نشكر كريس بستر لأداء التجارب الأولية هو مبين في الشكل (3) من نتائج ممثل وجيسون كريس واتس ويبستر لتعليقات مفيدة على المخطوطة. تم توفير التمويل لهذه الدراسة عن طريق منحة من المعاهد الوطنية للصحة (الولايات المتحدة الأمريكية) (R01DK074114) لJLW. وقدمت بعض سلالات النيماتودا المستخدمة في هذا العمل من قبل مركز علم الوراثة انواع معينة، والذي يتم تمويله من قبل المعاهد الوطنية للصحة مكتب برامج البنية التحتية للبحوث (P40 OD010440).

الأحماض الدهنية المتعددة غير المشبعة هي حساسة للحرارة والضوء والأكسجين. لذا، يجب توخي الحذر عند إعداد لوحات مكملات الأحماض الدهنية الأحماض الدهنية بحيث لا يتعرض للحرارة الزائدة وضوء. وسائل الإعلام NGM تحتوي على 0.1٪ Tergitol (NP-40) وتعقيمها وتبريده بشكل جزئي، وبعد ذلك تضاف أملاح الصوديوم الأحماض الدهنية مع التحريك المستمر. ويسمح لوحات لتجف في الظلام. امتصاص الأحماض الدهنية بواسطة C. مثقف ايليجانس على هذه اللوحات ومن ثم يمكن رصدها من قبل اللوني للغاز. 1. إعداد الأحماض الدهنية تستكمل وسائل الإعلام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس من مكونات وسائل الإعلام إلى قارورة بحجم مناسب. لكل 1 لتر، إضافة 17 غرام Bacto أجار، 2.5 غرام تريبتون، 3 غرام كلوريد الصوديوم، 1 مل 5 ملغ / مل الكولسترول الذائبة في الايثانول، و 10 مل 10٪ Tergitol المذاب في الماء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 80٪ من حجم المطلوب النهائي من الماء ميليبور والأوتوكلاف وسائل الإعلام جنبا إلى جنب مع الزجاجات الفارغة (مساو لعدد من مختلفتركيزات الأحماض الدهنية لفحصها)، وكذلك مناسبة تخرج اسطوانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسائل الاعلام بارد في حمام مائي تعيين إلى 55 درجة مئوية. في حين أن وسائل الإعلام والتبريد إعداد محلول المخزون عمل ملح الصوديوم الأحماض الدهنية عن طريق كسر فتح قارورة زجاجية، وذلك باستخدام احتياطات السلامة وضمان جزيئات الزجاج لا خلط في مع الأحماض الدهنية. تزن بها ما يكفي من الأحماض الدهنية لجعل مخزون العمل 100 ملم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقيق الحل الأحماض الدهنية إلى تركيز النهائي من 100 ملم مع الماء النقي. حل تماما الأحماض الدهنية ملح الصوديوم عادة يستغرق حوالي 20-30 دقيقة. تطهير الأسهم العمل من الأحماض الدهنية مع الأرجون أو النيتروجين، لأن الاتصال مع غاز خامل يمنع الأكسدة. قبعة القارورة وتخزين الأوراق المالية تعمل في الظلام حتى يبرد وسائل الإعلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (اختياري) إذا كان المطلوب رني وسائل الإعلام، وقياس الأمبيسلين والآيزوبروبيل β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) الحلول هنا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما تبرد آغار إلى 55 درجة مئوية إضافة لكل 1 L: 1مل من 1 M MgSO 4، 1 مل من 1 M و CaCl 2، و 25 مل من العازلة الفوسفات (108.3 ز KH 2 PO 4 و 35.6 ز K 2 هبو 4 في 1 L تعقيمها). إضافة عامل تصفية تعقيمها الأمبيسلين والحلول IPTG إذا صنع لوحات رني. لجميع أنواع لوحات، إضافة الماء المعقم لتبرزي حجم وسائل الاعلام النهائية إلى 1 L. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بالقرب من لهب، ونقل وسائل الإعلام لتعقيمها ومناسب الحجم الاسطوانة ثم إضافة الماء المعقم الدافئ لحجم المطلوب. نقل وسائل الإعلام إلى القارورة الأولي وتخلط بواسطة التحريك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بالقرب من لهب، ونقل وسائل الإعلام إلى عدد من زجاجات مساو لعدد من تركيزات لفحصها عن طريق قياس مع تعقيمها وبحجم مناسب اسطوانة تخرج. الحفاظ على وسائل الإعلام aliquoted كسائل باستخدام حمام مائي حتى يذوب الأسهم تعمل الأحماض الدهنية تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع زجاجة واحدة على طبق من ضجة وضجة حتى وسائل الاعلام هو لمسة دافئة، ولكن ليس الساخن. تأكد من أن تترك نفسك بما فيه الكفايةالوقت لاثارة في حل الأسهم الأحماض الدهنية وتصب لوحات قبل أن تبدأ وسائل الإعلام لترسيخ. إذا وحة ضجة لديه التحكم في درجة الحرارة، وضبطها إلى 55 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع الأسهم العمل 100 ملم الأحماض الدهنية إلى وسائل الإعلام للتركيز النهائي المطلوب. وسائل الاعلام ضجة حتى راسب أبيض في حل (حوالي 1 دقيقة). قد تكون وسائل الاعلام لا تزال غائمة قليلا بعد ذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (اختياري) إذا كان المطلوب رني وسائل الاعلام الوظيفة الأمبيسلين إلى 0.1 ملغ / مل وIPTG إلى 2 ملي تركيز النهائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب سائل الإعلام باستخدام المساعدات ماصة الآلي ومعقم 25 مل ماصة، مضيفا 8 مل من وسائل الإعلام في 60 ملم لوحة أو 25 مل من وسائل الإعلام لكل 100 ملم لوحة. تكرار الدهنية حمض بالإضافة لوحة وسكب خطوات لزجاجات المتبقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن عزز آغار، وتغطي لوحات تستكمل الأحماض الدهنية مع مربع أو تخزينها في درجة حرارة الغرفة في درج تنفيس جيدا للحماية من الأكسدة الخفيفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البذور E. القولونية OP50 على لوحات بعد يومين جفت لوحات.لوحات 60 مم، ماصة 300 ميكرولتر من ثقافة OP50 بين عشية وضحاها (نمت عند 37 درجة مئوية). إذا تم سكب وحات رني، البذور مع 300 ميكرولتر من البكتيريا رني بعد أن جفت لوحات لمدة أربعة أيام. قد تحتاج لوحة وقت التجفيف لتعديلها بسبب الاختلافات في نسبة الرطوبة في البيئات المختبر المختلفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لوحات في بيئة مظلمة في درجة حرارة الغرفة في حين أن العشب البكتيرية والتجفيف. </li></ol> 2. حمل جرثومة تدمير الخلايا بواسطة مكملات من DGLA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> C. ايليجانس نمت على لوحات تحتوي على 0.3 ملي DGLA (20:03 ن 6) تصبح عقيمة بسبب تدمير الخلايا الجرثومية في كل مرحلة اليرقات والديدان الخيطية الكبار. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد السكان متزامنة من L1 اليرقات عن طريق علاج المنحرفين حامل مع محلول هيبوكلوريت القلوية (عن حل 10 مل: 0.5 مل من هيدروكسيد الصوديوم 5M، 2.5 مل من التبييض المنزلي، و 7 مل H 2 O). صخرة بلطف حامل المنحرفين في هذا الحل حتى الدودةق حل. سيتم الحفاظ البيض، ويمكن من خلال مكعبات انخفاض سرعة الطرد المركزي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل إعداد البيض 3 مرات في المنطقة العازلة M9 (3 غ KH 2 PO 4، 6 ز نا 2 هبو 4، 5 غرام كلوريد الصوديوم، 1 مل 1 M MgSO 4، H 2 O إلى 1 L. إضافة MgSO 4 بعد التعقيم). لتوفير ما يكفي من الأوكسجين، resuspend والبيض في 15 مل أنبوب بلاستيكي إلى الحجم النهائي من 5 مل من العازلة M9 والصخور على شاكر بين عشية وضحاها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي أن يضاف L1 اليرقات إلى لوحات تستكمل بعد يومين من البذر مع OP50، أو يوم واحد بعد الطلاء البكتيريا رني. احتضان الديدان عند 20 درجة مئوية لمدة ثلاثة أيام أو حتى تصل إلى مرحلة البلوغ. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الديدان البالغة يمكن سجل للعقم باستخدام مجهر تشريح مع التكبير عالية بما يكفي لتصور الأجنة النامية في الرحم. ستظهر ناجحة فقدان الخلية الجرثومية كما فراغا الرحم واضحة من البيض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن أيضا أن الديدان سجل عن طريق تحديد وتلطيخ مع النووي وإدارة البحث الجنائي صبغ diamindinophenylindole (دابي)، مما يسهل التصور من النوى في الخلايا الجرثومية والأجنة النامية. ويتحقق وصمة عار دابي السريع عن طريق التقاط الديدان إلى قطرة من العازلة M9 على زجاجة ساعة 9. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفيضانات ساعة من الزجاج مع 1 مل من 0.2 نانوغرام / م. دابي في 95٪ من محلول الإيثانول، واسمحوا الجلوس لمدة حوالي 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار الديدان إلى قطرة من VectaShield على شريحة، ومن ثم تغطية مع ساترة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم ساترة وتخزينها في 4 درجات مئوية في الظلام ليلة وضحاها لتلطيخ الأمثل، ولكن الشرائح ويمكن أيضا أن ينظر إليها على الفور. يسجل لوجود أو عدم وجود نواة الخلية الجرثومية باستخدام المجهر مضان مجهزة مع مصباح الأشعة فوق البنفسجية والتصفية. </li></ol></li></ol> 3. مؤكدا امتصاص الأحماض الدهنية بواسطة اللوني للغاز عموما تكوين الأحماض الدهنية من C. يمكن تحديد ايليجانس من خلال إنتاج استرات الميثيل الأحماض الدهنية (جوع) والتي يتم فصلها وكميا باستخدام مركز حقوق الإنسان الغازomatography 4. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع 500-1،000 الديدان البالغة عن طريق غسل أجبرتها على الفرار من لوحات بالماء ونقل إلى silanized 13 مم × 100 مم الزجاج أنبوب رأس المسمار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اسمحوا الديدان تسوية عن طريق الجاذبية، ثم قم بإزالة الماء قدر الإمكان مع ماصة باستير الزجاج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الديدان مرة واحدة مع الماء، ثم مرة أخرى إزالة الماء قدر الإمكان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتشكل جوع بإضافة 1 مل من 2.5٪ H 2 SO 4 في الميثانول، ومن ثم التدفئة على 70 درجة مئوية لمدة 1 ساعة في حمام مائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أنابيب من حمام الماء وتبرد لمدة 1 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخراج جوع عن طريق إضافة 1.5 مل من الماء و 0.25 مل من الهكسان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنابيب خلاصة ويهز بقوة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنابيب الطرد المركزي في جهاز للطرد المركزي السريرية الطاولة لمدة 1 دقيقة في أقصى سرعة لفصل الهكسان من المذيبات المائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الهكسان (الطبقة العليا) إلى إدراج قارورة GC داخل قارورة GC، والحرص على عدم نقل أي من المرحلة المائية. لGC لnalysis، يتم حقن 1-2 ميكرولتر من جوع في الهكسان الصعود إلى القطبية الشعرية العمود اللوني للغاز مناسبة لتحليل جوع. يتم تعيين حاقن GC اجيلنت 7890 في 250 درجة مئوية، مع معدل تدفق 1.4 مل / دقيقة، ومبرمجة الفرن GC لدرجة الحرارة الأولية من 130 درجة مئوية، الذي يقام لمدة 1 دقيقة. في وقت لاحق، ورفعت درجة حرارة 10 ° C / دقيقة حتى 190 درجة مئوية، ثم رفعت مرة أخرى في 5 ° C / دقيقة حتى 210 درجة مئوية واحتجز لمدة 1 دقيقة اضافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لضمان أن حدث امتصاص DGLA وتحليل جوع بواسطة اللهب كشف التأين (ااا) أو مطياف الكتلة (MS) كشف، وذلك باستخدام معايير أصيلة لتحديد C. ايليجانس الأحماض الدهنية. </li></ol>

<ol>
	<li>Haeggstrom, J. Z., Funk, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipoxygenase+and+leukotriene+pathways:+biochemistry,+biology,+and+roles+in+disease.">Lipoxygenase and leukotriene pathways: biochemistry, biology, and roles in disease.</a> Chem. Rev. 111, 5866-5898 (2011).</li><li>de Lorgeril, M., Salen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+health+effects+of+dietary+saturated+and+omega-6+and+omega-3+polyunsaturated+fatty+acids.">New insights into the health effects of dietary saturated and omega-6 and omega-3 polyunsaturated fatty acids.</a> BMC Med. 10, 50 (2012).</li><li>Spychalla, J. P., Kinney, A. J., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+an+animal+omega-3+fatty+acid+desaturase+by+heterologous+expression+in+Arabidopsis.">Identification of an animal omega-3 fatty acid desaturase by heterologous expression in Arabidopsis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 1142-1147 (1997).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+polyunsaturated+fatty+acid+synthesis+in+Caenorhabditis+elegans.">Genetic dissection of polyunsaturated fatty acid synthesis in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 5854-5859 (2002).</li><li>Watts, J. L., Phillips, E., Griffing, K. R., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiencies+in+C20+Polyunsaturated+Fatty+Acids+Cause+Behavioral+and+Developmental+Defects+in+Caenorhabditis+elegans+fat-3+Mutants.">Deficiencies in C20 Polyunsaturated Fatty Acids Cause Behavioral and Developmental Defects in Caenorhabditis elegans fat-3 Mutants.</a> Genetics. 163, 581-589 (2003).</li><li>Kahn-Kirby, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+Polyunsaturated+Fatty+Acids+Drive+TRPV-Dependent+Sensory+Signaling+In+Vivo.">Specific Polyunsaturated Fatty Acids Drive TRPV-Dependent Sensory Signaling In Vivo.</a> Cell. 119, 889-900 (2004).</li><li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+regulation+of+unsaturated+fatty+acid+composition+in+C.+elegans.">Genetic regulation of unsaturated fatty acid composition in C. elegans.</a> PLoS Genet. 2, e108 (2006).</li><li>Webster, C. M., Deline, M. L., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+response+pathways+protect+germ+cells+from+omega-6+polyunsaturated+fatty+acid-mediated+toxicity+in+Caenorhabditis+elegans.">Stress response pathways protect germ cells from omega-6 polyunsaturated fatty acid-mediated toxicity in Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 373, 14-25 (2013).</li><li>Kadyk, L. C., Lambie, E. J., Kimble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=glp-3+is+required+for+mitosis+and+meiosis+in+the+Caenorhabditis+elegans+germ+line.">glp-3 is required for mitosis and meiosis in the Caenorhabditis elegans germ line.</a> Genetics. 145, 111-121 (1997).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+manipulation+implicates+lipid+signaling+in+the+regulation+of+germ+cell+maintenance+in+C.+elegans.">Dietary manipulation implicates lipid signaling in the regulation of germ cell maintenance in C. elegans.</a> Dev. Biol. 292, 381-392 (2006).</li><li>Pryor, W. A., Stanley, J. P., Blair, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoxidation+of+polyunsaturated+fatty+acids:+II.+A+suggested+mechanism+for+the+formation+of+TBA-reactive+materials+from+prostaglandin-like+endoperoxides.">Autoxidation of polyunsaturated fatty acids: II. A suggested mechanism for the formation of TBA-reactive materials from prostaglandin-like endoperoxides.</a> Lipids. 11, 370-379 (1976).</li><li>Kniazeva, M., Shen, H., Euler, T., Wang, C., Han, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+maternal+phospholipid+composition+and+IP(3)-dependent+embryonic+membrane+dynamics+by+a+specific+fatty+acid+metabolic+event+in+C.+elegans.">Regulation of maternal phospholipid composition and IP(3)-dependent embryonic membrane dynamics by a specific fatty acid metabolic event in C. elegans.</a> Genes Dev. 26, 554-566 (2012).</li><li>Edmonds, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin/FOXO+signaling+regulates+ovarian+prostaglandins+critical+for+reproduction.">Insulin/FOXO signaling regulates ovarian prostaglandins critical for reproduction.</a> Dev. Cell. 19, 858-871 (2010).</li><li>O'Rourke, E. J., Kuballa, P., Xavier, R., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=omega-6+Polyunsaturated+fatty+acids+extend+life+span+through+the+activation+of+autophagy.">omega-6 Polyunsaturated fatty acids extend life span through the activation of autophagy.</a> Genes Dev. 27, 429-440 (2013).</li><li>Taubert, S., Van Gilst, M. R., Hansen, M., Yamamoto, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mediator+subunit,+MDT-15,+integrates+regulation+of+fatty+acid+metabolism+by+NHR-49-dependent+and+-independent+pathways+in+C.+elegans.">A Mediator subunit, MDT-15, integrates regulation of fatty acid metabolism by NHR-49-dependent and -independent pathways in C. elegans.</a> Genes Dev. 20, 1137-1149 (2006).</li><li>Lesa, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+chain+polyunsaturated+fatty+acids+are+required+for+efficient+neurotransmission+in+C.+elegans.">Long chain polyunsaturated fatty acids are required for efficient neurotransmission in C. elegans.</a> J. Cell Sci. 116, 4965-4975 (2003).</li><li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+desaturation+and+the+regulation+of+adiposity+in+Caenorhabditis+elegans.">Fatty acid desaturation and the regulation of adiposity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 176, 865-875 (2007).</li><li>Goudeau, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+desaturation+links+germ+cell+loss+to+longevity+through+NHR-80/HNF4+in+C.+elegans.">Fatty acid desaturation links germ cell loss to longevity through NHR-80/HNF4 in C. elegans.</a> PLoS Biol. 9, e1000599 (2011).</li><li>Yang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ARC/Mediator+subunit+required+for+SREBP+control+of+cholesterol+and+lipid+homeostasis.">An ARC/Mediator subunit required for SREBP control of cholesterol and lipid homeostasis.</a> Nature. 442, 700-704 (2006).</li></ol>

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

نحن هنا تصف طريقة مكملات من C. ايليجانس مع الأحماض الدهنية غير المشبعة الغذائية. كما ذكر أعلاه، يجب توخي الحذر في إعداد لوحات بوفا تستكمل بسبب طبيعة رد الفعل من سندات مزدوجة في PUFAs يسبب هذه الأحماض الدهنية أن تكون حساسة للأكسدة من خلال الحرارة والضوء 11. لتجن?...

الأحماض الدهنية هي المكونات الهيكلية الأساسية للأغشية وكذلك جزيئات تخزين الطاقة بكفاءة. بالإضافة إلى ذلك، والأحماض الدهنية يمكن المشقوق من الأغشية الخلوية عن طريق الليباز ويمكن تعديل إنزيمي لإنتاج إشارة المستجيبات 1. تحدث بشكل طبيعي الأحماض الدهنية المتعددة غير المشبعة (PUFAs) تحتوي على اثنين أو أكثر من روابط مزدوجة رابطة الدول المستقلة. وتتميز الأحماض الدهنية أوميغا 3 والأحماض الدهنية أوميغا 6 من بعضها البعض على أساس المواقف من السندات مزدوجة فيما يتعلق نهاية الميثيل للحمض الدهني. النظم الغذائية الصحية تتطلب كلا أوميغا 3 الأحماض الدهنية أوميغا 6 و. ومع ذلك، الوجبات الغربية غنية وخاصة في أحماض أوميغا 6 والأحماض الدهنية والفقراء في أحماض أوميغا 3 الدهنية. ويرتبط أوميغا 6 ارتفاع نسبة أوميغا 3 الأحماض الدهنية لمع زيادة مخاطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية والتهابات، ولكن، وظائف محددة المفيدة والضارة من الأحماض الدهنية محددة وغير مفهومة جيدا 2. الدودة رائع والذوا انواع معينةنانوثانية مفيد في دراسة الدهنية حمض ظيفة لأنه يجمع كل من الإنزيمات اللازمة لإنتاج مجموعة من الأحماض أوميغا 6 وأوميغا 3 الدهنية، بما في ذلك desaturase أوميغا 3، وهو نشاط غير موجودة في معظم الحيوانات 3،4. المسوخ التي تفتقر إلى الانزيمات الدهنية حمض desaturase تفشل لإنتاج PUFAs محددة، مما يؤدي إلى مجموعة من العيوب التنموية والعصبية 4-6. لدراسة الآثار الفسيولوجية من الأحماض الدهنية الغذائية، وقد وضعنا مقايسة البيوكيميائية متوافقة مع التحليل الجيني باستخدام كل متحولة ورني تقنيات تدق إلى أسفل في C. ايليجانس. ويتحقق مكملات مع PUFAs معينة عن طريق إضافة الأحماض الدهنية الحل ملح الصوديوم إلى المتوسطة أجار قبل صب. هذه النتائج في بوفا امتصاص من قبل E. مصدر الغذاء القولونية، حيث يتراكم في الأغشية البكتيرية. C. ايليجانس استيعاب البكتيريا التي تحتوي على بوفا، وهذه المكملات الغذائية هي كافية لانقاذ defecTS من المسوخ بوفا التي تعاني من نقص. مكملات معظم الأحماض الدهنية ليس له أي آثار ضارة على نوع الحيوانات البرية، ومع ذلك، أوميغا 6 والأحماض الدهنية محددة، وخاصة dihomo غاما حمض اللينولينيك (DGLA، 20:03 ن 6) يسبب الدمار الدائمين في C. الخلايا الجرثومية ايليجانس 7،8. ويستخدم الغاز اللوني لمراقبة امتصاص الأحماض الدهنية تستكمل في مصدر الغذائي الجرثومي (إما OP50 أو HT115)، وكذلك في الديدان الخيطية. إضافة إلى Tergitol المنظفات (NP-40) في وسائل الإعلام حتى يسمح لتوزيع الأحماض الدهنية من خلال لوحة كاملة وأكثر كفاءة امتصاص الأحماض الدهنية من قبل E. القولونية والديدان الخيطية. لقد وجدنا أن الأحماض الدهنية غير المشبعة تؤخذ بسهولة من قبل البكتيريا وC. ايليجانس، ولكن امتصاص الأحماض الدهنية المشبعة أقل كفاءة بكثير. هذه المادة سوف تصف خطوة بخطوة كيفية استكمال وسائل الإعلام أجار مع الأحماض الدهنية، وكذلك كيفية مراقبة امتصاص الأحماض الدهنية في اله الديدان الخيطية باستخدام كروماتوغرافيا الغاز.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="765">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Bacto-Agar</td>
			<td style="width:128px;">Difco</td>
			<td style="width:155px;">214010</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Tryptone</td>
			<td style="width:128px;">Difco</td>
			<td style="width:155px;">211705</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">NaCl</td>
			<td style="width:128px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:155px;">3624-05</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Tergitol</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td style="width:155px;">NP40S-500mL</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Cholesterol</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td style="width:155px;">C8667-25G</td>
			<td style="width:275px;">(5 mg/mL in ethanol)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">MgSO4</td>
			<td style="width:128px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:155px;">2504-01</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">CaCl2</td>
			<td style="width:128px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:155px;">1311-01</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">K2HPO4</td>
			<td style="width:128px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:155px;">3254-05</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:128px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:155px;">3246-05</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Sodium dihomogamma linolenate</td>
			<td style="width:128px;">NuCHEK</td>
			<td style="width:155px;">S-1143</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Warm sterile Millipore water</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Sterile water for collecting worms</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Nuclease-free Water for DGLA stock solution</td>
			<td style="width:128px;">Ambion</td>
			<td style="width:155px;">AM9932</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Ampicillin</td>
			<td style="width:128px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">BP1760-25</td>
			<td style="width:275px;">100 mg/ml in water (for RNAi plates)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td style="width:128px;">Gold Biotechnology</td>
			<td style="width:155px;">12481C100</td>
			<td style="width:275px;">1 M in water (for RNAi plates)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">HSO4</td>
			<td style="width:128px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:155px;">9681-03</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Methanol</td>
			<td style="width:128px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">A452-4</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Hexane</td>
			<td style="width:128px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">H302-4</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">diamindinophenylindole (DAPI)</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td style="width:155px;">D9542</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">VectaShield</td>
			<td style="width:128px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:155px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Glass Flask</td>
			<td style="width:128px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">4980-2L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Autoclaveable Glass bottles with stirbars</td>
			<td style="width:128px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:155px;">FB-800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Autoclaveable Glass Graduated Cylinder</td>
			<td style="width:128px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:155px;">08-557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Stir Plate</td>
			<td style="width:128px;">VWR</td>
			<td style="width:155px;">97042-642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Waterbath at 55+ &#176;C</td>
			<td style="width:128px;">Precision Scientific Inc.</td>
			<td style="width:155px;">66551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Screwcap Brown Glass Vial</td>
			<td style="width:128px;">Sun SRI</td>
			<td style="width:155px;">200 494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Argon gas tank</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Automated Pipette aid</td>
			<td style="width:128px;">Pipette-Aid</td>
			<td style="width:155px;">P-90297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Sterile Serological Pipettes (25 ml)</td>
			<td style="width:128px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">4489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Bunsen Burner</td>
			<td style="width:128px;">VWR</td>
			<td style="width:155px;">89038-534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Dissection microscope</td>
			<td style="width:128px;">Leica</td>
			<td style="width:155px;">TLB3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Silanized glass tube</td>
			<td style="width:128px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:155px;">STT-13100-S</td>
			<td>for FAMEs derivitization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:208px;">PTFE Screw caps</td>
			<td style="width:128px;">Kimble-Chase</td>
			<td style="width:155px;">1493015D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Clinical tabletop centrifuge</td>
			<td style="width:128px;">IEC</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">GC Crimp Vial</td>
			<td style="width:128px;">SUN SRi</td>
			<td style="width:155px;">200 000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">GC Vial Insert</td>
			<td style="width:128px;">SUN SRi</td>
			<td style="width:155px;">200 232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">GC Vial cap</td>
			<td style="width:128px;">SUN SRi</td>
			<td style="width:155px;">200 100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Gas Chromatograph</td>
			<td style="width:128px;">Agilent</td>
			<td style="width:155px;">7890A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Mass Spectrometry Detector</td>
			<td style="width:128px;">Agilent</td>
			<td style="width:155px;">5975C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Column for gas chromatography</td>
			<td style="width:128px;">Suppelco</td>
			<td style="width:155px;">SP 2380</td>
			<td>30 m x 0.25 mm fused silica capillary column</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dietary supplementation of polyunsaturated fatty acids in caenorhabditis elegans

الأحماض الدهنية ضرورية للعديد من الوظائف الخلوية. كما أنها تخدم كفاءة جزيئات تخزين الطاقة، وتشكل جوهر مسعور من الأغشية، والمشاركة في مختلف مسارات الإشارات. يجمع جميع انواع معينة ايليجانس من الإنزيمات اللازمة لإنتاج مجموعة من الأحماض أوميغا 6 وأوميغا 3 الدهنية. هذا، جنبا إلى جنب مع علم التشريح بسيطة ومجموعة من الأدوات الجينية المتاحة، وجعلها نموذجا جذابا لدراسة الأحماض الدهنية وظيفة. من أجل التحقيق في مسارات الوراثية التي تتوسط الآثار الفسيولوجية من الأحماض الدهنية الغذائية، قمنا بتطوير طريقة لتكملة C. ايليجانس النظام الغذائي مع الأحماض الدهنية غير المشبعة. مكملات هو وسيلة فعالة لتغيير تكوين الأحماض الدهنية من الديدان، ويمكن أيضا أن تستخدم لانقاذ عيوب في المسوخ التي تعاني من نقص حمض الدهنية. يستخدم أسلوب لدينا الخيطية النمو المتوسطة أجار (NGM) تستكمل مع الأملاح acidsodium الدهنية. الأحماض الدهنية في لوحات تستكمل تصبح incorporaتيد في أغشية المصدر الغذائي البكتيري، والتي يتم بعد ذلك تناولها من قبل C. ايليجانس التي تتغذى على البكتيريا تستكمل. نحن أيضا وصف بروتوكول اللوني للغاز لرصد التغيرات في تكوين الأحماض الدهنية التي تحدث في الديدان تستكمل. هذا هو وسيلة فعالة لتكملة الوجبات الغذائية للسكان على حد سواء كبيرة وصغيرة من C. ايليجانس، والسماح لمجموعة من التطبيقات لهذا الأسلوب.

مكملات من C. ايليجانس نظام غذائي محدود بسبب قدرة المصدر الغذائي الجرثومي لامتصاص ودمج الأحماض الدهنية في غشاء البكتيريا. لتحديد قدرة E. القولونية OP50 لاستيعاب مختلف الأحماض الدهنية في الأغشية لها، ومطلي OP50 على وسائل الإعلام مع عدم وجود ملحق، 0.1 ملم و 0.3 ملم تر?...

Watch this Scientific Journal Video about Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

&lt;EM&gt; انواع معينة elegan &lt;م /&gt; هو نموذج مفيدة لاستكشاف وظائف الأحماض الدهنية غير المشبعة في التنمية وعلم وظائف الأعضاء. يصف هذا البروتوكول وسيلة فعالة لالمكمل لC. &lt;EM&gt; ايليجانس &lt;م /&gt; اتباع نظام غذائي مع الأحماض الدهنية غير المشبعة.

مكملات غذائية من الأحماض الدهنية غير المشبعة في<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

Fatty acids are essential for numerous cellular functions. They serve as efficient energy storage molecules, make up the hydrophobic core of membranes, ...

dietary-supplementation-polyunsaturated-fatty-acids-caenorhabditis

Research

JoVE Journal

Biology

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

17.0K Views.  Washington State University.  انواع معينة elegan هو نموذج مفيدة لاستكشاف وظائف الأحماض الدهنية غير المشبعة في التنمية وعلم وظائف الأعضاء. يصف هذا البروتوكول وسيلة فعالة لالمكمل لC. ايليجانس اتباع نظام غذائي مع الأحماض الدهنية غير المشبعة. 

Video: Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has since been used extensively as a model organism 1. C. elegans possesses key attributes such as simplicity, transparency and short life cycle that have made it a suitable experimental system for fundamental biological studies for many years 2. Discoveries in this nematode have broad implications because many cellular and molecular processes that control animal development are evolutionary conserved 3.
C. elegans life cycle goes through an embryonic stage and four larval stages before animals reach adulthood. Development can take 2 to 4 days depending on the temperature. In each of the stages several characteristic traits can be observed. The knowledge of its complete cell lineage 4,5 together with the deep annotation of its genome turn this nematode into a great model in fields as diverse as the neurobiology 6, aging 7,8, stem cell biology 9 and germ line biology 10. 
An additional feature that makes C. elegans an attractive model to work with is the possibility of obtaining populations of worms synchronized at a specific stage through a relatively easy protocol. The ease of maintaining and propagating this nematode added to the possibility of synchronization provide a powerful tool to obtain large amounts of worms, which can be used for a wide variety of small or high-throughput experiments such as RNAi screens, microarrays, massive sequencing, immunoblot or in situ hybridization, among others. 
Because of its transparency, C. elegans structures can be distinguished under the microscope using Differential Interference Contrast microscopy, also known as Nomarski microscopy. The use of a fluorescent DNA binder, DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole), for instance, can lead to the specific identification and localization of individual cells, as well as subcellular structures/defects associated to them.

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

The easiness of maintaining and propagating the nematode C. elegans make it a nice model organism to work with. The possibility of synchronizing worms allows the work with a significant amount of subjects at the same developmental stage, what facilitates the study of one particular process in many animals.

الأساسية<em&gt; Caenorhabditis ايليجانس</em&gt; طرق: التزامن والمراقبة

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, which are lipid signals derived from polyunsaturated fatty acids (PUFAs)10-14. These signalling molecules are difficult to study because of their low abundance and reactive nature. The characteristic feature of prostaglandins is a cyclopentane ring structure located within the fatty acid backbone. In mammals, prostaglandins can be formed through cyclooxygenase enzyme-dependent and -independent pathways10,15. C. elegans synthesizes a wide array of prostaglandins independent of cyclooxygenases6,16,17. A large class of F-series prostaglandins has been identified, but the study of eicosanoids is at an early stage with ample room for new discoveries. Here we describe a procedure for extracting and analyzing prostaglandins and other eicosanoids. Charged lipids are extracted from mass worm cultures using a liquid-liquid extraction technique and analyzed by liquid chromatography coupled to electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). The inclusion of deuterated analogs of prostaglandins, such as PGF2 &alpha;-d4 as an internal standard is recommended for quantitative analysis. Multiple reaction monitoring or MRM can be used to quantify and compare specific prostaglandin types between wild-type and mutant animals. Collision-induced decomposition or MS/MS can be used to obtain information on important structural features. Liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS) survey scans of a selected mass range, such as m/z 315-360 can be used to evaluate global changes in prostaglandin levels. We provide examples of all three analyses. These methods will provide researchers with a toolset for discovering novel eicosanoids and delineating their metabolic pathways.

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

In this paper, we describe an optimized procedure for extracting and analyzing prostaglandins and other eicosanoids from C. elegans using LC-MS/MS.

استخراج البروستاجلاندين والتحليل في<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we know about C. elegans is limited to laboratory cultivation of the nematodes that may not necessarily reflect the environments they normally inhabit in nature. Cultivation of C. elegans in a 3D habitat that is more similar to the 3D matrix that worms encounter in rotten fruits and vegetative compost in nature could reveal novel phenotypes and behaviors not observed in 2D. In addition, experiments in 3D can address how phenotypes we observe in 2D are relevant for the worm in nature. Here, a new method in which C. elegans grows and reproduces normally in three dimensions is presented. Cultivation of C. elegans in Nematode Growth Tube-3D (NGT-3D) can allow us to measure the reproductive fitness of C. elegans strains or different conditions in a 3D environment. We also present a novel method, termed Nematode Growth Bottle-3D (NGB-3D), to cultivate C. elegans in 3D for microscopic analysis. These methods allow scientists to study C. elegans biology in conditions that are more reflective of the environments they encounter in nature. These can help us to understand the overlying evolutionary relevance of the physiology and behavior of C. elegans we observe in the laboratory.

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

We present a simple method to construct 3D nematode cultivation systems called NGT-3D and NGB-3D. These can be used to study nematode fitness and behaviors in habitats that are more similar to natural Caenorhabditis elegans habitats than the standard 2D laboratory C. elegans culture plates.

زراعة<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em&gt; في ثلاثة أبعاد في المختبر

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we ...

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

A single biological sample holds a plethora of information, and it is now common practice to simultaneously investigate several macromolecules to capture a full picture of the multiple levels of molecular processing and changes between different conditions. This protocol presents the method of isolating DNA, RNA, and protein from the same sample of the nematode Caenorhabditis elegans to remove the variation introduced when these biomolecules are isolated from replicates of similarly treated but ultimately different samples. Nucleic acids and protein are extracted from the nematode using the acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction method, with subsequent precipitation, washing, and solubilization of each. We show the successful isolation of RNA, DNA, and protein from a single sample from three strains of nematode and HeLa cells, with better protein isolation results in adult animals. Additionally, guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform-extracted protein from nematodes improves the resolution of larger proteins, with enhanced detectable levels as observed by immunoblotting, compared to the traditional RIPA extraction of protein.
The method presented here is useful when investigating samples using a multiomic approach, specifically for the exploration of the proteome and transcriptome. Techniques that simultaneously assess multiomics are appealing because molecular signaling underlying complex biological phenomena is thought to occur at complementary levels; however, it has become increasingly common to see that changes in mRNA levels do not always reflect the same change in protein levels and that the time of collection is relevant in the context of circadian regulations. This method removes any intersample variation when assaying different contents within the same sample (intrasample.)

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

Here, we present a protocol for the isolation of RNA, DNA, and protein from the same sample, in an effort to reduce variation, improve reproducibility, and facilitate interpretations.

الجمع بين النوكليوتيدات والاستخراج البروتين في ايليجانس كاينورهابديتيس

A single biological sample holds a plethora of information, and it is now common practice to simultaneously investigate several macromolecules to capture ...

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous system and muscle. Consistent with this, mitochondrial dysfunction has been associated with a myriad of neurodegenerative diseases and aging in general. Caenorhabditis elegans have been a powerful model system for elucidating the many intricacies of mitochondrial function. Mitochondrial respiration is a strong indicator of mitochondrial function and recently developed respirometers offer a state-of-the-art platform to measure respiration in cells. In this protocol, we provide a technique to analyze live, intact C. elegans. This protocol spans a period of ~7 days and includes steps for (1) growing and synchronization of C. elegans, (2) preparation&#160;of compounds to be injected and hydration of probes, (3) drug loading and cartridge equilibration, (4) preparation of worm assay plate and assay run, and (5) post-experiment data analysis.

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Mitochondrial respiration is critical for organismal survival; therefore, oxygen consumption rate is an excellent indicator of mitochondrial health. In this protocol, we describe the use of a commercially available respirometer to measure basal and maximal oxygen consumption rates in live, intact, and freely-motile Caenorhabditis elegans.

قياس معدلات استهلاك الأوكسجين في سليمة ايليجانس كاينورهابديتيس

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous ...

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

The secretion of small membrane-bound vesicles into the external environment is a fundamental physiological process of all cells. These extracellular vesicles (EVs) function outside the cell to regulate global physiological processes by transferring proteins, nucleic acids, metabolites, and lipids between tissues. EVs reflect the physiological state of their cells of origin. EVs are implicated to have fundamental roles in virtually every aspect of human health. Thus, EV protein and genetic cargos are being increasingly analyzed for biomarkers of health and disease. However, the EV field still lacks a tractable invertebrate model system that permits the study of EV cargo composition. C. elegans is well suited for EV research because it actively secretes EVs outside of its body into its external environment, permitting facile isolation. This article provides all the necessary information for generating, purifying, and quantifying these environmentally secreted C. elegans EVs including how to work quantitatively with very large populations of age-synchronized worms, purifying EVs, and a flow cytometry protocol that directly measures the number of intact EVs in the purified sample. Thus, the large library of genetic reagents available for C. elegans research can be tapped into for investigating the impacts of genetic pathways and physiological processes on EV cargo composition.

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

This article presents methods for generating, purifying, and quantifying Caenorhabditis elegans extracellular vesicles.

تنقية وتحليل Caenorhabditis elegans خارج الخلية الحويصلات

The secretion of small membrane-bound vesicles into the external environment is a fundamental physiological process of all cells. These extracellular ...

Quantifying Tissue-Specific Proteostatic Decline in Caenorhabditis elegans

The ability to maintain proper function and folding of the proteome (protein homeostasis) declines during normal aging, facilitating the onset of a growing number of age-associated diseases. For instance, proteins with polyglutamine expansions are prone to aggregation, as exemplified with the huntingtin protein and concomitant onset of Huntington&#8217;s disease. The age-associated deterioration of the proteome has been widely studied through the use of transgenic Caenorhabditis elegans expressing polyQ repeats fused to a yellow fluorescent protein (YFP). This polyQ::YFP transgenic animal model facilitates the direct quantification of the age-associated decline of the proteome through imaging the progressive formation of fluorescent foci (i.e., protein aggregates) and subsequent onset of locomotion defects that develop as a result of the collapse of the proteome. Further, the expression of the polyQ::YFP transgene can be driven by tissue-specific promoters, allowing the assessment of proteostasis across tissues in the context of an intact multicellular organism. This model is highly amenable to genetic analysis, thus providing an approach to quantify aging that is complementary to lifespan assays. We describe how to accurately measure polyQ::YFP foci formation within either neurons or body wall muscle during aging, and the subsequent onset of behavioral defects. Next, we highlight how these approaches can be adapted for higher throughput, and potential future applications using other emerging strategies for C. elegans genetic analysis.

Quantifying Tissue-Specific Proteostatic Decline in Caenorhabditis elegans

Proteostatic decline is a hallmark of aging, facilitating the onset of neurodegenerative diseases. We outline a protocol to quantifiably measure proteostasis in two different Caenorhabditis elegans tissues through heterologous expression of polyglutamine repeats fused to a fluorescent reporter. This model allows rapid in vivo genetic analysis of proteostasis.

قياس الانخفاض البروتيني البروتيوستيكي الخاص بالأنسجة في إليجانات Caenorhabditis

The ability to maintain proper function and folding of the proteome (protein homeostasis) declines during normal aging, facilitating the onset of a ...

Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans

Battling human neurodegenerative pathologies and managing their pervasive socioeconomic impact is becoming a global priority. Notwithstanding their detrimental effects on the human life quality and the healthcare system, the majority of human neurodegenerative disorders still remain incurable and non-preventable. Therefore, the development of novel therapeutic interventions against such maladies is becoming a pressing urgency. Age-associated deterioration of neuronal circuits and function is evolutionarily conserved in organisms as diverse as the lowly worm Caenorhabditis elegans and humans, signifying similarities in the underlying cellular and molecular mechanisms. C. elegans is a highly malleable genetic model, which offers a well-characterized nervous system, body transparency and a diverse repertoire of genetic and imaging techniques to assess neuronal activity and quality control during ageing. Here, we introduce and describe methodologies utilizing some versatile nematode models, including hyperactivated ion channel-induced necrosis (e.g., deg-3(d) and mec-4(d)) and protein aggregate (e.g., &#945;-syunclein and poly-glutamate)-induced neurotoxicity, to monitor and dissect the cellular and molecular underpinnings of age-related neuronal breakdown. A combination of these animal neurodegeneration models, together with genetic and pharmacological screens for cell death modulators will lead to an unprecedented understanding of age-related breakdown of neuronal function and will provide critical insights with broad relevance to human health and quality of life.

Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans

Here, we introduce and describe widely accessible methodologies utilizing some versatile nematode models, including hyperactivated ion channel-induced necrosis and protein aggregate-induced neurotoxicity, to monitor and dissect the cellular and molecular underpinnings of age-associated neurodegenerative diseases.

النمذجة العمر المرتبطة الأمراض العصبية في Caenorhabditis elegans

Battling human neurodegenerative pathologies and managing their pervasive socioeconomic impact is becoming a global priority. Notwithstanding their ...

Automating Aggregate Quantification in Caenorhabditis elegans

A rise in the prevalence of neurodegenerative protein conformational diseases (PCDs) has fostered a great interest in this subject over the years. This increased attention has called for the diversification and improvement of animal models capable of reproducing disease phenotypes observed in humans with PCDs. Though murine models have proven invaluable, they are expensive and are associated with laborious, low-throughput methods. Use of the Caenorhabditis elegans nematode model to study PCDs has been justified by its relative ease of maintenance, low cost, and rapid generation time, which allow for high-throughput applications. Additionally, high conservation between the C. elegans and human genomes makes this model an invaluable discovery tool. Nematodes that express fluorescently tagged tissue-specific polyglutamine (polyQ) tracts exhibit age- and polyQ length-dependent aggregation characterized by fluorescent foci. Such reporters are often employed as proxies to monitor changes in proteostasis across tissues. Manual aggregate quantification is time-consuming, limiting experimental throughput. Furthermore, manual foci quantification can introduce bias, as aggregate identification can be highly subjective. Herein, a protocol consisting of worm culturing, image acquisition, and data processing was standardized to support high-throughput aggregate quantification using C. elegans that express intestine-specific polyQ. By implementing a C. elegans-based image processing pipeline using CellProfiler, an image analysis software, this method has been optimized to separate and identify individual worms and enumerate their respective aggregates. Though the concept of automation is not entirely unique, the need to standardize such procedures for reproducibility, elimination of bias from manual counting, and increase throughput is high. It is anticipated that these methods can drastically simplify the screening process of large bacterial, genomic, or drug libraries using the C. elegans model.

Automating Aggregate Quantification in Caenorhabditis elegans

The following protocol describes the development and optimization of a high-throughput workflow for worm culturing, fluorescence imaging, and automated image processing to quantify polyglutamine aggregates as an assessment of changes in proteostasis.

أتمتة القياس الكمي الكلي في Caenorhabditis elegans

A rise in the prevalence of neurodegenerative protein conformational diseases (PCDs) has fostered a great interest in this subject over the years. This ...