Biz yazının yararlı yorumlar için temsili sonuçlar Şekil 3 ve Jason Watts ve Chris Webster gösterilen ön deneyler için Chris Webster teşekkür ederim. Bu çalışma için fon JLW için Ulusal Sağlık Enstitüleri (ABD) (R01DK074114) bir hibe sağlanmıştır. Bu çalışmada kullanılan bazı nematod ırkları Araştırma Altyapı Programları NIH Ofisi (P40 OD010440) tarafından finanse edilmektedir Caenorhabditis Genetik Merkezi tarafından sağlandı.

Çoklu doymamış yağ asitleri, ısı, ışık ve oksijen duyarlıdır. Yağ asidi takviyesi tabak hazırlarken Bu nedenle, bakım alınmalıdır yağ asitleri aşırı ısı ve ışığa maruz kalmayacakları şekilde. % 0.1 Tergitol (NP-40) ihtiva eden NGM ortamı yağlı asit sodyum tuzları, sabit karıştırma ile ilave edilir ve bundan sonra, otoklav ve kısmen soğutulur. Plakalar karanlıkta kurumaya bırakılır. C. tarafından yağ asitlerinin Uptake daha sonra gaz kromatografisi ile takip edilebilir elegans, bu plakalar üzerinde kültürlendi. 1.. Yağ asit vasıta hazırlanması <ol><li> Uygun büyüklükte bir balona medya bileşenleri ölçün. 1 litre başına, 17 g Bacto-agar, 2.5 g tripton, 3 g NaCl, etanol içinde eritildi, 1 ml 5 mg / ml kolesterol ve su içinde eritildi, 10 ml% 10 Tergitol ekleyin. </li><li> Millipore su istenen son hacminin% 80 ekleyin ve farklı sayısına eşittir (boş cam şişe ile birlikte ortam otoklavyağlı asit test edilecek konsantrasyonlar), bunun yanısıra, uygun dereceli silindirler. </li><li> 55 ° C&#39;ye ayarlanmış bir su banyosu içinde Serin medya Ortam, cam şişe açık kırılma güvenlik önlemleri ile ve cam parçacıkları yağ asitleri ile karışmaz sağlanarak, yağlı asit sodyum tuzunun çalışma stok çözeltisi hazırlamak soğurken. 100 mM çalışma stok yapmak için yeterli yağ asidi dışarı tartılır. </li><li> , Saflaştırılmış su ile 100 mM&#39;lik bir son konsantrasyon elde etmek için yağlı asit çözeltisi getirin. Tam yağlı asit sodyum tuzunu çözerek, tipik olarak yaklaşık 20-30 dakika sürer. Bir atıl gaz ile temas oksidasyonunu engeller, çünkü, argon ya da azot ile birlikte bir yağ asidinin çalışma stok temizleyin. Kapatılır ve ortam soğuyana kadar karanlıkta çalışma stok saklayın. </li><li> (İsteğe bağlı) RNAi ortam istendiği takdirde, ampisilin ölçmek ve burada izopropil β-D-1-tiogalaktopiranosid (IPTG) çözümleri. </li><li> Agar 55 ° soğuduğunda 1 L başına eklemek C: 11 M MgSO 4 ml 1 M CaCI2 1 ml ve fosfat tamponu 25 ml (1 L başına 108.3 g KH 2 PO 4 ve 35.6 g K 2 HPO 4 otoklav). Filtre sterilize ampisilin ve IPTG çözümler RNAi yapım plakaları ise ekleyin. Plakalarının her türlü için, 1 L&#39;lik nihai ortam hacmi getirmek için steril su ekle </li><li> Bir alev yakınında, Otoklavlanmış aktarmak medya ve uygun Mezür boyutta ve daha sonra istenen hacme ılık steril su ekleyin. Geri ilk şişeye aktarmak medya ve karıştırarak karıştırın. </li><li> Bir alev civarında, bir otoklav ile ölçülerek test edilecek konsantrasyonlarının sayısına eşit bir dizi şişe içine transferi ortam ve uygun bir şekilde dereceli silindir boyuttadır. Yağlı asit çalışma stok tamamen çözülene kadar bir su banyosu kullanılarak bir sıvı olarak aliquoted ortamı koruyun. </li><li> Medya dokunmak sıcak, sıcak ama değil kadar bir heyecan plaka ve karıştırın üzerine bir şişe yerleştirin. Yeterince kendinizi bırakın emin olunyağlı asit stok çözeltisi içinde ilave edin ve ortam katılaşmaya başlamadan önce plakalar dökmek süresi. Heyecan plaka sıcaklığı denetimi varsa, 55 ° C&#39;ye ayarlayın </li><li> İstenen nihai konsantrasyon için ortama 100 mM yağlı asit çalışma stokları seyreltin. Stir ortam beyaz çökelti kadar çözelti (yaklaşık 1 dakika) bulunmaktadır. Medya hala sonra biraz bulanık olabilir. </li><li> (İsteğe bağlı) RNAi ortam 2 mM nihai bir konsantrasyona kadar IPTG ml ve 0.1 mg / eklenti ampisilin isteniyorsa. </li><li> 8 60 mm tabak başına ortam ml veya 100 mm plaka başına ortam 25 ml ilave otomatik bir pipet yardımı ile steril bir 25 ml bir pipet kullanılarak ortam dökün. Kalan şişeler için adımlar dökme yağlı asit ilaveli ve plaka tekrar edin. </li><li> Agar katılaşmış sonra, hafif oksidasyondan korumak için, iyi havalandırılan bir çekmece içerisinde oda sıcaklığında bir kutu ya da mağaza ile yağ asidi-takviye plakaları kapsamaktadır. </li><li> Tohum E. coli OP50 plakaları kurutuldu olan iki gün sonra, plakalar üzerine.60 mm tabak için, (37 ° C&#39;de yetiştirilen), bir gece boyunca OP50 kültür pipet 300 ul. RNAi plakalar boşaltılır olsaydı, plakalar dört gün boyunca kurutulduktan sonra, RNAi bakteri 300 ul tohum. Levha kuruma süresi nedeniyle çeşitli laboratuar ortamında nem farklılıklarından ayarlanması gerekebilir. </li><li> Bakteriyel çim kururken, oda sıcaklığında karanlık ortamda inkübe edin. </li></ol> 2. DGLA&#39;nın Suplementasyon tarafından Germ Hücre Destruction Inducing <ol><li> C. 0.3 mM DGLA (20:03 n-6) içeren plakalar üzerinde büyüdü elegans nedeniyle hem larva ve ergin nematod germ hücrelerinin imha steril hale gelir. <ol><li> Alkali hipoklorit çözeltisi ile muamele edilerek gebe çift cinsiyetli L1 larvalarının bir senkronize bir nüfus hazırlayın (10 ml solüsyon için: 5M NaOH, çamaşır suyu 2.5 ml, 7 ml H2O içinde 0.5 ml) eklenmiştir. Yavaşça yetişkin kurt kadar bu çözelti içinde gebe çift cinsiyetli kayas çözülür. Yumurta korunur ve düşük hızlı santrifüjleme ile tane haline edilebilir. </li><li> (3 g KH 2 PO 4, 6 g HPO 4, 5 g NaCl, 1 ml 1 M MgSO 4 H, 2 O L. otoklav sonrası MgSO 4 1 ekleyin 2 Na) M9 tampon maddesi içinde yumurta terkip 3 kez yıkayın. Yeterli oksijen sağlamak için, bir gece boyunca bir çalkalayıcı üzerinde M9 tampon ve kaya 5 ml&#39;lik bir son hacim için 15 ml plastik bir tüp içinde yumurta tekrar süspansiyon. </li><li> L1 larva iki gün RNAi bakteri sonra kaplama OP50, ya da bir gün ile tohumlamadan sonra takviye edilmiş plakalara ilave edilmelidir. Onlar yetişkin aşamasına ulaşana kadar üç gün boyunca 20 ° C&#39;de inkübe solucanlar ya. </li></ol></li><li> Yetişkin solucanlar rahim içinde gelişmekte olan embriyolar görselleştirmek için yeterince yüksek büyütme ile bir diseksiyon mikroskobu kullanarak sterilite için attı olabilir. Başarılı germ hücre kaybı yumurta açık bir rahim boşluğu olarak görünecektir. </li><li> Solucanlar da sabitleme ve nükleik a ile boyanarak attı olabilirgerm hücreleri çekirdeklerin görselleştirme ve gelişen embriyolar kolaylaştırmaktadır cid boya diamindinophenylindole (DAPI). Hızlı bir DAPI leke bir gözlem 9 M9 tampon bir damla halinde solucan toplama ile elde edilir. <ol><li> , 0.2 ng / m 1 ml Sel-cam. DAPI% 95 etanol çözeltisi içinde, yaklaşık 5 dakika boyunca bekletin. </li><li> Bir slaytta Vectashield bir damla içine solucanlar almak ve daha sonra bir lamel ile kaplayın. </li><li> Optimum boyama için karanlık gecede 4 ° C&#39;de mühür lamel ve mağaza, ancak slaytlar de hemen görülebilir. Varlığında veya bir UV lambası ve filtre ile teçhiz edilmiş bir floresans mikroskobu kullanılarak germ hücre çekirdeklerinin olmaması için puan. </li></ol></li></ol> 3. Gaz Kromatografisi ile Yağ Asit Alımı Onaylayan C. Genel olarak yağ asidi bileşimi, elegans daha sonra ayrılır ve gaz Chr kullanılarak nicelendirilir yağlı asit metil esterleri (FAME) üretilmesi ile belirlenebiliromatography 4. <ol><li> Su ile plakalar kapalı yıkamadan ve silanize edilmiş 13 mm x 100 mm cam tüpe Üstü yivli aktarılarak 500-1.000 erişkin solucanlar toplayın. </li><li> Solucanlar yerçekimi tarafından razı olsun, ve sonra bir cam Pasteur pipeti ile mümkün olduğunca çok su çıkarmak. </li><li> Su ile bir kez solucanlar yıkayın ve daha sonra tekrar mümkün olduğu kadar çok suyu çıkarmak. </li><li> Fames bir su banyosu içinde 1 saat boyunca 70 ° C&#39;de% 2.5 1 H 2 ml metanol içinde SO 4 ve daha sonra ısıtma eklenerek oluşturulur. </li><li> Su banyosundan çıkarın ve tüpler, 1 dakika için soğutun. </li><li> 1.5 ml su ve 0.25 ml heksan eklenerek Fames ekstrakte edin. </li><li> Recap tüpler ve şiddetle çalkalanır. </li><li> , Sulu çözücüden ayrılması için heksan maksimum hızda 1 dakika boyunca masa üstü bir klinik santrifüj cihazında santrifüj tüpleri. </li><li> Sulu fazın bir transferi için dikkatli olmak, bir GC şişe içinde bir GC şişe içeriğine heksan (üst katman) aktarın. GC için analysis, heksan içinde FAME 1-2 ul kareleri analizi için uygun olan bir polar kılcal gaz kromatografi sütunu üzerine enjekte edilir. Agilent 7890 GC enjektör 1.4 ml / dk &#39;lık bir akış oranı ile, 250 ° C&#39;de ayarlanır ve GC fırın 1 dakika için tutulan 130 ° C&#39;lik bir başlangıç ​​sıcaklığı için programlanır. Bundan sonra, sıcaklık 10 ° C / dk kadar 190 ° C rampalı edilir ve daha sonra 210 ° C&#39;ye kadar 5 ° C / dk &#39;da yeniden rampalı ve ek 1 dakika tutuldu. </li><li> , DGLA&#39;nın bu uptake oluştu sağlamak C tanımlanması için otantik standartlar kullanılarak alev iyonlaşma algılaması (FID) ya da kütle spektrofotometresi (MS) tespiti ile Fames analiz etmek yağ asitleri elegans. </li></ol>

<ol>
	<li>Haeggstrom, J. Z., Funk, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipoxygenase+and+leukotriene+pathways:+biochemistry,+biology,+and+roles+in+disease.">Lipoxygenase and leukotriene pathways: biochemistry, biology, and roles in disease.</a> Chem. Rev. 111, 5866-5898 (2011).</li><li>de Lorgeril, M., Salen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+health+effects+of+dietary+saturated+and+omega-6+and+omega-3+polyunsaturated+fatty+acids.">New insights into the health effects of dietary saturated and omega-6 and omega-3 polyunsaturated fatty acids.</a> BMC Med. 10, 50 (2012).</li><li>Spychalla, J. P., Kinney, A. J., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+an+animal+omega-3+fatty+acid+desaturase+by+heterologous+expression+in+Arabidopsis.">Identification of an animal omega-3 fatty acid desaturase by heterologous expression in Arabidopsis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 1142-1147 (1997).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+polyunsaturated+fatty+acid+synthesis+in+Caenorhabditis+elegans.">Genetic dissection of polyunsaturated fatty acid synthesis in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 5854-5859 (2002).</li><li>Watts, J. L., Phillips, E., Griffing, K. R., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiencies+in+C20+Polyunsaturated+Fatty+Acids+Cause+Behavioral+and+Developmental+Defects+in+Caenorhabditis+elegans+fat-3+Mutants.">Deficiencies in C20 Polyunsaturated Fatty Acids Cause Behavioral and Developmental Defects in Caenorhabditis elegans fat-3 Mutants.</a> Genetics. 163, 581-589 (2003).</li><li>Kahn-Kirby, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+Polyunsaturated+Fatty+Acids+Drive+TRPV-Dependent+Sensory+Signaling+In+Vivo.">Specific Polyunsaturated Fatty Acids Drive TRPV-Dependent Sensory Signaling In Vivo.</a> Cell. 119, 889-900 (2004).</li><li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+regulation+of+unsaturated+fatty+acid+composition+in+C.+elegans.">Genetic regulation of unsaturated fatty acid composition in C. elegans.</a> PLoS Genet. 2, e108 (2006).</li><li>Webster, C. M., Deline, M. L., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+response+pathways+protect+germ+cells+from+omega-6+polyunsaturated+fatty+acid-mediated+toxicity+in+Caenorhabditis+elegans.">Stress response pathways protect germ cells from omega-6 polyunsaturated fatty acid-mediated toxicity in Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 373, 14-25 (2013).</li><li>Kadyk, L. C., Lambie, E. J., Kimble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=glp-3+is+required+for+mitosis+and+meiosis+in+the+Caenorhabditis+elegans+germ+line.">glp-3 is required for mitosis and meiosis in the Caenorhabditis elegans germ line.</a> Genetics. 145, 111-121 (1997).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+manipulation+implicates+lipid+signaling+in+the+regulation+of+germ+cell+maintenance+in+C.+elegans.">Dietary manipulation implicates lipid signaling in the regulation of germ cell maintenance in C. elegans.</a> Dev. Biol. 292, 381-392 (2006).</li><li>Pryor, W. A., Stanley, J. P., Blair, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoxidation+of+polyunsaturated+fatty+acids:+II.+A+suggested+mechanism+for+the+formation+of+TBA-reactive+materials+from+prostaglandin-like+endoperoxides.">Autoxidation of polyunsaturated fatty acids: II. A suggested mechanism for the formation of TBA-reactive materials from prostaglandin-like endoperoxides.</a> Lipids. 11, 370-379 (1976).</li><li>Kniazeva, M., Shen, H., Euler, T., Wang, C., Han, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+maternal+phospholipid+composition+and+IP(3)-dependent+embryonic+membrane+dynamics+by+a+specific+fatty+acid+metabolic+event+in+C.+elegans.">Regulation of maternal phospholipid composition and IP(3)-dependent embryonic membrane dynamics by a specific fatty acid metabolic event in C. elegans.</a> Genes Dev. 26, 554-566 (2012).</li><li>Edmonds, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin/FOXO+signaling+regulates+ovarian+prostaglandins+critical+for+reproduction.">Insulin/FOXO signaling regulates ovarian prostaglandins critical for reproduction.</a> Dev. Cell. 19, 858-871 (2010).</li><li>O'Rourke, E. J., Kuballa, P., Xavier, R., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=omega-6+Polyunsaturated+fatty+acids+extend+life+span+through+the+activation+of+autophagy.">omega-6 Polyunsaturated fatty acids extend life span through the activation of autophagy.</a> Genes Dev. 27, 429-440 (2013).</li><li>Taubert, S., Van Gilst, M. R., Hansen, M., Yamamoto, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mediator+subunit,+MDT-15,+integrates+regulation+of+fatty+acid+metabolism+by+NHR-49-dependent+and+-independent+pathways+in+C.+elegans.">A Mediator subunit, MDT-15, integrates regulation of fatty acid metabolism by NHR-49-dependent and -independent pathways in C. elegans.</a> Genes Dev. 20, 1137-1149 (2006).</li><li>Lesa, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+chain+polyunsaturated+fatty+acids+are+required+for+efficient+neurotransmission+in+C.+elegans.">Long chain polyunsaturated fatty acids are required for efficient neurotransmission in C. elegans.</a> J. Cell Sci. 116, 4965-4975 (2003).</li><li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+desaturation+and+the+regulation+of+adiposity+in+Caenorhabditis+elegans.">Fatty acid desaturation and the regulation of adiposity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 176, 865-875 (2007).</li><li>Goudeau, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+desaturation+links+germ+cell+loss+to+longevity+through+NHR-80/HNF4+in+C.+elegans.">Fatty acid desaturation links germ cell loss to longevity through NHR-80/HNF4 in C. elegans.</a> PLoS Biol. 9, e1000599 (2011).</li><li>Yang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ARC/Mediator+subunit+required+for+SREBP+control+of+cholesterol+and+lipid+homeostasis.">An ARC/Mediator subunit required for SREBP control of cholesterol and lipid homeostasis.</a> Nature. 442, 700-704 (2006).</li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Burada C takviyesi için bir yöntem tarif Diyet doymamış yağ asitleri ile elegans. Yukarıda belirtildiği gibi, PUFAların en çift bağların reaktif doğası, bu yağ asitleri, ısı ve ışık 11 ile oksidasyona karşı duyarlı olması neden olur, çünkü bakım PUFA takviye plakaları hazırlanmasında alınmalıdır. Oksidasyonu önlemek için, ortam karanlık bir ortamda 55 ° C ve depolar plakalara soğuduktan sonra, sıvı agar ortamına PUFA eklemek için önemlidir. <p c...

Yağ asitleri temel yapı membran bileşenleri hem de verimli enerji depolama moleküllerdir. Ek olarak, yağ asitleri, lipazlar tarafından hücre zarlarından parçalanabilen ve enzimatik olarak işaret efektör 1 üretilmesi için değiştirilebilir. Doğal olarak oluşan çok-doymamış yağlı asitleri (PUFAlar) iki veya daha fazla cis çift bağ ihtiva edebilir. Omega-3 yağ asitleri ve omega-6 yağ asitleri, yağ asidi metil sonuna göre çift bağların pozisyonlara göre birbirinden ayırt edilmektedir. Sağlıklı beslenme omega-6 ve omega-3 yağ asitleri hem de gerektirir. Ancak, Western diyetler omega-6 yağ asitleri ve omega-3 yağ asitleri zayıf özellikle zengindir. Yüksek bir omega-6 omega-3 yağ asidi oranı, kardiyovasküler ve enflamatuar hastalıkların riski Bununla birlikte, belirli yağ asitlerinin tam yararlı ve zararlı işlevleri de 2 anlaşılmamıştır ile ilişkilidir. Yuvarlak kurt Caenorhabditis elegabir omega-3 desatürazı, çoğu hayvan 3,4 in mevcut olan bir aktivitesi omega-6 ve omega-3 yağ asitleri, bir dizi üretmek için gerekli olan bütün enzimleri sentezler için ns yağlı asit fonksiyonu çalışmalarında yararlıdır. Yağlı asit desatüraz enzimleri eksik olan mutantlar, gelişim ve nörolojik kusurlar 4-6 bir dizi yol açan, özel PUFAların üretilmesi için başarısız. Diyet yağ asitlerinin fizyolojik etkilerini incelemek için, C de mutant ve RNAi yok etme teknikleri kullanarak genetik analizi ile uyumlu bir biyokimyasal analiz geliştirdik elegans. Özel PUFAlar ile takviyesi dökülmesinden önce agar ortamına bir yağlı asit sodyum tuzu çözeltisinin eklenmesi ile elde edilir. Bu, E. tarafından PUFA alımı ile sonuçlanan Bu bakteri membran birikir coli besin kaynağı. C. elegans PUFA içeren bakteri yemek ve bu diyet takviyesi arızalı kurtarmak için yeterlidirPUFA eksikliği mutantlarının ts. En çok yağlı asitlerin takviyesi, ancak, belirli bir omega-6 yağ asitleri, özellikle dihomo-gama linolenik asit (DGLA, 20:03 n-6) C arasında kalıcı bir imha neden yabani tip hayvanlar üzerinde herhangi bir zararlı etkisi yoktur elegans germ hücreleri 7,8. Gaz kromatografisi bakteriyel besin kaynağı (OP50 veya HT115 olarak) hem de nematod takviye yağ asidi alımını izlemek için kullanılır. Medyada deterjan Tergitol (NP-40) &#39;nin ilave edilmesi, tüm plaka ve E ile yağlı asitlerin daha etkin alınması yoluyla yağlı asitlerin dağılımını sağlar: coli ve nematodlar. Biz, doymamış yağ asitleri kolayca bakteri ve C. tarafından alınır bulduk elegans, fakat doymuş yağlı asitlerin alımını çok daha az etkilidir. Bu makalede, yağ asitleri ile agar ortamı tamamlamak için nasıl adım adım tarif, hem de inci yağ asidi alımını izlemek için ne kadar olacakgaz kromatografisi kullanılarak e nematod.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="765">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Bacto-Agar</td>
			<td style="width:128px;">Difco</td>
			<td style="width:155px;">214010</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Tryptone</td>
			<td style="width:128px;">Difco</td>
			<td style="width:155px;">211705</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">NaCl</td>
			<td style="width:128px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:155px;">3624-05</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Tergitol</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td style="width:155px;">NP40S-500mL</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Cholesterol</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td style="width:155px;">C8667-25G</td>
			<td style="width:275px;">(5 mg/mL in ethanol)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">MgSO4</td>
			<td style="width:128px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:155px;">2504-01</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">CaCl2</td>
			<td style="width:128px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:155px;">1311-01</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">K2HPO4</td>
			<td style="width:128px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:155px;">3254-05</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:128px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:155px;">3246-05</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Sodium dihomogamma linolenate</td>
			<td style="width:128px;">NuCHEK</td>
			<td style="width:155px;">S-1143</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Warm sterile Millipore water</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Sterile water for collecting worms</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Nuclease-free Water for DGLA stock solution</td>
			<td style="width:128px;">Ambion</td>
			<td style="width:155px;">AM9932</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Ampicillin</td>
			<td style="width:128px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">BP1760-25</td>
			<td style="width:275px;">100 mg/ml in water (for RNAi plates)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td style="width:128px;">Gold Biotechnology</td>
			<td style="width:155px;">12481C100</td>
			<td style="width:275px;">1 M in water (for RNAi plates)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">HSO4</td>
			<td style="width:128px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:155px;">9681-03</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Methanol</td>
			<td style="width:128px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">A452-4</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Hexane</td>
			<td style="width:128px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">H302-4</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">diamindinophenylindole (DAPI)</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td style="width:155px;">D9542</td>
			<td style="width:275px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">VectaShield</td>
			<td style="width:128px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:155px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Glass Flask</td>
			<td style="width:128px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">4980-2L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Autoclaveable Glass bottles with stirbars</td>
			<td style="width:128px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:155px;">FB-800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Autoclaveable Glass Graduated Cylinder</td>
			<td style="width:128px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:155px;">08-557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Stir Plate</td>
			<td style="width:128px;">VWR</td>
			<td style="width:155px;">97042-642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Waterbath at 55+ &#176;C</td>
			<td style="width:128px;">Precision Scientific Inc.</td>
			<td style="width:155px;">66551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Screwcap Brown Glass Vial</td>
			<td style="width:128px;">Sun SRI</td>
			<td style="width:155px;">200 494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Argon gas tank</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Automated Pipette aid</td>
			<td style="width:128px;">Pipette-Aid</td>
			<td style="width:155px;">P-90297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:208px;">Sterile Serological Pipettes (25 ml)</td>
			<td style="width:128px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">4489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Bunsen Burner</td>
			<td style="width:128px;">VWR</td>
			<td style="width:155px;">89038-534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Dissection microscope</td>
			<td style="width:128px;">Leica</td>
			<td style="width:155px;">TLB3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Silanized glass tube</td>
			<td style="width:128px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:155px;">STT-13100-S</td>
			<td>for FAMEs derivitization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:208px;">PTFE Screw caps</td>
			<td style="width:128px;">Kimble-Chase</td>
			<td style="width:155px;">1493015D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Clinical tabletop centrifuge</td>
			<td style="width:128px;">IEC</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">GC Crimp Vial</td>
			<td style="width:128px;">SUN SRi</td>
			<td style="width:155px;">200 000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">GC Vial Insert</td>
			<td style="width:128px;">SUN SRi</td>
			<td style="width:155px;">200 232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">GC Vial cap</td>
			<td style="width:128px;">SUN SRi</td>
			<td style="width:155px;">200 100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Gas Chromatograph</td>
			<td style="width:128px;">Agilent</td>
			<td style="width:155px;">7890A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Mass Spectrometry Detector</td>
			<td style="width:128px;">Agilent</td>
			<td style="width:155px;">5975C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:208px;">Column for gas chromatography</td>
			<td style="width:128px;">Suppelco</td>
			<td style="width:155px;">SP 2380</td>
			<td>30 m x 0.25 mm fused silica capillary column</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dietary supplementation of polyunsaturated fatty acids in caenorhabditis elegans

Yağ asitleri çok sayıda hücre fonksiyonları için gereklidir. Bu membran hidrofobik özünü oluşturan ve çeşitli sinyal yoluna katılabilir, verimli enerji depolama molekülleri karşılık vermektedir. Caenorhabditis elegans omega-6 ve omega-3 yağ asitleri, bir dizi üretmek için gerekli olan bütün enzimleri sentezler. Bu, basit anatomi ve mevcut genetik araçları yelpazesi ile birlikte, bu yağ asidi işlevini incelemek için çekici bir model olun. Diyet yağ asitlerinin fizyolojik etkilere aracılık genetik yollarının araştırılması amacıyla, C takviyesi için bir yöntem geliştirdik Doymamış yağ asitleri ile elegans beslenme. Takviyesi solucanlar yağ asidi bileşimini değiştirmek için etkili bir araç ve aynı zamanda yağlı asit eksikliği olan mutantlar kusurları kurtarmak için kullanılabilir. Önerilen yöntem, yağ acidsodium tuzları ile takviye edilmiş nematod büyüme ortamı, agar (NGM) kullanır. Takviye edilmiş plakalarda yağ asitleri incorpora olmakted sonra C. tarafından alınır, bakteriyel besin kaynağı, zarların içine takviye bakteriler üzerine yem elegans. Biz de desteklenmiş solucanlar meydana yağ asidi kompozisyonundaki değişiklikleri izlemek için bir gaz kromatografisi protokol açıklar. Bu C. büyük ve küçük popülasyonların diyetlerine ek etkili bir yoldur elegans, bu yöntem için bir dizi uygulama için izin verir.

C. takviyesi elegans beslenme bakteriyel zarı içine yağ asidi alımı ve birleştirmek için bakteriyel gıda kaynağının kabiliyeti ile sınırlıdır. E. yeteneğini belirlemek için bu membran içine çeşitli yağ asitleri asimile coli OP50, OP50 hiçbir takviyesi, 0.1 mM ve stearik asit (18:00), sodyum oleat (18:1 n-9), ve sodyum DGLA (20, 0.3 mM konsantrasyonları ile ortamı üzerine kaplanmıştır : 3n-6). Tabaklar karanlıkta 2 gün boyunca oda sıcaklığında kurutuld...

Watch this Scientific Journal Video about Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

&lt;em&gt; Caenorhabditis elegan &lt;/ em&gt; geliştirme ve fizyolojisi çok-doymamış yağlı asitlerin fonksiyonlarını keşfetmek için uygun bir modeldir. Bu protokol &lt;em&gt; C tamamlayan etkili bir yöntem tarif elegans &lt;/ em&gt; çoklu doymamış yağ asitleri ile diyet.

Çoklu doymamış yağ asitlerinin Diyet takviyesi<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Fatty acids are essential for numerous cellular functions. They serve as efficient energy storage molecules, make up the hydrophobic core of membranes, ...

dietary-supplementation-polyunsaturated-fatty-acids-caenorhabditis

Research

JoVE Journal

Biology

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

17.0K Görüntüleme.  Washington State University.  Caenorhabditis elegan geliştirme ve fizyolojisi çok-doymamış yağlı asitlerin fonksiyonlarını keşfetmek için uygun bir modeldir. Bu protokol C tamamlayan etkili bir yöntem tarif elegans çoklu doymamış yağ asitleri ile diyet. 