فإن الكتاب أود أن أشكر جميع أعضاء المختبر Dumenil، ولا سيما سيلك سيلفا لقراءة نقدية للمخطوطة. قسم الجراحة في مستشفى Hôpital EUROPEEN جورج بومبيدو-(HEGP)، والدكتور ديفيد Maladry. مايكل Hivelin والدكتور باتريك Bruneval، قسم علم الأمراض في HEGP. مرفق الحيوانية في PARCC، برئاسة إليزابيث HUC. وأيد هذا العمل من قبل وكالات منحة التالي: ماري كوري الزمالة منتدى الطاقة الدولي لا. 273223 (KM)، ATIP-أفينير منحة من INSERM، المعدات CODDIM منحة (إيل دو فرانس المنطقة)، FRM (مؤسسة بحوث صب لا MEDICALE) منحة المعدات، مختبر IBEID التميز الكونسورتيوم ANR (الوكالة الوطنية صب لا بحوث) منحة &quot; الخلل في والتدفق &quot;. كان الممولين أي دور في تصميم الدراسة وجمع البيانات والتحليل، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة.

<ol>
	<li>Davis, C. E., Arnold, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+meningococcal+endotoxin+in+Meningococcal+purpura.">Role of meningococcal endotoxin in Meningococcal purpura.</a> J. Exp. Med. 140, 159-171 (1974).</li><li>Mairey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microcirculation+shear+stress+levels+determine+Neisseria+meningitidis+attachment+sites+along+the+blood-brain+barrier.">Cerebral microcirculation shear stress levels determine Neisseria meningitidis attachment sites along the blood-brain barrier.</a> J. Exp. Med. 203, 1939-1950 (2006).</li><li>Brandtzaeg, P., van Deuren, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classification+and+pathogenesis+of+meningococcal+infections.">Classification and pathogenesis of meningococcal infections.</a> Methods Mol. Biol. 799, 21-35 (2012).</li><li>Guarner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+diagnosis+of+human+meningococcal+disease+using+immunohistochemical+and+PCR+assays.">Pathogenesis and diagnosis of human meningococcal disease using immunohistochemical and PCR assays.</a> Am. J. Clin. Pathol. 122, 754-764 (2004).</li><li>Hill, W. R., Kinney, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cutaneous+lesions+in+acute+meningococcemia;+a+clinical+and+pathologic+study.">The cutaneous lesions in acute meningococcemia; a clinical and pathologic study.</a> J. Am. Med. Assoc. 134, 513-518 (1947).</li><li>Capecchi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+NadA+is+a+new+invasin+which+promotes+bacterial+adhesion+to+and+penetration+into+human+epithelial+cells.">Neisseria meningitidis NadA is a new invasin which promotes bacterial adhesion to and penetration into human epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 55, 687-698 (2005).</li><li>Merz, A. J., Enns, C. A., So, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+IV+pili+of+pathogenic+Neisseriae+elicit+cortical+plaque+formation+in+epithelial+cells.">Type IV pili of pathogenic Neisseriae elicit cortical plaque formation in epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 32, 1316-1332 (1999).</li><li>Morand, P. C., Tattevin, P., Eugene, E., Beretti, J. L., Nassif, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adhesive+property+of+the+type+IV+pilus-associated+component+PilC1+of+pathogenic+Neisseria+is+supported+by+the+conformational+structure+of+the+N-terminal+part+of+the+molecule.">The adhesive property of the type IV pilus-associated component PilC1 of pathogenic Neisseria is supported by the conformational structure of the N-terminal part of the molecule.</a> Mol. Microbiol. 40, 846-856 (2001).</li><li>Taha, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+induces+the+expression+of+the+TNF-alpha+gene+in+endothelial+cells.">Neisseria meningitidis induces the expression of the TNF-alpha gene in endothelial cells.</a> Cytokine. 12, 21-25 (2000).</li><li>Kirchner, M., Meyer, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PilC+adhesin+of+the+Neisseria+type+IV+pilus-binding+specificities+and+new+insights+into+the+nature+of+the+host+cell+receptor.">The PilC adhesin of the Neisseria type IV pilus-binding specificities and new insights into the nature of the host cell receptor.</a> Mol. Microbiol. 56, 945-957 (2005).</li><li>Mikaty, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+bacterial+pathogen+induces+host+cell+surface+reorganization+to+resist+shear+stress.">Extracellular bacterial pathogen induces host cell surface reorganization to resist shear stress.</a> PLoS Pathog. 5, (2009).</li><li>Johansson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD46+in+meningococcal+disease.">CD46 in meningococcal disease.</a> Science. 301, 373-375 (2003).</li><li>Kirchner, M., Heuer, D., Meyer, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD46-independent+binding+of+Neisserial+type+IV+pili+and+the+major+pilus+adhesin,+PilC,+to+human+epithelial+cells.">CD46-independent binding of Neisserial type IV pili and the major pilus adhesin, PilC, to human epithelial cells.</a> Infect. Immun. 73, 3072-3082 (2005).</li><li>Noinaj, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+iron+piracy+by+pathogenic+Neisseria.">Structural basis for iron piracy by pathogenic Neisseria.</a> Nature. 483, 53-58 (2012).</li><li>Schryvers, A. B., Gonzalez, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptors+for+transferrin+in+pathogenic+bacteria+are+specific+for+the+host's+protein.">Receptors for transferrin in pathogenic bacteria are specific for the host's protein.</a> Can. J. Microbiol. 36, 145-147 (1990).</li><li>Oftung, F., Lovik, M., Andersen, S. R., Froholm, L. O., Bjune, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+utilising+human+transferrin+to+study+protection+against+Neisseria+meningitidis+serogroup+B+induced+by+outer+membrane+vesicle+vaccination.">A mouse model utilising human transferrin to study protection against Neisseria meningitidis serogroup B induced by outer membrane vesicle vaccination.</a> FEMS Immunol. Med. Microbiol. 26, 75-82 (1999).</li><li>Zarantonelli, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+human+transferrin+as+a+model+for+meningococcal+infection.">Transgenic mice expressing human transferrin as a model for meningococcal infection.</a> Infect. Immun. 75, 5609-5614 (2007).</li><li>Melican, K., Michea Veloso, P., Martin, T., Bruneval, P., Dumenil, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+of+Neisseria+meningitidis+to+dermal+vessels+leads+to+local+vascular+damage+and+purpura+in+a+humanized+mouse+model.">Adhesion of Neisseria meningitidis to dermal vessels leads to local vascular damage and purpura in a humanized mouse model.</a> PLoS Pathog. 9, (2013).</li><li>Murray, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+T-cell-mediated+destruction+of+allogeneic+dermal+microvessels+in+a+severe+combined+immunodeficient+mouse.">Human T-cell-mediated destruction of allogeneic dermal microvessels in a severe combined immunodeficient mouse.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91, 9146-9150 (1994).</li><li>Nassif, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigenic+variation+of+pilin+regulates+adhesion+of+Neisseria+meningitidis+to+human+epithelial+cells.">Antigenic variation of pilin regulates adhesion of Neisseria meningitidis to human epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 8, 719-725 (1993).</li><li>Geoffroy, M. C., Floquet, S., Metais, A., Nassif, X., Pelicic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+analysis+of+the+meningococcus+genome+by+gene+disruption:+resistance+to+complement-mediated+lysis.">Large-scale analysis of the meningococcus genome by gene disruption: resistance to complement-mediated lysis.</a> Genome Res. 13, 391-398 (2003).</li><li>Ho, M., Hickey, M. J., Murray, A. G., Andonegui, G., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+Plasmodium+falciparum-endothelium+interactions+in+human+microvasculature:+mimicry+of+leukocyte+recruitment.">Visualization of Plasmodium falciparum-endothelium interactions in human microvasculature: mimicry of leukocyte recruitment.</a> J. Exp. Med. 192, 1205-1211 (2000).</li></ol>

الكتاب تعلن أي المصالح المالية المتنافسة.

النماذج الحيوانية هي ذات أهمية حاسمة لبحث المرضية البكتيرية. فمن المستحيل أن تحاكي تماما البيئة في الجسم الحي في خلية ثقافة وبات من الواضح أن التفاعل المضيف الممرض يتأثر العديد من العوامل الديناميكية. خصوصية الإنسان من بعض مسببات الأمراض الهامة سريريا، مثل N. السحائية، فيروس نقص المناعة البشرية والتهاب الكبد C، المتصورة المنجلية، المستوحدة الليستيريا، والسالمونيلا التيفية ويقتصر استخدام في الجسم الحي نماذج لهذه الالتهابات. لكن، وكما أن نبدأ في فهم الخطوات التي تشارك المعدية في خصوصية، ويجري حاليا وضع نماذج أنسنة. بروتوكول الموصوفة هنا هو دليل على هذا مع الأخذ microvessels الإنسان في الفئران، مما يسمح للعدوى واسعة في الجسم الحي مع N. السحائية، مما أدى إلى تلف الأوعية الدموية وأحيانا تطور الطفح الجلدي الفرفري. باستخدام هذا النموذج،كنا قادرين على تحديد أن خصائص لاصقة من البرلمان الاتحادي الانتقالي يشاركون في الاستعمار الأوعية الدموية في الجسم الحي باستخدام المسوخ البكتيرية والتي يتم تقليل تلف الأوعية الدموية في غياب التصاق 18. سابقا، قد تورطت تعميم المنتجات البكتيرية في هذا الضرر ولكن تشير نتائجنا دورا حاسما للالتصاق المحلية والاستعمار الأوعية الدموية. هذا يفتح آفاقا جديدة لتطوير أهداف العلاج الرواية. إذا يمكن أن يكون قد تم حظره من التصاق البكتيريا المسببة للأمراض صيدلي يمكن أن ربما منع تطور آفات الجلد وتؤدي إلى نتائج أفضل للناجين من المكورات السحائية من حيث نخر الأنسجة، التنضير وبتر الأطراف. وقد أظهرت أعمال أيضا تعقيد العدوى وإشراك الاستجابة المناعية والتخثر تتالي. حددنا إشارات خلوى الإنسان في مصل الفئران المصابة على الرغم من كمية صغيرة نسبيا من البطانة الإنسان الحاضر 18.وأشارت هذه استجابة كبيرة خلوى، جنبا إلى جنب مع تسلل الفأر السكان الخلايا المناعية في المنطقة. يمكن أن النماذج الحيوانية بالطبع أبدا تكرار بالكامل الأمراض التي تصيب البشر وحصل كل النتائج منها يجب النظر مع هذا في الاعتبار. على سبيل المثال، في هذا النموذج الدم والخلايا المنتشرة هي من أصل الماوس ونحن لا نستبعد أنها قد تتصرف بشكل مختلف للخلايا البشرية. ميزة هذا ومع ذلك، كما هو موضح في منشور صدر مؤخرا لدينا 18، هو القدرة على التفريق إشارة تنشأ من البطانة الإنسان من أن من خلايا فأر المنتشرة. ان الخلفية المناعة من الفئران المستخدمة في هذا النموذج يسمح أيضا لنقل خيفي من السكان الخلايا المناعية البشرية، إضافة &#39;أنسنة&#39; جانب آخر. لكن الخلفية المناعة من الفئران قد تخفي دور للNK، T أو B الخلايا، التي تفتقر إلى كل أو خلل في هذا النموذج. والشور نسبيار زمني (24 ساعة) المستخدمة في هذا النموذج تتعلق أساسا استجابة فطرية، ولكن لالتهابات على المدى الطويل، ووضع حصانة الخيارات الأخرى قد تحتاج إلى من يكتشفها. الجلد هو موقع الإصابة المهم بالنسبة N. السحائية ولكن وجود كمية صغيرة نسبيا من السفن الإنسان يعني أيضا أن استقراء البيانات إلى العدوى النظامية التي تنطوي على العديد من الأجهزة أمر صعب. في حين أن هذا النموذج يسمح لدراسة التنمية الآفة الجلدية، ليست مدرجة الخطوات الهامة للعدوى المكورات السحائية مثل الظهارية والدم في الدماغ المعبر. هناك حاجة إلى مواصلة تطوير هذه النماذج أنسنة لمعالجة هذه الجوانب الأخرى من العدوى. ومع ذلك يقدم هذا النموذج إمكانات كبيرة للعديد من مسببات الأمراض المحددة الإنسان، لا سيما تلك التي تستهدف الأوعية الدموية.

الإنتان هو عدوى المكورات السحائية الدم ولد قاتلة في كثير من الأحيان الناجمة عن مسببات الأمراض البكتيرية التهاب السحايا النيسيري. مرضى الإنتان المكورات السحائية غالبا ما تكون موجودة مع طفح دموية صغيرة أو برفريا على الجلد الذي سبق المرتبطة تدمير الأوعية الدموية التي تسببها البكتيريا المنتشرة والمنتجات البكتيرية 1. خزعات الجلد من المرضى السريرية تظهر البكتيريا المرتبطة microvessels، وغالبا ما يملأ الأوعية 2. وبصرف النظر عن تسرب البكتيريا والجلطة واسعة النطاق، تجلط الدم، واحتقان الأوعية الدموية وينظر في المناطق الفرفري 3-5. هذا تلف الأوعية الدموية يمكن أن يؤدي إلى نخر واسعة من الجلد والأنسجة المحيطة بها، مما أدى إلى بتر التنضير وحتى في الناجين السحائية. فهم كيف يسبب عدوى هذا الضرر الأوعية الدموية مهم لتحسين استراتيجيات الوقاية والعلاج. وقد أجريت غالبية الأبحاث على الإنتان المكورات السحائية في المختبر علىخطوط الخلايا البشرية نظرا لخصوصية الإنسان من N. السحائية. وقد تم دراسة العديد من الجوانب العدوى في المختبر بما في ذلك التصاق البكتيريا، استجابة الخلية المضيفة، وكذلك استجابة خلوى 6-9. النوع الرابع الشعرة (TFP) قد تورطت كما عضية التصاق الرئيسية للN. السحائية على كل من الخلايا الظهارية والبطانية 10. وقد تبين أيضا أن التصاق N. السحائية إلى الخلايا المضيفة هو إجهاد القص تعتمد وبالتالي يعتقد أن لهما صلة معدلات تدفق الدم في الأوعية الدموية الدقيقة 11. هذا يشير إلى الضغوط الحيوية مواجهة البكتيريا في الجسم الحي تعتبر حاسمة بالنسبة لإمراض. غير أنه من الصعب جدا لنموذج المكروية من السفن الصغيرة في المختبر. مستقبلات الالتصاق لالنيسيري البرلمان الاتحادي الانتقالي لا يزال مجهولا، وبالتالي الضربة القاضية في الاستراتيجيات الرامية إلى تحقيق التصاق البكتيريا في نموذج حيواني لا يمكن تصور في هذا الوقت. واقترح أن تكون CD46 تم إنتاج مستقبلات TFP والحيوانات المعدلة وراثيا لتكون بمثابة نماذج الماوس. ومع ذلك، لا تؤدي العدوى في هذه الحيوانات للإصابة واسعة أو طفح 12،13 التنمية. النماذج الحيوانية الأخرى التي تم وصفها من الناحية تجرثم الدم من العدوى النيسرية تأخذ في الاعتبار تفضيل البكتيرية لترانسفيرين الإنسان كمصدر للحديد 14،15. إما المكمل ترانسفيرين الإنسان أو التعبير عن ذلك من نتائج التحوير في زيادة الحمولة الجرثومية في مجرى الدم على مدى فترة زمنية طويلة، ولكن هذا النموذج لا يظهر التصاق البكتيريا أو تطوير طفح 16،17. في هذا البروتوكول، ونحن تصف نموذج الفأر أنسنة التي يتم فيها زرع جلد الإنسان، بما في ذلك الأوعية الدموية الدقيقة الجلدي، على الفئران المناعة 18،19. هذه النتائج في الأوعية الإنسان وظيفية، مع perfused تداول الماوس. جنبا إلى جنب مع مكملات ترانسفيرين الإنسان، وهذا محسابات مركز Odel لاثنين على الأقل من جوانب محددة من الإنسان N. السحائية، أي البطانة الإنسان وترانسفيرين الإنسان، في بيئة الجسم الحي. N. قدم السحائية عن طريق الوريد في هذا النموذج الالتزام على وجه التحديد إلى البطانة الإنسان، مما ينتج عنه أمراض مشابهة لما ورد في المرضى السريرية، بما في ذلك الضرر الأوعية الدموية والتنمية طفح الفرفري 18.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="693">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">DMEM</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">31885-023</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">10010-056</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Ketamine 500</td>
			<td style="width:161px;">Virbac France&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">LOT N&#176;VAL4243</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Xylazine</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Bayer Healthcare</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">AMM N&#176; FR/8146715 2/1980</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;">LOT N&#176; KPO809S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">(Rompun 2%)</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:247px;">Optigel&#160;&#160;&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Europhta</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">Medicament autoris&#233; N&#176;3400933521134</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Lacrigel&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Tronothane</td>
			<td style="width:161px;">Lisa Pharma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="40" rowspan="2" style="height:40px;width:247px;">GC agar Base</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Conda</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">1106</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Human endothelium SFM media</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">11111</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:161px;">P A A</td>
			<td style="width:119px;">A15-101</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Human transferrin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T3309</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">UEA lectin - rhodamine</td>
			<td style="width:161px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">RL-1062</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Hematoxylin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H9627</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Eosin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E4009&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Xylene</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">534056</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;">Humeca BV, Holland</td>
			<td style="width:119px;">4.SB01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Equiptment Name</td>
			<td style="width:161px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalogue Number</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Sober Hand Dermatome</td>
			<td style="width:161px;">Humeca BV, Holland</td>
			<td style="width:119px;">4.SB01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Animal housing</td>
			<td style="width:161px;">Innovive</td>
			<td style="width:119px;">M-BTM-C8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Biopsy punch (4 mm)</td>
			<td style="width:161px;">Dominic Dutscher</td>
			<td style="width:119px;">30737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Fast-Prep lysing matrix M tubes</td>
			<td style="width:161px;">MP Bio</td>
			<td style="width:119px;">116923050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">MagNA Lyzer Green Beads</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">3358941001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">MagNA Lyzer</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">3358976001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Vectashield mounting media</td>
			<td style="width:161px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Vetbond</td>
			<td style="width:161px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">1469SB</td>
			<td>Tissue Glue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">OCT tissue tek</td>
			<td style="width:161px;">Sakura</td>
			<td style="width:119px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

humanized mouse model to study bacterial infections targeting the microvasculature

النيسرية السحائية يسبب شديدة، وتعفن الدم قاتلة في كثير من الأحيان عندما يدخل مجرى دم الإنسان. العدوى يؤدي إلى أضرار واسعة النطاق في الأوعية الدموية مما يؤدي إلى تسرب الأوعية الدموية، وتطوير طفح فرفرية ونخر الأنسجة في نهاية المطاف. دراسة التسبب في هذا المرض كان محدودا من قبل خصوصية الإنسان من البكتيريا، الأمر الذي يجعل من الصعب في النماذج الحية. في هذا البروتوكول، ونحن تصف نموذجا أنسنة لهذا المرض الذي جلد الإنسان، التي تحتوي على microvessels الجلدي، وتطعم الفئران المناعة. هذه السفن يفاغر مع تداول الماوس مع الحفاظ على خصائص الإنسان. مرة واحدة أدخلت هذا النموذج، N. السحائية الالتزام حصرا لسفن الإنسان، مما أدى إلى تلف الأوعية الدموية واسعة، والتهاب في بعض الحالات تطور الطفح الفرفري. يصف هذا البروتوكول الخطوات التطعيم، والعدوى وتقييم هذا النموذج في كونتيXT من N. الإصابة السحائية. ويمكن تطبيق هذه التقنية في العديد من مسببات الأمراض التي تصيب الإنسان محددة مجرى الدم.

التهم كفو وN. سلالة السحائية المستخدمة في هذه النتائج هو ممثل N. السحائية 8013 استنساخ 12، وعزل السريرية المصلية C، معربا عن فئة I SB بايلين، أوبا -، بمسانده -، PilC1 + / + 20 PilC2. وقد تم تصميم سلالة للتعبير عن بروتين الفلورية الخضراء (GFP) من الإدراج الكروموسومات 18. يتم تأسيس مستعمرة بكتيرية تشكيل التهم حدة عن طريق حساب عدد من المستعمرات على لوحات أجار وحساب إما كفو / مل من الدم أو كفو / ملغ من الأنسجة من وحدات التخزين المعروفة مطلي. وأظهرت التهم الدم الذي 5 دقائق بعد الحقن الرابع من 10 6 البكتيريا كفو كان هناك في المتوسط ​​1.5 × 10 5 كفو / مل في الدم (الشكل 1A). بعد 6 ساعة متوسط ​​التهم 4.8 × 10 4 كفو / مل. قبل 24 ساعة كان متوسط ​​تعداد 2.4 × 10 4 كفو / مل ولكن في هذه المجموعة من الفئران 10، 5 زيارتهالا يمكن كشفها تعميم البكتيريا بينما كان غيرها من التهم 5 مرتفعة نسبيا (الشكل 1A). التهم كفو المأخوذة من عينات الجلد تظهر غالبية من الفئران وجود تهمة كبيرة في الجلد البشري، حيث بلغ متوسطها 2.1 × 10 4 كفو / ملغ من الأنسجة في 6 ساعة و 4.4 × 10 2 كفو / ملغ من الأنسجة في 24 ساعة (الشكل 1B) . أظهرت عينات الجلد الماوس المقابل لم بكتيريا في 24 ساعة فقط وعدد قليل جدا في 6 ساعة، مما يدل على تفضيل قوي لN. السحائية في الأوعية الإنسان في الجلد المطعمة (الشكل 1B). بشكل عام كانت منخفضة جدا بكتيريا لnondetectable في الأجهزة الأخرى على الرغم من عينات الحيوانات 2 لم تظهر التهم التي يمكن أن تعزى إلى تلوث من الدم، كما أنها ترتبط مع ارتفاع تعميم أرقام البكتيرية (الشكل 1C). يمكن أن تستخدم أيضا نموذج لتحديد دور العوامل الفوعة في الجسم الحي، على سبيل المثال نوع IV بيلى. أدخلت سلالات بكتيرية مع طفرات في الجينات المحددة pilD 21، مما أدى إلى سلالة تفتقر إلى البرلمان الاتحادي الانتقالي، وكذلك الجين pilC1 8، تفتقر إلى البرلمان الاتحادي الانتقالي &#39;adhesin&#39; المقترحة في النموذج. أدت هذه الطفرات في أي التصاق البكتيريا في الكسب غير المشروع جلد الإنسان، مؤكدا على الدور الحاسم TFP يلعب في التصاق في الجسم الحي (الشكل 1D). المناعية / علم الأنسجة في هذه التجارب كنا N. سلالات السحائية التي تعبر عن البروتين مضان الخضراء (GFP) لتمكين الكشف الفلورسنت دون الحاجة لتلطيخ الثانوية. كانت ملطخة الأوعية الإنسان باستخدام علامة للحصول على البطانة الإنسان، إما CD31 (PECAM-1) أو كتين الجولق الأوروبي راصة (UEA) 18،22. كان مترافق في جامعة إيست أنجليا لرودامين السماح خطوة واحدة تلطيخ (أرقام 2A-C). نواة الخلية يمكن وصمة عارإد مع دابي للمساعدة في تحديد هياكل الأنسجة (أرقام 2A-B). تم إجراء الأنسجة باستخدام معيار الهيماتوكسيلين / يوزين تلطيخ. كانت الحدود البشرة / الجلد من الجلد يمكن التعرف عليها بوضوح. وتركزت التهاب، تخثر الأوعية الدموية وتسرب للسفن على مقربة من هذا الحدود 24 ساعة بعد الإصابة (الشكل 2D). كان تجلط الدم واضحة في العديد من الأوعية الجلدية الصغيرة، وغالبا ما يرافقه احتقان والالتهابات. يمكن أن ينظر تسرب خلايا الدم الحمراء إلى الأنسجة خارج، مما يدل على أن مستوى الضرر واسعة من السفينة. التشريح المرضي من الجلد في الفئران المطعمة غير مصاب ظهرت طبيعية مع عدم وجود التهاب مميزة 18. في حوالي 30٪ من الإصابات التصاق البكتيريا في الجلد يؤدي إلى تطوير فرفرية كشف ظاهريا (أرقام 2E و2F). <img alt="الشكل 1" fo:content-width=<html> &quot;5IN&quot; FO: SRC = &quot;/ files/ftp_upload/51134/51134fig1highres.jpg&quot; سرك = &quot;/ files/ftp_upload/51134/51134fig1.jpg&quot; /&gt; الشكل 1. كفو التهم. (A) التهم البكتيرية كفو لكل مليلتر من الدم في 5 دقائق، 6 ساعة، و 24 إصابة آخر ساعة. (B) البكتيرية كفو يهم من عينات الجلد مقارنة الجلد البشري (HS) والجلد الماوس (MS) في كلا 6 ساعة و 24 إصابة آخر ساعة. (C) البكتيرية كفو التهم من الأجهزة الأخرى المتخذة 24 إصابة آخر ساعة. (D) وبمقارنة تعداد كفو البكتيرية من عينات الجلد البشري والفأر التي اتخذت في إصابة 24 آخر ساعة من الفئران المصابة مع نوع N. البرية السحائية 2C43 صمة عار (WT)، سلالة مع طفرة في الجين pilD (pilD) أو سلالة مع طفرة في الجين pilC1 (pilC1). وتظهر جميع الرسوم البيانية كبيانات أولية مع الوسيط. تم تعديل الرقم من Melican وآخرون 18&quot;_blank&quot;&gt; اضغط هنا لمشاهدة صورة أكبر. <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51134/51134fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51134/51134fig2.jpg" /> الشكل 2. المجهر. (A) الإسقاط من كومة متحد البؤر يظهر microvessel الإنسان ملطخة UEA كتين (الحمراء) على مقربة من الجلد (د) البشرة (ه) الحدود. إصابة السفينة مع N. السحائية (الأخضر) 2 عدوى آخر ساعة. (ب) شريحة البصرية وإسقاط شريحة (C) تظهر N. microcolonies السحائية (الأخضر) إصابة سفينة الإنسان (جامعة إيست أنجليا - أحمر) ضمن عدوى الجلد الكسب غير المشروع 2 ساعة آخر. (D) Haematoxylin / يوزين تلطيخ من الكسب غير المشروع الجلد البشري المصابة لمدة 24 ساعة مع N. السحائية. على البشرة (ه)، عن طريق الجلد (د) الحدود بشكل واضح تجلط الدم مرئية واسعة واحتقان microvessإلس (الأسهم) وينظر في الأدمة. ويمكن أيضا تحديد التهاب الأوعية الدموية وبعض تسرب (رأس السهم). (E) الكسب غير المشروع جلد الإنسان قبل العدوى. (F) نفس الكسب غير المشروع الجلد مثل (E) 24 إصابة آخر ساعة مع N. السحائية تظهر المناطق الفرفري (السهام). أرقام 2B، يتم تعديل 2D، 2E، و2F من Melican وآخرون 18 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51134/51134fig2highres.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر</a> .

Watch this Scientific Journal Video about Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature at JoVE.com

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

النيسرية السحائية هو الممرض الذي يصيب الإنسان محددة الأوعية الدموية. في هذا البروتوكول يتم تقديمها microvessels الإنسان في الماوس عن طريق تطعيم الجلد البشري على الفئران المناعة. البكتيريا الالتزام على نطاق واسع في الأوعية الإنسان، مما يؤدي إلى تلف الأوعية الدموية وتطوير الطفح الفرفري احظ عادة في الحالات البشرية.

أنسنة نموذج الفأر لدراسة الالتهابات البكتيرية استهداف الأوعية الدموية الدقيقة

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

humanized-mouse-model-to-study-bacterial-infections-targeting

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

14.7K Views.  Paris Cardiovascular Research Centre.  النيسرية السحائية هو الممرض الذي يصيب الإنسان محددة الأوعية الدموية. في هذا البروتوكول يتم تقديمها microvessels الإنسان في الماوس عن طريق تطعيم الجلد البشري على الفئران المناعة. البكتيريا الالتزام على نطاق واسع في الأوعية الإنسان، مما يؤد...

Video: Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes. In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific immune cell types, viral pathogens, parasites and bacteria can be followed in real-time within living animals 1-2. Application of bioluminescence imaging to the study of pathogens has advantages as compared to conventional strategies for analysis of infections in animal models3-4. Infections can be visualized within individual animals over time, without requiring euthanasia to determine the location and quantity of the pathogen. Optical imaging allows comprehensive examination of all tissues and organs, rather than sampling of sites previously known to be infected. In addition, the accuracy of inoculation into specific tissues can be directly determined prior to carrying forward animals that were unsuccessfully inoculated throughout the entire experiment. Variability between animals can be controlled for, since imaging allows each animal to be followed individually. Imaging has the potential to greatly reduce animal numbers needed because of the ability to obtain data from numerous time points without having to sample tissues to determine pathogen load3-4.
This protocol describes methods to visualize infections in live animals using bioluminescence imaging for recombinant strains of bacteria expressing luciferase. The click beetle (CBRLuc) and firefly luciferases (FFluc) utilize luciferin as a substrate5-6. The light produced by both CBRluc and FFluc has a broad wavelength from 500 nm to 700 nm, making these luciferases excellent reporters for the optical imaging in living animal models7-9. This is primarily because wavelengths of light greater than 600 nm are required to avoid absorption by hemoglobin and, thus, travel through mammalian tissue efficiently. Luciferase is genetically introduced into the bacteria to produce light signal10. Mice are pulmonary inoculated with bioluminescent bacteria intratracheally to allow monitoring of infections in real time. After luciferin injection, images are acquired using the IVIS Imaging System. During imaging, mice are anesthetized with isoflurane using an XGI-8 Gas Anethesia System. Images can be analyzed to localize and quantify the signal source, which represents the bacterial infection site(s) and number, respectively. After imaging, CFU determination is carried out on homogenized tissue to confirm the presence of bacteria. Several doses of bacteria are used to correlate bacterial numbers with luminescence. Imaging can be applied to study of pathogenesis and evaluation of the efficacy of antibacterial compounds and vaccines.

Methods for bioluminescence imaging of bacterial infections in living animals are decribed. Pathogens are modified to express luciferase allowing optical whole body imaging of infections in live animals. Animal models can be infected with luciferase expressing pathogens and the resulting course of disease visualized in real-time by bioluminescence imaging.

Luciferase به لالتهابات جرثومية في صورة الفئران

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the initial and determining step of the pathogenesis. Although experimentally adhesion is mostly studied in static conditions adhesion actually takes place in the presence of flowing liquid. First encounters between bacteria and their host often occur at the mucosal level, mouth, lung, gut, eye, etc. where mucus flows along the surface of epithelial cells. Later in infection, pathogens occasionally access the blood circulation causing life-threatening illnesses such as septicemia, sepsis and meningitis. A defining feature of these infections is the ability of these pathogens to interact with endothelial cells in presence of circulating blood. The presence of flowing liquid, mucus or blood for instance, determines adhesion because it generates a mechanical force on the pathogen. To characterize the effect of flowing liquid one usually refers to the notion of shear stress, which is the tangential force exerted per unit area by a fluid moving near a stationary wall, expressed in dynes/cm2. Intensities of shear stress vary widely according to the different vessels type, size, organ, location etc. (0-100 dynes/cm2). Circulation in capillaries can reach very low shear stress values and even temporarily stop during periods ranging between a few seconds to several minutes 1. On the other end of the spectrum shear stress in arterioles can reach 100 dynes/cm2 2. The impact of shear stress on different biological processes has been clearly demonstrated as for instance during the interaction of leukocytes with the endothelium 3. To take into account this mechanical parameter in the process of bacterial adhesion we took advantage of an experimental procedure based on the use of a disposable flow chamber 4. Host cells are grown in the flow chamber and fluorescent bacteria are introduced in the flow controlled by a syringe pump. We initially focused our investigations on the bacterial pathogen Neisseria meningitidis, a Gram-negative bacterium responsible for septicemia and meningitis. The procedure described here allowed us to study the impact of shear stress on the ability of the bacteria to: adhere to cells 1, to proliferate on the cell surface 5and to detach to colonize new sites 6 (Figure 1). Complementary technical information can be found in reference 7. Shear stress values presented here were chosen based on our previous experience1 and to represent values found in the literature. The protocol should be applicable to a wide range of pathogens with specific adjustments depending on the objectives of the study.

During the infection process, a key step is the adhesion of pathogens with host cells. In most instances this adhesion step occurs in the presence of mechanical stress generated by flowing liquid. We describe a technique that introduces shear stress as an important parameter in the study of bacterial adhesion.

إدخال إجهاد القص في دراسة الالتصاق الجرثومي

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Small animal models such as mice have been extensively used to study human disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of information gained from these studies, the unique characteristics of mouse immunity as well as the species specificity of viral diseases such as human immunodeficiency virus (HIV) infection led to the development of humanized mouse models. The earlier models involved the use of C. B 17 scid/scid mice and the transplantation of human fetal thymus and fetal liver termed thy/liv (SCID-hu) 1, 2 or the adoptive transfer of human peripheral blood leukocytes (SCID-huPBL) 3. Both models were mainly utilized for the study of HIV infection.
One of the main limitations of both of these models was the lack of stable reconstitution of human immune cells in the periphery to make them a more physiologically relevant model to study HIV disease. To this end, the BLT humanized mouse model was developed. BLT stands for bone marrow/liver/thymus. In this model, 6 to 8 week old NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) immunocompromised mice receive the thy/liv implant as in the SCID-hu mouse model only to be followed by a second human hematopoietic stem cell transplant 4. The advantage of this system is the full reconstitution of the human immune system in the periphery. This model has been used to study HIV infection and latency 5-8.
We have generated a modified version of this model in which we use genetically modified human hematopoietic stem cells (hHSC) to construct the thy/liv implant followed by injection of transduced autologous hHSC 7, 9. This approach results in the generation of genetically modified lineages. More importantly, we adapted this system to examine the potential of generating functional cytotoxic T cells (CTL) expressing a melanoma specific T cell receptor. Using this model we were able to assess the functionality of our transgenic CTL utilizing live positron emission tomography (PET) imaging to determine tumor regression (9).
The goal of this protocol is to describe the process of generating these transgenic mice and assessing in vivo efficacy using live PET imaging. As a note, since we use human tissues and lentiviral vectors, our facilities conform to CDC NIH guidelines for Biosafety Level 2 (BSL2) with special precautions (BSL2+). In addition, the NSG mice are severely immunocompromised thus, their housing and maintenance must conform to the highest health standards (<a href="http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html" target="_blank">http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html</a>).

The generation and characterization of tumor specific T cells using humanized mice is described here. Human thymic tissue and genetically modified human hematopoietic stem cells are transplanted into immunocompromised mice. This results in the reconstitution of an engineered human immune system allowing for in vivo examination of anti-tumor immune responses.

باستخدام الماوس BLT إنساني وساق الموديل خلية مقرها جين ورم العلاج

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of insects as infection models provides a valuable alternative. Compared to other non-vertebrate model hosts such as nematodes, insects have a relatively advanced system of antimicrobial defenses and are thus more likely to produce information relevant to the mammalian infection process. Like mammals, insects possess a complex innate immune system1. Cells in the hemolymph are capable of phagocytosing or encapsulating microbial invaders, and humoral responses include the inducible production of lysozyme and small antibacterial peptides2,3. In addition, analogies are found between the epithelial cells of insect larval midguts and intestinal cells of mammalian digestive systems. Finally, several basic components essential for the bacterial infection process such as cell adhesion, resistance to antimicrobial peptides, tissue degradation and adaptation to oxidative stress are likely to be important in both insects and mammals1. Thus, insects are polyvalent tools for the identification and characterization of microbial virulence factors involved in mammalian infections.
Larvae of the greater wax moth Galleria mellonella have been shown to provide a useful insight into the pathogenesis of a wide range of microbial infections including mammalian fungal (Fusarium oxysporum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans) and bacterial pathogens, such as Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Serratia marcescens Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes or Enterococcus faecalis4-7. Regardless of the bacterial species, results obtained with Galleria larvae infected by direct injection through the cuticle consistently correlate with those of similar mammalian studies: bacterial strains that are attenuated in mammalian models demonstrate lower virulence in Galleria, and strains causing severe human infections are also highly virulent in the Galleria model8-11. Oral infection of Galleria is much less used and additional compounds, like specific toxins, are needed to reach mortality.
G. mellonella larvae present several technical advantages: they are relatively large (last instar larvae before pupation are about 2 cm long and weight 250 mg), thus enabling the injection of defined doses of bacteria; they can be reared at various temperatures (20 &deg;C to 30 &deg;C) and infection studies can be conducted between 15 &deg;C to above 37 &deg;C12,13, allowing experiments that mimic a mammalian environment. In addition, insect rearing is easy and relatively cheap. Infection of the larvae allows monitoring bacterial virulence by several means, including calculation of LD5014, measurement of bacterial survival15,16 and examination of the infection process17. Here, we describe the rearing of the insects, covering all life stages of G. mellonella. We provide a detailed protocol of infection by two routes of inoculation: oral and intra haemocoelic. The bacterial model used in this protocol is Bacillus cereus, a Gram positive pathogen implicated in gastrointestinal as well as in other severe local or systemic opportunistic infections18,19.

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Oral and intra haemocolic infection of larvae of the greater wax moth Galleria mellonella is described. This insect can be used to study virulence factors of entomopathogenic as well as mammalian opportunistic bacteria. Rearing of the insects, methods of infection and examples of in vivo analysis are described.

والحشرات<em&gt; جاليريا mellonella</em&gt; نموذجا عدوى قوية المعنية بالتحقيق في إمراض البكتيرية

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the respective immune response to each single pathogen and may thereby affect pathogenesis and disease outcome. Coinfected patients may also respond differentially to anti-infective interventions. Coinfection between tuberculosis as caused by mycobacteria and the malaria parasite Plasmodium, both of which are coendemic in many parts of sub-Saharan Africa, has not been studied in detail. In order to approach the challenging but scientifically and clinically highly relevant question how malaria-tuberculosis coinfection modulate host immunity and the course of each disease, we established an experimental mouse model that allows us to dissect the elicited immune responses to both pathogens in the coinfected host. Of note, in order to most precisely mimic naturally acquired human infections, we perform experimental infections of mice with both pathogens by their natural routes of infection, i.e. aerosol and mosquito bite, respectively.

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

Tuberculosis and malaria are two of the most prevalent infections in humans and major causes of morbidity and mortality in impoverished populations in the tropics. We established an experimental model system to study outcome of malaria-tuberculosis coinfection in mice after challenge with both pathogens via their natural route of infection.

نموذج تجريبي لدراسة الملاريا والسل عدوى مرافقة على انتقال الطبيعية السل المتفطرة و المتصورة berghei</i

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence factors, which can subvert and manipulate key host functions. The study of host/pathogen interactions is therefore extremely important to understand bacterial infections and develop alternative strategies to counter infectious diseases. This approach however, requires the development of new high-throughput assays for the unbiased, automated identification and characterization of bacterial virulence determinants. Here, we describe a method for the generation of a GFP-tagged mutant library by transposon mutagenesis and the development of high-content screening approaches for the simultaneous identification of multiple transposon-associated phenotypes. Our working model is the intracellular bacterial pathogen Coxiellaburnetii, the etiological agent of the zoonosis Q fever, which is associated with severe outbreaks with a consequent health and economic burden. The obligate intracellular nature of this pathogen has, until recently, severely hampered the identification of bacterial factors involved in host pathogen interactions, making of Coxiella the ideal model for the implementation of high-throughput/high-content approaches.

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Coxiella burnetii is an obligate intracellular Gram-negative bacterium responsible for the zoonotic disease Q fever. Here we describe methods for the generation of Coxiella fluorescent transposon mutants as well as the automated identification and analysis of the resulting internalization, replication and cytotoxic phenotypes.

جيل ومتعدد المظهري فحص عالية المحتوى من<em&gt; الكوكسيلا البورنيتية</em&gt; المسوخ ينقول

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the shear stress of flowing blood.
To identify the bacterial and host factors that contribute to vascular adhesion of microorganisms, appropriate models that study these interactions under physiological shear conditions are needed. Here, we describe an in vitro flow chamber model that allows to investigate bacterial adhesion to different components of the extracellular matrix or to endothelial cells, and an intravital microscopy model that was developed to directly visualize the initial adhesion of bacteria to the splanchnic circulation in vivo. These methods can be used to identify the bacterial and host factors required for the adhesion of bacteria under flow. We illustrate the relevance of shear stress and the role of von Willebrand factor for the adhesion of Staphylococcus aureus using both the in vitro and in vivo model.

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

To study the interaction of bacteria with the blood vessels under shear stress, a flow chamber and an in vivo mesenteric intravital microscopy model are described that allow to dissect the bacterial and host factors contributing to vascular adhesion.

في المختبر والمجراة نموذج لدراسة التصاق البكتيريا إلى سفينة ستريت تحت ظروف التدفق

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is imperative to design experiments using human cells and tissues. An advantage of organ culture is maintenance of three-dimensional (3D) structural organization and extracellular matrix. The goal of the method described here is successful establishment of ex vivo human gestational tissue organ cultures and their healthy culture maintenance for 72-96 hr. The protocol details the immediate processing of research-consented, placental and decidual specimens fresh from the operating suite. These are abundant specimens that would otherwise be discarded. Detailed instructions on the sterile collection of these samples, including morphologic details on how to select appropriate tissues to establish 3D organ cultures, is provided. Placental villous and decidual tissues are microdissected into 2-3 mm3 pieces and placed separately on matrix-lined transwell filters and cultured for several days. Villous and decidual organ cultures are well suited for the study of human host-pathogen interaction. As compared to other model organisms, these human cultures are particularly advantageous to examine mechanism of infection for pathogens that demonstrate variable patterns of host specificity. As an example, we demonstrate infection of placental and decidual organ cultures with the clinically relevant, facultative intracellular bacterial pathogen Listeria monocytogenes.

A simple method to establish primary human placental (villous) and decidual organ cultures is described. Villous and decidual organ cultures are invaluable tools for studying pathogenesis at the human maternal-fetal interface. Infection with the facultative intracellular bacterium Listeria monocytogenes is demonstrated.

الثقافات المشيمة وساقطي الجهاز الإنسان لدراسة العدوى في واجهة الأم والجنين

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Methods to Study Lipid Alterations in Neutrophils and the Subsequent Formation of Neutrophil Extracellular Traps

Lipid analysis performed by high performance thin layer chromatography (HPTLC) is a relatively simple, cost-effective method of analyzing a broad range of lipids. The function of lipids (e.g., in host-pathogen interactions or host entry) has been reported to play a crucial role in cellular processes. Here, we show a method to determine lipid composition, with a focus on the cholesterol level of primary blood-derived neutrophils, by HPTLC in comparison to high performance liquid chromatography (HPLC). The aim was to investigate the role of lipid/cholesterol alterations in the formation of neutrophil extracellular traps (NETs). NET release is known as a host defense mechanism to prevent pathogens from spreading within the host. Therefore, blood-derived human neutrophils were treated with methyl-&#946;-cyclodextrin (M&#946;CD) to induce lipid alterations in the cells. Using HPTLC and HPLC, we have shown that M&#946;CD treatment of the cells leads to lipid alterations associated with a significant reduction in the cholesterol content of the cell. At the same time, M&#946;CD treatment of the neutrophils led to the formation of NETs, as shown by immunofluorescence microscopy. In summary, here we present a detailed method to study lipid alterations in neutrophils and the formation of NETs.

Lipids are known to play an important role in cellular functions. Here, we describe a method to determine the lipid composition of neutrophils, with emphasis on the cholesterol level, by using both HPTLC and HPLC to gain a better understanding of the underlying mechanisms of neutrophil extracellular trap formation.

طرق لدراسة الدهون التعديلات في العدلات وتشكيل لاحقة من الفخاخ خارج الخلية العدلات

Lipid analysis performed by high performance thin layer chromatography (HPTLC) is a relatively simple, cost-effective method of analyzing a broad range of ...

The WinCF Model - An Inexpensive and Tractable Microcosm of a Mucus Plugged Bronchiole to Study the Microbiology of Lung Infections

Many chronic airway diseases result in mucus plugging of the airways. Lungs of an individual with cystic fibrosis are an exemplary case where their mucus-plugged bronchioles create a favorable habitat for microbial colonization. Various pathogens thrive in this environment interacting with each other and driving many of the symptoms associated with CF disease. Like any microbial community, the chemical conditions of their habitat have a significant impact on the community structure and dynamics. For example, different microorganisms thrive in differing levels of oxygen or other solute concentrations. This is also true in the CF lung, where oxygen concentrations are believed to drive community physiology and structure. The methods described here are designed to mimic the lung environment and grow pathogens in a manner more similar to that from which they cause disease. Manipulation of the chemical surroundings of these microbes is then used to study how the chemistry of lung infections governs its microbial ecology. The method, called the WinCF system, is based on artificial sputum medium and narrow capillary tubes meant to provide an oxygen gradient similar to that which exists in mucus-plugged bronchioles. Manipulating chemical conditions, such as the media pH of the sputum or antibiotics pressure, allows for visualization of the microbiological differences in those samples using colored indicators, watching for gas or biofilm production, or extracting and sequencing the nucleic acid contents of each sample.

The mucus plugged airways of cystic fibrosis (CF) patients are an ideal environment for microbial pathogens to thrive. The manuscript describes a novel method for studying the CF lung microbiome in an environment that mimics where they cause disease and how alterations of chemical conditions can drive microbial dynamics.

نموذج وينف - غير مكلفة و تراكتابل مصغر من المخاط توصيل القصبات لدراسة الأحياء الدقيقة من التهابات الرئة

Many chronic airway diseases result in mucus plugging of the airways. Lungs of an individual with cystic fibrosis are an exemplary case where their ...