المؤلفان بالشكر ماتياس Gyllborg للحصول على دعم مرفق الحبار وللتعليقات على هذه المخطوطة، مايكل هادفيلد ومختبر البحرية Kewalo للحصول على المساعدة خلال الجمع الميداني، وأعضاء في مختبر روبي ومكفال نجاي، لما قدمته من مساهمات في هذا البروتوكول. ويدعم العمل في مختبر ماندل بواسطة جبهة الخلاص الوطني 0843633-IOS.

1. إعداد قائح البكتيرية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اليوم 0 قبل يومين من التلقيح الحبار، لوحة سلالات بكتيرية ذات الصلة على LBS 13 أجار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان البكتيريا في 25-28 درجة مئوية خلال الليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اليوم 1 تطعيم 3 رطل مل المتوسطة في كوب أنبوب الثقافة مع واحد من كل مستعمرة V. fischeri سلالة للعدوى. إعداد تكرار مثل أنابيب احتياطية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اليوم 2 (تنسيق الخطوات البكتيرية 1،4-1،6 مع خطوات الحبار 3،7-3،10) 1 ساعة قبل التلقيح، والبكتيريا ثقافة فرعية 1:80 (37.5 ميكرولتر) إلى LBS مل 3 في أنبوب من الزجاج والثقافة، وتنمو لمدة 1 ساعة مع التهوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس OD 600 من العينة قبل التلقيح. قياسات نموذجية وفقا 0،3-0،6 على السلالة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحصول على اللقاح الهدف من 3-5 × 10 3 كفو / مل حساب حجم اللقاح على النحو التالي: حجم اللقاح (ميكرولتر) = 1.25 / OD 600 (على سبيل المثال، للحصول على التطوير التنظيمي 600 = 0.5، وحجم اللقاح محسوب = 1.25/0.5 = 2.5 ميكرولتر). يضاف هذا المبلغ مباشرة إلى مياه البحر التي تحتوي على الحبار في الخطوة 4.1. قد يكون هذا الحساب يجب أن يتم تعديلها لسلالات مختلفة من V. fischeri أو للتلقيح عند مستويات أدنى أو أعلى من تلك المحددة هنا. </li></ol> 2. إعداد لوحات أجار للتعداد قائح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل معاملة، والتسمية LBS لوحات (2 في العلاج) إلى لوحة عينات من اللقاح في الخطوة 4.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 5 حبات تصفيح معقم لكل لوحة. </li></ol> 3. مجموعة من الأحداث الحبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس ملوحة المحيط فورية باستخدام مقياس الإنكسار وضبط إلى 35 ‰. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصفية 1 لتر من المحيط فورية باستخدام وحدة الترشيح وجود خط فراغ المرفقة أو مضخة فراغ، لتوليد فلتر تعقيم فورية المحيط (FSIO). الأوكسجين في المياه قبل يحوم بقوة إلى كل صرفها. اليمكن إعادة استخدامها ه مرشح وحدة لمدة 2 ايام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قسامة 40-50 مل من FSIO في كل من اثنين (2) السلطانيات عينة يمكن التخلص منها. ملصق واحد كما earlies واحد كما timelies. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد وجود فائض من الماصات نقل من البلاستيك للحصول على الحبار الأحداث من خلال خفض ماصة ما يقرب من 1 سم من الحافة، وفوق التلال أدنى (انظر الشكل 3). هذا يسهل مساحة أوسع من خلالها الحبار يمكن أن تمر على جمع. تجاهل أي الماصات نقل التي يوجد فيها سطح خشن عرضة للخطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الماصة نقل معدة سلفا، وجمع E. scolopes التي تحاك بين عشية وضحاها، ونقل إلى وعاء من earlies FSIO. وكانت سلحفاة صغيرة في وقت مبكر من نظام البيض لأكثر من 1 ساعة وتكون عرضة للتلوث من قبل الاستعمار V. fischeri في نظام البيض. لا تستخدم earlies للتجارب الاستعمار الحساسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق الدبابات بيضة كل دقيقة 30-45 لسلحفاة صغيرة جديدة. ضمان أن يتم مسح جميع سلحفاة صغيرة خلال كل جهيك. سلحفاة صغيرة مع إزالة ماصة، ونقل وديعة في وعاء من timelies FSIO. الحيوانات التي تم جمعها في الوقت المناسب غير متوفرة للتجارب الاستعمار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما انتهى جمع (~ 45 دقيقة بعد غروب الشمس)، ونقل الحبار إلى المختبر الرئيسي. تجريبيا فإنه من المفيد لاستعمار الحيوانات تحت ظروف الإضاءة دون انقطاع المخبرية اللازمة للتحصين ح 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل معاملة، وإعداد وعاء مع FSIO مل 40. إضافة إلى الحبار الطاسات لفحص (الحد الأقصى ن = 40 في وعاء). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد وعاء إضافية كعنصر تحكم (السلبية) aposymbiotic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد ماصة مخصصة لنقل كل معاملة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الحبار اضافية في الإيثانول بنسبة 2٪. </li></ol> 4. الحبار الاستعمار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اليوم 2 - استخدام Pipetman P10، صرف قسامة محسوب من البكتيريا (الخطوة 1.5) في كل وعاء الحبار (الخطوة 3.8) عن كل معاملة. بدء الموقت H 3 على الفور بعدمن التلقيح الأول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل معاملة، وخلق &quot;دوامة&quot; في وعاء مع ماصة نقل مخصصة عن طريق وضع ماصة بالقرب من حافة وعاء وpipetting صعودا وهبوطا عدة مرات لخلط المياه والحبار لحوالي 10 ثانية. خلط شامل أمر بالغ الأهمية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة 50 ميكرولتر من كل وعاء على طبق آجار رطل من الخطوة 2.2 (لأسباب تقنية مكررات، لوحة لوحات كل منهما 50 ميكرولتر لكل معاملة). احتضان في 25-28 درجة مئوية خلال الليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الأطباق غسيل (100 مل FSIO / EA) عن كل معاملة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد ذبابة الفاكهة قارورة (4 مل FSIO / EA) لكل الحبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 3 ساعات بالضبط، ونقل إلى الحبار غسيل الاطباق ومنها (كامل لكافة أنواع المعاملة). هذا يتوقف على التلقيح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> والمضي قدما لنقل كل فرد الحبار إلى قارورة فيها ذبابة الفاكهة الخاصة مع FSIO. استخدم ماصة مخصصة لنقل كل معاملة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الصواني من قوارير ذبابة الفاكهة إلى مرفق الحبار للعودة الى يوم / ندورة ضوء ight شهدت هذه الحيوانات خلال مرحلة التطور الجنيني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يوم 3 - إعداد ذبابة الفاكهة قارورة (4 مل FSIO / EA) لكل الحبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل الغسق في 22-24 ساعة تلقيح ما بعد، نقل كل الحبار إلى قارورة ذبابة الفاكهة الجديدة. استخدم ماصة مخصصة لنقل كل معاملة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد وصفت 1،5 أنابيب microcentrifuge مل (1/squid) - يوم 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل الغسق في 46-48 ح التدبير، في مرحلة ما بعد التلقيح وتسجيل كل من التألق الحبار في قارورة ذبابة الفاكهة (مجموعة luminometer للتكامل 6 ق، وعلى إغلاق غطاء السيارات للقراءة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كوسيلة لمراقبة سلبية على خلفية التألق، وقياس قارورة مع FSIO التي لا تحتوي على أي الحبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل كل الحبار في وبلغ حجم التداول نحو 700 ميكروليتر إلى أنبوب مل microcentrifuge 1،5 من 4،12 الخطوة. الانتقال إلى مربع المجمد من الورق المقوى. مرة واحدة يتم وضع غطاء على مربع، لا إزالته كما اشارات ضوء لطرد البكتيريا ليست أهلا وسهلاL-مفهومة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجمد أنابيب microcentrifuge في -80 درجة مئوية خلال الليل. </li></ol> 5. تحديد مستويات الاستعمار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل والحبار، وإعداد اثنين من أنابيب microcentrifuge (2)، ولكل منها 475 FSIO ميكروليتر (أو تعقم المحيط الفوري 70٪). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد المدقات باستخدام لأول مرة Kimwipe لتنظيف مدقة وإزالة الأنقاض الإجمالي و / أو الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان المدقات تلميح إلى أسفل في دورق 50 مل يحتوي على الايثانول بنسبة 95٪. ينبغي أن يضاف إلى الإيثانول على ارتفاع ما يقرب من 3 سم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل مدقة، وإزالة من الدورق وامسح رأس مع Kimwipe. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تراجع المدقه مرة أخرى في حمام الايثانول، لإزالة وإدراج (نصيحة متابعة) الى microcentrifuge رف أنبوب، والسماح للتعبير جاف تماما لحوالي 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحبار ذوبان في microcentrifuge رف أنبوب (الحد الأقصى ن = 8). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان ذلك ضروريا، ضبط حجم الصوت إلى 700 ميكروليتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مدقة من الخطوة 5.5، تعطيل أنسجة الحيوانات حتى الحبر كيس روبتوريس (الماء سوف يتحول لون رمادي مظلم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة مدقة، وضمان جميع الأنسجة يبقى في الأنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة لفترة وجيزة الأنسجة لبالضبط 10 ثانية (استخدام جهاز توقيت). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للنسيج للراحة لمدة 10 دقيقة. وسوف تستقر في الأنسجة، والبكتيريا والحبر تبقى في حل. للحسابات التي تتبع، والبكتيريا / حل الحبر هو [A] تخفيف (أي ضوء scolopes E. جناسة الجهاز في 700 ميكرولتر). التخفيفات 1:20 مسلسل ([B]، [C]) وصفها أدناه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتخفيف [B]، أضف 25 ميكرولتر [A] إلى واحدة من أنابيب microcentrifuge أعدت في الخطوة 5.1. دوامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتخفيف [C]، أضف 25 ميكرولتر [B] إلى واحدة من أنابيب microcentrifuge أعدت في الخطوة 5.1. دوامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة 50 ميكرولتر من كل تخفيف على أجار LBS، 2 مكررات لكل معاملة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لوحات في 25-28 درجة مئوية خلال الليل. </li></ol> 6. تحليل البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحساب CFU / الجهاز ضوء (LO)، اشعرتي المستعمرات على لوحة لكل معاملة في المستعمرات التي 10-400 موجودة، واستخدام الصيغة المناسبة: CFU / LO = (المستعمرات في لوحة [A]) × 14؛ أو CFU / LO = (المستعمرات في لوحة [B]) × 280، أو CFU / LO = (المستعمرات في لوحة [C]) × 5600. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم نقاط البيانات الفردية والوساطات على مقياس لوغاريتمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غالبا ما تكون البيانات التي لم يتم توزيعها بشكل طبيعي، مع تباينات مختلفة، والقيم المتطرفة قد تحتوي على معلومات ذات معنى من الناحية البيولوجية. لذلك، غير بارامترية الاختبارات توفر طريقة مفيدة لتحديد ما إذا كانت العلاجات تختلف اختلافا كبيرا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام البرمجيات GraphPad بريزم للتحليل الإحصائي. لاثنين من العلاجات، واستخدام المبلغ رتبة اختبار يلكوكسون. لإجراء مقارنات بين أكثر من اثنين من العلاجات، واستخدام اختبار كروسكال واليس، مع مناسبة الاختبارات اللاحقة. </li></ol> 7. ممثل النتائج وأظهرت نتائج فحص عينة من الاستعمار في الشكل 4. سلالتين من <em&gt; V. وكانت fischeri الذي يحمل مختلف المستويات النسبية من التألق كل تلقيح في ستة الحبار، مع ستة الحبار الذي شغل منصب والضوابط (uncolonized) aposymbiotic. وE. scolopes المتكافل، ES114 14، وأكثر إشراقا في Sepiola المتكافل روبوستا، SR5 15،16. اللقاح مستويات مماثلة (الشكل 4A) تؤدي إلى الاستعمار 100٪ خلال 3 ساعات. في 48 ساعة، تم تحديد مستويات التلألؤ (الشكل 4B) وتعول CFU (الشكل 4C) لتقييم الكفاءة الاستعمار من سلالة. تقرير من التلألؤ محدد (الشكل 4D؛ جرثومة لكل) يسمح لتحديد درجة وضوح كل سلالة بكتيرية خلال التكافل. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/3758/3758fig1.jpg" /> الرسم البياني رقم 1 التدفق. الإجراء الاستعمار. ويتم حصاد البكتيريا والحبار على حدة، ثم يخلط في اللقاح المحدد. تغسل الحبار، ثم نقل إلى مياه جديدة في 3 ساعات، 24 ساعة، و 4<html> 8 تطعيم آخر ساعة. بعد 48 ساعة يتم قياس التألق ويتم تجميد هذه الحيوانات، والذي يعمل على سطح تعقيم الحيوانات. استعمرت الخفيف الجهاز البكتيريا لا تزال قابلة للحياة على -80 درجة مئوية من خلال واحدة ذوبان (أي إضافية تجميد ذوبان دورات). <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/3758/3758fig2.jpg" /> الرسم البياني رقم 2 التدفق. يوضح التجانس وتصفيح التخفيف من البكتيريا. مسلسل 20 ضعفا التخفيفات تقديم مجموعة مناسبة حيوية لتعداد الجراثيم المستعمرة. <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/3758/3758fig3.jpg" /> الشكل 3. نقل ماصات مع تفتق رمح ضيق مناسب لتتحمل ضيق (A) التي من شأنها أن تضر الحبار الأحداث. المعالجة عن طريق قطع أضيق الباب مع مقص أو شفرة حلاقة ينتج أداة مناسبة (B) لنقل الأحداث الحبار. s/ftp_upload/3758/3758fig4.jpg &quot;/&gt; الشكل 4. بيانات عينة لفحص الاستعمار. (أ) مستويات من البكتيريا الموجودة في الأوعية اللقاح. (ب) التلألؤ من الحبار الفردية. (ج) من مستعمرة تهم الحبار الفردية. (د) التألق محددة من الحبار الفردية. APO، Aposymbiotic (uncolonized سيطرة سلبية).

<ol>
	<li>Aas, J. A., Paster, B. J., Stokes, L. N., Olsen, I., Dewhirst, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+normal+bacterial+flora+of+the+oral+cavity.">Defining the normal bacterial flora of the oral cavity.</a> J. Clin. Microbiol. 43, 5721-5732 (2005).</li><li>Mandel, M. J., Wollenberg, M. S., Stabb, E. V., Visick, K. L., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+regulatory+gene+is+sufficient+to+alter+bacterial+host+range.">A single regulatory gene is sufficient to alter bacterial host range.</a> Nature. 458, 215-218 (2009).</li><li>Grice, E. A., Segre, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+skin+microbiome.">The skin microbiome.</a> Nat. Rev. Microbiol. 9, 244-253 (2011).</li><li>Malic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+identification+of+specific+bacteria+in+wound+biofilms+using+peptide+nucleic+acid+fluorescent+in+situ+hybridization+(PNA+FISH).">Detection and identification of specific bacteria in wound biofilms using peptide nucleic acid fluorescent in situ hybridization (PNA FISH).</a> Microbiology. 155, 2603-2611 (2009).</li><li>Turnbaugh, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+microbiome+project.">The human microbiome project.</a> Nature. 449, 804-810 (2007).</li><li>Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+winnowing:+establishing+the+squid-Vibrio+symbiosis.">The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis.</a> Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).</li><li>Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+from+a+cooperative,+bacterial-animal+association:+the+Vibrio+fischeri-Euprymna+scolopes+light+organ+symbiosis.">Lessons from a cooperative, bacterial-animal association: the Vibrio fischeri-Euprymna scolopes light organ symbiosis.</a> Annu. Rev. Microbiol. 50, 591-624 (1996).</li><li>McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symbiont+recognition+and+subsequent+morphogenesis+as+early+events+in+an+animal-bacterial+mutualism.">Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism.</a> Science. 254, 1491-1494 (1991).</li><li>Jones, B., Nishiguchi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counterillumination+in+the+Hawaiian+bobtail+squid,+Euprymna+scolopes+Berry+(Mollusca:+Cephalopoda).">Counterillumination in the Hawaiian bobtail squid, Euprymna scolopes Berry (Mollusca: Cephalopoda).</a> Marine Biology. 144, 1151-1155 (2004).</li><li>Graf, J., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-derived+amino+acids+support+the+proliferation+of+symbiotic+bacteria.">Host-derived amino acids support the proliferation of symbiotic bacteria.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1818-1822 (1998).</li><li>Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+squid+that+glows+in+the+night:+development+of+an+animal-bacterial+mutualism.">A squid that glows in the night: development of an animal-bacterial mutualism.</a> J. Bacteriol. 174, 4865-4870 (1992).</li><li>Lee, P. N., McFall-Ngai, M. J., Callaerts, P., de Couet, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hawaiian+bobtail+squid+(Euprymna+scolopes):+a+model+to+study+the+molecular+basis+of+eukaryote-prokaryote+mutualism+and+the+development+and+evolution+of+morphological+novelties+in+cephalopods.">The Hawaiian bobtail squid (Euprymna scolopes): a model to study the molecular basis of eukaryote-prokaryote mutualism and the development and evolution of morphological novelties in cephalopods.</a> Cold Spring Harbor Protocols. , (2009).</li><li>Stabb, E., Visick, K., Millikan, D., Corcoran, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Vibrio+fischeri-Euprymna+scolopes+symbiosis:+a+model+marine+animal-bacteria+interaction.">The Vibrio fischeri-Euprymna scolopes symbiosis: a model marine animal-bacteria interaction.</a> Recent Advances in Marine Science and Technology. , (2001).</li><li>Boettcher, K. J., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depressed+light+emission+by+symbiotic+Vibrio+fischeri+of+the+sepiolid+squid+Euprymna+scolopes.">Depressed light emission by symbiotic Vibrio fischeri of the sepiolid squid Euprymna scolopes.</a> J. Bacteriol. 172, 3701-3706 (1990).</li><li>Fidopiastis, P. M., von Boletzky, S., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+niche+for+Vibrio+logei,+the+predominant+light+organ+symbiont+of+squids+in+the+genus+Sepiola.">A new niche for Vibrio logei, the predominant light organ symbiont of squids in the genus Sepiola.</a> J. Bacteriol. 180, 59-64 (1998).</li><li>Bose, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+rapid+evolution+of+the+luxR-luxI+intergenic+region+to+the+diverse+bioluminescence+outputs+of+Vibrio+fischeri+strains+isolated+from+different+environments.">Contribution of rapid evolution of the luxR-luxI intergenic region to the diverse bioluminescence outputs of Vibrio fischeri strains isolated from different environments.</a> Appl. Environ. Microbiol. 77, 2445-2457 (2011).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

الفحص الاستعمار صفها يسمح لتحليل عملية تكافلية الطبيعية في بيئة مختبر للرقابة. على هذا النحو، يمكن استخدامه لتقييم من قبل الاستعمار سلالات متحولة، من عزلة طبيعية مختلفة، وتحت مختلف النظم الكيماوية. ويشيع استخدام الاختلافات في التجارب المذكورة لتقييم مختلف جوانب ا?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> الثقافة أنابيب الزجاج، و 16 مم القطر </td><td> VWR </td><td> 47729-580 </td><td></td></tr><tr><td> قبعات للأنابيب الثقافة زجاج </td><td> الصياد </td><td> NC9807998 </td><td></td></tr><tr><td> مرئية معمل تقدير OD 600 </td><td> Biowave </td><td> CO8000 </td><td> فإن أي معمل قادرة على قياس OD 600 عمل. وهذا يمكن وحدة قياس OD 600 من السائل مباشرة في أنابيب زجاجية ثقافة. قد يكون بعض التعديل لحساب اللقاح يكون من الضروري تبعا للأداة المستخدمة. </td></tr><tr><td> GloMax 20/20 Luminometer واحدة انابيب </td><td> Promega </td><td> E5311 </td><td> تعادل Luminometer تيرنر 20/20n النظم البيولوجية. ويشمل حامل أنبوب microcentrifuge. </td></tr><tr><td> GloMax 20/20 ضوء قياسي </td><td> Promega </td><td> E5341 </td><td> لمعايرة luminometer. </td></tr><tr><td> الإنكسار، المحمولة </td><td> الحاضنة والسباحة سميث </td><td> CD-14035 </td><td> معايرة قبل كل استعمال مع ماء منزوع الأيونات. شطف بعد كل استخدام مع ماء منزوع الأيونات لمنع تراكم الأملاح. </td></tr><tr><td> لحظة المحيط (اصطناعي مياه البحر المركزة) </td><td> فوستر والسباحة سميث </td><td> CD-16881 </td><td> تعد في 35 ‰ في الماء منزوع الأيونات، وذلك باستخدام مقياس الإنكسار، ثم مرشح من خلال مرشح ميكرومتر SFCA 0.2. </td></tr><tr><td> وحدة الترشيح </td><td> Nalgene </td><td> 158-0020 </td><td> بالسطح خالية من خلات السليلوز (SFCA) غشاء، 0.2 ميكرون. وقد لاحظنا النتائج متغير مع بعض المرشحات التي تحتوي على PES بالسطح. </td></tr><tr><td> نقل الماصات </td><td> الصياد </td><td> 13-711 -09:00 </td><td> باستخدام مقص أو شفرة حلاقة، وقطع رأس نظيفة فوق التلال الأولى لزيادة القطر من طرف ماصة، وتجنب الضغط على سلحفاة صغيرة الحبار. </td></tr><tr><td> السلطانيات عينة يمكن التخلص منها (البهلوانات البلاستيك) </td><td> المذنب </td><td> T9S (9 أونصة.) </td><td> الطاسات لتلقيح، مع قطرها العلوي 3 ¼ &quot;، وانخفاض قطرها 2 ¼&quot;، ارتفاع 3 &quot;. السلطانيات خلق بيئة متجانسة وأنها لا تملك حافة القاع، والتي يمكن الحصول على المحاصرين الحبار في مكانة منخفضة الأوكسجين. تم تحسين حجم لمدة 40 مل اللقاح. متاح في webstaurantstore.com، # 619PI9. </td></tr><tr><td> ذبابة الفاكهة قوارير </td><td> VWR </td><td> 89092-720 </td><td> قطر قارورة مباريات الافتتاح في PMT luminometer. </td></tr><tr><td> 1.5 مل أنابيب Microcentrifuge </td><td> ISC Bioexpress </td><td> C-3217-1CS </td><td> يجب أن أنابيب تناسب شكل من المدقات. </td></tr><tr><td> الايثانول، و 200 والدليل </td><td> الصياد </td><td> BP2818-100 </td><td></td></tr><tr><td> المدقات </td><td> كيمبل تشيس / Kontes </td><td> 749521-1500 </td><td></td></tr><tr><td> الخرز تصفيح، 5 مم القطر </td><td> كيمبل تشيس </td><td> 13500 5 </td><td> إعداد 5 في أنبوب والتعقيم. </td></tr></tbody></table>

colonization of euprymna scolopes squid by vibrio fischeri

تم العثور على بكتيريا محددة بالتعاون مع الأنسجة الحيوانية 1-5. هذه المضيفة للبكتيريا الجمعيات (symbioses) يمكن أن يكون ضارا (الممرضة)، ليس لديهم نتيجة للياقة البدنية (commensal)، أو أن تكون مفيدة (المنفعة المتبادلة). بينما تم إيلاء اهتمام كبير للتفاعلات المسببة للأمراض، ولا يعرف سوى القليل عن العمليات التي تملي اكتساب استنساخه من المفيد / commensal البكتيريا من البيئة. وتبادل المنافع والمصالح للضوء الجهاز بين هذه البكتيريا سالبة الجرام البحرية V. fischeri وهاواي قصير الذيل الحبار، E. scolopes، يمثل التفاعل محددة للغاية في أي واحد مضيف (E. scolopes) يؤسس علاقة تكافلية مع واحد فقط الأنواع البكتيرية (ف. fischeri) طوال فترة من عمر البطارية 6،7. تلألؤ بيولوجي التي تنتجها V. fischeri خلال هذا التفاعل يعطي فائدة لمكافحة المفترسة إلى E. scolopes خلال الأنشطة الليلية 8،9، في حينالنسيج المضيف الغنية بالمغذيات ويوفر V. fischeri مع مكانة المحمية 10. خلال كل جيل المضيفة، وخصت هذه العلاقة، ويمثل بالتالي عملية يمكن التنبؤ بها والتي يمكن تقييمها بالتفصيل في مراحل مختلفة من التنمية التكافلية. في المختبر، والحبار الأحداث يفقس aposymbiotically (uncolonized)، وإذا تم جمعها في غضون الدقائق ال 30-60 الأولى، ونقل إلى المتكافل خالية من المياه، لا يمكن إلا من قبل المستعمر اللقاح التجريبي 6. هذا التفاعل يوفر بالتالي نظام نموذجا مفيدا في أي لتقييم الخطوات الفردية التي تؤدي إلى اكتساب المحددة لميكروب التكافلية من البيئة 11،12. نحن هنا وصفا لطريقة لتقييم درجة من الاستعمار الذي يحدث عندما فقست حديثا E. aposymbiotic ويتعرض scolopes إلى (الاصطناعي) التي تحتوي على مياه البحر V. fischeri. هذا الفحص بسيط يصف التلقيح، العدوى الطبيعية، والانتعاشمن المتكافل البكتيرية من الجهاز ضوء الوليدة من E. يؤخذ scolopes. العناية لتوفير بيئة متناسقة لهذه الحيوانات خلال تطوير التكافلية، وخاصة فيما يتعلق بنوعية المياه والعظة ضوء. أساليب لتحديد خصائص السكان التكافلية صفها وتشمل (1) قياس التألق الحيوي جرثوميا المشتقة، و (2) مستعمرة مباشرة عد من المتكافلة استردادها.

Watch this Scientific Journal Video about Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri at JoVE.com

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

الأسلوب يحدد الاجراءات التي من الحبار قصير الذيل هاواي،<em&gt; Euprymna scolopes</em&gt; ولها المتكافل البكتيرية،<em&gt; الضمة fischeri</em&gt;، تربى على حدة ومن ثم قدم للسماح للاستعمار محدد من جانب الجهاز ضوء الحبار بواسطة البكتيريا. وصفت من قبل الكشف عن الاستعمار التلألؤ جرثوميا المشتقة والعد مستعمرة مباشرة.

استعمار Euprymna scolopes الحبار بواسطة الضمة fischeri</em

Specific bacteria are found in association with animal tissue1-5. Such host-bacterial associations (symbioses) can be detrimental (pathogenic), have no ...

colonization-of-euprymna-scolopes-squid-by-vibrio-fischeri

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

19.8K Views.  Northwestern University. الأسلوب يحدد الاجراءات التي من الحبار قصير الذيل هاواي، Euprymna scolopes ولها المتكافل البكتيرية، الضمة fischeri، تربى على حدة ومن ثم قدم للسماح للاستعمار محدد من جانب الجهاز ضوء الحبار بواسطة البكتيريا. وصفت من قبل الكشف عن الاستعمار التلألؤ جرثوميا الم?...

Video: Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

It is well known that gut bacteria contribute significantly to the host homeostasis, providing a range of benefits such as immune protection and vitamin synthesis. They also supply the host with a considerable amount of nutrients, making this ecosystem an essential metabolic organ. In the context of increasing evidence of the link between the gut flora and the metabolic syndrome, understanding the metabolic interaction between the host and its gut microbiota is becoming an important challenge of modern biology.1-4
 Colonization (also referred to as normalization process) designates the establishment of micro-organisms in a former germ-free animal. While it is a natural process occurring at birth, it is also used in adult germ-free animals to control the gut floral ecosystem and further determine its impact on the host metabolism. A common procedure to control the colonization process is to use the gavage method with a single or a mixture of micro-organisms. This method results in a very quick colonization and presents the disadvantage of being extremely stressful5. It is therefore useful to minimize the stress and to obtain a slower colonization process to observe gradually the impact of bacterial establishment on the host metabolism.
 In this manuscript, we describe a procedure to assess the modification of hepatic metabolism during a gradual colonization process using a non-destructive metabolic profiling technique. We propose to monitor gut microbial colonization by assessing the gut microbial metabolic activity reflected by the urinary excretion of microbial co-metabolites by 1H NMR-based metabolic profiling. This allows an appreciation of the stability of gut microbial activity beyond the stable establishment of the gut microbial ecosystem usually assessed by monitoring fecal bacteria by DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis).6 The colonization takes place in a conventional open environment and is initiated by a dirty litter soiled by conventional animals, which will serve as controls. Rodents being coprophagous animals, this ensures a homogenous colonization as previously described.7
 Hepatic metabolic profiling is measured directly from an intact liver biopsy using 1H High Resolution Magic Angle Spinning NMR spectroscopy. This semi-quantitative technique offers a quick way to assess, without damaging the cell structure, the major metabolites such as triglycerides, glucose and glycogen in order to further estimate the complex interaction between the colonization process and the hepatic metabolism7-10. This method can also be applied to any tissue biopsy11,12.

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

A progressive colonization procedure is described to further assess its impact on the host hepatic metabolism. Colonization is monitored non invasively by evaluating the urinary excretion of microbial co-metabolites by NMR-based metabolic profiling while hepatic metabolism is assessed by High Resolution Magic Angle Spinning (HR MAS) NMR profiling of intact biopsy.

تقييم التغيرات الأيضية الكبدي خلال الاستعمار التدريجي الماوس مجانا من جرثومة 1 H NMR الطيفي

It is well known that gut bacteria contribute significantly to the host homeostasis, providing a range of benefits such as immune protection and vitamin ...

Quantification of Fungal Colonization, Sporogenesis, and Production of Mycotoxins Using Kernel Bioassays

The rotting of grains by seed-infecting fungi poses one of the greatest economic challenges to cereal production worldwide, not to mention serious risks to human and animal health. Among cereal production, maize is arguably the most affected crop, due to pathogen-induced losses in grain integrity and mycotoxin seed contamination. The two most prevalent and problematic mycotoxins for maize growers and food and feed processors are aflatoxin and fumonisin, produced by Aspergillus flavus and Fusarium verticillioides, respectively.
Recent studies in molecular plant-pathogen interactions have demonstrated promise in understanding specific mechanisms associated with plant responses to fungal infection and mycotoxin contamination1,2,3,4,5,6. Because many labs are using kernel assays to study plant-pathogen interactions, there is a need for a standardized method for quantifying different biological parameters, so results from different laboratories can be cross-interpreted. For a robust and reproducible means for quantitative analyses on seeds, we have developed in-lab kernel assays and subsequent methods to quantify fungal growth, biomass, and mycotoxin contamination. Four sterilized maize kernels are inoculated in glass vials with a fungal suspension (106) and incubated for a predetermined period. Sample vials are then selected for enumeration of conidia by hemocytometer, ergosterol-based biomass analysis by high performance liquid chromatography (HPLC), aflatoxin quantification using an AflaTest fluorometer method, and fumonisin quantification by HPLC.

The devastation of cereal crops by seed-infecting fungi has prompted numerous research efforts to better understand plant-pathogen interactions. To study seed-fungal interactions in a laboratory setting, we developed a robust method for the quantification of fungal reproduction, biomass, and mycotoxin contamination using kernel bioassays.

الكمي للاستعمار الفطرية، تولد الأبواغ، وإنتاج السموم الفطرية عن طريق اختبارات بيولوجية على النواة

The rotting of grains by seed-infecting fungi poses one of the greatest economic challenges to cereal production worldwide, not to mention serious risks ...

TransFLP &#x2014; A Method to Genetically Modify Vibrio cholerae Based on Natural Transformation and FLP-recombination

Several methods are available to manipulate bacterial chromosomes1-3. Most of these protocols rely on the insertion of conditionally replicative plasmids (e.g. harboring pir-dependent or temperature-sensitive replicons1,2). These plasmids are integrated into bacterial chromosomes based on homology-mediated recombination. Such insertional mutants are often directly used in experimental settings. Alternatively, selection for plasmid excision followed by its loss can be performed, which for Gram-negative bacteria often relies on the counter-selectable levan sucrase enzyme encoded by the sacB gene4. The excision can either restore the pre-insertion genotype or result in an exchange between the chromosome and the plasmid-encoded copy of the modified gene. A disadvantage of this technique is that it is time-consuming. The plasmid has to be cloned first; it requires horizontal transfer into V. cholerae (most notably by mating with an E. coli donor strain) or artificial transformation of the latter; and the excision of the plasmid is random and can either restore the initial genotype or create the desired modification if no positive selection is exerted. Here, we present a method for rapid manipulation of the V. cholerae chromosome(s)5 (Figure 1). This TransFLP method is based on the recently discovered chitin-mediated induction of natural competence in this organism6 and other representative of the genus Vibrio such as V. fischeri7. Natural competence allows the uptake of free DNA including PCR-generated DNA fragments. Once taken up, the DNA recombines with the chromosome given the presence of a minimum of 250-500 bp of flanking homologous region8. Including a selection marker in-between these flanking regions allows easy detection of frequently occurring transformants.
This method can be used for different genetic manipulations of V. cholerae and potentially also other naturally competent bacteria. We provide three novel examples on what can be accomplished by this method in addition to our previously published study on single gene deletions and the addition of affinity-tag sequences5. Several optimization steps concerning the initial protocol of chitin-induced natural transformation6 are incorporated in this TransFLP protocol. These include among others the replacement of crab shell fragments by commercially available chitin flakes8, the donation of PCR-derived DNA as transforming material9, and the addition of FLP-recombination target sites (FRT)5. FRT sites allow site-directed excision of the selection marker mediated by the Flp recombinase10.

TransFLP &amp;#x2014; A Method to Genetically Modify &lt;em&gt;Vibrio cholerae&lt;/em&gt; Based on Natural Transformation and FLP-recombination

A quick method to modify the genome of V. cholerae is described. These modifications include the deletion of single genes, gene clusters and genomic islands as well as the integration of short sequences (e.g. promoter elements or affinity-tag sequences). The method is based on the natural transformation and FLP-recombination.

TransFLP - طريقة لتعديل وراثيا<em&gt; ضمة الكوليرا</em&gt; بناء على التحول الطبيعي وإعادة التركيب، FLP

Several methods are available to manipulate bacterial chromosomes1-3. Most of these protocols rely on the insertion of conditionally replicative plasmids ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing the mucosal surface of the nasopharynx, where it can reside, multiply and eventually overcome host defences to invade to other tissues of the host. Establishment of an infection in the normally lower respiratory tract results in pneumonia. Alternatively, the bacteria can disseminate into the bloodstream causing bacteraemia, which is associated with high mortality rates2, or else lead directly to the development of pneumococcal meningitis. Understanding the kinetics of, and immune responses to, nasopharyngeal colonization is an important aspect of S. pneumoniae infection models.
Our mouse model of intranasal colonization is adapted from human models3 and has been used by multiple research groups in the study of host-pathogen responses in the nasopharynx4-7. In the first part of the model, we use a clinical isolate of S. pneumoniae to establish a self-limiting bacterial colonization that is similar to carriage events in human adults. The procedure detailed herein involves preparation of a bacterial inoculum, followed by the establishment of a colonization event through delivery of the inoculum via an intranasal route of administration. Resident macrophages are the predominant cell type in the nasopharynx during the steady state. Typically, there are few lymphocytes present in uninfected mice8, however mucosal colonization will lead to low- to high-grade inflammation (depending on the virulence of the bacterial species and strain) that will result in an immune response and the subsequent recruitment of host immune cells. These cells can be isolated by a lavage of the tracheal contents through the nares, and correlated to the density of colonization bacteria to better understand the kinetics of the infection.

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Colonization of the murine nasopharynx with Streptococcus pneumoniae and the subsequent extraction of adherent or recruited cells is described. This technique involves flushing the nasopharynx and collection of the fluid through the nares and is adaptable for various readouts, including differential cell quantification and analysis of mRNA expression in situ.

توصيف الاستجابات الالتهابية خلال الاستعمار داخل الشرج مع الالتهاب الرئوي العقدي

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a prerequisite for pneumococcal infections such as pneumonia and otitis media. In vitro adherence assays can be used to study the attachment of pneumococci to epithelial cell monolayers and to investigate potential interventions, such as the use of probiotics, to inhibit pneumococcal&#160;colonization.&#160;The protocol described here is used to investigate the effects of the probiotic Streptococcus salivarius on the adherence of pneumococci to the human epithelial cell line CCL-23 (sometimes referred to as HEp-2 cells). The assay involves three main steps: 1) preparation of epithelial and bacterial cells, 2) addition of bacteria to epithelial cell monolayers, and 3) detection of adherent pneumococci by viable counts (serial dilution and plating) or quantitative real-time PCR (qPCR). This technique is relatively straightforward and does not require specialized equipment other than a tissue culture setup. The assay can be used to test other probiotic species and/or potential inhibitors of pneumococcal colonization and can be easily modified to address other scientific questions regarding pneumococcal adherence and invasion.

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

In vitro adherence assays can be used to study the attachment of Streptococcus pneumoniae to epithelial cell monolayers and to investigate potential interventions such as the use of probiotics for inhibiting pneumococcal colonization.

التحقيق في آثار البروبيوتيك على المكورات الرئوية الاستعمار باستخدام<em&gt; في المختبر</em&gt; الالتزام الفحص

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the majority of Vibrio-associated infections. Thus, accurate differentiation among Vibrio spp. and detection of V. parahaemolyticus is critically important to ensure the safety of our food supply. Although molecular techniques are increasingly common, culture-depending methods are still routinely done and they are considered standard methods in certain circumstances. Hence, a novel chromogenic agar medium was tested with the goal of providing a better method for isolation and differentiation of clinically relevant Vibrio spp. The protocol compared the sensitivity, specificity and detection limit for the detection of V. parahaemolyticus between the new chromogenic medium and a conventional medium. Various V. parahaemolyticus strains (n=22) representing diverse serotypes and source of origins were used. They were previously identified by Food and Drug Administration (FDA) and Centers for Disease Control and Prevention (CDC), and further verified in our laboratory by tlh-PCR. In at least four separate trials, these strains were inoculated on the chromogenic agar and thiosulfate-citrate-bile salts-sucrose (TCBS) agar, which is the recommended medium for culturing this species, followed by incubation at 35-37 &#176;C for 24-96 hr. Three V. parahaemolyticus strains (13.6%) did not grow optimally on TCBS, nonetheless exhibited green colonies if there was growth. Two strains (9.1%) did not yield the expected cyan colonies on the chromogenic agar. Non-V. parahaemolyticus strains (n=32) were also tested to determine the specificity of the chromogenic agar. Among these strains, 31 did not grow or exhibited other colony morphologies. The mean recovery of V. parahaemolyticus on the chromogenic agar was ~96.4% relative to tryptic soy agar supplemented with 2% NaCl. In conclusion, the new chromogenic agar is an effective medium to detect V. parahaemolyticus and to differentiate it from other vibrios.

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

Detection and isolation of clinically relevant Vibrio species require selective and differential culture media. This study evaluated the ability of a new chromogenic medium to detect and identify V. parahaemolyticus and other related species. The new medium was found to have better sensitivity and specificity than the conventional medium.

تطوير أكثر حساسية وخصوصية اللونية آجار المتوسطة للكشف عن<em&gt; الضمة نظيرة الحالة للدم</em&gt; وغيره<em&gt; الضمة</em&gt; الأنواع

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of 10 - 30% of adults. In immune-compromised individuals, including neonates, pregnant women, and the elderly, GBS may switch to an invasive pathogen causing sepsis, arthritis, pneumonia, and meningitis. Because GBS is a leading bacterial pathogen of neonates, current prophylaxis is comprised of late gestation screening for GBS vaginal colonization and subsequent peripartum antibiotic treatment of GBS-positive mothers. Heavy GBS vaginal burden is a risk factor for both neonatal disease and colonization. Unfortunately, little is known about the host and bacterial factors that promote or permit GBS vaginal colonization. This protocol describes a technique for establishing persistent GBS vaginal colonization using a single &#946;-estradiol pre-treatment and daily sampling to determine bacterial load. It further details methods to administer additional therapies or reagents of interest and to collect vaginal lavage fluid and reproductive tract tissues. This mouse model will further the understanding of the GBS-host interaction within the vaginal environment, which will lead to potential therapeutic targets to control maternal vaginal colonization during pregnancy and to prevent transmission to the vulnerable newborn. It will also be of interest to increase our understanding of general bacterial-host interactions in the female vaginal tract.

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

The purpose of this protocol is to imitate human group B Streptococcus (GBS) vaginal colonization in a murine model. This method may be used to investigate host immune responses and bacterial factors contributing to GBS vaginal persistence, as well as to test therapeutic strategies.

نموذج الفئران من المجموعة الثانية<em&gt; العقدية</em&gt; المهبلية الاستعمار

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Laboratory Techniques Used to Maintain and Differentiate Biotypes of Vibrio cholerae Clinical and Environmental Isolates

The aquatic Gram-negative bacterium Vibrio cholerae is the etiological agent of the infectious gastrointestinal disease cholera. Due to the global prevalence and severity of this disease, V. cholerae has been extensively studied in both environmental and laboratory settings, requiring proper maintenance and culturing techniques. Classical and El Tor are two main biotypes that compose the V. cholerae O1 serogroup, each displaying unique genotypic and phenotypic characteristics that provide reliable mechanisms for biotype characterization, and require distinct virulence inducing culturing conditions. Regardless of the biotype of the causative strain for any given infection or outbreak, the standard treatment for the disease involves rehydration therapy supplemented with a regimen of antibiotics. However, biotype classification may be necessary for laboratory studies and may have broader impacts in the biomedical field. In the early 2000&#39;s clinical isolates were identified which exhibit genotypic and phenotypic traits from both classical and El Tor biotypes. The newly identified hybrids, termed El Tor variants, have caused clinical and environmental isolate biotype identification to become more complex than previous traditional single assay identification protocols. In addition to describing V. cholerae general maintenance and culturing techniques, this manuscript describes a series of gene specific (ctxB and tcpA) PCR-based genetic screens and phenotypic assays (polymyxin B resistance, citrate metabolism, proteolytic activity, hemolytic activity, motility, and glucose metabolism via Voges-Proskauer assay) collectively used to characterize and/or distinguish between classical and El Tor biotypes. Together, these assays provide an efficient systematic approach to be used as an alternative, or in addition, to costly, labor-intensive experiments in the characterization of V. cholerae clinical (and environmental) isolates.

Laboratory Techniques Used to Maintain and Differentiate Biotypes of Vibrio cholerae Clinical and Environmental Isolates

This manuscript describes proper Vibrio cholerae maintenance techniques in addition to a series of biochemical assays, collectively utilized for quick and reliable differentiation between clinical and environmental V. cholerae biotypes in a laboratory setting.

تقنيات المختبر تستخدم للحفاظ على والتمايز بيوتيبس<em&gt; ضمة الكوليرا</em&gt; العوازل السريرية والبيئية

The aquatic Gram-negative bacterium Vibrio cholerae is the etiological agent of the infectious gastrointestinal disease cholera. Due to the global ...

Induction of Cellular Differentiation and Single Cell Imaging of Vibrio parahaemolyticus Swimmer and Swarmer Cells

The ability to study the intracellular localization of proteins is essential for the understanding of many cellular processes. In turn, this requires the ability to obtain single cells for fluorescence microscopy, which can be particularly challenging when imaging cells that exist within bacterial communities. For example, the human pathogen Vibrio parahaemolyticus exists as short rod-shaped swimmer cells in liquid conditions that upon surface contact differentiate into a subpopulation of highly elongated swarmer cells specialized for growth on solid surfaces. This paper presents a method to perform single cell fluorescence microscopy analysis of V. parahaemolyticus in its two differential states. This protocol very reproducibly induces differentiation of V. parahaemolyticus into a swarmer cell life-cycle and facilitates their proliferation over solid surfaces. The method produces flares of differentiated swarmer cells extending from the edge of the swarm-colony. Notably, at the very tip of the swarm-flares, swarmer cells exist in a single layer of cells, which allows for their easy transfer to a microscope slide and subsequent fluorescence microscopy imaging of single cells. Additionally, the workflow of image analysis for demographic representation of bacterial societies is presented. As a proof of principle, the analysis of the intracellular localization of chemotaxis signaling arrays in swimmer and swarmer cells of V. parahaemolyticus is described.

Induction of Cellular Differentiation and Single Cell Imaging of Vibrio parahaemolyticus Swimmer and Swarmer Cells

This protocol enables single cell microscopy of the differentially distinct Vibrio parahaemolyticus swimmer and swarmer cells. The method produces a population of swarmer cells easily available for single cell analysis and covers preparation of cell cultures, induction of swarmer differentiation, sample preparation, and image analysis.

تحريض التمايز الخلوي والتصوير خلية واحدة من<em&gt; فيبرايو بارايموليتيكوس</em&gt; السباح و سوارمر الخلايا

The ability to study the intracellular localization of proteins is essential for the understanding of many cellular processes. In turn, this requires the ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome (HUS), colonize to the intestinal tract of humans. To study the detailed mechanism of EHEC colonization in vivo, it is essential to have animal models to monitor and quantify EHEC colonization. We demonstrate here a mouse-EHEC colonization model by transforming the bioluminescent expressing plasmid to EHEC to monitor and quantify EHEC colonization in living hosts. Animals inoculated with bioluminescence-labeled EHEC show intense bioluminescent signals in mice by detection with a non-invasive in vivo imaging system. After 1 and 2 days post infection, bioluminescent signals could still be detected in infected animals, which suggests that EHEC colonize in hosts for at least 2 days. We also demonstrate that these bioluminescent EHEC locate to mouse intestine, specifically in the cecum and colon, from ex vivo images. This mouse-EHEC colonization model may serve as a tool to advance the current knowledge of the EHEC colonization mechanism.

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

A detailed protocol of a mouse model for enterohemorrhagic E. coli (EHEC) colonization by using bioluminescence-labeled bacteria is presented. The detection of these bioluminescent bacteria by a non-invasive in vivo imaging system in live animals can advance our current understanding of EHEC colonization.

الكشف عن استعمار الإشريكيّة القولونية Enterohemorrhagic موريني واستضافة بنظام الإضاءة الحيوية غير الغازية في فيفو

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...