الكتاب يقر WJ لوني لاستعراض بعناية المخطوطة.

<html> معيار 2 من المعايير الدولية لرعاية السل الدول أن جميع المرضى الذين يشتبه في وجود مرض السل الرئوي وينبغي أن يقدم عينات من البلغم اثنين على الأقل من أجل الفحص البكتريولوجي. عندما يكون ذلك ممكنا، ينبغي الحصول على واحدة على الأقل في الصباح الباكر عينة، والبلغم التي جمعت في هذا الوقت لديها أعلى عائد. يمكن تطبيقها (11) MTB / RIF كسبيرت فحص لعينات البلغم أو الرواسب البلغم المركز أعد من sputa محرض أو expectorated التي هي . إما عصيات مقاومة للحمض (AFB) مسحة إيجابية أو سلبية 6، 12، 13 والهدف من فحص للاستخدام مع العينات المأخوذة من المرضى الذين هناك اشتباه سريري من السل الرئوي الذين لديهم: 1) لم يتلق العلاج المضاد للسل، 2 ) قد &lt;7 أيام من العلاج، أو 3) لم يتلقوا العلاج في الأيام ال 60 الماضية. هل لاحظ أنه لا ينبغي أن تستخدم لرصد آثار العلاج بالعقاقير 7 لأن الحمض النووي للبكتيريا قد تستمر بعد العلاج المضادة للميكروبات. الطبقة = &quot;jove_content&quot;&gt; علاج العينات السريرية، بما في ذلك الخراطيش المستخدمة، كما لو قادرة على نقل العوامل المعدية. استخدام الاحتياطات المناسبة، مثل ارتداء القفازات الواقية للتصرف، والمعاطف مختبر، وحماية العين، واتباع اجراءات السلامة مؤسستكم والمبادئ التوجيهية. 1. عينات البلغم Expectorated ملاحظة: عملية فقط كما العديد من العينات في وقت واحد، كما أن هناك GeneXpert DX نظام الوحدات المتاحة لتشغيل اختبار! <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمية كل MTB / RIF كسبيرت خرطوشة مع معرف عينة المقابلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> expectorated نقل 1.0 مل البلغم إلى أنبوب مخروطي المسمار المغطاة، وذلك باستخدام ماصة نقل معقمة. بدلا من ذلك، قد يتم معالجة عينة كامل في الاصل مانعة للتسرب البلغم حاويات خاصة لجمع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2.0 مل كسبيرت الكاشف عينة MTB / RIF (2:1؛ V / V) لالبلغم expectorated باستخدام ماصة نقل معقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استبدال غطاء، ويهز الأنبوب بقوة 10-20 مرات. بدلا من ذلك، قد يكون vortexed الخليط (30 ثانية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للأنبوب إلى الوقوف بشكل مستقيم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هز أنبوب بقوة 10-20 مرة. بدلا من ذلك، استخدم دوامة (30 ثانية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للأنبوب إلى الوقوف بشكل مستقيم لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فحص العينات: يجب المسال العينات مع عدم وجود كتل واضحة من البلغم. </li></ol> 2. مركز الرواسب ملاحظة: عملية فقط كما العديد من العينات في وقت واحد كما ان هناك GeneXpert DX نظام الوحدات المتاحة لتشغيل الاختبارات! <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمية كل MTB / RIF كسبيرت خرطوشة مع معرف عينة المقابلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 1.5 مل كسبيرت الكاشف عينة MTB / RIF إلى أنبوب مخروطي المسمار المغطاة، وذلك باستخدام ماصة نقل معقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة ما لا يقل عن 0.5 مل الرواسب مركزة على عينة تحتوي على أنبوب الكاشف باستخدام ماصة نقل معقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استبدال غطاء، ويهز الخامس أنبوبigorously 10-20 مرة. بدلا من ذلك، استخدم دوامة (30 ثانية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للأنبوب إلى الوقوف بشكل مستقيم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هز أنبوب بقوة 10-20 مرة. بدلا من ذلك، استخدم دوامة (30 ثانية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للأنبوب إلى الوقوف بشكل مستقيم لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فحص العينات: يجب المسال العينات مع عدم وجود كتل واضحة من البلغم. </li></ol> 3. تحميل MTB / RIF كسبيرت خرطوشة ملاحظة: بدء الاختبار في غضون 30 دقيقة من إضافة العينة إلى خرطوشة! <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحقق من العلامات على كسبيرت MTB / RIF خرطوشة ورقم العينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح غطاء خرطوشة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ماصة نقل معقمة المقدمة، ونضح العينة المسال في ماصة نقل حتى الغضروف المفصلي هو فوق علامة الحد الأدنى ونقل العينة إلى فتح منفذ للخرطوشة MTB / RIF كسبيرت. </li></ol> ملاحظة:الاستغناء ببطء لتقليل خطر من تشكيل الهباء! <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق غطاء خرطوشة. </li></ol> 4. بدء اختبار ملاحظة: قبل البدء في الاختبار، وضمان أن يتم تجهيز نظام DX GeneXpert مع برنامج GX2.1، ويتم استيراد MTB / RIF كسبيرت الفحص في البرنامج 9! <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل الكمبيوتر، ثم تشغيل الأداة DX GeneXpert. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على سطح المكتب Windows، انقر نقرا مزدوجا فوق الاختصار DX GeneXpert رمز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل الدخول إلى نظام GeneXpert البرمجيات DX باستخدام اسم المستخدم وكلمة السر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نظام GeneXpert نافذة DX، انقر فوق إنشاء اختبار. والباركود خرطوشة مسح يظهر مربع حوار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في عينة المربع معرف، تفحص أو اكتب معرف عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح الباركود على خرطوشة MTB / RIF كسبيرت. إنشاء إطار الاختبار يظهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق ابدأ الاختبار </قوي&gt;، وأدخل كلمة المرور في مربع الحوار الذي يظهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الباب وحدة أداة مع الضوء الاخضر وامض، وتحميل خرطوشة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أغلق الباب. الاختبار يبدأ وميض ضوء توقف ويبقى أخضر باستمرار. عند الانتهاء من الاختبار، وعلى ضوء إيقاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الانتظار حتى يصدر نظام قفل الباب في نهاية الفترة السابقة، ثم فتح الباب وحدة وإزالة خرطوشة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخلص من الخراطيش المستعملة في حاويات النفايات مناسبة وفقا للممارسات مؤسستك القياسية. </li></ol> 5. ممثل النتائج كل MTB / RIF كسبيرت خرطوشة يشمل الكواشف للكشف عن مجمع MTB والمقاومة RIF، فضلا عن مراقبة تجهيز العينات (SPC) للسيطرة على لمعالجة كافية من البكتيريا المستهدفة ورصد وجود المانع (ق) في رد فعل PCR . التحكم تحقق من التحقيق (PCC) يتحقق الإماهة كاشف، PCR أنبوب ملءخرطوشة، وسلامة التحقيق، وصبغ الاستقرار. (9) الاشعال في فحص MTB / RIF كسبيرت تضخيم جزء من الجين الذي يحتوي على زوج rpoB قاعدة 81 &quot;الأساسية&quot; المنطقة. خمسة ألوان مختلفة fluorogenic تهجين الحمض النووي تحقيقات، ودعا منارات الجزيئية، واستجواب كامل 81-BP الأساسية. وقد تم تصميم كل 14 منارة الجزيئية أن تكون محددة بحيث لا ربط هدفها إذا كان تسلسل هدف يختلف عن rpoB من النوع البري تسلسل فشيئا مثل استبدال 1 النوكليوتيدات واحد. منذ مضان منارات الجزيئية فقط عندما تكون ملزمة لأهدافها، أي تسلسل rpoB من النوع البري، لعدم وجود أي واحد من خمسة ألوان في فحص التفريق بين تسلسل من النوع البري حفظها والطفرات في المنطقة الأساسية التي ترتبط مع RIF مقاومة. 6 وينبغي أن محكمة الشعب العليا أن تكون إيجابية في عينة السلبية، ويمكن أن يكون سلبيا أو إيجابيا في عينة ايجابية. الاختباروسوف تكون النتيجة &quot;غير صالح&quot; اذا لم يتم الكشف عن هيئة تخطيط الدولة في اختبار سلبي. قبل بداية رد فعل PCR، ونظام DX GeneXpert يقيس إشارة مضان من المجسات لرصد الجفاف حبة، ملء أنبوب رد فعل، وسلامة التحقيق والاستقرار صبغ. المجلس المركزي الفلسطيني يمر في حالة إشارة مضان من تحقيقات تستوفي معايير قبول تعيينه. يتم تفسير النتائج وفقا لنظام DX GeneXpert من إشارات مضان قياس والخوارزميات حساب جزءا لا يتجزأ من ويتم عرضها في نافذة عرض النتائج 9، على النحو المبين أدناه: MTB الكشف: يتم الكشف عن الحمض النووي MTB الهدف، وكلاهما الضوابط، وهيئة تخطيط الدولة والحزب الشيوعي الكولومبي، وتلبية معايير قبول تعيينه. انخفاض قيم ط م تمثل أعلى تركيز بدءا من قالب الحمض النووي؛ أعلى القيم ط م تمثل أقل تركيز من قالب الحمض النووي. في النتائج MTB الكشف عن &quot;الكشف عن RIF المقاومة&quot; (الشكل 1A)، &quot;لم يتم الكشف عن RIF المقاومة&quot; ( <strأونج سوف&gt; الشكل 1B)، أو &quot;RIF المقاومة غير محدد&quot; عرض على سطر منفصل. MTB لم يتم الكشف عن: لم يتم الكشف عن الحمض النووي MTB الهدف، وكلاهما الضوابط، وهيئة تخطيط الدولة والحزب الشيوعي الكولومبي، وتلبية معايير قبول تعيين (الشكل 2). صالح: لا وجود أو عدم وجود MTB يتحدد: هيئة تخطيط الدولة لا تستوفي معايير القبول، أي لم يكن عينة معالجتها بشكل صحيح، أو كانت تحول دون PCR (الشكل 3). ملاحظة: اختبار مع تكرار عينة اضافية! خطأ: واحد أو أكثر من نتائج فشل PCC (تفشل). كلا MTB وSPC عرض أي نتيجة. ملاحظة: اختبار مع تكرار عينة اضافية! إذا مرت PCC (باس)، وتسبب في الخطأ من خلال نظام فشل عنصر. تم الكشف عن الحمض النووي MTB الهدف، وكلاهما الضوابط، وهيئة تخطيط الدولة والحزب الشيوعي الكولومبي، وتلبية معايير قبول تعيينه: الشكل 1. انخفاض قيم ط م تمثل أعلى انطلاقتركيز من قالب الحمض النووي؛ أعلى القيم ط م تمثل أقل تركيز من قالب الحمض النووي. في الكشف عن نتائج MTB &quot;RIF المقاومة لم يتم الكشف عن&quot; (الشكل 1A)، &quot;الكشف عن RIF المقاومة&quot; (الشكل 1B)، أو &quot;RIF المقاومة غير محدد&quot; سيعرض على سطر منفصل. <img alt="رقم 1A" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig1A.jpg" /> الشكل 1A MTB المكتشفة؛ RIF المقاومة لم يتم الكشف عن أي فقط في البرية من نوع تسلسل الحمض النووي من منطقة الريف 81-BP مقاومة تحديد المنطقة (RRDR) من الجين rpoB كان حاضرا 6. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig1A.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر شخصية</a> . <img alt="الشكل 1B" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig1B.jpg" /> . 1B الكشف عن شخصية MTB؛ RIF المقاومة الكشف عنها. استكمال الانسحاب من التحقيق ب (السهم)، الذي يغطي مواقف 513-517 من R<html> RDR من الجين rpoB. 6 في سبيل المثال، كشف التسلسل جزئي 8 التي تم الكشف عن طفرة جينية rpoB D516V. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig1Blarge.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر شخصية</a> . <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig2.jpg" /> الشكل 2 لم يتم الكشف عن الحمض النووي MTB المستهدفة؛.. كل الضوابط، وهيئة تخطيط الدولة والحزب الشيوعي الكولومبي، وتلبية معايير القبول المخصصة <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig2large.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر شخصية</a> . <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig3.jpg" /> . لا يمكن ان الرقم 3 نتيجة اختبار غير صالح، وجود أو عدم وجود أي MTB يتحدد: هيئة تخطيط الدولة لا تستوفي معايير القبول، لأنه لم يكن العينة المجهزة بشكل صحيح، أو لأنه يحول دون PCR.3547fig3large.jpg &quot;الهدف =&quot; _blank &quot;&gt; اضغط هنا لعرض أكبر شخصية.

<ol>
	<li>Sudre, P., Dam, t. e. n., Chan, G., C, A., Kochi, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuberculosis+in+the+present+time:+a+global+overview+of+the+tuberculosis+situation.">Tuberculosis in the present time: a global overview of the tuberculosis situation.</a> World Health Organisation Document WHO/TUB/91. 158, 1-47 (1991).</li><li>World Health Organisation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+tuberculosis+control:+epidemiology,+strategy,+financing.">Global tuberculosis control: epidemiology, strategy, financing.</a> WHO report 2010. , (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The global plan to stop TB, 2006-2015. , (2006).</li><li>Morris, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+multiple+drug+resistance+in+clinical+isolates+of+Mycobacterium+tuberculosis.">Molecular mechanisms of multiple drug resistance in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis.</a> J. Infect. Dis. 171, 954-960 (1995).</li><li>Traore, H., Fissette, K., Bastian, I., Devleeschouwer, M., Portaels, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+rifampicin+resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis+isolates+from+diverse+countries+by+a+commercial+line+probe+assay+as+aninitial+indicator+of+multidrug+resistance.">Detection of rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates from diverse countries by a commercial line probe assay as aninitial indicator of multidrug resistance.</a> Int. J. Tuberc. Lung Dis. 4, 481-484 (2000).</li><li>Helb, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+and+Rifampin+Resistance+by+Use+of+On-Demand+Near-Patient+Technology.">Rapid Detection of Mycobacterium tuberculosis and Rifampin Resistance by Use of On-Demand Near-Patient Technology.</a> J. Clin. Microbiol. 48, 229-237 (2010).</li><li>Blakemore, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Analytical+Performance+of+the+Xpert+MTB/RIF.">Evaluation of the Analytical Performance of the Xpert MTB/RIF.</a> Assay. J. Clin. Microbiol. 48, 2495-2501 (2010).</li><li>Telenti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+rifampicin-resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis.">Detection of rifampicin-resistance in Mycobacterium tuberculosis.</a> Lancet. 341, 647-650 (1993).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> GeneXpert Dx System Operator Manual. , (2011).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> International Standards for Tuberculosis Care (ISTC). , (2009).</li><li>Boehme, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Molecular+Detection+of+Tuberculosis+and+Rifampin+Resistance.">Rapid Molecular Detection of Tuberculosis and Rifampin Resistance.</a> N. Engl. J. Med. 363, 1005-1015 (2010).</li><li>Marlowe, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Cepheid+Xpert+MTB/RIF+assay+for+the+Direct+Detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+Complex+from+Respiratory+Specimens.">Evaluation of the Cepheid Xpert MTB/RIF assay for the Direct Detection of Mycobacterium tuberculosis Complex from Respiratory Specimens.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 1621-1623 (2011).</li><li>El-Hajj, H. H., Marras, S. A. M., Tyagi, S., Kramer, F. R., Alland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+rifampin+resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis+in+a+single+tube+with+molecular+beacons.">Detection of rifampin resistance in Mycobacterium tuberculosis in a single tube with molecular beacons.</a> J. Clin. Microbiol. 39, 4131-4137 (2001).</li><li>Hillemann, D., Ruesch-Gerdes, S., Boehme, C., Richter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+molecular+detection+of+extrapulmonary+tuberculosis+by+automated+GeneXpert+MTB/RIF+system.">Rapid molecular detection of extrapulmonary tuberculosis by automated GeneXpert MTB/RIF system.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 1202-1205 (2011).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وMTB / RIF كسبيرت فحص عينة يدمج إزالة التلوث، عملية خالية اليدين، على متن تجهيز العينات، وفائقة الحساسية PCR نصفي المتداخلة للكشف في وقت واحد من MTB ومقاومة الريف، سواء في البلغم expectorated أو الرواسب المركزة، في واحد وسهلة الاستخدام ونظام. تم العثور على الحد من الفحص والتحليل للكشف عن أن 131 CFU / مل من البلغم. 6 وسجل العلاقة الخطية بين القيم المقطعية وعدد الخلايا MTB تقديم يصدق من CFU 02-10 يوليو 10 / مل من البلغم. كما تركيزات MTB ذات الصلة سريريا كل تدخل في نطاق خطية من الفحص، الفحص يوفر نصف كمية تقديرات الحمولة الجرثومية. (7) فحص يتطلب فقط معتدل البنية التحتية المختبرية والتدريب. الحد من الكشف تكمن اثنين على الأقل من أوامر من حجم أقل من المجهر التقليدية. 6 خصوصية ممتازة. علاوة على ذلك، كشف في وقت واحد من RIF-resistanتي MTB هو مكسب كبير في تحديد نقطة من الرعاية الاختبارات في عصر السل المقاوم للأدوية. 3 حتى الآن سوى قلة البيانات المنشورة على أداء الفحص لتشخيص مرض السل الرئوي في المرافق الصحية المتوفرة 12؛. 13 حساسية MTB / RIF كسبيرت الفحص السريرية الشاملة للكشف عن MTB في البلغم من المرضى الذين يعانون من مرض السل الرئوي المشتبه بهم وكان 97.6٪ بالمقارنة مع ثقافة كمرجع. وكانت هذه النتائج التي توصلت إليها دراسة متعددة المراكز المحتملين أن تشارك مواقع الدراسة الخمسة (ليما، بيرو، باكو، أذربيجان؛ كيب تاون ودوربان، جنوب أفريقيا، ومومباي، الهند)، ومجموع من 1462 مريض. وكان مجمل ما قبل اختبار احتمال السل ثقافة وأكد في عينة الدراسة 50.7٪. كانت حساسية 99.8٪ للحالات اللطاخة وثقافة إيجابية و90.2٪ عن اللطاخة سلبية الحالات ثقافة إيجابية،. من بين المصابين بفيروس الإيدز المرضى الذين يعانون من مرض السل الرئوي، وبلغت حساسية اختبار MTB / RIF 93.9٪، بالمقارنة مع 98.4٪ في. يحملونه 12 مريضا في جو من انتشار السل منخفضة، وكان اتفاق شامل للكشف عن MTB 89٪ بالمقارنة مع الثقافة، وحساسية وكان 98٪ ل٪ الإيجابية اللطاخة و 72 لاللطاخة سلبية العينات، على التوالي، و خصوصية كان ممتازا. 13 لم يكن هناك فرق كبير في حساسية بين التجارب على علاج البلغم وتلك الرواسب المركزة. 12 وفي نفس الدراسة، واختبار MTB / RIF الكشف بشكل صحيح RIF مقاومة في 209 من 211 مريضا (99.1٪ حساسية) وفي العثور على جميع المرضى 506 مع قابلية RIF (100 خصوصية٪)، عندما أخذت في الاعتبار نتائج التسلسل. (12) من الكتاب أن أداء لاكتشاف الحالات على حد سواء، والتمييز من مقاومة الريف، وكان مماثلة عبر مواقع مختلفة، مما يوحي بأن هذه النتائج من المرجح أن تكون قابلة للتطبيق على نطاق واسع. 12 وعلاوة على ذلك، تتركز رواسب عينات من البلغم التنفسية الأخرى، مثل الشعبة الهوائية السنخية غسيل وشعب هوائيةإفرازات لتر، وقد تم اختبار مع حساسية وخصوصية مماثلة. 13 بيانات عن أداء الفحص وعند اختبار السل خارج الرئة في الظهور. 15 العالمي لمكافحة السل في حاجة ماسة الأدوات الفعالة التي تتيح التشخيص السريع لحالات السل الجديدة والكشف عن RIF المقاوم MTB في عالمي وصول نقطة من مؤسسات الرعاية. 3 الحالية تضخيم الحمض النووي الأساليب المستخدمة للكشف عن MTB معقدة وكثيفة العمالة، وتطالب من الناحية الفنية. وMTB / RIF كسبيرت فحص لديه القدرة على جلب الاختبارات التشخيصية موحدة وحساسة ومحددة للغاية لكل من مرض السل والمقاومة للعقاقير على هذه الإعدادات، شريطة أن تكون قادرة على تحمل ذلك. من أجل تسهيل وصول، وتفاوضت مؤسسة وسائل التشخيص الجديدة الابتكارية تخفيضات في الأسعار كبيرة للاختبار MTB / RIF كسبيرت. بالأسعار الجارية، البحث عن طريق التفاوض، جنبا إلى جنب مع لائحة الدول مؤهلة للحصول على الخصومات، متاحة على شبكة الإنترنت. 10 </suP&gt;

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> كاشف / معدات </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> كسبيرت MTB / RIF اختبار </td><td> Cepheid </td><td> GXMTB/RIF-10 </td></tr><tr><td> نقل ماصات </td><td> Sarstedt </td><td> 86.1172.001 </td></tr><tr><td> مخروطي أنابيب، 15 مل، 120 × 17 ملم، وتبسيط العمليات </td><td> Sarstedt </td><td> 62.553.542 </td></tr></tbody></table>

diagnosing pulmonary tuberculosis with the xpert mtb/rif test

الدرن (السل) وذلك بسبب مرض السل المتفطرة (MTB) لا يزال يمثل مشكلة صحية عامة رئيسية: العدوى يصيب ما يصل الى ثلث سكان العالم 1، وقتل ما يقرب من مليوني شخص من السل كل سنة 2 حصول الجميع على جودة عالية. ، وأكد المريض محورها العلاج لجميع مرضى السل من قبل منظمة الصحة العالمية استراتيجية دحر السل. (3) الكشف السريع عن MTB في عينات الجهاز التنفسي والعلاج بالعقاقير على أساس موثوق النتائج المخدرات اختبار المقاومة هي شرط أساسي لنجاح تنفيذ هذه الاستراتيجية. ومع ذلك، في مناطق كثيرة من العالم، وتشخيص مرض السل ما زالت تعتمد على حساس، موحدة سوء أساليب الفحص المجهري البلغم. غير فعالة كشف مرض السل، وظهور وانتقال سلالات MTB المقاوم للأدوية تعرض للخطر على نحو متزايد للأنشطة العالمية لمكافحة السل. 2 التشخيص الفعال لمرض السل الرئوي يتطلب توفر - على نطاق عالمي - من موقفardized وأدوات التشخيص وسهلة الاستخدام، وقوية من شأنها أن تسمح للكشف مباشرة من مجمع كل MTB والمقاومة للمضادات الحيوية الرئيسية، مثل ريفامبيسين (الريف). نتيجة هذا الأخير يمكن أن تكون بمثابة علامة للحصول على المقاوم MTB (السل المقاوم للأدوية)، ولقد تم الإبلاغ عنها في&gt; 95٪ من العزلات السل المقاوم للأدوية. 5، 4 توافر السريع لنتائج الاختبار موثوق ومن المرجح أن يترجم مباشرة إلى إدارة سليمة المريض القرارات التي، في النهاية، وسوف يشفى المريض الفردية وكسر سلسلة انتقال مرض السل في المجتمع. 2 وCepheid (سانيفيل، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) كسبيرت MTB / RIF فحص 6 و 7 تلبي متطلبات المذكورة أعلاه بطريقة ملحوظة. انه اختبار التضخيم النووية، الأحماض ل1) الكشف عن الحمض النووي معقد MTB في البلغم أو الرواسب البلغم المركزة، و 2) الكشف عن طفرات مقاومة المرتبطة RIF من الجين rpoB 8 وهو مصمم للاستخدام مع DX GeneXpert Cepheid ل. نظام الويدمج في بأتمتة تجهيز العينات، حامض النووي التضخيم، والكشف عن تسلسل الهدف في الوقت الحقيقي باستخدام PCR PCR وعكس الناسخ. ويتكون النظام من وسيلة، والحواسيب الشخصية، ماسح الباركود، وبرامج مسبقة لتشغيل التجارب وعرض النتائج. (9) ويعمل واحد استخدام المتاح كسبيرت MTB / RIF الخراطيش التي تحمل كواشف PCR واستضافة عملية الاسترداد. لأن خراطيش هي بذاتها، يتم القضاء على انتقال التلوث بين العينات. 6 الحالي تضخيم الحمض النووي الأساليب المستخدمة للكشف عن MTB معقدة وكثيفة العمالة، وتطالب من الناحية الفنية. وMTB / RIF كسبيرت فحص لديه القدرة على جلب الاختبارات التشخيصية موحدة وحساسة ومحددة للغاية لكل من مرض السل والمقاومة للأدوية إلى الجميع وصول نقطة من الرعاية ضبط 3، شريطة أن تكون قادرة على تحمل ذلك. من أجل تسهيل وصول، وتفاوضت مؤسسة وسائل التشخيص الجديدة الابتكارية signifiغير قادر على خفض الأسعار. بالأسعار الجارية، البحث عن طريق التفاوض، جنبا إلى جنب مع لائحة الدول مؤهلة للحصول على الخصومات، متاحة على شبكة الإنترنت. 10

Watch this Scientific Journal Video about Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test at JoVE.com

Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test

وMTB / RIF كسبيرت اختبار عينة يدمج إزالة التلوث، عملية خالية اليدين، على متن تجهيز العينات، وفائقة الحساسية PCR نصفي المتداخلة للكشف في وقت واحد<em&gt; المتفطرة السلية</em&gt; مقاومة ريفامبيسين، وإما في البلغم expectorated أو الرواسب البلغم المركزة، في نحو ساعتين. الاختبار الموحد، ويتطلب فقط معتدل البنية التحتية المختبرية والتدريب.

تشخيص السل الرئوي مع اختبار MTB / RIF كسبيرت

Tuberculosis (TB) due to Mycobacterium tuberculosis (MTB) remains a major public health issue: the infection affects up to one third of the world ...

diagnosing-pulmonary-tuberculosis-with-the-xpert-mtbrif-test

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

79.9K Views.  University of Bern. وMTB / RIF كسبيرت اختبار عينة يدمج إزالة التلوث، عملية خالية اليدين، على متن تجهيز العينات، وفائقة الحساسية PCR نصفي المتداخلة للكشف في وقت واحد المتفطرة السلية مقاومة ريفامبيسين، وإما في البلغم expectorated أو الرواسب البلغم المركزة، في نحو ساعتين. الاختبار الم?...

Video: Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including antibiotics. Although stress tolerance of M. tuberculosis is one of the likely contributors to the 6-month long chemotherapy of tuberculosis 1, the molecular mechanisms underlying this characteristic phenotype of the pathogen remain unclear. Many microbial species have evolved to survive in stressful environments by self-assembling in highly organized, surface attached, and matrix encapsulated structures called biofilms 2-4. Growth in communities appears to be a preferred survival strategy of microbes, and is achieved through genetic components that regulate surface attachment, intercellular communications, and synthesis of extracellular polymeric substances (EPS) 5,6. The tolerance to environmental stress is likely facilitated by EPS, and perhaps by the physiological adaptation of individual bacilli to heterogeneous microenvironments within the complex architecture of biofilms 7.
In a series of recent papers we established that M. tuberculosis and Mycobacterium smegmatis have a strong propensity to grow in organized multicellular structures, called biofilms, which can tolerate more than 50 times the minimal inhibitory concentrations of the anti-tuberculosis drugs isoniazid and rifampicin 8-10. M. tuberculosis, however, intriguingly requires specific conditions to form mature biofilms, in particular 9:1 ratio of headspace: media as well as limited exchange of air with the atmosphere 9. Requirements of specialized environmental conditions could possibly be linked to the fact that M. tuberculosis is an obligate human pathogen and thus has adapted to tissue environments. In this publication we demonstrate methods for culturing M. tuberculosis biofilms in a bottle and a 12-well plate format, which is convenient for bacteriological as well as genetic studies. We have described the protocol for an attenuated strain of M. tuberculosis, mc27000, with deletion in the two loci, panCD and RD1, that are critical for in vivo growth of the pathogen 9. This strain can be safely used in a BSL-2 containment for understanding the basic biology of the tuberculosis pathogen thus avoiding the requirement of an expensive BSL-3 facility. The method can be extended, with appropriate modification in media, to grow biofilm of other culturable mycobacterial species.
Overall, a uniform protocol of culturing mycobacterial biofilms will help the investigators interested in studying the basic resilient characteristics of mycobacteria. In addition, a clear and concise method of growing mycobacterial biofilms will also help the clinical and pharmaceutical investigators to test the efficacy of a potential drug.

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Mycobacterium tuberculosis forms drug tolerant biofilms when cultured in certain conditions. Here we describe methods for culturing M. tuberculosis biofilms and determining the frequency of drug tolerant persisters. These protocols will be useful for further studies into the mechanisms of drug tolerance in M. tuberculosis.

نمو المتفطرة السلية الأغشية الحيوية

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including ...

Right Ventricular Systolic Pressure Measurements in Combination with Harvest of Lung and Immune Tissue Samples in Mice

The function of the right heart is to pump blood through the lungs, thus linking right heart physiology and pulmonary vascular physiology. Inflammation is a common modifier of heart and lung function, by elaborating cellular infiltration, production of cytokines and growth factors, and by initiating remodeling processes 1.
Compared to the left ventricle, the right ventricle is a low-pressure pump that operates in a relatively narrow zone of pressure changes. Increased pulmonary artery pressures are associated with increased pressure in the lung vascular bed and pulmonary hypertension 2. Pulmonary hypertension is often associated with inflammatory lung diseases, for example chronic obstructive pulmonary disease, or autoimmune diseases 3. Because pulmonary hypertension confers a bad prognosis for quality of life and life expectancy, much research is directed towards understanding the mechanisms that might be targets for pharmaceutical intervention 4. The main challenge for the development of effective management tools for pulmonary hypertension remains the complexity of the simultaneous understanding of molecular and cellular changes in the right heart, the lungs and the immune system.
Here, we present a procedural workflow for the rapid and precise measurement of pressure changes in the right heart of mice and the simultaneous harvest of samples from heart, lungs and immune tissues. The method is based on the direct catheterization of the right ventricle via the jugular vein in close-chested mice, first developed in the late 1990s as surrogate measure of pressures in the pulmonary artery5-13. The organized team-approach facilitates a very rapid right heart catheterization technique. This makes it possible to perform the measurements in mice that spontaneously breathe room air. The organization of the work-flow in distinct work-areas reduces time delay and opens the possibility to simultaneously perform physiology experiments and harvest immune, heart and lung tissues.
The procedural workflow outlined here can be adapted for a wide variety of laboratory settings and study designs, from small, targeted experiments, to large drug screening assays. The simultaneous acquisition of cardiac physiology data that can be expanded to include echocardiography5,14-17 and harvest of heart, lung and immune tissues reduces the number of animals needed to obtain data that move the scientific knowledge basis forward. The procedural workflow presented here also provides an ideal basis for gaining knowledge of the networks that link immune, lung and heart function. The same principles outlined here can be adapted to study other or additional organs as needed.

A specific and rapid protocol to simultaneously investigate right heart function, lung inflammation, and the immune response is described as a learning tool. Video and figures describe physiology and microdissection techniques in an organized team-approach that is adaptable to be used for small to large sized studies.

قياسات الضغط البطيني الحق الانقباضي في تركيبة مع حصاد الرئة وعينات الأنسجة المناعية في الفئران

The function of the right heart is to pump blood through the lungs, thus linking right heart physiology and pulmonary vascular physiology. Inflammation is ...

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the respective immune response to each single pathogen and may thereby affect pathogenesis and disease outcome. Coinfected patients may also respond differentially to anti-infective interventions. Coinfection between tuberculosis as caused by mycobacteria and the malaria parasite Plasmodium, both of which are coendemic in many parts of sub-Saharan Africa, has not been studied in detail. In order to approach the challenging but scientifically and clinically highly relevant question how malaria-tuberculosis coinfection modulate host immunity and the course of each disease, we established an experimental mouse model that allows us to dissect the elicited immune responses to both pathogens in the coinfected host. Of note, in order to most precisely mimic naturally acquired human infections, we perform experimental infections of mice with both pathogens by their natural routes of infection, i.e. aerosol and mosquito bite, respectively.

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

Tuberculosis and malaria are two of the most prevalent infections in humans and major causes of morbidity and mortality in impoverished populations in the tropics. We established an experimental model system to study outcome of malaria-tuberculosis coinfection in mice after challenge with both pathogens via their natural route of infection.

نموذج تجريبي لدراسة الملاريا والسل عدوى مرافقة على انتقال الطبيعية السل المتفطرة و المتصورة berghei</i

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the ...

Isolation and Characterization of Neutrophils with Anti-Tumor Properties

Neutrophils, the most abundant of all white blood cells in the human circulation, play an important role in the host defense against invading microorganisms. In addition, neutrophils play a central role in the immune surveillance of tumor cells. They have the ability to recognize tumor cells and induce tumor cell death either through a cell contact-dependent mechanism involving hydrogen peroxide or through antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC). Neutrophils with anti-tumor activity can be isolated from peripheral blood of cancer patients and of tumor-bearing mice. These neutrophils are termed tumor-entrained neutrophils (TEN) to distinguish them from neutrophils of healthy subjects or na&#239;ve mice that show no significant tumor cytotoxic activity. Compared with other white blood cells, neutrophils show different buoyancy making it feasible to obtain a &#62; 98% pure neutrophil population when subjected to a density gradient. However, in addition to the normal high-density neutrophil population (HDN), in cancer patients, in tumor-bearing mice, as well as under chronic inflammatory conditions, distinct low-density neutrophil populations (LDN) appear in the circulation. LDN co-purify with the mononuclear fraction and can be separated from mononuclear cells using either positive or negative selection strategies. Once the purity of the isolated neutrophils is determined by flow cytometry, they can be used for in vitro and in vivo functional assays. We describe techniques for monitoring the anti-tumor activity of neutrophils, their ability to migrate and to produce reactive oxygen species, as well as monitoring their phagocytic capacity ex vivo. We further describe techniques to label the neutrophils for in vivo tracking, and to determine their anti-metastatic capacity in vivo. All these techniques are essential for understanding how to obtain and characterize neutrophils with anti-tumor function.

Neutrophils play an important role not only in host defense against invading microorganisms, but are also involved in the immune surveillance of tumor cells. Here, we describe techniques related to the isolation of neutrophils with anti-tumor properties and methods for monitoring anti-tumor neutrophil function in vitro and in vivo.

عزل وتوصيف العدلات مع خصائص مضادة للورم

Neutrophils, the most abundant of all white blood cells in the human circulation, play an important role in the host defense against invading ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte extravasation might result in pathophysiological changes in the CNS. Thus, investigation of lymphocyte migration into the CNS is important to understand inflammatory CNS diseases and to develop new therapy approaches. Here we present an in vitro model of the human blood-brain barrier to study lymphocyte extravasation. Human brain microvascular endothelial cells (HBMEC) are confluently grown on a porous polyethylene terephthalate transwell insert to mimic the endothelium of the blood-brain barrier. Barrier function is validated by zonula occludens immunohistochemistry, transendothelial electrical resistance (TEER) measurements as well as analysis of evans blue permeation. This model allows investigation of the diapedesis of rare lymphocyte subsets such as CD56brightCD16dim/- NK cells. Furthermore, the effects of other cells, cytokines and chemokines, disease-related alterations, and distinct treatment regimens on the migratory capacity of lymphocytes can be studied. Finally, the impact of inflammatory stimuli as well as different treatment regimens on the endothelial barrier can be analyzed.

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Here, we describe a human blood-brain barrier model enabling to investigate lymphocyte transmigration into the central nervous system in vitro.

تحليل الخلايا الليمفاوية التسرب باستخدام<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من الدم في الدماغ الإنسان الحاجز

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in the caseous cores of cavities and lesions is especially crucial because they harbor subpopulations of drug-tolerant bacteria also commonly referred to as persisters. Existing methods for the measurement of drug penetration in tuberculosis lesions involve costly and time-consuming in vivo pharmacokinetic studies coupled to bioanalytical or imaging techniques. The in vitro measurement of drug binding to caseum macromolecules was proposed as an alternative to such techniques since this binding hinders the passive diffusion of drug molecules through caseum. Rapid equilibrium dialysis is a fast and reliable system for performing plasma protein and tissue binding studies. In this protocol, we used a rapid equilibrium dialysis (RED) device to measure drug binding to homogenates of caseum that is excised from the lesions and cavities of tuberculosis-infected rabbits. The protocol also describes how to generate a surrogate matrix from lipid loaded THP-1 macrophages to use in place of caseum. This caseum/surrogate binding assay is an important tool in tuberculosis drug discovery and can be adapted to help study drug distribution in lesions or abscesses caused by other diseases.

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

Here we describe a rapid equilibrium dialysis (RED) method to measure drug binding to caseum from pulmonary tuberculosis lesions and cavities. The protocol is also used with a foamy macrophage-derived matrix that is an effective surrogate to caseum.

ل<em&gt; في المختبر</em&gt; كاسيم ملزمة الفحص الذي يتنبأ اختراق المخدرات في الآفات السل

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in ...

Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese individuals worldwide by 2030, thus representing a growing socioeconomic burden. Simultaneously, obesity-related comorbidities, including diabetes as well as heart and chronic lung diseases, are continuously on the rise. Although obesity has been associated with increased risk for asthma exacerbations, worsening of respiratory symptoms, and poor control, the functional role of obesity and perturbed metabolism in the pathogenesis of chronic lung disease is often underestimated, and underlying molecular mechanisms remain elusive. This article aims to present methods to assess the effect of obesity on metabolism, as well as lung structure and function. Here, we describe three techniques for mice studies: (1) assessment of intraperitoneal glucose tolerance (ipGTT) to analyze the effect of obesity on glucose metabolism; (2) measurement of airway resistance (Res) and respiratory system compliance (Cdyn) to analyze the effect of obesity on lung function; and (3) preparation and fixation of the lung for subsequent quantitative histological assessment. Obesity-related lung diseases are probably multifactorial, stemming from systemic inflammatory and metabolic dysregulation that potentially adversely influence lung function and the response to therapy. Therefore, a standardized methodology to study molecular mechanisms and the effect of novel treatments is essential.

The incidence of obesity is rising and increases the risk of chronic lung diseases. To establish the underlying mechanisms and preventive strategies, well-defined animal models are needed. Here, we provide three methods (glucose-tolerance-test, body plethysmography, and lung fixation) to study the effect of obesity on pulmonary outcomes in mice.

اختبار تحمل الجلوكوز داخل، قياس وظيفة الرئة، والتثبيت في الرئة لدراسة تأثير السمنة والايض البصر على النتائج الرئوية

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese ...

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by fluorescence or bioluminescence. We utilize BlaC, an enzyme expressed constitutively by all M. tuberculosis strains. REF allows rapid quantification of bacteria in lungs of infected mice. The same group of mice can be imaged at many time points, greatly reducing costs, enumerating bacteria more quickly, allowing novel observations in host-pathogen interactions, and increasing statistical power, since more animals per group are readily maintained. REF is extremely sensitive due to the catalytic nature of the BlaC enzymatic reporter and specific due to the custom flourescence resonance energy transfer (FRET) or fluorogenic substrates used. REF does not require recombinant strains, ensuring normal host-pathogen interactions. We describe the imaging of M. tuberculosis infection using a FRET substrate with maximal emission at 800 nm. The wavelength of the substrate allows sensitive deep tissue imaging in mammals. We will outline aerosol infection of mice with M. tuberculosis, anesthesia of mice, administration of the REF substrate, and optical imaging. This method has been successfully applied to evaluating host-pathogen interactions and efficacy of antibiotics targeting M. tuberculosis.

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

We describe the optical imaging of mice infected with Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) using reporter enzyme fluorescence (REF). This protocol facilitates the sensitive and specific detection of M. tuberculosis in pre-clinical animal models for pathogenesis, therapeutics and vaccine research.

تصوير بكتريا السل في الفئران مع "مراسل إنزيم الأسفار"

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by ...

Co-immunoprecipitation Assay for Studying Functional Interactions Between Receptors and Enzymes

Receptor-associated enzymes are the major mediators of cellular activation. These enzymes are regulated, at least in part, by physical interactions with cytoplasmic tails of the receptors. The interactions often occur through specific protein domains and result in activation of the enzymes. There are several methods to study interactions between proteins. While co-immunoprecipitation is commonly used to study domains that are required for protein-protein interactions, there are no assays that document the contribution of specific domains to activity of the recruited enzymes at the same time. Accordingly, the method described here combines co-immunoprecipitation and an on-bead enzymatic activity assay for simultaneous evaluation of interactions between proteins and associated enzymatic activation. The goal of this protocol is to identify the domains that are critical for physical interactions between a protein and enzyme and the domains that are obligatory for complete activation of the enzyme. The importance of this assay is demonstrated, as certain receptor protein domains contribute to the binding of the enzyme to the cytoplasmic tail of the receptor, while other domains are necessary to regulate the function of the same enzyme.

Here, we present a protocol for co-immunoprecipitation and an on-bead enzymatic activity assay to simultaneously study the contribution of specific protein domains of plasma membrane receptors to both enzyme recruitment and enzyme activity.

الإنزيم Co-إيمونوبريسيبيتيشن لدراسة التفاعلات الوظيفية بين المستقبلات والأنزيمات

Receptor-associated enzymes are the major mediators of cellular activation. These enzymes are regulated, at least in part, by physical interactions with ...

Application of Consistent Massage-Like Perturbations on Mouse Calves and Monitoring the Resulting Intramuscular Pressure Changes

Massage is generally recognized to be beneficial for relieving pain and inflammation. Although previous studies have reported anti-inflammatory effects of massage on skeletal muscles, the molecular mechanisms behind are poorly understood. We have recently developed a simple device to apply local cyclical compression (LCC), which can generate intramuscular pressure waves with varying amplitudes. Using this device, we have demonstrated that LCC modulates inflammatory responses of macrophages in situ and alleviates immobilization-induced muscle atrophy. Here, we describe protocols for the optimization and application of LCC as a massage-like intervention against immobilization-induced inflammation and atrophy of skeletal muscles of mouse hindlimbs. The protocol that we have developed can be useful for investigating the mechanism underlying beneficial effects of physical exercise and massage. Our experimental system provides a prototype of the analytical approach to elucidate the mechanical regulation of muscle homeostasis, although further development needs to be made for more comprehensive studies.

Here we describe the protocols for applying defined mechanical loads to mouse calves and for monitoring the concomitant intramuscular pressure changes. The experimental systems that we have developed can be useful for investigating the mechanism behind the beneficial effects of physical exercise and massage.

تطبيق اضطرابات متناسقة تشبه التدليك على عجول الماوس ومراقبة التغيرات الناتجة عن الضغط العضلي العضلي

Massage is generally recognized to be beneficial for relieving pain and inflammation. Although previous studies have reported anti-inflammatory effects of ...