدر الإشارة، ونحن بأي حال من الأحوال مشيرا إلى أن السكان + CD133 هو 100٪ نقية الخلايا الجذعية السكان، لكنها تمثل بوضوح السكان غير متجانسة من الخلايا، مع نسب مختلفة وإمكانية إعادة تعمير. واحدة من العوائق الرئيسية الحقل هو تعريف الخلايا الجذعية والخلايا الاولية. نستخدم مصطلح &quot;الخلايا الجذعية&quot; على نطاق أوسع في هذا العمل، ولكن في التعريف الدقيق، CD133 + غير parenc-<html> الخلايا hymal تمثل السكان السلف ثنائية النسب. نظرا لحالة الجذعية الحالية والبحوث السلف في الكبد، فإن هذا التقرير لا توفر مكان انطلاق لالمحققين الذين يهتمون في هذا المجال. كما يمكن علامات جديدة تظهر، مثل EpCAM، أو 22،23 عوامل النسخ، مثل Sox9، 24 إدراجها. على سبيل المثال، وجدنا نسبة عالية إلى حد ما من التداخل بين الخلايا والخلايا + + EpCAM CD133. في هذا التقرير، إلا أننا التفاصيل عملية لعزل الخلايا الجذعية من الكبد الفئران العادية وكذلك نماذج اصابة الكبد المزمنة، التي تبين زيادة انتشار الكبد الخلايا الجذعية. هذا الأسلوب له مزايا واضحة على مستوى الكبد المناعية الثابتة المجمدة أو الفورمالين كما يمكن إجراء الدراسات الفنية باستخدام الخلايا الحية بعد العزلة. 1،3،4 الهدف المحدد لهذه العملية هو عزل السكان نقية نسبيا من الخلايا الجذعية التي يمكن أن الكبد يمكن توسيع clonally في المختبر. معشوقة = &quot;jove_content&quot;&gt; والقيد الرئيسي لهذا الإجراء هو أن غالبية خلايا معزولة لن تكون قابلة للحياة بعد التدفق الخلوي (انظر القسم المتاعب رماية). هذا هو نتيجة لساعات اللازمة لإعداد الخلايا، والإجراءات اللازمة لصقل العديد من السكان قبل العزلة. إذا هضم الكبد في تعليق خلية واحدة لتحليل FACS الفوري، والفرق بين حجم خلايا الكبد وخلايا أخرى غير متني تفعيل إنشاء بوابة FACS مستحيلا. إذا تستخدم الكبد غير متني الخلايا، دون القضاء على الخلايا المكونة للدم، وهناك خطر يتمثل في أن عددا كبيرا من الخلايا CD133 + قد تكون ذات المنشأ المكونة للدم قد تلوث الكسر. وعلاوة على ذلك، عن طريق معالجة خلايا من خلال تصفية Miltenyi، يتم جمع الخلايا فقط واحد ومجموعات صغيرة جدا من الخلايا. وهذا يضمن أن العينة لن تسد الإبرة تناول FACS. بدائل لهذا الإجراء تشمل مodification لأي علامة الخلية السطحية البديلة، مثل CD49f، EpCAM، أو مزيج من علامات، مثل CD133 + + A EpCAM نشر التقرير الثاني يستخدم التدرج الكثافة لعزل الخلايا الجذعية من الكبد جزء غير متني. هذا الإجراء يتطلب وجود أجهزة الطرد المركزي فائقة (8000 XG)، ويضيف وقتا كبيرا لهذا الإجراء، وتجربتنا، انخفاضا كبيرا قبل FACS العائد الخلوية وقدرتها على البقاء بعد FACS .. 8 التجارب في المستقبل تشمل مجموعة أوسع من تحليل التعبير الجيني، بما في ذلك الجينات الكبد الجنين، مثل HNF3، HNF4α، وبالإضافة إلى ذلك αfp.In، تحليل لطخة غربية ويمكن استخدامها كيمياء سيتولوجية مناعية للبروتينات وأعرب لتأكيد RT-PCR النتائج من الخلايا في الثقافة. قضية واحدة هو أن نلاحظ أن الأعمال الأخيرة التي تم تحديدها CD133 التعبير على الخلايا النجمية الكبدية 25 ونحن الآن فحص روتيني لدينا عينات من علامات الخلايا النجمية (انظر القسم المتاعب الرماية)، وليس لديها معرفentified تلوث كبير في الكسور لدينا. قد يكون ذلك متعلقا تقنيات مختلفة من الهضم الكبد والعزلة الخلية. 2،3،26 استنادا إلى حقيقة أن غالبية الخلايا لن تكون قابلة للحياة على الفور بعد العزلة FACS، من المستحسن أن تكون الخلايا مطلي، إما معظم الخلايا CD133 + أو الخلايا واحدة، قبل استخدامها في الحيوانات. سوف 5-7 أيام في المختبر تحسن إلى حد كبير نتائج تحليل الورم. وبالإضافة إلى ذلك، وبالنظر إلى قسوة العزلة خلية واحدة، ينبغي أن تجرى إلا مرة واحدة هذا ويمكن توسيع المستعمرات من CD133 + جل الخلايا المعزولة. وقد تم مناقشة أشمل لمختلف الظروف الثقافة والبروتينات التي يمكن أن سقالة تستخدم لالجذعية الكبد الثقافة والخلايا الاصلية تتميز بشكل جيد من قبل لولا ريد. هذا العمل يوفر الظروف البديلة والتعديلات التي قد المحققين يدرج في برنامج أبحاثهم بمجرد يتقن تقنيات عزل الأساسية. 27،28 د. ريد العك كما يوفر تحليلا أكثر تفصيلا لعلم الأحياء ونسب نضوج الخلايا الجذعية بين الكبد والأسلاف ملتزمة. من حيث تحليل الورم في الجسم الحي، ونحن حققنا نجاحا باستخدام الخلايا المعزولة حديثا والخلايا من الخلايا توسيع clonally + CD133 في المختبر، وذلك باستخدام أساسا 1x10 6 خلايا. فقد ركزنا سلالات ontwo الوراثية للإصابة الكبد المزمن، وMAT1a - / - وPTEN الكبد محددة - / - الفئران، ونحن على حد سواء استخدمت الفئران عارية والبرية من نوع الفئران باعتبارها الدولة المضيفة لنمو الورم. في تجربتنا، فإن CD133 + الجذعية الكبد الخلايا تشكل الأورام فقط إذا تم عزلها من النماذج الهامة التي هي إصابة الكبد قبل الخبيثة. لاحظ أن الأورام يتكون من خلايا CD133 + العامة على حد سواء سرطان الكبد سرطانة الأوعية الصفراوية والميزات، مما يشير إلى الخلايا الجذعية أو خلايا المنشأ السلف إلى أورام. 2-4،29 يتم توثيق أعمال المتابعة بعد أورام incluقصر معيار تحليل أنسجة الورم مرضية من (H &amp; E تلطيخ) وتلطيخ المناعى. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن مفروم الأورام وهضمها لتحليل FACS أو إعادة الثقافة. 2-4،30 في الختام، لقد فصلنا إجراء لعزل وتوسيع وتوصيف CD133 + الأساسية للخلايا الجذعية الكبد وCD133 + الخلايا الجذعية السرطانية. متاعب إطلاق النار: CD45 التلوث: لخطوة 3، إذا كان هناك تلوث من الخلايا + CD45، والتي يمكن تقييمها من خلال إضافة آب CD45-FITC قبل FACS تحليل والعزلة، تحقق لضمان عدم صلاحية الأجسام المضادة microbead CD45 والتي تم تجميعها في الترشيح في حين فقط وكان مرشح في حامل المغناطيسي. أي جمع الراشح في حين أن المرشح هو ليس في حامل المغناطيسي سوف تحتوي على خلايا CD45 +. انخفاض الخلية رقم: للكبد لم يصب، ومجموع numbeقد ص CD133 + من غير معزولة متني يكون أقل من 10،000. هذه الخلايا هي نادرة في الكبد هادئة. لنموذج إصابة مزمنة، مثل اتباع نظام غذائي DDC 0.1٪، وزيادة عدد الخلايا إلى حد كبير إلى 100،000. إذا كان عدد الخلايا الإجمالي أقل بكثير هذه الأرقام، قضية واحدة للنظر هو تلطيخ أب FACS. تحقق لضمان عدم صلاحية أب CD133، وتلطيخ الفقراء سيؤدي إلى العائد الفقراء. أيضا، نوصي بإجراء تحليل FACS من الخلايا غير متني الكبد لتحديد السكان النسبي قبل محاولة FACS العزلة. انخفاض بقاء الخلية بعد FACS: قد تكون ذات صلة واحدة من القضايا ذات جدوى لكيفية معالجة الخلايا وأكثر من أي وقت من الناحية المثالية، ينبغي أن تتم بمعزل الخلية بأكملها الداخلي، الخطوات 1-4، دون أي تأخير بين الخطوات ويتم الانتهاء منها في نفس اليوم. فإن أي تأخير كبير بين الخطوات 1-4 يقلل كثيرا من بقاء الخلية. المسألة الثانية تتعلق جقد تكون ذات صلة الجدوى الذراع لضغوط غمد تستخدم لعزل FACS. نوصي باستخدام خفض ضغط غمد. وأخيرا، مرة واحدة يتم عزل الخلايا، ينبغي أن تكون مطلية على الفور، لأن أي تخزين كبيرة على الجليد بعد الفرز سوف يقلل أيضا قدرتها على البقاء. CD133 + غير متني عدم التجانس: التقارير الأخيرة تشير إلى أن الخلايا النجمية الكبدية قد يكون لها أيضا CD133 التعبير وبعض اللدونة 25 لذلك، بالإضافة إلى التحقق من فاعلية الجينات ثنائية مع التحقق، والزلال Krt19 إضافية يمكن أن تشمل الجينات المرتبطة الخلايا النجمية، مثل البروتين ييفي الحمضية الدبقية في الخلايا النجمية هادئة وسلسة ألفا أكتين العضلات والخلايا النجمية في desmin المنشط. 3،4،26 وبالإضافة إلى ذلك، فإن عدد سكان + CD133 يمثل السكان أوسع السلف. إن إضافة علامة ثانية، مثل EpCAM، وتساعد على صقل المزيد من السكان، وعدم التجانس الحد.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> كتالوج رقم </th><th> التعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> DMEM: F12 </td><td> إينفيتروجن </td><td> 10565-018 </td><td> مع أحمر الفينول </td></tr><tr><td> CD45 microbeads </td><td> Miltenyi </td><td> 130-052-301 </td><td></td></tr><tr><td> عامل النمو الكبدية </td><td> سيجما </td><td> H1404 </td><td></td></tr><tr><td> عامل نمو البشرة </td><td> سيجما </td><td> E4127 </td><td></td></tr><tr><td> الدناز </td><td> سيجما </td><td> DN25 </td><td> 1 غرام </td></tr><tr><td> كولاجيناز D </td><td> روش </td><td> 1088874 </td><td></td></tr><tr><td> Pronase </td><td> روش </td><td> 0165921 </td><td></td></tr><tr><td> 70 ميكرون شبكة مصفاة </td><td> الصياد </td><td> 352350 </td><td></td></tr><tr><td> OMNRT iscript </td><td> Quaigen </td><td> 205111 </td><td> 50 ردود الفعل </td></tr><tr><td> HotStarTaq </td><td> Quaigen </td><td> 203203 </td><td></td></tr><tr><td> Miltenyi LD العمود </td><td> Miltenyi </td><td> 130-042-901 </td><td></td></tr><tr><td> CD133-PE FACS أب </td><td> eBioscience </td><td> 12-1331-82 </td><td></td></tr><tr><td> المغلفة لوحات Laminin </td><td> BD </td><td> 354410 </td><td> 96 جيدا </td></tr><tr><td> التربسين 0.05٪ EDTA </td><td> إينفيتروجن </td><td> 25300-354 </td><td> 100 مل </td></tr><tr><td> RNeasy مايكرو طقم </td><td> Quaigen </td><td> 74004 </td><td> 50 أعمدة ل5x10 5 خلايا أو أقل </td></tr><tr><td> فارم ليز </td><td> BD </td><td> 555899 </td><td> 10X تركيز </td></tr></tbody></table>

isolation of cd133+ liver stem cells for clonal expansion

الكبد الخلايا الجذعية، أو الخلايا البيضاوي، تتكاثر خلال إصابة الكبد المزمن، واقترح على التمايز إلى خلايا الكبد على حد سواء وcholangiocytes. وبالإضافة إلى ذلك، يتم الافتراض الكبد الخلايا الجذعية لتكون السلائف لمجموعة فرعية من سرطان الكبد، سرطان الكبد. واحدة من التحديات الرئيسية لوقف العمل في أي خلية الأعضاء الصلبة مثل الكبد هو عزل السكان نادرة من الخلايا لتحليل مفصل. على سبيل المثال، فإن الغالبية العظمى من الخلايا في الكبد هي خلايا الكبد (جزء متني)، والتي هي أكبر بكثير من الخلايا غير متني. من إثراء حجرات محددة الخلوية في الكبد (أي متني والكسور غير متني)، واختيار لخلايا CD45 السلبية، ونحن قادرون على إثراء السكان بدءا من الخلايا الجذعية أكثر من fold.The-600 proceduresdetailed في هذا التقرير يسمح لل يمكن فرز عدد سكانها نادرة نسبيا من الخلايا من الأعضاء الصلبة بكفاءة. ويمكن استخدام هذه العملية لisolateliالخلايا الجذعية النسخة من الكبد الفئران العادية وكذلك نماذج اصابة الكبد المزمنة، والتي تثبت زيادة انتشار الخلايا الجذعية الكبد. هذا الأسلوب له مزايا واضحة على مستوى الكبد المناعية الثابتة المجمدة أو الفورمالين كما يمكن إجراء الدراسات الفنية باستخدام الخلايا الحية بعد التجارب الأولية شارك في الترجمة. لإنجاز إجراءات المبينة في هذا التقرير، وتشجع بقوة على علاقة عمل مع مجموعة أساسية التدفق الخلوي البحوث القائمة على المعلومات من العزلة FACS تعتمد اعتمادا كبيرا على الأجهزة المتخصصة ومعرفة قوية تعمل من إجراءات التدفق الخلوي الأساسية. الهدف المحدد لهذه العملية هو عزل السكان من الخلايا الجذعية الكبد التي يمكن توسيعها clonally في المختبر.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of CD133+ Liver Stem Cells for Clonal Expansion at JoVE.com

Isolation of CD133+ Liver Stem Cells for Clonal Expansion

نحن هنا وصف عزل الخلايا الجذعية CD133 معربا عن الكبد والخلايا الجذعية السرطانية من الكبد الفئران كله، وهي عملية الهضم يتطلب الأنسجة، والإثراء الخلية، وتدفق الخلوي العزلة. نحن تشمل أساليب متقدمة لعزل خلية واحدة والتوسع نسيلي.

عزل CD133 خلايا + الجذعية الكبد للتوسع نسيلي

Liver stem cell, or oval cells, proliferate during chronic liver injury, and are proposed to differentiate into both hepatocytes and cholangiocytes. In ...

isolation-of-cd133-liver-stem-cells-for-clonal-expansion

Research

JoVE Journal

Biology

22.2K Views.  Pennsylvania State College of Medicine. نحن هنا وصف عزل الخلايا الجذعية CD133 معربا عن الكبد والخلايا الجذعية السرطانية من الكبد الفئران كله، وهي عملية الهضم يتطلب الأنسجة، والإثراء الخلية، وتدفق الخلوي العزلة. نحن تشمل أساليب متقدمة لعزل خلية واحدة والتوسع نسيلي.

Video: Isolation of CD133+ Liver Stem Cells for Clonal Expansion

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

العزلة وزرع الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs)

Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells

This paper introduces a novel recovery strategy for endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs) from heparinized but otherwise unmanipulated adult human peripheral blood within a mean of 12 days. After large scale expansion &gt;1x108 ECFCs can be obtained for further tests. Advantageously by using pHPL the contact of human cells with bovine serum antigens can be excluded. By flow cytometry and immunohistochemistry the isolated cells can be characterized as ECFC and their in vitro functionality to form vascular like structures can be tested in a matrigel assay. Further these cells can be subcutaneously injected in a mouse model to form functional, perfused vessels in vivo. After long term expansion and cryopreservation proliferation, function and genomic stability appear to be preserved. 3,4
This animal-protein free isolation and expansion method is easily applicable to generate a large quantity of ECFCs.

Endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs) are a promising tool to study vascular homeostasis and repair.1,2 This paper introduces a novel animal-serum free method for isolation and expansion of ECFC from heparinised adult human peripheral blood with pooled human platelet lysate (pHPL) diminishing the risk of anti-bovine immunisation.

العزلة وتوقعات بنمو كبير من الكبار الإنسان خلايا غشائي السلف تشكيل مستعمرة

This paper introduces a novel recovery strategy for endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs) from heparinized but otherwise unmanipulated adult ...

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal stem cells, MSCs) and endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs). Both cell types are key players in maintaining the integrity of tissue and are probably also involved in regenerative processes and tumor formation.
To study their biology and function in a comparative manner it is important to have both cells types available from the same donor. It may also be beneficial for regenerative purposes to derive MSCs and ECFCs from the same tissue.
Because cellular therapeutics should eventually find their way from bench to bedside we established a new method to isolate and further expand progenitor cells without the use of animal protein. Pooled human platelet lysate (pHPL) replaced fetal bovine serum in all steps of our protocol to completely avoid contact of the cells to xenogeneic proteins.
This video demonstrates a methodology for the isolation and expansion of progenitor cells from one umbilical cord.
All materials and procedures will be described.

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

This protocol describes the isolation and subsequent expansion of mesenchymal stromal cells and endothelial colony forming cells without the use of animal serum to generate autologous pairs for experimental transplantation purposes.

العزلة والحيوان التوسع الحرة المصل الحبل السري الإنسان المستمدة الخلايا اللحمية الوسيطة (MSCS) وغشائي خلايا مستعمرة السلف التشكيل (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental stages is a perfect model to address our hypothesis about cancer and infertility. This protocol shows how to isolate primordial germinal cells from developing gonads in 10.5-11.5 days post coitum (dpc) mouse embryos.  Developing gonadal ridges from mouse embryos (C57BL6J) were dissociated by mechanical disruption with collagenase, then plated in a mouse embryo fibroblast feeder layer (MEF-CF1) that was previously mitotically inactivated with mitomycin C in the presence of knockout media and supplemented with Leukemia Inhibitor Factor (LIF), basic Fibroblast Growth Factor (bFGF), and Stem Cell Factor (SCF).  Using these optimized methods for PCG identification, isolation, and establishment of culture conditions permits long term cultures of EG cells for more than 40 days.  The embryonic germinal cell lines showed embryonic phenotype and expression of common used markers of the pluripotent state.  Isolation and derivation of germinal cells in culture provide a tool to understand their development in vitro and offer the opportunity to monitor cumulative damage at genetic and epigenetic levels after exposure to oxidative stress.

The ability of embryonic germinal cells to differentiate into primordial germinal cells during early development stages is a perfect model to address our hypothesis about cancer and infertility. This protocol shows how to isolate primordial germinal cells from developing gonads in 10.5-11.5 days post coitum mouse embryos.

العزلة واشتقاق خلايا الفأر الجنينية بيرشوت

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of saliva into the oral cavity. Serous and mucous acinar cells are the protein and mucous producing factories of the gland respectively, and represent the origin of saliva production. Once synthesised, the various enzymatic and other proteinaceous components of saliva are secreted through a series of ductal cells bearing epithelial-type morphology, until the eventual expulsion of the saliva through one major duct into the cavity of the mouth. The composition of saliva is also modified by the ductal cells during this process.
In the manifestation of diseases such as Sj&ouml;gren's syndrome, and in some clinical situations such as radiotherapy treatment for head and neck cancers, saliva production by the glands is dramatically reduced 1,2. The resulting xerostomia, a subjective feeling of dry mouth, affects not only the ability of the patient to swallow and speak, but also encourages the development of dental caries and can be socially debilitating for the sufferer.
The restoration of saliva production in the above-mentioned clinical conditions therefore represents an unmet clinical need, and as such several studies have demonstrated the regenerative capacity of the salivary glands 3-5. Further to the isolation of stem cell-like populations of cells from various tissues within the mouse and human bodies 6-8, we have shown using the described method that stem cells isolated from mouse salivary glands can be used to rescue saliva production in irradiated salivary glands 9,10. This discovery paves the way for the development of stem cell-based therapies for the treatment of xerostomic conditions in humans, and also for the exploration of the salivary gland as a microenvironment containing cells with multipotent self-renewing capabilities.

An optimized protocol for the isolation of stem cells from the mouse salivary gland is described. The method employs enzymatic and mechanical digestion, and permits isolation of salispheres containing cells with characteristics of stem cells.

عزل الخلايا الجذعية ماوس اللعابية الغدة

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Muscle regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite cells. Satellite cells are defined by their position between the basal lamina and the sarcolemma of each myofiber. Current knowledge of their behavior heavily relies on the use of the single myofiber isolation protocol. In 1985, Bischoff described a protocol to isolate single live fibers from the Flexor Digitorum Brevis (FDB) of adult rats with the goal to create an in vitro system in which the physical association between the myofiber and its stem cells is preserved 1. In 1995, Rosenblattmodified the Bischoff protocol such that myofibers are singly picked and handled separately after collagenase digestion instead of being isolated by gravity sedimentation 2, 3. The Rosenblatt or Bischoff protocol has since been adapted to different muscles, age or conditions 3-6. The single myofiber isolation technique is an indispensable tool due its unique advantages. First, in the single myofiber protocol, satellite cells are maintained beneath the basal lamina. This is a unique feature of the protocol as other techniques such as Fluorescence Activated Cell Sorting require chemical and mechanical tissue dissociation 7. Although the myofiber culture system cannot substitute for in vivo studies, it does offer an excellent platform to address relevant biological properties of muscle stem cells. Single myofibers can be cultured in standard plating conditions or in floating conditions. Satellite cells on floating myofibers are subjected to virtually no other influence than the myofiber environment. Substrate stiffness and coating have been shown to influence satellite cells' ability to regenerate muscles 8, 9 so being able to control each of these factors independently allows discrimination between niche-dependent and -independent responses. Different concentrations of serum have also been shown to have an effect on the transition from quiescence to activation. To preserve the quiescence state of its associated satellite cells, fibers should be kept in low serum medium 1-3. This is particularly useful when studying genes involved in the quiescence state. In serum rich medium, satellite cells quickly activate, proliferate, migrate and differentiate, thus mimicking the in vivo regenerative process 1-3. The system can be used to perform a variety of assays such as the testing of chemical inhibitors; ectopic expression of genes by virus delivery; oligonucleotide based gene knock-down or live imaging. This video article describes the protocol currently used in our laboratory to isolate single myofibers from the Extensor Digitorum Longus (EDL) muscle of adult mice (6-8 weeks old).

Isolation and culture of myofibers is the gold standard in vitro system to study the transition of satellite cells through quiescence, activation and differentiation. Importantly, the single myofiber culture system preserves the myofiber/stem cell association, which is an essential component of the muscle stem cell niche.

العزلة وثقافة فردية وMyofibers زنزاناتهم القمر الصناعي من العضلات الهيكلية الكبار

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Over the last decade, several adult stem cell populations have been identified in human skin 1-4. The isolation of multipotent adult dermal precursors was first reported by Miller F. D laboratory 5, 6. These early studies described a multipotent precursor cell population from adult mammalian dermis 5. These cells--termed SKPs, for skin-derived precursors-- were isolated and expanded from rodent and human skin and differentiated into both neural and mesodermal progeny, including cell types never found in skin, such as neurons 5. Immunocytochemical studies on cultured SKPs revealed that cells expressed vimentin and nestin, an intermediate filament protein expressed in neural and skeletal muscle precursors, in addition to fibronectin and multipotent stem cell markers 6. Until now, the adult stem cells population SKPs have been isolated from freshly collected mammalian skin biopsies.
Recently, we have established and reported that a population of skin derived precursor cells could remain present in primary fibroblast cultures established from skin biopsies 7. The assumption that a few somatic stem cells might reside in primary fibroblast cultures at early population doublings was based upon the following observations: (1) SKPs and primary fibroblast cultures are derived from the dermis, and therefore a small number of SKP cells could remain present in primary dermal fibroblast cultures and (2) primary fibroblast cultures grown from frozen aliquots that have been subjected to unfavorable temperature during storage or transfer contained a small number of cells that remained viable 7. These rare cells were able to expand and could be passaged several times. This observation suggested that a small number of cells with high proliferation potency and resistance to stress were present in human fibroblast cultures 7.
We took advantage of these findings to establish a protocol for rapid isolation of adult stem cells from primary fibroblast cultures that are readily available from tissue banks around the world (Figure 1). This method has important significance as it allows the isolation of precursor cells when skin samples are not accessible while fibroblast cultures may be available from tissue banks, thus, opening new opportunities to dissect the molecular mechanisms underlying rare genetic diseases as well as modeling diseases in a dish.

Na&amp;#239;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

We report a method to isolate na&#239;ve multipotent skin-derived precursor (SKP) cells from primary human fibroblast cultures. We show that these SKPs derived from fibroblast cultures share similar stem cell properties to the ones derived directly from human skin biopsies. These cells express the neural crest marker, nestin, in addition to the multipotent markers such as OCT4 and Nanog.

السذاجة الكبار الخلايا الجذعية عزل من المرحلة الابتدائية الثقافات الخلايا الليفية الإنسان

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Epithelial to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during development. Misregulation of this process has been implicated as a key event in fibrosis and the progression of carcinomas to a metastatic state. Understanding the processes that underlie EMT is imperative for the early diagnosis and clinical control of these disease states. Reliable induction of EMT in vitro is a useful tool for drug discovery as well as to identify common gene expression signatures for diagnostic purposes. Here we demonstrate a straightforward method for the induction of EMT in a variety of cell types. Methods for the analysis of cells pre- and post-EMT induction by immunocytochemistry are also included. Additionally, we demonstrate the effectiveness of this method through antibody-based array analysis and migration/invasion assays.

A straightforward method is described for the induction of epithelial to mesenchymal transition (EMT) in a variety of cell types. Methods for the analysis of cells in EMT states by immunocytochemistry are included.

الاستقراء وتحليل الظهارية الوسيطة الانتقالية ل

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation, Culture, and Transplantation of Muscle Satellite Cells

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal nuclei in muscle fibers. In adult muscle, satellite cells are normally mitotically quiescent. Following injury, however, satellite cells initiate cellular proliferation to produce myoblasts, their progenies, to mediate the regeneration of muscle. Transplantation of satellite cell-derived myoblasts has been widely studied as a possible therapy for several regenerative diseases including muscular dystrophy, heart failure, and urological dysfunction. Myoblast transplantation into dystrophic skeletal muscle, infarcted heart, and dysfunctioning urinary ducts has shown that engrafted myoblasts can differentiate into muscle fibers in the host tissues and display partial functional improvement in these diseases. Therefore, the development of efficient purification methods of quiescent satellite cells from skeletal muscle, as well as the establishment of satellite cell-derived myoblast cultures and transplantation methods for myoblasts, are essential for understanding the molecular mechanisms behind satellite cell self-renewal, activation, and differentiation. Additionally, the development of cell-based therapies for muscular dystrophy and other regenerative diseases are also dependent upon these factors.

However, current prospective purification methods of quiescent satellite cells require the use of expensive fluorescence-activated cell sorting (FACS) machines. Here, we present a new method for the rapid, economical, and reliable purification of quiescent satellite cells from adult mouse skeletal muscle by enzymatic dissociation followed by magnetic-activated cell sorting (MACS). Following isolation of pure quiescent satellite cells, these cells can be cultured to obtain large numbers of myoblasts after several passages. These freshly isolated quiescent satellite cells or ex vivo expanded myoblasts can be transplanted into cardiotoxin (CTX)-induced regenerating mouse skeletal muscle to examine the contribution of donor-derived cells to regenerating muscle fibers, as well as to satellite cell compartments for the examination of self-renewal activities.

The isolation and culture of a pure population of quiescent satellite cells, a muscle stem cell population, is essential to the understanding of muscle stem cell biology and regeneration, as well as stem cell transplantation for therapies in muscular dystrophy and other degenerative diseases.&#160;

العزلة والثقافة، وزرع خلايا العضلات الأقمار الصناعية

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal ...

Protocol for Isolation of Primary Human Hepatocytes and Corresponding Major Populations of Non-parenchymal Liver Cells

Beside parenchymal hepatocytes, the liver consists of non-parenchymal cells (NPC) namely Kupffer cells (KC), liver endothelial cells (LEC) and hepatic Stellate cells (HSC). Two-dimensional (2D) culture of primary human hepatocyte (PHH) is still considered as the &#34;gold standard&#34; for in vitro testing of drug metabolism and hepatotoxicity. It is well-known that the 2D monoculture of PHH suffers from dedifferentiation and loss of function. Recently it was shown that hepatic NPC play a central role in liver (patho-) physiology and the maintenance of PHH functions. Current research focuses on the reconstruction of in vivo tissue architecture by 3D- and co-culture models to overcome the limitations of 2D monocultures. Previously we published a method to isolate human liver cells and investigated the suitability of these cells for their use in cell cultures in Experimental Biology and Medicine1. Based on the broad interest in this technique the aim of this article was to provide a more detailed protocol for the liver cell isolation process including a video, which will allow an easy reproduction of this technique.
Human liver cells were isolated from human liver tissue samples of surgical interventions by a two-step EGTA/collagenase P perfusion technique. PHH were separated from the NPC by an initial centrifugation at 50 x g. Density gradient centrifugation steps were used for removal of dead cells. Individual liver cell populations were isolated from the enriched NPC fraction using specific cell properties and cell sorting procedures. Beside the PHH isolation we were able to separate KC, LEC and HSC for further cultivation.
Taken together, the presented protocol allows the isolation of PHH and NPC in high quality and quantity from one donor tissue sample. The access to purified liver cell populations could allow the creation of in vivo like human liver models.

A technique to isolate human hepatocytes and non-parenchymal liver cells from the same donor is described. The different liver cell types build the basis for functional liver models and tissue engineering. This new method aims to isolate liver cells in a high yield and viability.

بروتوكول لعزل خلايا الكبد الإنسان الابتدائية والموافق السكان الرئيسية للخلايا الكبد غير متني

Beside parenchymal hepatocytes, the liver consists of non-parenchymal cells (NPC) namely Kupffer cells (KC), liver endothelial cells (LEC) and hepatic ...