يتم اعتماد مختبر الدكتور دي Caestecker من قبل المعاهد الوطنية للصحة 1RO1 HL093057-01-01 و1RC4DK090770. يتم اعتماد مختبر الدكتور هاريس &quot;من قبل DK38226، DK51265، DK62794 وتمويل من إدارة المحاربين القدامى. الدعم للماوس الكلى جراحات الإصابات والكرياتينين في مصل الدم، وفحوصات التليف قدمت أيضا من قبل فاندربيلت اوبراين الكلى الاصابات مركز منحة 1P30 DK079341.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأوتوكلاف جميع الأدوات الجراحية قبل الجراحة. لاحظ أنه إذا واحد هو إجراء جراحات متعددة على الفئران مختلفة، وشطف الأدوات بعد استخدامها ومن ثم تعقيم باستخدام معقم حبة ساخنة. انها ليست كافية لنقع في الايثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعطاء 0.5 مل S / C ملحي معقم قبل الجراحة وبعد العمل الجراحي فورا للتعويض عن فقدان السوائل في الجسم أثناء الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس باستخدام زيلازين IP / خليط الكيتامين. وعادة ما يستغرق 3-5 دقيقة للفئران للوصول الجراحية التخدير الطائرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يحلق موقع الجراحية مع منطقة الحدود بما فيه الكفاية للحفاظ على الشعر من تلويث موقع شق. هذا يحتاج إلى أن يؤديها في منطقة التحضيرية، حيث لا يتم إجراء الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم التشحيم العيون للعيون لمنع جفاف أثناء العملية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس عرضة على سطح ساخن مع تغطية وسادة مقعد ماصة. الساقين الشريط إلى سطح الجراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حالة استخدامنظام حمام مائي، تعيين الحرارة عند 38 درجة مئوية 1 ساعة قبل الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد العقيم باستخدام بتدين حل مسحة عصا: فرك من وسط الموقع نحو محيط 3X، في كل مرة تليها الغسل مع Nolvasan لإزالة بتدين. يجب إزالة جميع بتدين من الميدان الجراحية قبل شق من قبل الشطف مع Nolvasan. قبل البدء في إجراء قفازات معقمة يجب أن يتم تغيير لتكون عقيمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية الجراحي الميداني مع ثنى الجراحية المعقمة. سيمنع هذا الشعر طائشة من دخول الميدان الجراحية وتوفير مساحة على أساسها وضع أدوات معقمة أثناء الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جس الموقع الكلى عن طريق الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الجلد على طول خط الوسط الظهرية من الماوس (حوالي 1.5 سم) باستخدام المقص والملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجلد منفصلة وطبقات تحت الجلد على جانبي ظهري اليسار واليمين من خلال هذا الشق من قبل تشريح حادة باستخدام مقص وملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير من خلال FL الحقعنخ العضلات واللفافة فوق الكلى والداخل للظاهر الكلية اليمنى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح بعناية القطبين العلوي والسفلي في الكلى خالية من الأنسجة المحيطة. لاحظ أن الأنسجة الدهنية من جميع أنحاء القطب العلوي يحتوي على الغدة الكظرية تحمل إمدادات الدم الخاصة بها والتي يمكن دفع قبالة الكلى ولكن من الواضح أنه لا ينبغي إزالتها من الماوس (الشكل 1). بعد تحرير الكلى من الأنسجة المحيطة بها، وربط خياطة الحرير 4-0 حول نقير من الكلية اليمنى باستخدام عقدة الجراحية المزدوجة. ترك واحدة من نهاية خياطة ~ 2 في لونغ لتصمد في الكلى كما كنت القطع البعيدة إلى عقدة حتى تتمكن من تصور أن يكون قطعت الموقع. ري جدعة مع ملحي معقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق طبقة العضلات باستخدام خياطة للامتصاص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير من خلال العضلات الجهة اليسرى واللفافة فوق الكلى والداخل للظاهر الكلية اليسرى (الشكل 2A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد بعناية الكلى باستخدام ملقط حادة حين الإفراج الكلويعنيق من الأنسجة المحيطة الدهون باستخدام ملقط (أرقام 2B-2F). الكثير من الضغط على الكلى باستخدام ملقط حادة قد تسبب الإصابة الكلوية وبالتالي يحتاج المرء أن نتذكر هذا عند تصميم الضوابط &quot;الشام&quot; للدراسات. إذا وجدت أن الضوابط الشام الخاص على تطوير الإصابة الكلوية (كما يتضح من ارتفاع في الكرياتينين في مصل الدم)، وهي طريقة بديلة قد تفكر في الإفراج عن الأنسجة الدهنية المحيطة من عنيق الكلوي هو للفة بلطف الأنسجة بمحلول ملحي معقم غارقة القطن مسحات الرؤوس. في تجربتنا وإلى حد ما تعلق الدهون بإحكام على عنيق الكلوي وأنه لا يمكن بسهولة إزالة مع مسحات القطن، وحتى هذا قد لا يكون النهج الأول كنت تريد استخدامها. ومع ذلك، مثل جوانب أخرى من هذا النموذج، وهذا هو الشيء الذي سيكون لديك لإنشاء لنفسك مع الممارسة والخبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المشبك ترك الكلوي عنيق باستخدام المشبك الأوعية الدموية غير المؤلمة باستخدام ملقط عقد (لتسهيل وضع المشبك)، استخدم الموقت لمختلف CLAمرات النائب اعتمادا على سلالة الماوس وشدة الإصابة المطلوبة (انظر الجدول 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية الكلية اليسرى مع الجلد (الشكل 2H). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية شق الجلد مع الشاش غارقة المالحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الداخل للظاهر الكلى، تأكد من مظهر داكن موحدة والإفراج عن المشبك بعد العصر المشار إليه، وتؤكد أن مظهر داكن يعكس بشكل موحد في جميع أنحاء الكلى (الشكل 2I / G). إذا لم يكن بسرعة وبشكل موحد إعادة يروي (حتى الوردي) ينبغي استبعاد الماوس الكلى من مزيد من التحليل. دفع برفق الكلى مرة أخرى إلى الفضاء خلف الصفاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق طبقة العضلات باستخدام خياطة للامتصاص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق طبقة الجلد باستخدام حيدة النايلون خياطة غير قابل للامتصاص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة بوبرينورفين وعي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الفئران بعيدا عن مجال الجراحة على وسادة التدفئة حتى يستيقظ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عودة الفئران لغرفة الحيوانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تراقب عن كثب الفئران وإعطاء جرعات إضافيةمن بوبرينورفين كما هو مبين أعلاه كل 8-12 ساعة لألم أو إزعاج. العلامات السريرية الناتجة في إدارة المسكنات وتشمل التغييرات الاكتئاب أو غيرها من السلوكية، ومظهر غير طبيعي، أو الموقف مثل الشعرية-الانتصاب، التقوس في الجلوس، وعدم الاستمالة وتناول الطعام، أو الجمود. </li></ol>

<ol>
	<li>Singh, A. P., Junemann, A., Muthuraman, A., Jaggi, A. S., Singh, N., Grover, K., Dhawan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+acute+renal+failure.">Animal models of acute renal failure.</a> Pharmacological reports: PR. 64, 31-44 (2012).</li><li>Heyman, S. N., Rosenberger, C., Rosen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+ischemia-reperfusion:+Biases+and+myths-the+proximal+vs.+Distal+hypoxic+tubular+injury+debate+revisited.">Experimental ischemia-reperfusion: Biases and myths-the proximal vs. Distal hypoxic tubular injury debate revisited.</a> Kidney Int. 77, 9-16 (2010).</li><li>Lieberthal, W., Nigam, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+renal+failure.+II.+Experimental+models+of+acute+renal+failure:+Imperfect+but+indispensable.">Acute renal failure. II. Experimental models of acute renal failure: Imperfect but indispensable.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 278, F1-F12 (2000).</li><li>Dunn, S. R., Qi, Z., Bottinger, E. P., Breyer, M. D., Sharma, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+endogenous+creatinine+clearance+as+a+measure+of+renal+function+in+mice.">Utility of endogenous creatinine clearance as a measure of renal function in mice.</a> Kidney Int. 65, 1959-1967 (2004).</li><li>Yuen, P. S., Dunn, S. R., Miyaji, T., Yasuda, H., Sharma, K., Star, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+HPLC+determination+of+creatinine+in+mouse+serum.">A simplified method for HPLC determination of creatinine in mouse serum.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 286, F1116-F1119 (2004).</li><li>Hetu, P. O., Gingras, M. E., Vinet, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+rapid+liquid+chromatography+isotope+dilution+tandem+mass+spectrometry+(LC-IDMS/MS)+method+for+serum+creatinine.">Development and validation of a rapid liquid chromatography isotope dilution tandem mass spectrometry (LC-IDMS/MS) method for serum creatinine.</a> Clin. Biochem. 43, 1158-1162 (2010).</li><li>Keppler, A., Gretz, N., Schmidt, R., Kloetzer, H. M., Groene, H. J., Lelongt, B., Meyer, M., Sadick, M., Pill, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+creatinine+determination+in+mice+and+rats:+An+enzymatic+method+compares+favorably+with+a+high-performance+liquid+chromatography+assay.">Plasma creatinine determination in mice and rats: An enzymatic method compares favorably with a high-performance liquid chromatography assay.</a> Kidney Int. 71, 74-78 (2007).</li><li>Yang, L., Besschetnova, T. Y., Brooks, C. R., Shah, J. V., Bonventre, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+cycle+arrest+in+G2/M+mediates+kidney+fibrosis+after+injury.">Epithelial cell cycle arrest in G2/M mediates kidney fibrosis after injury.</a> Nat. Med. 16, 535-543 (2010).</li><li>Shanley, P. F., Rosen, M. D., Brezis, M., Silva, P., Epstein, F. H., Rosen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topography+of+focal+proximal+tubular+necrosis+after+ischemia+with+reflow+in+the+rat+kidney.">Topography of focal proximal tubular necrosis after ischemia with reflow in the rat kidney.</a> Am. J. Pathol. 122, 462-468 (1986).</li><li>Chawla, L. S., Amdur, R. L., Amodeo, S., Kimmel, P. L., Palant, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+severity+of+acute+kidney+injury+predicts+progression+to+chronic+kidney+disease.">The severity of acute kidney injury predicts progression to chronic kidney disease.</a> Kidney Int. 79, 1361-1369 (2012).</li><li>Lo, L. J., Go, A. S., Chertow, G. M., McCulloch, C. E., Fan, D., Ordonez, J. D., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dialysis-requiring+acute+renal+failure+increases+the+risk+of+progressive+chronic+kidney+disease.">Dialysis-requiring acute renal failure increases the risk of progressive chronic kidney disease.</a> Kidney Int. 76, 893-899 (2009).</li><li>Burne, M. J., Haq, M., Matsuse, H., Mohapatra, S., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+susceptibility+to+renal+ischemia+reperfusion+injury+revealed+in+a+murine+model.">Genetic susceptibility to renal ischemia reperfusion injury revealed in a murine model.</a> Transplantation. 69, 1023-1025 (2000).</li><li>Muller, V., Losonczy, G., Heemann, U., Vannay, A., Fekete, A., Reusz, G., Tulassay, T., Szabo, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+renal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats:+Possible+role+of+endothelin.">Sexual dimorphism in renal ischemia-reperfusion injury in rats: Possible role of endothelin.</a> Kidney Int. 62, 1364-1371 (2002).</li><li>Schmitt, R., Marlier, A., Cantley, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zag+expression+during+aging+suppresses+proliferation+after+kidney+injury.">Zag expression during aging suppresses proliferation after kidney injury.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 19, 2375-2383 (2008).</li><li>Oxburgh, L., de Caestecker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+injury+of+the+mouse+kidney.">Ischemia-reperfusion injury of the mouse kidney.</a> Methods Mol. Biol. 886, 363-379 (2012).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم تضارب المصالح في الكشف عنها.

وصفنا نموذجين من IR-AKI لدراسة آثار المعتدل والشديد الإصابة الكلوية. هذه النماذج تسمح لنا للحث على إصابة ثابت ويمكن التنبؤ بها مع معدل وفيات منخفض. بروتوكول لدينا تحدد كثيرا من الصعوبات والعثرات ترتبط تقليديا مع هذا النموذج. وعلاوة على ذلك، ونحن قد أظهرت أن اعتمادا على ...

وقد وضعت مجموعة متنوعة من نماذج تجريبية من إصابة الكلى الحاد (آكي) لتتناسب مع تنوع وتعقيد حالة الإنسان (انظر المرجع لمراجعة حديثة وشاملة 1). كل من هذه النماذج لديه نقاط قوته ونقاط الضعف، وحين يحاكي كل الظروف الإنسانية ذات الصلة مع الكفاءات المتنوعة، لا شيء نموذج بالضبط الفيزيولوجيا المرضية لنظرائهم الإنسان. وقد تم تطوير ضخه نقص التروية (IR) التي يسببها آكي كنموذج للإصابة الكلى نقص التروية الحادة التي يسببها في القوارض. بينما نادرا ما لوحظ من شدة الإصابة أنبوبي كلوي ينظر في هذا النموذج في المرضى الذين يعانون من إصابات نقص انسياب الدم الكلوي 2، على الرغم من قصوره وإلى حد كبير بسبب طبيعة استنساخه نسبيا من هذا الطراز، وفرت الاستخدام الواسع النطاق، ومن المتوقع، وسوف تستمر لتوفير معلومات هامة عن العديد من الآليات المشتركة الأساسية للآكي، والإصلاح، والعلاج 3. جراحة IR يتطلب فامiliarity مع تشريح الكلى الماوس، الذي قمنا موضح في شكل مبسط في الشكل 1. لا يمكن أن يؤديها الكلوي نقص التروية-ضخه (IR) لعملية جراحية إصابة عن طريق النهج بطني (البطن) أو الظهرية (خلف الصفاق). ونحن نستخدم منهج ظهري لأنه هو أقل من صدمة، والسماح أوقات الانتعاش بشكل أسرع وتحسين البقاء على قيد الحياة (وخاصة عند أول تعلم الإجراء). لا يمكن أن يؤديها الكلوي إصابة IR أحاديا أو ثنائيا. ومع ذلك، فإن الاختلافات بين الضغوط فعالة المشبك (التي قد تنجم عن مداخلة من الدهون محيط بالنقير بين فكي المشبك) و / أو الفروق في استجابات الكلوي إلى نقص التروية بين الجانبين يؤدي إلى نتائج أكثر متغير. في حين أن هذا ليس مشكلة مستعصية على الحل، فإنه يمكن زيادة التباين بين التجارب، التي هي قضية رئيسية لهذا النموذج. الأشعة تحت الحمراء من جانب واحد لا يمكن أن يؤديها مع استئصال الكلية مضاد الوحشي. هذا هو أسلوب لدينا من خيار لأنه يقلل من التباين في لقط بين السويقات، والعمل في الوقت نفسه علىllows واحد لتقييم وظائف الكلى، والتي لا تتأثر مع الأشعة تحت الحمراء من جانب واحد وحده. كان هناك نقاش حول ما هي الطريقة الأكثر عملية مقابل المثلى لتقييم وظائف الكلى في الفئران. الدم واليوريا والنيتروجين (بون) يوفر قدرا من وظيفة الكلى وغير مفيد &quot;أول نظرة&quot; علامة في بعض النماذج من آكي، بما في ذلك الضرر الأشعة تحت الحمراء. ومع ذلك، يمكن أن تتأثر مستويات BUN حسب الحالة حجم الفئران التي قد تتأثر، لا سيما في أعقاب نهج بطني إصابة الأشعة تحت الحمراء، عندما يقلل تأخر الانتعاش تناول عن طريق الفم من السوائل لعدة أيام بعد الجراحة. وأقل تأثرا مصل الكرياتينين حسب حالة الماء ولكن يتأثر بشكل واضح من قبل كتلة العضلات. كان واحدا من الصعوبات مع قياسات كرياتينين المصل مشاكل مع الكشف عن chromogens غير الكرياتينين في مصل الفأر باستخدام التقنيات المعتمدة حامض البكريك. وكبديل لذلك، قد وضعت عددا من المراكز إلى أسلوب يعتمد على HPLC لتحديد الكرياتينين الماوس أن لا يتأثر هذا قطعة أثرية 4. ومع ذلك، UNLآيك BUN والكرياتينين البكريك حمض المقايسات، والتي تتطلب فقط 5-10 ميكرولتر من المصل، HPLC-فحوصات تتطلب ~ 25 ميكرولتر مصل في الفحص، التي إذا أجريت في مكررة سيتطلب ~ 100 ميكرولتر من الدم الكامل لكل مقايسة. هذا يمكن أن تكون مقيدة للدراسات الماوس. وقد وضعت بعض المراكز القائمة على الطيف HPLC وقداس طرق أكثر حساسية التي تسمح تحليل عينة أصغر حجم 5، 6. ومع ذلك، هذه التقنيات ليست متاحة على نطاق واسع. وقد تم تقييم بديل، مقايسة تتالي الأنزيمية (الذي يتطلب فقط ميكرولتر 5-10 من المصل) في الفأر والجرذ عينات المصل وأظهرت وثيقة موازية قياسات HPLC من الكرياتينين في مصل الدم في حين فحوصات حمض البكريك دائما القيم الكرياتينين المبالغة في تقدير 7. في حين لا يستخدم على نطاق واسع هذا الاختبار في الأدب آكي، الفحص متاح تجاريا، وسهلة الاستخدام، ونجد يعطي نتائج يمكن الاعتماد عليها مع هذا النموذج من الأشعة تحت الحمراء التي يسببها آكي في الفئران.

<table><tbody><tr><td>Ketamine (anesthetic)</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-881-9413 (100 mg/ml)</td><td>Final concentration 30 mg/ml Ketamine with 3 mg/ml Xylazine administered at 3-4 ml/kg (100 mg/kg Ketamine and 10 mg/kg Xylazine)</td></tr><tr><td>Xylazine (analgesic)</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-808-1939 (100 mg/ml)</td><td>As above</td></tr><tr><td>Antisedan (anti-Xylazine)</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-867-7097 (5 mg/ml)</td><td>Optional: to reverse effects of Xylazine in order to increase the rate of recovery after surgery Use 0.5-0.7 mg/kg</td></tr><tr><td>Buprenorphine (analgesic)</td><td>Bedford Laboratories</td><td>NDC 55390-100-10 (0.3 mg/ml)</td><td>Dose 0.05-0.1 &amp;mu;g/g every 8-12 hr. Make up a 1:5 dilution in sterile normal saline preoperatively and give 2.5-5 &amp;mu;l/g of the diluted solution.</td></tr><tr><td>Ophthalmic ointment</td><td>Dechra</td><td>NDC 17033-211-38</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Betadine swab sticks</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>NDC 67618-153-01</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Nolvasan Surgical Scrub</td><td>Pfizer Animal Care</td><td>300253</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Table 2. Drugs and solutions for I/R surgery.&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Iris Scissors</td><td>Integra Miltex</td><td>VWR 21909-404</td><td>For skin and muscle dissection</td></tr><tr><td>Curved iris forceps</td><td>FST</td><td>11065-07</td><td>To hold skin and muscle, to remove peri-nephric fat</td></tr><tr><td>Blunt forceps</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5228</td><td>To manipulate kidneys</td></tr><tr><td>Vascular clamp (795 g pressure)</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5459</td><td>Good for C57BL/6 and BALB/c mice strains</td></tr><tr><td>Schwartz clip applying forceps</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5450</td><td>For RS-5459 clamps</td></tr><tr><td>Vascular clamp (75-85 g pressure)</td><td>FST</td><td>18055-02</td><td>Optimal for CD1 mice strain, but also can be used for C57BL/6 and BALB/c</td></tr><tr><td>Micro-Serrefine Clamp Applicator-14 cm with Lock</td><td>FST</td><td>18056-14</td><td>For FST 18055-02 clamps</td></tr><tr><td>Gayman T/Pump (water-bath heated platform)</td><td>Braintree Scientific</td><td>TP-650</td><td>The water heater is set at 38 &amp;deg;C 1 hr prior surgery</td></tr><tr><td>15&quot; W x 24&quot; Heated platform</td><td>Braintree Scientific</td><td>HHP-2</td><td>Connect to Gayman heated water pump</td></tr><tr><td>Heating pad</td><td>Braintree Scientific</td><td>Model 39DP</td><td>Uses microwave for heating. This is useful for warming during recovery</td></tr><tr><td>Absorbable suture (Vicryl 5-0)</td><td>ETHICON</td><td>VCP834G</td><td>For fascia and muscle</td></tr><tr><td>Non-absorbable suture: monofilament nylon MONOMID 6/0 660B)</td><td>CP Medical</td><td>CP-B660B-03</td><td>For skin</td></tr><tr><td>Halsey needle holder: Tungsten Carbide/13 cm</td><td>FST</td><td>12501-13</td><td>To hold suture needles</td></tr><tr><td>Timer</td><td>FST</td><td>06-662-3</td><td>To quantify ischemia time</td></tr><tr><td>Hot bead sterilizer</td><td>FST</td><td>18000-45</td><td>To sterilize instruments between mice if you are performing multiple surgeries (it is not sufficient to soak instruments in ethanol)</td></tr><tr><td>Electric razor</td><td>Braintree Scientific</td><td>CLP-22965</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Tape</td><td>Durapore</td><td>1538-0</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>1 ml Syringe</td><td>EXELint</td><td>26044</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Sterile cotton tipped applicators</td><td>Kendall</td><td>8884541300</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Absorbent BenchPad</td><td>VWR</td><td>56617-014</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Surgical drapes</td><td>VWR</td><td>21902-985</td><td>Need to be autoclaved</td></tr><tr><td>2&amp;rsquo;&amp;rsquo; x 2&amp;rsquo;&amp;rsquo; Gauze Pads</td><td>Medi-First</td><td>60673</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Sterile gloves</td><td>Cardinal Health</td><td>2D7251</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Table 3. Equipment and instruments for I/R surgery.&lt;/strong&gt;</td></tr></tbody></table>

ischemia-reperfusion model of acute kidney injury and post injury fibrosis in mice

يستخدم نقص التروية-ضخه يسببها إصابة الكلى الحاد (IR-آكي) على نطاق واسع كنموذج للآكي في الفئران، ولكن النتائج غالبا ما تكون متغير تماما مع معدلات وفيات عالية، وغالبا ما يتم الإبلاغ عنها والتي قد تربك التحليلات. يستخدم الثنائية الكلوي تحامل عنيق عادة للحث على IR-آكي، لكن الخلافات بين الضغوط المشبك الفعالة و / أو استجابات الكلوي إلى نقص تروية الكلى بين غالبا ما تؤدي إلى نتائج أكثر متغير. وبالإضافة إلى ذلك، ومن المعروف مرات المشبك أقصر للحث على إصابة أنبوبي أكثر متغير، وبينما الفئران التي تمر الإصابة الثنائية مع أوقات المشبك يعد تطوير أنبوبي إصابة أكثر اتساقا، فإنهم غالبا ما يموت في غضون أول 3 أيام بعد الإصابة بسبب قصور كلوي حاد. لتحسين البقاء على قيد الحياة بعد الإصابة والحصول على نتائج أكثر اتساقا ويمكن التنبؤ بها، وقد وضعنا نموذجين من جانب واحد إصابة نقص التروية-ضخه تليها استئصال الكلية المقابل. يتم تنفيذ كل العمليات الجراحية باستخدام نهج الظهرية، والحد من الإجهاد الجراحية الناتجة جمعةROM البطن بطني، وتستخدم عادة لجراحات IR-آكي الماوس. لتحريض إصابة BALB / ج الفئران معتدلة الخضوع من جانب واحد لقط من عنيق الكلوي لمدة 26 دقيقة، والخضوع أيضا استئصال الكلية المقابل في وقت واحد. باستخدام هذا النهج، 50-60٪ من الفئران تطوير معتدلة آكي 24 ساعة بعد الاصابة لكن 90-100٪ من الفئران البقاء على قيد الحياة. للحث على آكي أكثر شدة، والفئران BALB / ج الخضوع عنيق الكلوي لقط لمدة 30 دقيقة تليها استئصال الكلية المقابل بعد 8 أيام الإصابة. وهذا يسمح التقييم الوظيفي للانتعاش الكلوي بعد الإصابة مع بقاء 90-100٪. الضرر أنبوبي بعد الإصابة في وقت مبكر، فضلا عن إصابة آخر التليف هي متسقة للغاية باستخدام هذا النموذج.

معتدل الأشعة تحت الحمراء التي يسببها آكي. الأشعة تحت الحمراء من جانب واحد في وقت واحد مع استئصال الكلية المقابل يقلل كثيرا من التباين في النتائج، ولكن مع أوقات أقصر المشبك اللازمة لالفئران البقاء على قيد الحياة هذا الإجراء، ونحن لا يزال وجد أن٪ فقط 50-60 من ال?...

Watch this Scientific Journal Video about Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice at JoVE.com

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

نحن تصف نماذج من إصابة الكلى نقص التروية-ضخه التي يسببها المعتدلة والشديدة والتي الفئران الخضوع من جانب واحد الكلوي عنيق لقط تليها في وقت واحد أو تأخر استئصال الكلية المقابل، على التوالي. هذه النماذج تعطي باستمرار يؤدي إلى الفشل الكلوي وتليف بعد الاصابه، ولكن شدة الإصابة والبقاء على قيد الحياة تعتمد على خلفية والعمر والمعدات الجراحية الماوس.

نقص التروية-ضخه نموذج من إصابة الكلى الحاد والتليف آخر الاصابات في الفئران

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

ischemia-reperfusion-model-acute-kidney-injury-post-injury-fibrosis

Research

JoVE Journal

Medicine

39.5K Views.  Vanderbilt University Medical Center. نحن تصف نماذج من إصابة الكلى نقص التروية-ضخه التي يسببها المعتدلة والشديدة والتي الفئران الخضوع من جانب واحد الكلوي عنيق لقط تليها في وقت واحد أو تأخر استئصال الكلية المقابل، على التوالي. هذه النماذج تعطي باستمرار يؤدي إلى الفشل الكلوي وتليف بعد الاصابه، ولكن ش...

Video: Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused by whole-body hypoperfusion.5,6 Successful reproduction of whole-body hypoperfusion in rodent models has been fraught with 
difficulty.7-9,9,10 Models which employ focal ischemia have repeatedly demonstrated results which do not translate to the clinical setting, and larger 
animal models which allow for whole body hypoperfusion lack access to the full toolset of genetic manipulation possible in the mouse.11,12 However, in recent 
years a mouse model of cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation has emerged which can be adapted to model AKI.13 This model reliably reproduces 
physiologic, functional, anatomic, and histologic outcomes seen in clinical AKI, is rapidly repeatable, and offers all of the significant advantages of a murine surgical 
model, including access to genetic manipulative techniques, low cost relative to large animals, and ease of use. Our group has developed extensive experience 
with use of this model to assess a number of organ-specific outcomes in AKI.14,15

A powerful model for perioperative and critical care related acute kidney injury is presented. Using whole body hypoperfusion induced by cardiac arrest it is possible to nearly replicate the histologic and functional changes of clinical AKI.

توقف القلب والإنعاش القلبي Normothermic : نموذج الفأر من نقص التروية ، إعادة إشباع الخلايا الإصابات

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable during renal transplantation. Experimental models that accurately and reproducibly recapitulate renal IRI are crucial in dissecting the pathophysiology of AKI and the development of novel therapeutic agents. Presented here is a mouse model of renal IRI that results in reproducible AKI. This is achieved by a midline laparotomy approach for the surgery with one incision allowing both a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia of the left kidney. By careful monitoring of the clamp position and body temperature during the period of ischaemia this model achieves reproducible functional and structural injury. Mice sacrificed 24 hr&#160;following surgery demonstrate loss of renal function with elevation of the serum or plasma creatinine level as well as structural kidney damage with acute tubular necrosis evident. Renal function improves and the acute tissue injury resolves during the course of 7 days following renal IRI such that this model may be used to study renal regeneration. This model of renal IRI has been utilized to study the molecular and cellular pathophysiology of AKI as well as analysis of the subsequent renal regeneration.

The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

الكلوي ونقص الأوكسجين إعادة إشباع الخلايا الإصابات: نموذج الفأر من الإصابات والتجديد

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

نموذج الفئران من المعوية الإسكيمية-ضخه إصابة

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, diabetic retinopathy, and retinal vascular occlusions. Rodent models of I/R injury are providing significant insights into mechanisms and treatment strategies for human I/R injury, especially with regard to neurodegenerative damage in the retinal neurovascular unit. Presented here is a protocol for inducing retinal I/R injury in mice through elevation of intraocular pressure (IOP). In this protocol, the ocular anterior chamber is cannulated with a needle, through which flows the drip of an elevated saline reservoir. Using this drip to raise IOP above systolic arterial blood pressure, a practitioner temporarily halts inner retinal blood flow (ischemia). When circulation is reinstated (reperfusion) by removal of the cannula, severe cellular damage ensues, resulting ultimately in retinal neurodegeneration. Recent studies demonstrate inflammation, vascular permeability, and capillary degeneration as additional elements of this model. Compared to alternative retinal I/R methodologies, such as retinal arterial ligation, retinal I/R injury by elevated IOP offers advantages in its&#160;anatomical specificity, experimental tractability, and technical accessibility, presenting itself as a valuable tool for examining neuronal pathogenesis and therapy in the retinal neurovascular unit.

This article describes a procedure for inducing retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure in mice. Retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure serves to model human pathologies characterized by compromised oxygen and nutrient delivery in the retina, enabling researchers to examine potential cellular mechanisms and treatments for human diseases of the retinal neurovascular unit.

نموذج الفأر من الشبكية الإسكيمية-ضخه إصابة خلال ارتفاع ضغط العين

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

تقييم احتياطي التدفق التاجي بعد إعادة ضخ الإقفارية عضلة القلب في الفئران

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

An Effective Mouse Model of Unilateral Renal Ischemia-Reperfusion Injury

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models are the only available resources that mimic the complexities of the IRI-associated damage encountered in vivo. This paper describes an effective mouse model of unilateral renal IRI that delivers highly reproducible data. Ischemia is induced by occluding the right renal pedicle for 30 min followed by reperfusion. In addition to the surgical procedure, a sequential overview of the expected physiological and histopathological changes following renal IRI will be provided by comparing data from seven different reperfusion times (4 h, 8 h, 16 h, 1 day, 2 days, 4 days, and 7 days). Critical data for planning experiments ahead, such as mean surgical time, average anesthetic consumption, and body weight changes over time, will be shared. This work will help researchers implement a reliable renal IRI model and select the appropriate reperfusion time that aligns with their intended investigative goals.

Renal ischemia-reperfusion injury is associated with high morbidity and mortality in hospitalized patients. Here, we present a simple and effective mouse model of unilateral renal ischemia-reperfusion injury and provide a sequential overview of representative pathological changes observed in the kidney.

نموذج فعال للفأر لإصابة نقص التروية الكلوية أحادية الجانب

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a prerequisite for studying the physiology of the isolated organ and for many innovative applications that may be possible in the future, including perfusion decellularization for kidney bioengineering or the administration of anti-rejection or genome-editing drugs in high doses to prime the kidney for transplantation. During the time of the perfusion, the kidney can be manipulated, renal function can be assessed, and various pharmaceuticals administered. After the procedure, the kidney can be transplanted or processed for molecular biology, biochemical analysis, or microscopy.
This paper describes the perfusate and the surgical technique needed for the ex vivo perfusion of mouse kidneys. Details of the perfusion apparatus are given and data are presented showing the viability of the kidney&#39;s preparation: renal blood flow, vascular resistance, and urine data as functional, transmission electron micrographs of different nephron segments as morphological readouts, and western blots of transport proteins of different nephron segments as molecular readout.

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. The buffers and surgical technique are described in detail.

الماوس معزولة تقنية الكلى Perfused

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Biology

Technical Refinement of a Bilateral Renal Ischemia-Reperfusion Mouse Model for Acute Kidney Injury Research

Cardiac arrest poses a large public health burden. Acute kidney injury (AKI) is an adverse marker in survivors of cardiac arrest following the return of spontaneous circulation (ROSC) after successful cardiopulmonary resuscitation. Conversely, recovery of kidney function from AKI is a predictor of favorable neurological outcomes and hospital discharge. However, an effective intervention to prevent kidney damage caused by cardiac arrest after ROSC is lacking, suggesting that additional therapeutic strategies are required. Renal hypoperfusion and reperfusion are two pathophysiological mechanisms that cause AKI after cardiac arrest. Animal models of ischemia-reperfusion-induced AKI (IR-AKI) of both kidneys are comparable with patients with AKI following ROSC in a clinical setting. However, IR-AKI of both kidneys is technically challenging to analyze because the model is associated with high mortality and wide variation in kidney damage, which may affect the analysis. Lightweight mice were chosen, placed under general anesthesia with isoflurane, subjected to surgery with a dorsolateral approach, and their body temperature maintained during operation, thereby reducing tissue damage and establishing a reproducible acute renal IR-AKI research protocol.

This study established a protocol focusing on the technical refinement of a mouse model of bilateral renal ischemia-reperfusion for acute kidney injury research.

التحسين التقني لنموذج فأر ثنائي لنقص التروية الكلوية لأبحاث إصابات الكلى الحادة

Cardiac arrest poses a large public health burden. Acute kidney injury (AKI) is an adverse marker in survivors of cardiac arrest following the return of ...

Developing Murine Acute Kidney Injury Model Using Bilateral Ischemia-Reperfusion

Bilateral Renal Ischemia-Reperfusion Model for Acute Kidney Injury in Mice

Acute kidney injury (AKI) is defined as a rapid decline in renal function, in which persistent kidney dysfunction gradually progresses to chronic kidney disease (CKD) due to the irreversible loss of nephrons and their maladaptive repair. In recent years, the incidence of AKI has been increasing concerning diverse etiologies, including volume depletion, sepsis, nephrotoxicity, muscle injury, and major trauma, in which ischemia-reperfusion injury (IRI)&#160;accounts for most episodes. Development of the IRI model in mice is induced by surgical clamping of the renal pedicles, which provides powerful and controllable tools for preclinical models of AKI. Importantly, the IRI model is deployed at different stages of the AKI development, especially in the processes of AKI to CKD. Despite the IRI model being widely practiced in many laboratories, a series of variables still influence the results of this model. Here, we describe the procedure of IRI model development to provide a repeatable and reliable method for researchers to explore the underlying pathogenesis in the development of AKI and the progression of AKI to CKD.

The ischemia-reperfusion injury (IRI) model can be used at different stages of acute kidney injury (AKI) development, especially during AKI to chronic kidney disease (CKD) progression. Here, we describe the procedure for IRI model development in mice via a trans-abdominal approach, clamping renal pedicles via a vascular clip to induce ischemic injury.

Acute kidney injury (AKI) is defined as a rapid decline in renal function, in which persistent kidney dysfunction gradually progresses to chronic kidney ...

Unilateral Ureteral Obstruction Model for Investigating Kidney Interstitial Fibrosis

Kidney fibrosis is the final pathological outcome of progressive chronic kidney disease (CKD). The unilateral ureteral obstruction (UUO) model is widely used to elucidate the molecular and cellular mechanisms underlying kidney interstitial fibrosis and to identify potential therapeutic targets. This model is established in mice through surgical ligation of a unilateral ureter, a procedure that is relatively straightforward and easy to perform. However, the UUO mouse model is known to exhibit significant variability and inconsistency, influenced by factors such as mouse strain, age, sex, anesthesia type, duration of surgery, body temperature during the procedure, the operator's surgical skills, feeding conditions, and the overall health status of the mice. Variations in surgical techniques, suture placement, and the duration of obstruction contribute to the variability in outcomes. Additionally, inconsistent sampling of obstructed kidneys further increases variability in the assessment of kidney fibrosis. This study outlines the process of developing the UUO mouse model and evaluating interstitial fibrosis, discusses the technical challenges contributing to the model's unpredictability, and proposes potential solutions. These insights aim to establish a more standardized and universally applicable approach for investigating kidney fibrosis.

This protocol describes a method for inducing unilateral ureteral obstruction (UUO) in mice to study the progression of tissue fibrosis in obstructive nephropathy. It includes surgical procedures, post-operative care, and methods for fibrosis assessment.

Kidney fibrosis is the final pathological outcome of progressive chronic kidney disease (CKD). The unilateral ureteral obstruction (UUO) model is widely ...