وقد تم تمويل هذا المنشور من قبل الإنزيمات في البيئة بحوث تنسيق البحوث الشبكة بدعم من مؤسسة العلوم الوطنية الأمريكية (DEB # 1021559). وأيد هذا البحث من قبل مؤسسة العلوم الوطنية الأميركية (DEB # 1021559)، وزارة الخارجية الأميركية مكتب الطاقة للعلوم (البيولوجية والبحوث البيئية). أي الآراء والنتائج والاستنتاجات والتوصيات الواردة في هذه المادة هي آراء أصحابها ولا تعكس بالضرورة وجهات نظر جبهة الخلاص الوطني في الولايات المتحدة.

1. فحص مجموعة المتابعة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 3 لوحات التسمية بئر عميق: &quot;نموذج&quot;، &quot;MUB القياسية&quot;، و &quot;معيار MUC&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب كل معيار (MUB 0، 2.5، 5، 10، 25، 50، و 100 ميكرومتر) والركيزة (BG، CB، NAG، مؤسسات الصحة الأولية، XYL، AG، LAP) في نظيفة، وخزانات منفصلة prelabeled (المنحى في الصفوف) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة معيار MUB المناسبة في الآبار المماثلة من MUB لوحة موحدة (الجدول 1). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من 0 ميكرومتر MUB في الصف ألف من MUB وحة القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من 2.5 ميكرومتر MUB إلى الصف B من لوحة MUB القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من 5 ميكرومتر MUB في الصف C من لوحة MUB القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من 10 ميكرومتر MUB في الصف D من لوحة MUB القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من 25 ميكرومتر MUB في الصف E من لوحة MUB القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من 50 ميكرومتر MUB في الصف F من لوحة MUB القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من 100 μM MUB في صف ومجموعة من MUB وحة القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 1.3.1 - 1.3.8 للمعايير MUC في الآبار المقابلة من لوحة MUC القياسية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عجائن التربة الإعدادية لكل عينة التربة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن 2.75 جرام من التربة الرطبة الميدانية إلى خلاط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 91 مل من 50 ملي العازلة. مزيج على ارتفاع لمدة 1 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب محتويات الخلاط في وعاء زجاجي نظيف على الأقل واسعة كما ماصة 8 قنوات مع بقضيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع على لوحة ضجة، وخلط الطين التربة على انخفاض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 800 ميكرولتر من الطين التربة في العمود الأول من لوحة عينة (الجدول 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تكرار في 1 شارع عمود MUB معيار ومعيار لوحات MUC (الجدول 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف خلاط، لوحة ضجة وضجة شريط مع DI H 2 O أو عازلة بين عينات التربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 1.4.1 - 1.4.7) لكل عينة، والانتقال إلى العمود التالي مع كل عينة التربة اللاحقة (الجدولان 1 و2). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة الركيزة المناسبة (في هذا المثال، 200 ميكرومتر تركيزات) في الآبار المقابلة من لوحة عينة (الجدول 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من الركيزة BG في الصف A من لوحة عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من الركيزة CB في الصف B من لوحة عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من الركيزة NAG في الصف C من لوحة عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من الركيزة مؤسسات الصحة الأولية في الصف D من لوحة عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من الركيزة XYL في الصف E من لوحة عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من الركيزة AG في الصف F من لوحة عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 200 ميكرولتر من الركيزة LAP في صف وG من لوحة عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 1.5.1 - 1.5.7 لكل عينة لوحة درجة حرارة الحضانة. </li></ol></li></ol> 2. حضانة لوحات الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم لوحات من الآبار العميقة (&quot;نموذج&quot;، &quot;MUB القياسية&quot;، و &quot;معيار MUC4 ؛) مع الحصير وحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عكس كل (مختومة) لوحة باليد حتى يختلط جيدا الحل (~ 10X). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع لوحات في الحاضنة المناسبة لفترة زمنية المطلوبة الحضانة (الجدول 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل الوقت الأولي مع مرور الوقت 0. أيضا تسجيل الأوقات الحضانة المناسبة حتى تعرف متى لإزالة لوحة من الحاضنة (الجدول 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نهاية كل فترة الحضانة، وأجهزة الطرد المركزي لوحات مختومة لمدة 3 دقائق في ~ 2،900 ز س. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> موثق، ونقل 250 ميكرولتر من كل بئر من الآبار العميقة لوحات المحتضنة في الآبار المقابلة في لوحات سوداء 96 جيدا مسطحة القاع (سوف تستخدم واحدة لوحة سوداء لحضنت كل لوحة بئر عميقة). فمن المهم لنقل عينات من لوحات بئر عميقة المحتضنة في نفس الآبار (أي A1 A12 ...، الخ) في لوحات 96 جيدا مسطحة القاع الأسود (الجدول رقم 1، 2). </li></ol> 3. القياسات الفلورسنت علىمقياس التألق صفيحة ميكروسكوبية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باتباع إرشادات الشركة المصنعة للقارئ لوحة فلوروميتريك المستخدمة، تعيين الطول الموجي الإثارة إلى 365 نانومتر، والطول الموجي الانبعاثات إلى 450 نانومتر (أو استخدام الفلاتر المناسبة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قراءة لوحات ثلاث على التألق. المهم: عينات واللوحات القياسية (أي MUB أو MUC) يجب أن تقرأ باستخدام نفس الربح. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط معمل لكسب التلقائي وقراءة MUC وMUB قياسي لوحات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مجموعة كسب إلى دليل، وتقلل من قيمة الأمثل لأقل عدد المقبلة، مقربة إلى أقرب خمسة، على كل لوحة قياسي. تكرار 2X لكل لوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين مكسب على التلقائية وتشغيل لوحة عينة. أعد لوحة عينة يدويا لمطابقة أعلى مكاسب لكل من لوحات قياسي (أي MUB وMUC). </li></ol></li></ol> 4. تحليل البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدخال البيانات منحنى مضان القياسية في جدول لMUB (الجدول 4A) وMUC القياسية (4B الجدول) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحويل (ميكرومتر) لتركيزات (ميكرومول) (4A الجداول و4B). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لبيانات منحنى القياسية مضان لكل عينة، وحساب المنحدر، التقاطع y، وR 2 القيم لMUC MUB و(ميكرومول) تركيزات القياسية. يجب أن يتجاوز مقبولة القيم R 2 0.98 لكل عينة (4A الجداول و4B). قد يكون من المفيد لتصور المنحنيات القياسية في مؤامرة مبعثر؛ مع مضان يقرأ تآمر كمتغير تابع (المحور الصادي) والتركيز القياسية (ميكرومول) تآمر كمتغير مستقل (محور س) (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسوف تستخدم MUB وMUC القياسية منحدر منحنى والقيم التقاطع y لحساب العينة + البيانات مضان الخام الركيزة في EEAS المحتملة. يجب عليك أولا إدخال العينة + الركيزة البيانات مضان الخام إلى جدول بيانات جديد (5A الجدول </strong&gt;). وسوف تحتاج أيضا لدخول فترة حضانة (الموارد البشرية) والتربة الوزن الجاف لكل عينة (5B الجدول). ملاحظة أن قيم الوقت دخلت في هذا المثال هي 3 ساعة، وذلك لأن وحضنت العينات عند 25 درجة مئوية (الجدول 3). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طرح منحنى القيم اعتراض القياسية من القيم مضان عينة المقابلة ثم القسمة والمنحدر من منحنى القياسية المقابلة (5C الجدول). لإنجاز هذا، وإعادة ترتيب المعادلة الخط المعياري لحل لعينة تركيز انزيم (خ)؛ س = (YB) / م حيث: [ص = عينة مضان الخام القراءة؛ ب = اعتراض من MUB أو منحنى MUC عادي؛ م = المنحدر من MUB أو MUC منحنى قياسي]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتكاثر عينة مكرومول، من الخطوة 4.3.1 أعلاه، بنسبة 91 مل (حجم العازلة المستخدمة في الطين التربة) (5D الجدول). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قيمة الفجوة التي تم الحصول عليها في الخطوة 4.3.2 من عينة محددة وفترة حضانة كتلة جافة تربة (5E الجدول): [القضاة التونسيين الانزيم. (&amp; #956؛ مول) × 91 مل س الحضانة (ساعة) × التربة الجافة (ز) × 0.8 مل س 1،000] ملاحظة: 0.8 مل هو حجم الطين المستخدمة في كل بئر، و1،000 يصحح لكمية التربة الفعلية في كل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مضاعفة القيمة التي تم الحصول عليها في الخطوة 4.3.3 بواسطة 1،000 للحصول على وحدات المطلوب (النشاط نانومول / غرام جاف التربة / ساعة) (5F الجدول). </li></ol></li></ol>

أعلن عن أي تضارب في المصالح.

وتشارك الإنزيمات خارج الخلية (إي إي إس) التي تنتجها بكتيريا التربة والفطريات، والعتيقة في العمليات البيولوجية الكيميائية التي لا حصر لها، وتعتبر أساسية لتجهيز والاستقرار، وزعزعة الاستقرار من المواد العضوية في التربة وتدوير المغذيات في النظم الإيكولوجية الأرضية 1. من خلال إنتاج EES والميكروبات في التربة تتحلل وتحويل المواد العضوية إلى جزيئات البوليمر للذوبان أصغر، وبالتالي تحرير ملزمة سابقا الدقيقة والمغذيات، والذي يسمح النباتات والميكروبات لاستيعاب المواد المغذية متوفرة من التربة. وقد تم دراسة EES على مدى عقود، في المقام الأول عن طريق قياس أنشطتها في فحوصات المختبر 2-4، لأنه من الصعب جدا للكشف عن مباشرة وقياس الانزيمات. يتم التحكم نشاط انزيم خارج الخلية (EEA) بشدة من تركيز الأنزيمات وركائز المقابلة. وفرة مختلفة C-، ويتم التحكم N، P-مهينة والانزيمات في التربة بفعل عوامل عديدة طالكتلة الحيوية الميكروبية التسبب، وتكوين المجتمع، وتوافر الركيزة، والصغير، ومطالب متكافئة 5،6، ومع ذلك، في EEAS الموقع الطبيعي داخل بيئة التربة التي تتأثر أيضا بدرجة الحرارة 7،8، وملزمة من الانزيمات لالطين التربة وخصائص الدبالية 2، والقيود نشر 9، التي تنظم في نهاية المطاف تجمع انزيم نشط، من حيث الحجم، وتوافر الركيزة ، ومعدلات دوران 10-12. لذا، معترفا في ظروف التربة الموقعية أمر بالغ الأهمية عند استخدام المقايسات انزيم مختبر لتفسير وظيفة الميكروبية التربة عبر مواقع بيئية مختلفة. العديد من فئات مختلفة من المنطقة الاقتصادية الأوروبية يمكن قياسها كميا في فحوصات المختبر باستخدام مجموعة متنوعة من ركائز الاصطناعية (يرجى الرجوع إلى &quot;قائمة الكواشف الجدول&quot; لمزيد من التفاصيل). بعض البروتوكولات الاستفادة من ركائز في المقايسات التي تقترن الى رد فعل اللونية التي يمكن الكشف مع طيفي، ث: رغم آخرين، بما في ذلك البروتوكول وصفنا هنا، والاستفادة من ركائز التي لا بد أن شاردة الفلورسنت. المقايسات مضان EE وعادة ما تكون أكثر حساسية (عن طريق أمر من حجم) من المقايسات اللونية (التي تستخدم شاردة مولد اللون مرتبط مع الركيزة الاصطناعية) 12-14. يتضمن حساسية في الكشف EEA جانبين: أحدهما يرتبط كمية مجمع الفائدة وغيرها من الكشف عن ذات الصلة إلى أدنى كشف نشاط انزيم المحتملة. طرق اللونية ف نيتروفينول المقايسات (PNP) المستندة يمكن العثور عليها في الماضي يعمل 15،16. باختصار، التربة (منخول عادة إلى &lt;2 مم والمجفف في الهواء) وحضنت في الأمثل أو حقل ذات الصلة درجة الحرارة ودرجة الحموضة. المعدل الذي يتم تحديد ناتج التفاعل صدر colorimetrically مع طيفي 14. هي حساسية أعلى من المقايسات انزيم مضان ويرجع ذلك جزئيا إلى الكشف عن أكثر حساسية للفصل شاردة الفلورة المرتبطة SUBSTRأكلت تدهور بدلا من تسجيل الامتصاصية بعد فصل شاردة مولد اللون محددة في طول موجة محددة. الأكثر شيوعا مؤشرات الفلورسنت الاصطناعية هما 4 methylumbelliferone (MUB) 17 و 7 الأمينية-4-methylcoumarin (MUC) 18،19. ترتبط ركائز MUC المرتبطة عادة مع ركائز الاصطناعية N-الغنية مثل البروتينات و / أو الأحماض الأمينية. تم تطوير تقنيات الفلورسنت الأول للعينات المائية 20،21، وتطبيقها على التربة يتطلب ضوابط لتبريد إشارة والتدخل 22،23. يمكن أن تكون إما فحوصات أجريت باستخدام التقليدية &quot;أعلى مقاعد البدلاء&quot; الكيمياء مع كميات كبيرة، أو يمكن استخدامها في البروتوكولات القائمة على صفيحة ميكروسكوبية، مع زيادة الإنتاجية ولكن ربما خطأ في القياس العالي. في حين أن هناك العديد من البروتوكولات واستشهد على نطاق واسع للكشف الفلورسنت من EEAS في التربة 24، والعديد من مختبرات توظيف اختلافات دقيقة على هذه البروتوكولات، وغالبا دون قصد أو بسبب الاختلافق في المعدات المختبرية أو الكواشف. الاختلافات الصغيرة التي تبدو في تفاصيل البروتوكولات يمكن أن تؤثر بقوة قياس EEAS 25،26 وعدم وجود الانزيمات موحدة يجعل من التحدي لمعايرة المقايسات بين المختبرات المختلفة. وبالتالي، هناك حاجة مهمة لنشر بروتوكولات وإجراءات تفصيلية لتشجيع توحيد المقايسات المنطقة الاقتصادية الأوروبية. في بروتوكول لدينا، يتم إعداد عينات من التربة من خلال الجمع بين عينات التربة مع الحموضة عازلة والمجانسة مع الخلاط. ثم يتم تلقيح للعجائن مع كمية من nonlimiting fluorescently المسمى C، N-، أو ف الغنية الركيزة، الذي تم اختياره اعتمادا على سؤال البحث محددة من الفائدة. باستخدام عجائن التربة في المقايسات انزيم بمثابة التحكم للحد من القيود الركيزة نشرها. وتطفأ الأنصاف الفلورسنت حتى يتم المشقوق أنها من ركائز كل منها، ويمكن أن يتم الكشف عن النشاط وبالتالي الانزيم كما يتم تحرير صبغة الفلورسنت من الركيزة بذ رد فعل الانزيم المحفز. تزايد كثافة مضان عبر الزمن يعكس معدل التفاعل المحفز الانزيم. المفهوم العام للمقايسة انزيم مضان هو أن ركائز الاصطناعية ملزمة مع شاردة الفلورة (صبغة الفلورسنت)، تضاف إلى عينات من التربة 27. خلال حفز انزيم تدهور الركيزة، والسندات فواصل بين صبغة الفلورسنت والركيزة. وبالتالي استخدام صبغة الفلورسنت تتحرر من الركيزة إلى تقييم غير المباشرة للنشاط انزيم، ويمكن أن يكون كميا باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية للكشف عن كثافة مضان من الصبغة. في سطور، ويتم إنجاز مضان الكمي كما الصبغة المحررة تنبعث ضوء طول موجي واحد بعد امتصاص الضوء من طول موجة مختلفة. وسجلت كثافة مضان من قبل قارئ لوحة قادرة على حد سواء الإثارة والكشف. يمكن قياس نشاط انزيم في وقت لاحق على أساس المعروف بغية دراسته واقراره الفلورسنت صبغntrations الركيزة (أي كميات معروفة من الركيزة الاصطناعية المضافة إلى عينات من التربة) جنبا إلى جنب مع الرجوع إلى منحنى تخفيف مستوى كثافة مضان لشاردة الفلورة محددة من الركيزة المستخدمة في فحص (أي 4 methylumbelliferone (MUB) أو 7-الأمينية -4-methylcoumarin (MUC)). (يرجى الرجوع إلى القسم بروتوكول للحصول على تفاصيل محددة عن نشاط انزيم الكمي). المقايسات انزيم المختبرية للتربة هي مفيدة لتقييم وظيفة المجتمع الميكروبية، ولكن هناك العديد من القيود التقنية التي يجب على المستخدمين التعرف على 10. يمكن المقايسات مضان تعاني من التداخل الذي تسببه الشوائب و / أو عدم استقرار العديد من المركبات الفلورسنت عند تعرضها للضوء، لذلك الحذر مطلوب عند التعامل مع ركائز الفلورسنت 25. الجسيمات التربة و / أو المواد العضوية في التربة عجائن يمكن أيضا تتداخل مع كثافة مضان، والمعروفة باسم تأثير التبريد 26.علاوة على ذلك، المقايسات انزيم المختبر يقيم فقط EEAS المحتملة في الظروف المختبرية. في المختبر فحوصات قياس EEAS تحت الظروف التي نشرها الركيزة وفرة وnonlimiting. وبالتالي، فإن البيانات التي تقدمها هذه المقايسات قد لا تكون وكيل جيد للEEAS تحت ظروف التربة في الوضع الطبيعي 10. عموما، نشاط انزيم مفيد جدا لالمقارنات النسبية في أي نوع من أنواع التربة متشابهة. ومع ذلك، عند استخدام هذا الأسلوب للمقارنة بين الأنشطة التربة التي تختلف في الخصائص الفيزيائية أو الكيميائية، وينبغي أن تستخدم بحذر. ويرجع ذلك إلى حقيقة أن الاختلافات في نوع التربة ودرجة الحرارة يمكن أن يغير بشكل جذري دولة في حركية إنزيم الوضع الطبيعي هذا. الحد الآخر هو أن عدد قليل نسبيا من ركائز المتاحة تجاريا (بالمقارنة مع البيئة الطبيعية). علاوة على ذلك، ركائز الاصطناعية المستخدمة لفحوصات انزيم هي بسيطة نسبيا (القابلة للذوبان بسهولة) قد لا تمثل بدقة ركائز التربة الحالية أو المتوفرهه في الموقع. عامل آخر للنظر هو أن استخدام عجائن التربة سيتضمن نشاط بعض الإنزيمات استقرت (أي يجمد بواسطة المواد العضوية أو الطين) التي قد لا تكون نشطة في ظل ظروف في الموضع 2. المقايسات انزيم المختبر أيضا لا تقدم معلومات بشأن استمرار الإنزيمات في التربة (معدلات دوران انزيم) أو معلومات بشأن الأنواع الميكروبية المحددة التي تنتج الإنزيمات التربة.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/ Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents: </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Methylumbelliferyl &#945;-D-glucopyranoside (AG)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M9766</td>
			<td>Sugar degradation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Methylumbelliferyl &#946;-D-glucopyranoside (BG)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M3633</td>
			<td>Sugar degradation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Methylumbelliferyl &#946;-D-cellobioside (CB)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M6018</td>
			<td>Cellulose degradation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Leucine-7-amido-4-methylcoumarin hydrochloride (LAP)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>L2145</td>
			<td>Protein degradation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Methylumbelliferyl N-acetyl-&#946;-D-glucosaminide (NAG)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M2133</td>
			<td>Chitin degradation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Methylumbelliferyl phosphate (PHOS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M8883</td>
			<td>Phosphorus mineralization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Methylumbelliferyl-&#946;-D-xylopyranoside (XYL)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7008</td>
			<td>Hemicellulose degradation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Methylumbelliferone (MUB)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M1381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-Amino-4-methylcoumarin (MUC)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mM Sodium acetate anhydrous buffer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S210-500</td>
			<td>acidic and neutral soils</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mM Tris base buffer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP154-1</td>
			<td>basic soils</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bel-Art Scienceware disposable pipetting reservoirs</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-512-65</td>
			<td>pipetting reservoir</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic; Eppendorf Xplorer; 8-channel</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-684-265</td>
			<td>8-channel pipette, range: 50-1,200 &#956;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TipOne 101-1,250 &#956;l extended length natural tips</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1112 - 1720</td>
			<td>10 racks of 96 tips (960 tips)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hotplate; heating surface: 10 in x 10 in.</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-100-100SH</td>
			<td>Lab disc magnetic stir plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waring blender</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-509-7P</td>
			<td>Two-speed; 1 L (34 oz) stainless steel container</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAND Dispensette III bottle-top dispensers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-688-231</td>
			<td>Dispenser; range: 5-50 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wheaton Unispense &#956;P peristaltic pumps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-683-7</td>
			<td>Optional dispenser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand magnetic stir bar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1451363SIX</td>
			<td>Used to stirr soil slurry afer blending</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyrex glass bowls</td>
			<td>World Kitchen</td>
			<td>5304218</td>
			<td>Pyrex 10 oz rimmed custard cup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar 96-well black solid plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200-590</td>
			<td>Used for plate reader step</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar 96-well assay blocks</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200-700</td>
			<td>V-bottom; 2 ml; sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Nunc 96-well cap mats</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-387-93</td>
			<td>Sterile 96-well cap mat for square wells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge equipped with holders for deep-well plates</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3121</td>
			<td>Centra-GP8 (this model is no longer available)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan Infinite 200 series multifunctional microplate reader</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>30016058</td>
			<td>Plate reader (this model is no longer available)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-throughput fluorometric measurement of potential soil extracellular enzyme activities

الميكروبات في التربة وغيرها من البيئات انتاج الانزيمات خارج الخلية ليزيل البلمرة ويتحلل الجزيئات العضوية بحيث يمكن استيعابهم للحصول على الطاقة والمواد المغذية. قياس التربة نشاط انزيم الميكروبية أمر حاسم في فهم ديناميات النظام الإيكولوجي التربة وظيفية. المفهوم العام للمقايسة انزيم مضان هو أن الاصطناعية C-، N-، أو ف الغنية ملزمة مع ركائز صبغة الفلورسنت تضاف لعينات التربة. عندما سليمة، ركائز المسمى لا يتألق. يتم قياس نشاط انزيم كما الزيادة في مضان كما هي المشقوق الأصباغ الفلورية من ركائز بهم، مما يسمح لهم ليتألق. ويمكن التعبير عن القياسات انزيم في وحدات من المولية أو النشاط. لإجراء هذا الاختبار، يتم إعداد عجائن التربة من خلال الجمع بين التربة مع الحموضة عازلة. المخزن المؤقت الأس الهيدروجيني (عادة خلات الصوديوم 50 ملي أو 50 ملي تريس العازلة)، والذي تم اختياره لحمض خاصة التفكك المستمر المخزن المؤقت (الباكاف الحمضية) لمطابقة أفضل سا التربةmple درجة الحموضة. يتم تلقيح للعجائن التربة مع كمية من nonlimiting fluorescently المسمى (أي C، N-، أو ف الغنية) الركيزة. باستخدام عجائن التربة في مقايسة يعمل على تقليل القيود المفروضة على انزيم والركيزة نشرها. وبالتالي، فإن هذا الفحص الضوابط الاختلافات في الحد الركيزة، ومعدلات الانتشار، وظروف التربة ودرجة الحموضة، وبالتالي الكشف عن معدلات نشاط انزيم المحتملة بوصفها وظيفة من الفرق في تركيز انزيم (في العينة). المقايسات انزيم مضان عادة ما تكون أكثر حساسية من الطيفي (أي اللونية) المقايسات، ولكن يمكن أن تعاني من التداخل الذي تسببه الشوائب وعدم الاستقرار في العديد من المركبات الفلورسنت عند تعرضها للضوء، لذا الحذر مطلوب عند التعامل مع ركائز الفلورسنت. وبالمثل، وهذه الطريقة فقط بتقييم أنشطة انزيم المحتملة في الظروف المختبرية عندما ركائز لا يحد. ينبغي توخي الحذر عند تفسير البيانات التي تمثل الصليبيمكن مقارنات الموقع مع اختلاف درجات الحرارة أو أنواع التربة، كما هو الحال في الوضع الطبيعي نوع التربة ودرجة الحرارة تؤثر على حركية الانزيم.

Watch this Scientific Journal Video about High-throughput Fluorometric Measurement of Potential Soil Extracellular Enzyme Activities at JoVE.com

High-throughput Fluorometric Measurement of Potential Soil Extracellular Enzyme Activities

لقياس معدلات المحتملة لأنشطة انزيم خارج الخلية التربة، وتضاف ركائز الاصطناعية التي لا بد أن صبغة الفلورسنت لعينات التربة. يتم قياس نشاط الإنزيم كما يتم تحرير صبغة الفلورسنت من الركيزة عن طريق رد فعل الانزيم المحفز، حيث يشير ارتفاع مضان تدهور أكثر الركيزة.

الإنتاجية العالية فلوروميتريك قياس التربة المحتملة خارج الخلية أنزيم الأنشطة

Microbes in soils and other environments produce extracellular enzymes to depolymerize and hydrolyze organic macromolecules so that they can be ...

high-throughput-fluorometric-measurement-potential-soil-extracellular

Research

JoVE Journal

Environment

46.0K Views.  Colorado State University.  لقياس معدلات المحتملة لأنشطة انزيم خارج الخلية التربة، وتضاف ركائز الاصطناعية التي لا بد أن صبغة الفلورسنت لعينات التربة. يتم قياس نشاط الإنزيم كما يتم تحرير صبغة الفلورسنت من الركيزة عن طريق رد فعل الانزيم المحفز، حيث يشير ارتفاع مضان تد...

Video: High-throughput Fluorometric Measurement of Potential Soil Extracellular Enzyme Activities

Determination of Microbial Extracellular Enzyme Activity in Waters, Soils, and Sediments using High Throughput Microplate Assays

Much of the nutrient cycling and carbon processing in natural environments occurs through the activity of extracellular enzymes released by microorganisms. Thus, measurement of the activity of these extracellular enzymes can give insights into the rates of ecosystem level processes, such as organic matter decomposition or nitrogen and phosphorus mineralization. Assays of extracellular enzyme activity in environmental samples typically involve exposing the samples to artificial colorimetric or fluorometric substrates and tracking the rate of substrate hydrolysis. Here we describe microplate based methods for these procedures that allow the analysis of large numbers of samples within a short time frame. Samples are allowed to react with artificial substrates within 96-well microplates or deep well microplate blocks, and enzyme activity is subsequently determined by absorption or fluorescence of the resulting end product using a typical microplate reader or fluorometer. Such high throughput procedures not only facilitate comparisons between spatially separate sites or ecosystems, but also substantially reduce the cost of such assays by reducing overall reagent volumes needed per sample.

Microplate based procedures are described for the colorimetric or fluorometric analysis of extracellular enzyme activity. These procedures allow for the rapid assay of such activity in large numbers of environmental samples within a manageable time frame.

تقرير من خارج الخلية الميكروبية نشاط انزيم في المياه، والتربة، والرواسب باستخدام إنتاجية عالية صفيحة ميكروسكوبية فحوصات

Much of the nutrient cycling and carbon  processing in natural environments occurs through the activity of extracellular  enzymes released by ...

Design and Operation of a Continuous 13C and 15N Labeling Chamber for Uniform or Differential, Metabolic and Structural, Plant Isotope Labeling

Tracing rare stable isotopes from plant material through the ecosystem provides the most sensitive information about ecosystem processes; from CO2 fluxes and soil organic matter formation to small-scale stable-isotope biomarker probing. Coupling multiple stable isotopes such as 13C with 15N, 18O or&#160;2H has the potential to reveal even more information about complex stoichiometric relationships during biogeochemical transformations. Isotope labeled plant material has been used in various studies of litter decomposition and soil organic matter formation1-4. From these and other studies, however, it has become apparent that structural components of plant material behave differently than metabolic components (i.e. leachable low molecular weight compounds) in terms of microbial utilization and long-term carbon storage5-7. The ability to study structural and metabolic components separately provides a powerful new tool for advancing the forefront of ecosystem biogeochemical studies. Here we describe a method for producing 13C and 15N labeled plant material that is either uniformly labeled throughout the plant or differentially labeled in structural and metabolic plant components.
Here, we present the construction and operation of a continuous 13C and 15N labeling chamber that can be modified to meet various research needs. Uniformly labeled plant material is produced by continuous labeling from seedling to harvest, while differential labeling is achieved by removing the growing plants from the chamber weeks prior to harvest. Representative results from growing Andropogon gerardii Kaw demonstrate the system&#39;s ability to efficiently label plant material at the targeted levels. Through this method we have produced plant material with a 4.4 atom%13C and 6.7 atom%15N uniform plant label, or material that is differentially labeled by up to 1.29 atom%13C and 0.56 atom%15N in its metabolic and structural components (hot water extractable and hot water residual components, respectively). Challenges lie in maintaining proper temperature, humidity, CO2 concentration,&#160;and light levels in an airtight 13C-CO2 atmosphere for successful plant production. This chamber description represents a useful research tool to effectively produce uniformly or differentially multi-isotope labeled plant material for use in experiments on ecosystem biogeochemical cycling.

Design and Operation of a Continuous 13C and 15N Labeling Chamber for Uniform or Differential, Metabolic and Structural, Plant Isotope Labeling

This method explains how to build and operate a continuous 13C and 15N isotope labeling chamber for uniform or differential plant tissue labeling. Representative results from metabolic and structural labeling of Andropogon gerardii are discussed.

تصميم وتشغيل المستمر<sup&gt; 13</sup&gt; C و<sup&gt; 15</sup&gt; N غرفة صفها الموحدة لأو التفاضلية، الأيض والإنشائية، مصنع النظائر وصفها

Tracing rare stable isotopes from plant material through the ecosystem provides the most sensitive information about ecosystem processes; from CO2 fluxes ...

Soil Sampling and Isolation of Entomopathogenic Nematodes (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Entomopathogenic nematodes (a.k.a. EPN) represent a group of soil-inhabiting nematodes that parasitize a wide range of insects. These nematodes belong to two families: Steinernematidae and Heterorhabditidae. Until now, more than 70 species have been described in the Steinernematidae and there are about 20 species in the Heterorhabditidae. The nematodes have a mutualistic partnership with Enterobacteriaceae bacteria and together they act as a potent insecticidal complex that kills a wide range of insect species.
Herein, we focus on the most common techniques considered for collecting EPN from soil. The second part of this presentation focuses on the insect-baiting technique, a widely used approach for the isolation of EPN from soil samples, and the modified White trap technique which is used for the recovery of these nematodes from infected insects. These methods and techniques are key steps for the successful establishment of EPN cultures in the laboratory and also form the basis for other bioassays that consider these nematodes as model organisms for research in other biological disciplines. The techniques shown in this presentation correspond to those performed and/or designed by members of S. P. Stock laboratory as well as those described by various authors.

Soil Sampling and Isolation of Entomopathogenic Nematodes Steinernematidae, Heterorhabditidae

Entomopathogenic nematodes are soil-inhabiting roundworms that parasitize a wide range of insects. We demonstrate sampling methods used for the isolation of these nematodes from the soil using two techniques: the insect baiting and the modified White trap, for the recovery of nematodes from soil samples and infected insect cadavers, respectively.

أخذ العينات التربة والنيماتودا الممرضة للحشرات عزل (Steinernematidae، Heterorhabditidae)

Entomopathogenic nematodes (a.k.a. EPN) represent a group of soil-inhabiting nematodes that parasitize a wide range of insects. These nematodes belong to ...

Measurement of Greenhouse Gas Flux from Agricultural Soils Using Static Chambers

Measurement of greenhouse gas (GHG) fluxes between the soil and the atmosphere, in both managed and unmanaged ecosystems, is critical to understanding the biogeochemical drivers of climate change and to the development and evaluation of GHG mitigation strategies based on modulation of landscape management practices. The static chamber-based method described here is based on trapping gases emitted from the soil surface within a chamber and collecting samples from the chamber headspace at regular intervals for analysis by gas chromatography. Change in gas concentration over time is used to calculate flux. This method can be utilized to measure landscape-based flux of carbon dioxide, nitrous oxide, and methane, and to estimate differences between treatments or explore system dynamics over seasons or years. Infrastructure requirements are modest, but a comprehensive experimental design is essential. This method is easily deployed in the field, conforms to established guidelines, and produces data suitable to large-scale GHG emissions studies.

This article showcases the static chamber-based method for measurement of greenhouse gas flux from soil systems. With relatively modest infrastructure investments, measurements may be obtained from multiple treatments/locations and over timeframes ranging from hours to years.

قياس الجريان غازات الاحتباس الحراري من الأراضي الزراعية عن طريق الغرف ثابت

Measurement of greenhouse gas (GHG) fluxes between the soil and the atmosphere, in both managed and unmanaged ecosystems, is critical to understanding the ...

Semi-High Throughput Screening for Potential Drought-tolerance in Lettuce (Lactuca sativa) Germplasm Collections

This protocol describes a method by which a large collection of the leafy green vegetable lettuce (Lactuca sativa L.) germplasm was screened for likely drought-tolerance traits. Fresh water availability for agricultural use is a growing concern across the United States as well as many regions of the world. Short-term drought events along with regulatory intervention in the regulation of water availability coupled with the looming threat of long-term climate shifts that may lead to reduced precipitation in many important agricultural regions has increased the need to hasten the development of crops adapted for improved water use efficiency in order to maintain or expand production in the coming years. This protocol is not meant as a step-by-step guide to identifying at either the physiological or molecular level drought-tolerance traits in lettuce, but rather is a method developed and refined through the screening of thousands of different lettuce varieties. The nature of this screen is based in part on the streamlined measurements focusing on only three water-stress indicators: leaf relative water content, wilt, and differential plant growth following drought-stress. The purpose of rapidly screening a large germplasm collection is to narrow the candidate pool to a point in which more intensive physiological, molecular, and genetic methods can be applied to identify specific drought-tolerant traits in either the lab or field. Candidates can also be directly incorporated into breeding programs as a source of drought-tolerance traits.

Semi-High Throughput Screening for Potential Drought-tolerance in Lettuce Lactuca sativa Germplasm Collections

This protocol was developed to screen a large germplasm collection of the leafy vegetable lettuce (Lactuca sativa L.) for drought-tolerance, in order to identify a small candidate pool of lettuce for use in physiological, molecular, and genetic studies to identify underlying drought-tolerance traits along with breeding programs.

شبه عالية الإنتاجية لفحص إمكانية الجفاف التسامح في الخس (<em&gt; خس ساتيفا</em&gt;) مجموعات الأصول الوراثية

This protocol describes a method by which a large collection of the leafy green vegetable lettuce (Lactuca sativa L.) germplasm was screened for likely ...

A Gusseted Thermogradient Table to Control Soil Temperatures for Evaluating Plant Growth and Monitoring Soil Processes

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a series of incubators. A temperature gradient is passively established across the surface of the table between the heated and cooled ends and is lost quickly at distances above the surface. Since temperature is only controlled on the table surface, experiments are restricted to shallow containers, such as Petri dishes, placed on the table. Welding continuous aluminum vertical strips or gussets perpendicular to the surface of a table enables temperature control in depth via convective heat flow. Soil in the channels between gussets was maintained across a gradient of temperatures allowing a greater diversity of experimentation. The gusseted design was evaluated by germinating oat, lettuce, tomato, and melon seeds. Soil temperatures were monitored using individual, battery-powered dataloggers positioned across the table. LED lights installed in the lids or along the sides of the gradient table create a controlled temperature chamber where seedlings can be grown over a range of temperatures. The gusseted design enabled accurate determination of optimum temperatures for fastest germination rate and the highest percentage germination for each species. Germination information from gradient table experiments can help predict seed germination and seedling growth under the adverse soil conditions often encountered during field crop production. Temperature effects on seed germination, seedling growth, and soil ecology can be tested under controlled conditions in a laboratory using a gusseted thermogradient table.

Traditional thermogradient tables create a range of temperatures across the surface. Welding gussets perpendicular to the surface of a thermogradient table will control temperature in depth increasing possible research applications.

والجدول Gusseted Thermogradient لتنظيم درجة الحرارة التربة لتقييم نمو النبات ومراقبة العمليات التربة

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a ...

A 3-dimensional (3D)-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related research fields. Thanks to its unique features, including large fecundity, embryo translucency, rapid and simultaneous development, etc., zebrafish embryos are often used for large scale toxicity assessment of chemicals and drug/compound screening. A typical screening procedure involves adult zebrafish spawning, embryos selection, and arraying the embryos into multi-well plates. From there, embryos are subjected to exposure and the toxicity of chemical, or the effectiveness of the drugs/compounds can be evaluated relatively quickly based on phenotypic observations. Among these processes, embryos arraying is one of the most time-consuming and labor-intensive steps that limits the throughput level. In this protocol, we present an innovative approach that makes use of a 3D-printed arraying template coupled with vacuum manipulation to speed up this laborious step. The protocol herein describes the overall design of the arraying template, a detailed experimental setup and step-by-step procedure, followed by representative results. When implemented, this approach should prove beneficial in a variety of research applications using zebrafish embryos as testing subjects.

A 3-dimensional 3D-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

Here, we present a protocol to design and fabricate a zebrafish embryo arraying template, followed by a detailed procedure on the use of such template for high throughput zebrafish embryo arraying into a 96-well plate.

3-الأبعاد (3D)--طباعة قالب للجنين الزرد الإنتاجية العالية أرايينج

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related ...

Use of Principal Components for Scaling Up Topographic Models to Map Soil Redistribution and Soil Organic Carbon

Landscape topography is a critical factor affecting soil formation and plays an important role in determining soil properties on the earth surface, as it regulates the gravity-driven soil movement induced by runoff and tillage activities. The recent application of Light Detection and Ranging (LiDAR) data holds promise for generating high spatial resolution topographic metrics that can be used to investigate soil property variability. In this study, fifteen topographic metrics derived from LiDAR data were used to investigate topographic impacts on redistribution of soil and spatial distribution of soil organic carbon (SOC). Specifically, we explored the use of topographic principal components (TPCs) for characterizing topography metrics and stepwise principal component regression (SPCR) to develop topography-based soil erosion and SOC models at site and watershed scales. Performance of SPCR models was evaluated against stepwise ordinary least square regression (SOLSR) models. Results showed that SPCR models outperformed SOLSR models in predicting soil redistribution rates and SOC density at different spatial scales. Use of TPCs removes potential collinearity between individual input variables, and dimensionality reduction by principal component analysis (PCA) diminishes the risk of overfitting the prediction models. This study proposes a new approach for modeling soil redistribution across various spatial scales. For one application, access to private lands is often limited, and the need to extrapolate findings from representative study sites to larger settings that include private lands can be important.

Landscape processes are critical components of soil formation and play important roles in determining soil properties and spatial structure in landscapes. We propose a new approach using stepwise principal component regression to predict soil redistribution and soil organic carbon across various spatial scales.

استخدام المكونات الرئيسية للارتقاء بمستوى نماذج الطبوغرافية لتعيين الكربون العضوي في التربة وإعادة توزيع الأراضي

Landscape topography is a critical factor affecting soil formation and plays an important role in determining soil properties on the earth surface, as it ...

High-throughput Siderophore Screening from Environmental Samples: Plant Tissues, Bulk Soils, and Rhizosphere Soils

Siderophores (low-molecular weight metal chelating compounds) are important in various ecological phenomenon ranging from iron (Fe) biogeochemical cycling in soils, to pathogen competition, plant growth promotion, and cross-kingdom signaling. Furthermore, siderophores are also of commercial interest in bioleaching and bioweathering of metal-bearing minerals and ores. A rapid, cost effective, and robust means of quantitatively assessing siderophore production in complex samples is key to identifying important aspects of the ecological ramifications of siderophore activity, including, novel siderophore producing microbes. The method presented here was developed to assess siderophore activity of in-tact microbiome communities, in environmental samples, such as soil or plant tissues. The samples were homogenized and diluted in a modified M9 medium (without Fe), and enrichment cultures were incubated for 3 days. Siderophore production was assessed in samples at 24, 48, and 72 hours (h) using a novel 96-well microplate CAS (Chrome azurol sulphonate)-Fe agar assay, an adaptation of the traditionally tedious and time-consuming colorimetric method of assessing siderophore activity, performed on individual cultivated microbial isolates. We applied our method to 4 different genotypes/Lines of wheat (Triticum aestivum L.), including Lewjain, Madsen, and PI561725, and PI561727 commonly grown in the inland Pacific Northwest. Siderophore production was clearly impacted by the genotype of wheat, and in the specific types of plant tissues observed. We successfully used our method to rapidly screen for the influence of plant genotype on siderophore production, a key function in terrestrial and aquatic ecosystems. We produced many technical replicates, yielding very reliable statistical differences in soils and within plant tissues. Importantly, the results show the proposed method can be used to rapidly examine siderophore production in complex samples with a high degree of reliability, in a manner that allows communities to be preserved for later work to identify taxa and functional genes.

We present a protocol for rapid screening of environmental samples for siderophore potential contributing to micronutrient bioavailability and turnover in terrestrial systems.

الفحص سيديروفوري الفائق من العينات البيئية: زراعة الأنسجة، والتربة السائبة، وتربة Rhizosphere

Siderophores (low-molecular weight metal chelating compounds) are important in various ecological phenomenon ranging from iron (Fe) biogeochemical cycling ...

Estimation of Crystalline Cellulose Content of Plant Biomass using the Updegraff Method

Cellulose is the most abundant polymer on Earth generated by photosynthesis and the main load-bearing component of cell walls. The cell wall plays a significant role in plant growth and development by providing strength, rigidity, rate and direction of cell growth, cell shape maintenance, and protection from biotic and abiotic stressors. The cell wall is primarily composed of cellulose, lignin, hemicellulose and pectin. Recently plant cell walls have been targeted for the second-generation biofuel and bioenergy production. Specifically, the cellulose component of the plant cell wall is used for the production of cellulosic ethanol. Estimation of cellulose content of biomass is critical for fundamental and applied cell wall research. The Updegraff method is simple, robust, and the most widely used method for the estimation of crystalline cellulose content of plant biomass. The alcohol insoluble crude cell wall fraction upon treatment with Updegraff reagent eliminates the hemicellulose and lignin fractions. Later, the Updegraff reagent resistant cellulose fraction is subjected to sulfuric acid treatment to hydrolyze the cellulose homopolymer into monomeric glucose units. A regression line is developed using various concentrations of glucose and used to estimate the amount of the glucose released upon cellulose hydrolysis in the experimental samples. Finally, the cellulose content is estimated based on the amount of glucose monomers by colorimetric anthrone assay.

The Updegraff method is the most widely used method for the cellulose estimation. The main purpose of this demonstration is to provide a detailed Updegraff protocol for estimation of cellulose content in plant biomass samples.

تقدير محتوى السليلوز البلوري للكتلة الحيوية النباتية باستخدام طريقة Updegraff

Cellulose is the most abundant polymer on Earth generated by photosynthesis and the main load-bearing component of cell walls. The cell wall plays a ...