ד&quot;ר ראונטרי מודה תמיכה הנוכחי מרשת נס הילדים, המכון הלאומי לבריאות, K08DK080928 ו R03DK088013, ואת האגודה האמריקנית למלחמה בסרטן מחקר פרס המלומד, MgO-11651. ד&quot;ר ראונטרי מודה כי הליך זה פותחה בתחילה ומעודן בעוד ממומן על ידי תוכנית הפיתוח של המדען ילדים (NICHD פרס גרנט K12-HD00850).

<ol>
	<li>Rountree, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CD133-expressing+murine+liver+oval+cell+population+with+bilineage+potential.">A CD133-expressing murine liver oval cell population with bilineage potential.</a> Stem Cells. 25, 2419-2429 (2007).</li><li>Ding, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD133++liver+cancer+stem+cells+from+methionine+adenosyl+transferase+1A-deficient+mice+demonstrate+resistance+to+transforming+growth+factor+(TGF)-beta-induced+apoptosis.">CD133+ liver cancer stem cells from methionine adenosyl transferase 1A-deficient mice demonstrate resistance to transforming growth factor (TGF)-beta-induced apoptosis.</a> Hepatology. 49, 1277-1286 (2009).</li><li>Rountree, C. B., Ding, W., He, L., Stiles, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+CD133-expressing+liver+cancer+stem+cells+in+liver-specific+phosphatase+and+tensin+homolog+deleted+on+chromosome+10-deleted+mice.">Expansion of CD133-expressing liver cancer stem cells in liver-specific phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10-deleted mice.</a> Stem Cells. 27, 290-299 (2009).</li><li>Rountree, C. B., Senadheera, S., Mato, J. M., Crooks, G. M., Lu, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+liver+cancer+stem+cells+during+aging+in+methionine+adenosyltransferase+1A-deficient+mice.">Expansion of liver cancer stem cells during aging in methionine adenosyltransferase 1A-deficient mice.</a> Hepatology. 47, 1288-1297 (2008).</li><li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+regeneration.">Liver regeneration.</a> J. Cell. Physiol. 213, 286-300 (2007).</li><li>Fausto, N., Campbell, J. S., Riehle, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+regeneration.">Liver regeneration.</a> Hepatology. 43, 45-53 (2006).</li><li>Theise, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+Stem+Cells.+III.+Emergent+themes+of+liver+stem+cell+biology:+niche,+quiescence,+self-renewal,+and+plasticity.">Gastrointestinal Stem Cells. III. Emergent themes of liver stem cell biology: niche, quiescence, self-renewal, and plasticity.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 290, 189-193 (2006).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+and+liver+repopulating+capacity+of+murine+oval+cells.">The origin and liver repopulating capacity of murine oval cells.</a> Proc Natl Acad Sci U. S. A. 100, 11881-11888 (2003).</li><li>Greenbaum, L. E., Wells, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+stem+cells+in+liver+repair+and+fibrosis.">The role of stem cells in liver repair and fibrosis.</a> Int. J. Biochem. Cell Biol. 43, 222-229 (2011).</li><li>Choi, S. S., Omenetti, A., Syn, W. K., Diehl, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+Hedgehog+signaling+in+fibrogenic+liver+repair.">The role of Hedgehog signaling in fibrogenic liver repair.</a> Int. J. Biochem. Cell. Biol. 43, 238-244 (2011).</li><li>Khurana, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scopolamine+treatment+and+muscarinic+receptor+subtype-3+gene+ablation+augment+azoxymethane-induced+murine+liver+injury.">Scopolamine treatment and muscarinic receptor subtype-3 gene ablation augment azoxymethane-induced murine liver injury.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 333, 639-649 (2010).</li><li>Sell, S., Leffert, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+cancer+stem+cells.">Liver cancer stem cells.</a> J. Clin. Oncol. 26, 2800-2805 (2008).</li><li>Lee, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+prognostic+subtype+of+human+hepatocellular+carcinoma+derived+from+hepatic+progenitor+cells.">A novel prognostic subtype of human hepatocellular carcinoma derived from hepatic progenitor cells.</a> Nat. Med. 12, 410-416 (2006).</li><li>Sell, S., Dunsford, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+the+stem+cell+origin+of+hepatocellular+carcinoma+and+cholangiocarcinoma.">Evidence for the stem cell origin of hepatocellular carcinoma and cholangiocarcinoma.</a> Am. J. Pathol. 134, 1347-1363 (1989).</li><li>Amin, R., Mishra, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+stem+cells+and+tgf-Beta+in+hepatic+carcinogenesis.">Liver stem cells and tgf-Beta in hepatic carcinogenesis.</a> Gastrointest Cancer Res. 2, 27-30 (2008).</li><li>Tang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor/stem+cells+give+rise+to+liver+cancer+due+to+aberrant+TGF-beta+and+IL-6+signaling.">Progenitor/stem cells give rise to liver cancer due to aberrant TGF-beta and IL-6 signaling.</a> Proc Natl Acad Sci. 105, 2445-2450 (2008).</li><li>Kitisin, K., Pishvaian, M. J., Johnson, L. B., Mishra, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+stem+cells+and+molecular+signaling+pathways+in+hepatocellular+carcinoma.">Liver stem cells and molecular signaling pathways in hepatocellular carcinoma.</a> Gastrointest Cancer Res. 1, 13-21 (2007).</li><li>Rountree, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow+fails+to+differentiate+into+liver+epithelium+during+murine+development+and+regeneration.">Bone marrow fails to differentiate into liver epithelium during murine development and regeneration.</a> Hepatology. 45, 1250-1260 (2007).</li><li>Shimano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+oval+cells+have+the+side+population+phenotype+defined+by+expression+of+ATP-binding+cassette+transporter+ABCG2/BCRP1.">Hepatic oval cells have the side population phenotype defined by expression of ATP-binding cassette transporter ABCG2/BCRP1.</a> Am J Pathol. 163, 3-9 (2003).</li><li>Suzuki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+isolation+and+clonal+identification+of+self-renewing+bipotent+hepatic+progenitor+cells+in+adult+mouse+liver.">Flow cytometric isolation and clonal identification of self-renewing bipotent hepatic progenitor cells in adult mouse liver.</a> Hepatology. , (2008).</li><li>Suzuki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+identification+and+characterization+of+self-renewing+pluripotent+stem+cells+in+the+developing+liver.">Clonal identification and characterization of self-renewing pluripotent stem cells in the developing liver.</a> J Cell Biol. 156, 173-184 (2002).</li><li>Yamashita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EpCAM-positive+hepatocellular+carcinoma+cells+are+tumor-initiating+cells+with+stem/progenitor+cell+features.">EpCAM-positive hepatocellular carcinoma cells are tumor-initiating cells with stem/progenitor cell features.</a> Gastroenterology. 136, 1012-1024 (2009).</li><li>Yamashita, T., Budhu, A., Forgues, M., Wang, X. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+hepatic+stem+cell+marker+EpCAM+by+Wnt-beta-catenin+signaling+in+hepatocellular+carcinoma.">Activation of hepatic stem cell marker EpCAM by Wnt-beta-catenin signaling in hepatocellular carcinoma.</a> Cancer Res. 67, 10831-10839 (2007).</li><li>Furuyama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+cell+supply+from+a+Sox9-expressing+progenitor+zone+in+adult+liver,+exocrine+pancreas+and+intestine.">Continuous cell supply from a Sox9-expressing progenitor zone in adult liver, exocrine pancreas and intestine.</a> Nat Genet. 43, 34-41 (2011).</li><li>Kordes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD133++hepatic+stellate+cells+are+progenitor+cells.">CD133+ hepatic stellate cells are progenitor cells.</a> Biochem Biophys Res Commun. 352, 410-417 (2007).</li><li>Berg, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+Growth+Factor+10+is+critical+for+liver+growth+during+embryogenesis+and+controls+of+hepatoblast+survival+via+b-catenin+activation.">Fibroblast Growth Factor 10 is critical for liver growth during embryogenesis and controls of hepatoblast survival via b-catenin activation.</a> Hepatology. , (2007).</li><li>Turner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatic+stem+cell+and+maturational+liver+lineage+biology.">Human hepatic stem cell and maturational liver lineage biology.</a> Hepatology. 53, 1035-1045 (2011).</li><li>Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+restriction+of+human+hepatic+stem+cells+to+mature+fates+is+made+efficient+by+tissue-specific+biomatrix+scaffolds.">Lineage restriction of human hepatic stem cells to mature fates is made efficient by tissue-specific biomatrix scaffolds.</a> Hepatology. 53, 293-305 (2011).</li><li>Galicia, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+hepatic+tumor+progenitor+cells+in+Pten-null+mice+requires+liver+injury+and+is+reversed+by+loss+of+AKT2.">Expansion of hepatic tumor progenitor cells in Pten-null mice requires liver injury and is reversed by loss of AKT2.</a> Gastroenterology. 139, 2170-2182 (2010).</li><li>Ding, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial-to-mesenchymal+transition+of+murine+liver+tumor+cells+promotes+invasion.">Epithelial-to-mesenchymal transition of murine liver tumor cells promotes invasion.</a> Hepatology. 52, 945-953 (2010).</li></ol>

ד&quot;ר ראונטרי מקבל תמיכה מחקר רוקחות באייר. בני הזוג. דינג ו נוכלים גברת דאנג וגב &#39;VanKirk אין גילויים לדווח.

בניגוד למערכת hematopoietic, שבו בתאי גזע hematopoietic אחראים לשמירה מערכת בידול הסלולר replacesnormal פיזיולוגי להתהפך של לויקוציטים, בתאי דם אדומים וטסיות דם, תא גזע בכבד, או מבוגר ובתאים בכבד, אינם משתתפים כבד נורמלי הומאוסטזיס. ​​5,6 לאחר פגיעה בכבד חריפה או כריתה חלקית, hepatocytes, כמו אפיתל הכבד הבדיל, לעבור כמה סיבובים של התפשטות להחליף את מסת הכבד לאיבוד. 5,6 רק במהלך פציעה כרונית הם גזע לתאי הכבד נצפתה להתרבות. 1,5 -11, אלה המבוגרים איבר ספציפי בתאי גזע מוצעים להתמיין גם hepatocytes ו cholangiocytes. 1,5-8 מעניין, הרוב המכריע של סרטן הכבד מתפתחת על רקע של פגיעה כרונית, וכך גזע לתאי כבד הם שיערו גם להיות מבשרי עבור משנה של סרטן הכבד. 2-4,12-17 אחד האתגרים העיקריים גזע עובדים תא הכבד הוא בידוד של אוכלוסיות נדירות של תאים לניתוח פונקציונלי. למשל, הרוב המכריע של תאים בכבד הם hepatocytes, אשר גדול יותר באופן משמעותי מאשר cholangiocytes אחרים קטנים יותר שאינם parenchymal תאים. על ידי שבירת כל הכבד לתאים תאים (hepatocytes גדול - חלק parenchymal תאים קטנים יותר - שאינם parenchymal חלק), ועוד בחירה של תאים CD45 שלילי (לא hematopoietic תאים), אנו מסוגלים להעשיר את האוכלוסייה החל בתאי גזע על ידי מעל 600 של פי. 1,18-21 לציין, אנחנו בשום אופן המעידים כי האוכלוסייה CD133 + היא אוכלוסייה 100% טהור בתאי גזע, אבל ברור מייצג אוכלוסיה הטרוגנית של תאים, עם באים ממשפחות שונות ואת הפוטנציאל ואכלוס. אחת המגבלות העיקריות של התחום היא הגדרות של בתאי גזע ובתאים. אנו משתמשים &quot;תא גזע&quot; טווח רחב יותר בעבודה זו, אלא בהגדרה מחמירה, CD133 + לא parenchymal תאים מייצגים אוכלוסייה דו אבי השושלת. בהתחשב במצב הנוכחי של גזע ומחקר ובתאים בכבד, דוח זה מספק נקודת זינוק חוקרים המעוניינים בתחום זה. כמו סמנים חדשים לצוץ, כגון EpCAM, 22,23 או גורמי שעתוק, כגון Sox9, 24 הם יכולים להיות משולבים. לדוגמה, מצאנו שיעור גבוה למדי של חפיפה בין EpCAM תאים + ו-CD133 + תאים. בדו&quot;ח זה, אנו בפירוט תהליך של בידוד תא גזע מהכבד Murine נורמלית, כמו גם פגיעה כרונית מודלים הכבד, אשר גדל להפגין גזע כבד התפשטות תאים. לשיטה זו יתרונות ברורים על פני אימונוהיסטוכימיה תקן של הכבד קבוע קפוא או פורמלין כפי מחקרים תפקודית באמצעות תאים חיים יכול להתבצע לאחר בידוד. 1,3,4 המטרה הספציפיים של התהליך הזה היא לבודד אוכלוסייה טהורה יחסית של גזע לתאי כבד שיכול יורחב clonally במבחנה. המגבלה העיקרית בהליך זה היא כי הרוב המכריע של תאים בודדים לא תהיה בת קיימא לאחר cytometry זרימה (ראה סעיף קליעה Trouble). זוהי תוצאה של שעות נדרש להכין את התאים, ואת ההליכים הרבים הנדרשים כדי לחדד את האוכלוסייה לפני הבידוד. אם הכבד מתעכל ההשעיה תא בודד לניתוח FACS מיידית, את ההבדל בין גודל hepatocytes ולמוסדות אחרים ללא כוונת parenchymal תאים יגרום ליצירת FACS יעיל שער בלתי אפשרי. אם לא parenchymal בתאי הכבד מנוצלים, ללא סילוק תאים hematopoietic, קיים סיכון כי מספר משמעותי של תאים CD133 + עשוי להיות ממוצא hematopoietic עלול לזהם את השבר. יתר על כן, על ידי עיבוד התאים דרך מסנן Miltenyi, רק תאים בודדים ואשכולות קטנים מאוד של תאים נאספים. הדבר מבטיח כי המדגם לא סותמים את המחט צריכת FACS. חלופות הליך זה כולל שינוי עבור כל סמן פני חלופה התא, כגון CD49f, EpCAM, או צירוף של סמנים, כגון CD133 + + EpCAM דו&quot;ח שפורסם second מנצל שיפוע צפיפות לבודד גזע לתאי כבד מן חלק בלתי parenchymal. הליך זה מחייב צנטריפוגות Ultra-(8000 XG), מוסיף זמן משמעותי הנוהל, שעל פי ניסיוננו, הקטינה באופן משמעותי מראש FACS תשואה הסלולר ופוסט FACS הכדאיות. 8 ניסויים עתידיים כוללים מגוון רחב יותר של ניתוח ביטוי גנים, ביניהם גנים בכבד העובר, כגון HNF3, HNF4α, ועל כן αfp.In, ניתוח כתם immunocytochemistry המערבי של חלבונים הביע יכול להיות מנוצל כדי לאשר RT-PCR התוצאות של תאים בתרבית. נושא אחד לציין הוא העבודה האחרונה כי זיהו CD133 ביטוי בתאי stellate הכבד. 25 כעת אנו שגרתי מסך דגימות שלנו סמנים של תאים stellate (ראה סעיף קליעה Trouble), ויש להם לא אידentified זיהום משמעותי שברים שלנו. זו עשויה להיות קשורה בטכניקות שונות של מערכת העיכול והכבד ובידוד התא. 2,3,26 בהתבסס על העובדה כי הרוב המכריע של תאים לא תהיה בת קיימא מיד לאחר בידוד FACS, אנו ממליצים כי התאים להיות מצופה, או כפי בתפזורת CD133 + תאים או תאים בודדים, לפני השימוש בבעלי חיים. 5-7 ימים במבחנה יביא לשיפור משמעותי של התוצאות של ניתוח הגידול. בנוסף, בהתחשב בתלאות בידוד תא בודד, זה צריך להיעשות רק פעם מושבות ניתן להרחיב מ CD133 בתפזורת + תאים מבודדים. דיון מעמיק יותר מהתנאים תרבות שונים וחלבונים פיגום אשר עשוי להיות מנוצל כדי גזע ותרבות הכבד ובתאים התאפיינה גם על ידי לולה ריד. עבודה זו מספקת תנאים חלופיים שינויים, אשר החוקרים עשוי לשלב תוכנית המחקר שלהם פעם אחת הטכניקות הבסיסיות הן בידוד שולט. 27,28 ד&quot;ר יצירתו של ריד מספקת גם ניתוח מפורט יותר של הביולוגיה השושלת והתבגרות בין בתאי גזע כבד ואת אבות מחויב. במונחים של ניתוח הגידול vivo, יש לנו הצלחה באמצעות טרי תאים מבודדים תאים מורחבת clonally CD133 + תאים במבחנה, בעיקר באמצעות 1x10 6 תאים. התמקדנו זנים ontwo הגנטי של פגיעה בכבד כרוניים, MAT1a - / - ו PTEN הכבד ספציפי - / - עכברים, ויש לנו מנוצל בשני עכברים בעירום wild-type עכברים כמארחים עבור הגידול. מניסיוננו, CD133 + בתאי גזע כבד רק טופס גידולים אם הם מבודדים פגיעה משמעותית מודלים כבד כי הם טרום ממאירים. ראוי לציין, כי גידולים נוצר CD133 + תאים בכלל יש גם קרצינומה hepatocellular ותכונות בסרטן כיס המרה, דבר המצביע על תא גזע או מוצא התא ובתאים של גידולים. 2-4,29 מעקב אחרי עובדים גידולים מתועדים כולל ניתוח פתולוגי תקן של רקמת הגידול (H &amp; מכתים E) מכתים immunohistochemical. בנוסף, גידולים יכולים להיות טחון מתעכל לניתוח FACS מחדש או תרבות. 2-4,30 לסיכום, יש לנו נוהל מפורט הבידוד, הרחבת, ואפיון הבסיסיים של CD133 + בתאי גזע כבד CD133 + סרטן בתאי גזע. צרות הירי: CD45 זיהום: עבור שלב 3, אם יש זיהום CD45 + תאים, אשר ניתן להעריך על ידי הוספת CD45-FITC Ab לפני ניתוח FACS ובידוד, לבדוק על מנת להבטיח כי נוגדן CD45 microbead אינו פג וכי תסנין נאסף רק בעוד מסנן היה בעל מגנטי. תסנין כל שנאספו תוך המסנן אינו בעל מגנטי יכיל תאים CD45 +. התא נמוכה מספר: עבור הכבד שלם, המספר הכולל של CD133 + לא parenchymal מבודד עשוי להיות פחות מ -10,000. תאים אלה הם נדירים בכבד שקט. עבור דגם פציעה כרונית, כגון הדיאטה 0.1% DDC, המספר יגדל באופן משמעותי עד 100,000 תאים. אם מספר תא הכולל הוא נמוך משמעותית מספרים אלה, נושא אחד שצריך לקחת בחשבון הוא מכתים Ab FACS. בדוק כדי לוודא Ab CD133 אינו פג, כפי מכתים עניים תגרום תשואה גרועה. כמו כן, אנו ממליצים על ביצוע ניתוח FACS הלא parenchymal בתאי הכבד על מנת לקבוע את האוכלוסייה יחסית לפני בידוד FACS ניסיון. תא הכדאיות נמוכה לאחר FACS: אחת הבעיות של הקיום עשוי להיות קשור איך התאים מעובדים על פני זמן מה. באופן אידיאלי, התא כולו בידוד ההליך, צעדים 1-4, צריכה להתנהל ללא עיכובים בין השלבים וסיים באותו יום. כל עיכוב משמעותי בין שלבים 1-4 יהיה לצמצם במידה ניכרת את הכדאיות התא. בעיה שנייה הקשורה כדאיות התא עשויה להיות קשורה ללחץ נדן המשמש לבידוד FACS. אנו ממליצים להשתמש בלחץ נמוך נדן. לבסוף, לאחר תאים מבודדים, הם צריכים להיות מצופה מיד, כמו כל אחסון משמעותי על הקרח לאחר מיון יהיה גם להפחית את הכדאיות. CD133 + לא parenchymal ההטרוגניות: דיווחים אחרונים מצביעים על כך stellate תאים בכבד יכול להיות גם CD133 הביטוי יש פלסטיות. 25 לפיכך, בנוסף אימות עוצמה דו גנים עם אלבומין ו Krt19, אימות נוסף יכול לכלול גנים הקשורים בתאי stellate, כגון חלבון fibrillary גליה חומצי בתאי stellate שקט ו אלפא חלקה אקטין שרירים desmin בתאי stellate הופעל. 3,4,26 בנוסף, האוכלוסייה CD133 + מייצג אב באוכלוסייה רחבה יותר. תוספת של סמן שנייה, כגון EpCAM, עשוי לסייע לחדד את האוכלוסייה נוספת, ההטרוגניות גבול.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> הערות (אופציונלי) </th></tr><tr><td> DMEM: F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 10565-018 </td><td> עם פנול אדום </td></tr><tr><td> CD45 microbeads </td><td> Miltenyi </td><td> 130-052-301 </td><td></td></tr><tr><td> פקטור גדילה hepatocyte </td><td> סיגמא </td><td> H1404 </td><td></td></tr><tr><td> הצמיחה אפידרמיס גורם </td><td> סיגמא </td><td> E4127 </td><td></td></tr><tr><td> DNase </td><td> סיגמא </td><td> DN25 </td><td> 1 גרם </td></tr><tr><td> Collagenase D </td><td> רוש </td><td> 1088874 </td><td></td></tr><tr><td> Pronase </td><td> רוש </td><td> 0165921 </td><td></td></tr><tr><td> 70 מיקרון רשת מסננת </td><td> דיג </td><td> 352350 </td><td></td></tr><tr><td> Omniscript RT </td><td> Quaigen </td><td> 205111 </td><td> 50 תגובות </td></tr><tr><td> HotStarTaq </td><td> Quaigen </td><td> 203203 </td><td></td></tr><tr><td> Miltenyi טור LD </td><td> Miltenyi </td><td> 130-042-901 </td><td></td></tr><tr><td> CD133-PE FACS Ab </td><td> eBioscience </td><td> 12-1331-82 </td><td></td></tr><tr><td> Laminin צלחות מצופה </td><td> BD </td><td> 354410 </td><td> 96 גם </td></tr><tr><td> טריפסין 0.05% EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25300-354 </td><td> 100 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> RNeasy מיקרו Kit </td><td> Quaigen </td><td> 74004 </td><td> 50 עמודים עבור 5x10 5 תאים או פחות </td></tr><tr><td> פארם Lyse </td><td> BD </td><td> 555899 </td><td> 10X ריכוז </td></tr></tbody></table>

isolation of cd133+ liver stem cells for clonal expansion

גזע כבד התא, או התאים סגלגל, להתרבות במהלך פציעה כבד כרונית, והם הציעו להתמיין גם hepatocytes ו cholangiocytes. בנוסף, בתאי גזע בכבד הם שיערו להיות מבשרי עבור משנה של סרטן הכבד, סרטן Hepatocellular. אחד האתגרים העיקריים לבלום עבודה תא מוצק כמו כל איבר הכבד הוא בידודה של אוכלוסייה נדירה של תאים עבור ניתוח מפורט. למשל, הרוב המכריע של תאים בכבד הם hepatocytes (חלק parenchymal), אשר באופן משמעותי יותר מאשר אי - parenchymal תאים. על ידי העשרת תאים סלולריים ספציפי של הכבד (כלומר parenchymal ולא parenchymal שברים), ובחירה של תאים CD45 שלילי, אנו מסוגלים להעשיר את האוכלוסייה החל בתאי גזע על ידי למעלה מ 600-fold.The proceduresdetailed בדוח זה לאפשר אוכלוסייה נדירה יחסית של תאים מאיבר מוצק להיות מיון ביעילות. תהליך זה יכול להיות מנוצל כדי בתאי גזע isolateliver מהכבד Murine נורמלית, כמו גם פגיעה כרונית מודלים הכבד, אשר גדל להפגין גזע כבד התפשטות תאים. לשיטה זו יתרונות ברורים על פני אימונוהיסטוכימיה תקן של הכבד קבוע קפוא או פורמלין כפי מחקרים תפקודית באמצעות תאים חיים יכול להתבצע לאחר שיתוף לוקליזציה הניסויים הראשוניים. כדי לבצע את ההליך המתוארים בדוח זה, יחסים בעבודה עם ליבה מחקר מבוסס זרימה cytometry הוא מומלץ מאוד כמו הפרטים של בידוד FACS הם תלויים במידה רבה על מכשור מיוחדים ידע בסיסי חזק של זרימת cytometry נהלים בסיסיים. המטרה הספציפיים של התהליך הזה היא לבודד אוכלוסייה של גזע לתאי כבד כי ניתן להרחיב clonally במבחנה.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of CD133+ Liver Stem Cells for Clonal Expansion at JoVE.com

Isolation of CD133+ Liver Stem Cells for Clonal Expansion

כאן אנו מתארים את הבידוד של CD133 לבטא בתאי גזע כבד סרטן בתאי גזע מהכבד Murine שלם, תהליך הדורש עיכול רקמות, העשרה התא cytometry בידוד תזרים. אנו כוללים שיטות מתקדמות בידוד תא בודד והרחבת משובט.

בידוד של הכבד CD133 + בתאי גזע משובטים עבור הרחבת

Liver stem cell, or oval cells, proliferate during chronic liver injury, and are proposed to differentiate into both hepatocytes and cholangiocytes. In ...

isolation-of-cd133-liver-stem-cells-for-clonal-expansion

Research

JoVE Journal

Biology

22.2K Views.  Pennsylvania State College of Medicine. כאן אנו מתארים את הבידוד של CD133 לבטא בתאי גזע כבד סרטן בתאי גזע מהכבד Murine שלם, תהליך הדורש עיכול רקמות, העשרה התא cytometry בידוד תזרים. אנו כוללים שיטות מתקדמות בידוד תא בודד והרחבת משובט.

Video: Isolation of CD133+ Liver Stem Cells for Clonal Expansion

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

בידוד והשתלות של בתאי גזע hematopoietic (HSCs)

Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells

This paper introduces a novel recovery strategy for endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs) from heparinized but otherwise unmanipulated adult human peripheral blood within a mean of 12 days. After large scale expansion &gt;1x108 ECFCs can be obtained for further tests. Advantageously by using pHPL the contact of human cells with bovine serum antigens can be excluded. By flow cytometry and immunohistochemistry the isolated cells can be characterized as ECFC and their in vitro functionality to form vascular like structures can be tested in a matrigel assay. Further these cells can be subcutaneously injected in a mouse model to form functional, perfused vessels in vivo. After long term expansion and cryopreservation proliferation, function and genomic stability appear to be preserved. 3,4
This animal-protein free isolation and expansion method is easily applicable to generate a large quantity of ECFCs.

Endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs) are a promising tool to study vascular homeostasis and repair.1,2 This paper introduces a novel animal-serum free method for isolation and expansion of ECFC from heparinised adult human peripheral blood with pooled human platelet lysate (pHPL) diminishing the risk of anti-bovine immunisation.

בידוד הרחבת בקנה מידה גדול של תאים אנושיים למבוגרים האנדותל המושבה יצירת אב

This paper introduces a novel recovery strategy for endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs) from heparinized but otherwise unmanipulated adult ...

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal stem cells, MSCs) and endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs). Both cell types are key players in maintaining the integrity of tissue and are probably also involved in regenerative processes and tumor formation.
To study their biology and function in a comparative manner it is important to have both cells types available from the same donor. It may also be beneficial for regenerative purposes to derive MSCs and ECFCs from the same tissue.
Because cellular therapeutics should eventually find their way from bench to bedside we established a new method to isolate and further expand progenitor cells without the use of animal protein. Pooled human platelet lysate (pHPL) replaced fetal bovine serum in all steps of our protocol to completely avoid contact of the cells to xenogeneic proteins.
This video demonstrates a methodology for the isolation and expansion of progenitor cells from one umbilical cord.
All materials and procedures will be described.

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

This protocol describes the isolation and subsequent expansion of mesenchymal stromal cells and endothelial colony forming cells without the use of animal serum to generate autologous pairs for experimental transplantation purposes.

בידוד בעלי חיים הרחבת חינם סרום של טבורי האדם נגזר תאים סטרומה mesenchymal (MSCs) ו האנדותל יצירת המושבה ובתאים (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental stages is a perfect model to address our hypothesis about cancer and infertility. This protocol shows how to isolate primordial germinal cells from developing gonads in 10.5-11.5 days post coitum (dpc) mouse embryos.  Developing gonadal ridges from mouse embryos (C57BL6J) were dissociated by mechanical disruption with collagenase, then plated in a mouse embryo fibroblast feeder layer (MEF-CF1) that was previously mitotically inactivated with mitomycin C in the presence of knockout media and supplemented with Leukemia Inhibitor Factor (LIF), basic Fibroblast Growth Factor (bFGF), and Stem Cell Factor (SCF).  Using these optimized methods for PCG identification, isolation, and establishment of culture conditions permits long term cultures of EG cells for more than 40 days.  The embryonic germinal cell lines showed embryonic phenotype and expression of common used markers of the pluripotent state.  Isolation and derivation of germinal cells in culture provide a tool to understand their development in vitro and offer the opportunity to monitor cumulative damage at genetic and epigenetic levels after exposure to oxidative stress.

The ability of embryonic germinal cells to differentiate into primordial germinal cells during early development stages is a perfect model to address our hypothesis about cancer and infertility. This protocol shows how to isolate primordial germinal cells from developing gonads in 10.5-11.5 days post coitum mouse embryos.

בידוד גזירת תאים עובריים בעכבר ז&#39;רמינל

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of saliva into the oral cavity. Serous and mucous acinar cells are the protein and mucous producing factories of the gland respectively, and represent the origin of saliva production. Once synthesised, the various enzymatic and other proteinaceous components of saliva are secreted through a series of ductal cells bearing epithelial-type morphology, until the eventual expulsion of the saliva through one major duct into the cavity of the mouth. The composition of saliva is also modified by the ductal cells during this process.
In the manifestation of diseases such as Sj&ouml;gren's syndrome, and in some clinical situations such as radiotherapy treatment for head and neck cancers, saliva production by the glands is dramatically reduced 1,2. The resulting xerostomia, a subjective feeling of dry mouth, affects not only the ability of the patient to swallow and speak, but also encourages the development of dental caries and can be socially debilitating for the sufferer.
The restoration of saliva production in the above-mentioned clinical conditions therefore represents an unmet clinical need, and as such several studies have demonstrated the regenerative capacity of the salivary glands 3-5. Further to the isolation of stem cell-like populations of cells from various tissues within the mouse and human bodies 6-8, we have shown using the described method that stem cells isolated from mouse salivary glands can be used to rescue saliva production in irradiated salivary glands 9,10. This discovery paves the way for the development of stem cell-based therapies for the treatment of xerostomic conditions in humans, and also for the exploration of the salivary gland as a microenvironment containing cells with multipotent self-renewing capabilities.

An optimized protocol for the isolation of stem cells from the mouse salivary gland is described. The method employs enzymatic and mechanical digestion, and permits isolation of salispheres containing cells with characteristics of stem cells.

בידוד של בלוטת הרוק עכבר תאים גזע

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Muscle regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite cells. Satellite cells are defined by their position between the basal lamina and the sarcolemma of each myofiber. Current knowledge of their behavior heavily relies on the use of the single myofiber isolation protocol. In 1985, Bischoff described a protocol to isolate single live fibers from the Flexor Digitorum Brevis (FDB) of adult rats with the goal to create an in vitro system in which the physical association between the myofiber and its stem cells is preserved 1. In 1995, Rosenblattmodified the Bischoff protocol such that myofibers are singly picked and handled separately after collagenase digestion instead of being isolated by gravity sedimentation 2, 3. The Rosenblatt or Bischoff protocol has since been adapted to different muscles, age or conditions 3-6. The single myofiber isolation technique is an indispensable tool due its unique advantages. First, in the single myofiber protocol, satellite cells are maintained beneath the basal lamina. This is a unique feature of the protocol as other techniques such as Fluorescence Activated Cell Sorting require chemical and mechanical tissue dissociation 7. Although the myofiber culture system cannot substitute for in vivo studies, it does offer an excellent platform to address relevant biological properties of muscle stem cells. Single myofibers can be cultured in standard plating conditions or in floating conditions. Satellite cells on floating myofibers are subjected to virtually no other influence than the myofiber environment. Substrate stiffness and coating have been shown to influence satellite cells' ability to regenerate muscles 8, 9 so being able to control each of these factors independently allows discrimination between niche-dependent and -independent responses. Different concentrations of serum have also been shown to have an effect on the transition from quiescence to activation. To preserve the quiescence state of its associated satellite cells, fibers should be kept in low serum medium 1-3. This is particularly useful when studying genes involved in the quiescence state. In serum rich medium, satellite cells quickly activate, proliferate, migrate and differentiate, thus mimicking the in vivo regenerative process 1-3. The system can be used to perform a variety of assays such as the testing of chemical inhibitors; ectopic expression of genes by virus delivery; oligonucleotide based gene knock-down or live imaging. This video article describes the protocol currently used in our laboratory to isolate single myofibers from the Extensor Digitorum Longus (EDL) muscle of adult mice (6-8 weeks old).

Isolation and culture of myofibers is the gold standard in vitro system to study the transition of satellite cells through quiescence, activation and differentiation. Importantly, the single myofiber culture system preserves the myofiber/stem cell association, which is an essential component of the muscle stem cell niche.

בידוד ותרבות של Myofibers פרט ותאי הלווין שלהם משרירי שלד למבוגרים

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Over the last decade, several adult stem cell populations have been identified in human skin 1-4. The isolation of multipotent adult dermal precursors was first reported by Miller F. D laboratory 5, 6. These early studies described a multipotent precursor cell population from adult mammalian dermis 5. These cells--termed SKPs, for skin-derived precursors-- were isolated and expanded from rodent and human skin and differentiated into both neural and mesodermal progeny, including cell types never found in skin, such as neurons 5. Immunocytochemical studies on cultured SKPs revealed that cells expressed vimentin and nestin, an intermediate filament protein expressed in neural and skeletal muscle precursors, in addition to fibronectin and multipotent stem cell markers 6. Until now, the adult stem cells population SKPs have been isolated from freshly collected mammalian skin biopsies.
Recently, we have established and reported that a population of skin derived precursor cells could remain present in primary fibroblast cultures established from skin biopsies 7. The assumption that a few somatic stem cells might reside in primary fibroblast cultures at early population doublings was based upon the following observations: (1) SKPs and primary fibroblast cultures are derived from the dermis, and therefore a small number of SKP cells could remain present in primary dermal fibroblast cultures and (2) primary fibroblast cultures grown from frozen aliquots that have been subjected to unfavorable temperature during storage or transfer contained a small number of cells that remained viable 7. These rare cells were able to expand and could be passaged several times. This observation suggested that a small number of cells with high proliferation potency and resistance to stress were present in human fibroblast cultures 7.
We took advantage of these findings to establish a protocol for rapid isolation of adult stem cells from primary fibroblast cultures that are readily available from tissue banks around the world (Figure 1). This method has important significance as it allows the isolation of precursor cells when skin samples are not accessible while fibroblast cultures may be available from tissue banks, thus, opening new opportunities to dissect the molecular mechanisms underlying rare genetic diseases as well as modeling diseases in a dish.

Na&amp;#239;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

We report a method to isolate na&#239;ve multipotent skin-derived precursor (SKP) cells from primary human fibroblast cultures. We show that these SKPs derived from fibroblast cultures share similar stem cell properties to the ones derived directly from human skin biopsies. These cells express the neural crest marker, nestin, in addition to the multipotent markers such as OCT4 and Nanog.

בידוד תאי גזע בוגרים נאיבי מתרבויות פיברובלסטים אנושיות הראשוניות

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Epithelial to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during development. Misregulation of this process has been implicated as a key event in fibrosis and the progression of carcinomas to a metastatic state. Understanding the processes that underlie EMT is imperative for the early diagnosis and clinical control of these disease states. Reliable induction of EMT in vitro is a useful tool for drug discovery as well as to identify common gene expression signatures for diagnostic purposes. Here we demonstrate a straightforward method for the induction of EMT in a variety of cell types. Methods for the analysis of cells pre- and post-EMT induction by immunocytochemistry are also included. Additionally, we demonstrate the effectiveness of this method through antibody-based array analysis and migration/invasion assays.

A straightforward method is described for the induction of epithelial to mesenchymal transition (EMT) in a variety of cell types. Methods for the analysis of cells in EMT states by immunocytochemistry are included.

אינדוקציה וניתוח של אפיתל לmesenchymal מעבר

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation, Culture, and Transplantation of Muscle Satellite Cells

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal nuclei in muscle fibers. In adult muscle, satellite cells are normally mitotically quiescent. Following injury, however, satellite cells initiate cellular proliferation to produce myoblasts, their progenies, to mediate the regeneration of muscle. Transplantation of satellite cell-derived myoblasts has been widely studied as a possible therapy for several regenerative diseases including muscular dystrophy, heart failure, and urological dysfunction. Myoblast transplantation into dystrophic skeletal muscle, infarcted heart, and dysfunctioning urinary ducts has shown that engrafted myoblasts can differentiate into muscle fibers in the host tissues and display partial functional improvement in these diseases. Therefore, the development of efficient purification methods of quiescent satellite cells from skeletal muscle, as well as the establishment of satellite cell-derived myoblast cultures and transplantation methods for myoblasts, are essential for understanding the molecular mechanisms behind satellite cell self-renewal, activation, and differentiation. Additionally, the development of cell-based therapies for muscular dystrophy and other regenerative diseases are also dependent upon these factors.

However, current prospective purification methods of quiescent satellite cells require the use of expensive fluorescence-activated cell sorting (FACS) machines. Here, we present a new method for the rapid, economical, and reliable purification of quiescent satellite cells from adult mouse skeletal muscle by enzymatic dissociation followed by magnetic-activated cell sorting (MACS). Following isolation of pure quiescent satellite cells, these cells can be cultured to obtain large numbers of myoblasts after several passages. These freshly isolated quiescent satellite cells or ex vivo expanded myoblasts can be transplanted into cardiotoxin (CTX)-induced regenerating mouse skeletal muscle to examine the contribution of donor-derived cells to regenerating muscle fibers, as well as to satellite cell compartments for the examination of self-renewal activities.

The isolation and culture of a pure population of quiescent satellite cells, a muscle stem cell population, is essential to the understanding of muscle stem cell biology and regeneration, as well as stem cell transplantation for therapies in muscular dystrophy and other degenerative diseases.&#160;

בידוד, תרבות והשתלה של תאי לווין שריר

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal ...

Protocol for Isolation of Primary Human Hepatocytes and Corresponding Major Populations of Non-parenchymal Liver Cells

Beside parenchymal hepatocytes, the liver consists of non-parenchymal cells (NPC) namely Kupffer cells (KC), liver endothelial cells (LEC) and hepatic Stellate cells (HSC). Two-dimensional (2D) culture of primary human hepatocyte (PHH) is still considered as the &#34;gold standard&#34; for in vitro testing of drug metabolism and hepatotoxicity. It is well-known that the 2D monoculture of PHH suffers from dedifferentiation and loss of function. Recently it was shown that hepatic NPC play a central role in liver (patho-) physiology and the maintenance of PHH functions. Current research focuses on the reconstruction of in vivo tissue architecture by 3D- and co-culture models to overcome the limitations of 2D monocultures. Previously we published a method to isolate human liver cells and investigated the suitability of these cells for their use in cell cultures in Experimental Biology and Medicine1. Based on the broad interest in this technique the aim of this article was to provide a more detailed protocol for the liver cell isolation process including a video, which will allow an easy reproduction of this technique.
Human liver cells were isolated from human liver tissue samples of surgical interventions by a two-step EGTA/collagenase P perfusion technique. PHH were separated from the NPC by an initial centrifugation at 50 x g. Density gradient centrifugation steps were used for removal of dead cells. Individual liver cell populations were isolated from the enriched NPC fraction using specific cell properties and cell sorting procedures. Beside the PHH isolation we were able to separate KC, LEC and HSC for further cultivation.
Taken together, the presented protocol allows the isolation of PHH and NPC in high quality and quantity from one donor tissue sample. The access to purified liver cell populations could allow the creation of in vivo like human liver models.

A technique to isolate human hepatocytes and non-parenchymal liver cells from the same donor is described. The different liver cell types build the basis for functional liver models and tissue engineering. This new method aims to isolate liver cells in a high yield and viability.

פרוטוקול הבידוד של hepatocytes האדם הראשי הקביל סרן אוכלוסיות של תאים בכבד ללא parenchymal

Beside parenchymal hepatocytes, the liver consists of non-parenchymal cells (NPC) namely Kupffer cells (KC), liver endothelial cells (LEC) and hepatic ...