المؤلفان بالشكر إلى أعضاء سيريلو المختبر لإجراء مناقشات قيمة والمساعدة طوال هذه الدراسة. نشكر الدكتور جوشوا هيل ومختبر الدكتور صموئيل جيمس للحصول على مساعدة أثناء تصوير هذا البروتوكول. وقد تم تمويل هذا العمل عن طريق منح 48523 من مؤسسة بيل وميليندا غيتس وAI47866 منحة من المعاهد القومية للصحة.

1. العدوى الرئوية التي التنبيب داخل الرغامى <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن الفئران ، واختياريا ، يمكن جعل علامات على أذنيه لتحديد سهلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران مع الكيتامين (100 ميكروغرام لكل غرام من وزن الماوس) ، وزيلازين (10 ميكروغرام لكل غرام من وزن الفأر) بواسطة التلقيح داخل الصفاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الفئران في اقفاص حتى تخدير كامل. ضغط على منصات أقدامهم لفحص دواسة المنعكس. يجب أن تعرض الفئران انخفاض أو أي رد فعل منعكس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس على الوقوف التنبيب ملقاة على ظهرها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح الشريط المطاطي على الوقوف التنبيب ومكان فإنه في ظل القواطع العلوية من الفأرة. استخدام الشريط لإصلاح الساقين والذراعين على موقف التنبيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحرك بلطف tougue يخرج من الفم باستخدام ملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ادخال منظار مع octoscope داخل الفم والبلعوم حتى تنظر في فتح الحنجرة مرئيا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقدم الأسلاك دليل مغطاة cathether في القصبة الهوائية حتى وصل catether هو في القواطع. إزالة الأسلاك الدليل. وضعت في الهواء للاحتفال cathether توسيع الصدر وتأكيد التنبيب الصحيح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ 50 ميكرولتر من البكتيريا (في الصور المبينة كنا عصية كالميت غيران (BCG) معربا عن خنفساء فوق الحمراء luciferase (CBRLuc) ، شيدت في المختبر لدينا ، ولكن يمكن استخدام أي الانارة سلالة بكتيرية) حل من خلال cathether باستخدام حقنة 1 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الماوس في قفص ونلاحظ أنه خلال التعافي من التخدير. </li></ol> 2. التخدير الحيوانية والتحضير لتصوير ضوء بارد الفئران هي تخدير مع isoflurane باستخدام نظام XGI - 8 Aneshesia الغاز. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل تشغيل نظام XGI - 8 التخدير ، وتزن كل علبة الفحم التصفية وكتابة الوزن والتاريخ على ذلك. إذا كان الوزن أكثر من 50 غرام من الوزن الأولي ، استبداله اسطوانة جديدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من مستوى isoflurane في المرذاذ وملئه إذا لزم الأمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على مضخة الإجلاء في الجزء الأمامي من XGI - 8 نظام التخدير وتعيين إلى 8 LPM (ليتر لكل minuite). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على امدادات الاوكسجين من أسطوانات الضغط العالي وتعيينه إلى 55 رطل لكل بوصة مربعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على الأكسجين تبديل (الأخضر) على الجزء الأمامي من التخدير XGI - 8 النظام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على تدفق الغاز الى غرفة التصوير لضبط مستوى تدفق الغاز. تعيين إلى 0.25 LPM ثم إيقاف تدفق الغاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على تدفق الغاز إلى غرفة التخدير التعريفي لضبط مستوى تدفق الغاز. تعيين إلى 1.5 LPM ثم إيقاف تدفق الغاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على isoflurane مع المرذاذ وتعيين إلى 2-2،5 في المئة. يمكن ضبط مستوى isoflurane تبعا لعدد الحيوانات المستخدمة والوزن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الفئران الى غرفة الاستقراء وإغلاق الغطاء. بدوره على تدفق الغاز الى حجرة التعريفي. الفئران مكان في الغرفة لمدة 5 -- 10 minuites حتى يتم تخدير كامل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم البصرية للعين لحماية عينيه أثناء التصوير الماوس ووضع الفئران في غرفة التصوير في واحدة من المخاريط على الأنف مشعب التخدير. استخدام الضوء يربك بين الفئران لمنع انعكاس الضوء على الموضوعات الحيوان المجاورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن luciferin (150 ميكروغرام / غرام من وزن الجسم) عن طريق التلقيح داخل الصفاق. </li></ol> 3. تلألؤ بيولوجي التصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء برامج التصوير الحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا لم يتم تهيئة النظام ، وتهيئة نظام التصوير IVIS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين المعلمات من أجل التصوير بالنقر الإعداد تسلسل في اقتناء IVIS لوحة التحكم. حدد التلألؤ وصورة في وضع التصوير. إذا كان الخيار هو المطلوب لتنفيذ إعادة الإعمار DLIT 3D ، حدد الصور الفوتوغرافية الضوء ، الانارة والهيكلية كجزء من تسلسل الصور. تعيين وقت التعرض من 0.5 ثانية لمدة 10 دقائق. تعيين Binning وF / وقف استنادا سطوع المتوقع من العينة. تعيين مرشح لمنع الإثارة وانبعاث تصفية لفتح ، ما لم تخطط للحصول على موجات معينة فقط من الضوء. في حالة DLIT 3D الدستور ، وتعيين المرشحات انبعاث موجات متعددة من مختلف دقيقة للسماح للتوطين من المصدر. تعيين FOV من ألف إلى دال اعتمادا على عدد من الفئران أو الحيوانات لمنطقة يمكن تصوير. حدد A و B : 1 الماوس ، C الفئران لمدة 2-3 ، 4-5 و D عن الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق إضافة في معالج الصور في اقتناء لوحة التحكم لإضافة الإعداد التسلسل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسلسل بدء التصوير عن طريق النقر عليه. في حالة البناء 3D DLIT ، سيتم الحصول على الصور الانارة للمرشحات متعددة في انبعاث موجات مختلفة. وسيتم أيضا الصور الفوتوغرافية ومنظم الخفيفة سيتم شراؤها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال اقتناء والصورة وتحرير الصور المستويات لوحات تكون مرئية. تعبئة على معلومات مفصلة قدر الإمكان عن كل تجربة في تحرير الصورة لضمان سهولة تتبع الصور في أوقات لاحقة وحفظ الصور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ReRemove الفئران من IVIS غرفة التصوير وإعادتها إلى أقفاصها. نلاحظ من الانتعاشلم تكن لضمان حس الفئران تتأثر كثيرا الإجراء. يجب مراقبة الحيوانات باستمرار حتى يتعافى تماما من التخدير (عادة 1-2 دقائق). </li></ol> 4. التصوير وخارج الحي CFU التحليل الكمي للمن البكتيريا في الرئتين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الفئران مع intraperitoneally luciferin بالطريقة نفسها للتصوير ، وذلك قبل لمجرد القتل الرحيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء في الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق من 100 ملغم / كغم من 5 دقائق بعد الحقن pentobarbitol luciferin. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يزدرع الرئتين من الفئران ووضعه في الأطباق ، بتري معقمة باستخدام ملقط معقم والمقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طبق بتري مكان يحتوي الجهاز explanted في غرفة التصوير والحصول على صور في تلألؤ بيولوجي بنفس الطريقة للماوس كلها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التصوير ، وإزالة الجهاز من طبق بتري explanted باستخدام ملقط معقم والتجانس في برنامج تلفزيوني مل 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل التخفيفات والأنسجة لوحة على وسائل الإعلام وانتقائية مناسبة. ويمكن تخزين النسيج المتجانس -80 درجة مئوية لاعادة الطلاء ينبغي أن يكون ذلك ضروريا. بدلا من ذلك ، يمكن استخدام النسيج المتجانس لاستخراج الحمض النووي الريبي أو لتحديد الأرقام التي qPCR البكتيرية. </li></ol> 5. تحليل التصوير التلألؤ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء &quot;العيش برامج التصوير&quot; وتصفح ملفات الصور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام &quot;لوحة أداة&quot; لضبط الصور. انقر فوق صورة لتعديل ضبط تصحيح / تصفية الإعدادات ودقيقة / كحد أقصى لمقاييس الألوان الفردية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام أدوات في القائمة المنسدلة دوروا لتحديد مقدار شدة الضوء. حدد ROI شكل وعدد وحجم. اسحب الإطار إلى المنطقة ROI الفائدة على الصورة. ضمان جميع ROI هي نفس الحجم والشكل. انقر فوق حفظ وقياس العائد على الاستثمار ، نسخة و / أو تصدير البيانات الكمية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حالة إعادة البناء DLIT 3D ، تحميل تسلسل الصور بما في ذلك صورة ضوئية منظم. فوق تضاريس السطح في أداة بلات. في القائمة المنسدلة ، انقر فوق علامة التبويب إعادة إعمار لتوليد تضاريس السطح. وهناك فوضى السطح ثم تظهر في النافذة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد DLIT إعادة الإعمار في 3D أداة بلات. في القائمة المنسدلة ، انقر فوق علامة التبويب خصائص لتعيين خصائص الأنسجة والطيف المصدر. ينصح العضلات في معظم الظروف. في القائمة المنسدلة ، انقر فوق علامة التبويب تحليل لتحديد الطول الموجي للتحليل. انقر فوق علامة التبويب معلمة وتأكيد القيم الافتراضية أو تعديل المعلمات DLIT إذا لزم الأمر. انقر فوق علامة التبويب لبدء إعادة إعمار تحليل 3D. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يتم الانتهاء من إعادة الإعمار 3D ، وسوف ترى 3D عرض نتائج إعادة الإعمار 3D. انقر فوق علامة التبويب لمعرفة النتائج وتحليل البيانات لكثافة الفوتون ، voxels والمعلمات الخوارزمية DLIT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حفظ و / أو تصدير نتائج التحليلات إعادة الإعمار 3D إلى أرقام وملفات البيانات. </li></ol> 6. ممثل النتائج : وتظهر الصور تلألؤ بيولوجي من الفئران مصابة بالبكتيريا bioluminescent جنبا إلى جنب مع السيطرة الماوس المعافين في الشكل 1. والرئوي الفئران المصابة ببكتيريا bioluminescent تنتج إشارة هامة من الرئتين (الشكل 1). وكميا كثافة التلألؤ والتمويه ضمن مجموع عائدات الاستثمار (منطقة المهتمة) (الشكل 2). هو تطبيع البيانات الكمية لشدة الضوء على الوحدات التي تشكل مستعمرة (CFU) من البكتيريا التي تم الحصول عليها من الرئتين لتأكيد أن يتم إنتاج إشارة من البكتيريا bioluminescent ويمكن مقارنة لمراقبة سلبية. يمكن أن يكون موقع وحدة تحليل الإشارات المزيد من الإعمار 3D DLIT مصدر التلألؤ على أساس التصوير المقطعي لسطح الماوس 11. تسمح هذه التحليلات الكمي والتوطين للإشارة bioluminescent المنتجة. نتائج إعادة الإعمار 3D مصدر الانارة في الفئران المصابة يوضح أن الضوء ينتج من الرئتين من الفأرة (الشكل 3). ينبعث الصور فيفو السابقين في الرئتين مما يؤكد أن الماوس التلألؤ من الرئتين ، بدلا من بعض الأنسجة الأخرى جنبا إلى جنب بشكل وثيق أو الهيئة (الشكل 2C). <img src="/files/ftp_upload/2547/2547fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. التصوير التلألؤ من الفئران مصابة بالبكتيريا الرئوية bioluminescent المفتاحية CBRluc. المعافين الماوس السيطرة على الجهة اليسرى واثنين من الفئران المصابة هي على حق. وكانت الفئران مصابة بالبكتيريا معربا عن CBRluc (ن = 2) من طريق داخل الرغامى. بعد 10 دقائق من الحقن luciferin ، تم الحصول على الصور التلألؤ لمدة 10 دقيقة على 4 وظائف : ، البطنية الظهرية ، الجانب الأيسر والجانب الأيمن. <img src="/files/ftp_upload/2547/2547fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. شدة الضوء كمية من الفئران المصابة ببكتيريا معربا عن CBRluc (A ، B) الصور التلألؤ تحليل عائد الاستثمار وتدفق كمية الضوء من مجموع عائدات الاستثمار في المناصب ظهري وبطني ، على التوالي. الفئران غير المصابة الموجودة على اليسار واثنين من الفئران المصابة هي على حق. تم الحصول على الصور من التلألؤ س الرئتينو الفئران غير المصابة والمصابين CBRlux (ن = 2). وكان كميا لشدة الضوء حول الرئتين عن طريق تحليل العائد على الاستثمار. C) صور فيفو السابقين في الرئتين من الفئران (أسفل مجموعتين من الرئتين) غير مصاب (أعلى) والمصابة. تم حقن Luciferin 5 miniuts قبل القتل الرحيم والصور تم الحصول عليها بعد ذلك. تم تطبيع القيم كميا لCFU. <img src="/files/ftp_upload/2547/2547fig3.jpg" alt="الشكل 3" /> الشكل 3. تعمير 3D مصدر تلألؤ بيولوجي (ق) من الفأر المصاب الرئوي. كانت مصابة والفأر مع البكتيريا CBRluc معربا عن طريق الحقن داخل الرغامى. وقد حصلت على تسلسل الصور باستخدام مرشحات مختلفة من انبعاث موجات من 540 نانومتر المسلسل إلى 700 نانومتر. وكان يستخدم لإعادة تسلسل الصور 3D لمصدر التألق في المواضيع التي تحتوي على الحيوانات ايماج منظم. أ) يظهر التصوير المقطعي للماوس في مواقف مختلفة : في الأمام والخلف واليمين واليسار. وترد مصادر الضوء وvoxels (مربعات حمراء داخل الماوس 3D) التي تقع داخل الرئة وفقا لما يحدده إعادة الإعمار. ب) خريطة densiy فوتون البيانات المقاسة والمحاكاة. مقارنة بين كثافة الفوتون قياس ومحاكاة منحنيات توفير المعلومات لنوعية البناء. نتيجة جيدة النوعية في إعادة بناء كثافة مماثلة قياس الفوتون والمحاكاة.

<ol>
	<li>Wilson, T., Hastings, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence.">Bioluminescence.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 14, 197-230 (1998).</li><li>Contag, C. H., Bachmann, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+in+vivo+bioluminescence+imaging+of+gene+expression.">Advances in in vivo bioluminescence imaging of gene expression.</a> Annu Rev Biomed Eng. 4, 235-260 (2002).</li><li>Hutchens, M., Luker, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+bioluminescence+imaging+to+the+study+of+infectious+diseases.">Applications of bioluminescence imaging to the study of infectious diseases.</a> Cell Microbiol. 9, 2315-2322 (2007).</li><li>Doyle, T. C., Burns, S. M., Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescence+imaging+for+integrated+studies+of+infection.">In vivo bioluminescence imaging for integrated studies of infection.</a> Cell Microbiol. 6, 303-317 (2004).</li><li>Wood, K. V., Lam, Y. A., Seliger, H. H., McElroy, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementary+DNA+coding+click+beetle+luciferases+can+elicit+bioluminescence+of+different+colors.">Complementary DNA coding click beetle luciferases can elicit bioluminescence of different colors.</a> Science. 244, 700-702 (1989).</li><li>Wet, J. R. d. e., Wood, K. V., Helinski, D. R., DeLuca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+of+firefly+luciferase+cDNA+and+the+expression+of+active+luciferase+in+Escherichia+coli.">Cloning of firefly luciferase cDNA and the expression of active luciferase in Escherichia coli.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 82, 7870-7873 (1985).</li><li>Hastings, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistries+and+colors+of+bioluminescent+reactions:+a+review.">Chemistries and colors of bioluminescent reactions: a review.</a> Gene. 173, 5-11 (1996).</li><li>Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emission+spectra+of+bioluminescent+reporters+and+interaction+with+mammalian+tissue+determine+the+sensitivity+of+detection+in+vivo.">Emission spectra of bioluminescent reporters and interaction with mammalian tissue determine the sensitivity of detection in vivo.</a> J Biomed Opt. 10, 41210-41210 (2005).</li><li>Rice, B. W., Cable, M. D., Nelson, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+light-emitting+probes.">In vivo imaging of light-emitting probes.</a> J Biomed Opt. 6, 432-440 (2001).</li><li>Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photonic+detection+of+bacterial+pathogens+in+living+hosts.">Photonic detection of bacterial pathogens in living hosts.</a> Mol Microbiol. 18, 593-603 (1995).</li><li>Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+reconstruction+of+in+vivo+bioluminescent+sources+based+on+multispectral+imaging.">Three-dimensional reconstruction of in vivo bioluminescent sources based on multispectral imaging.</a> J Biomed Opt. 12, 024007-024007 (2007).</li><li>Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+clearer+vision+for+in+vivo+imaging.">A clearer vision for in vivo imaging.</a> Nat Biotechnol. 19, 316-317 (2001).</li></ol>

وقد أجريت دراسات على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها لرعاية الحيوان واللجنة المؤسسية استخدام جامعة تكساس A &amp; M.

على الرغم من أن هذه البروتوكولات التالية سوف يؤدي عادة في صور ذات جودة عالية ، فإنه من المهم للنظر في بعض القضايا الرئيسية من أجل الحصول على بيانات دقيقة ومتناسقة من الدراسات التصوير. وينبغي الحصول على الصور التي تهم التلألؤ من 600 إلى 60000 لضمان أن تكون الإشارة أعلاه ال...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Isoflurane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VETONE</td>
<td>501027 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketamine </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Butler animal health supply</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Xylazine </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedical</td>
<td>158307</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Luciferin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GMT</td>
<td>LUCK-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal plus solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VOR tech pharmaceutical</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cathether (22G x 1&#x201D;)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>TERUMO</td>
<td>OX2225CA</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Guide wire </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hallowell EMC</td>
<td>210A3491</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Octocope with speculum </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hallowell EMC</td>
<td>000A3748</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Xenogen IVIS system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Caliper Life Sciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>XGI-8-gas Anesthsia System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Caliper Life Sciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Living Imaging Software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Caliper Life Sciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Transparent nose cones</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Caliper Life Sciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Light baffle divider </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Caliper Life Sciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

using luciferase to image bacterial infections in mice

التصوير هو أسلوب القيمة التي يمكن استخدامها لمراقبة العمليات البيولوجية. على وجه الخصوص ، يمكن تتبع وجود الخلايا السرطانية والخلايا الجذعية ، والخلايا المناعية أنواع محددة ، ومسببات الأمراض الفيروسية ، والطفيليات والبكتيريا في الوقت الحقيقي داخل الحيوانات الحية 1-2. تطبيق التصوير تلألؤ بيولوجي لدراسة مسببات الأمراض ومزايا مقارنة الاستراتيجيات التقليدية لتحليل الإصابات في النماذج الحيوانية 3-4. ويمكن تصور أن تكون العدوى داخل الحيوانات الفردية على مر الزمن ، دون اشتراط القتل الرحيم لتحديد مكان وكمية من العامل الممرض. التصوير الضوئي يتيح فحص شامل لجميع الأنسجة والأعضاء ، بدلا من أخذ العينات من المواقع المعروفة سابقا لتكون مصابة. بالإضافة ، يمكن من دقة التلقيح في أنسجة معينة تحدد مباشرة قبل القيام الحيوانات إلى الأمام التي تم تلقيح دون جدوى طوال التجربة بأكملها. يمكن التحكم عن التباين بين الحيوانات ، منذ التصوير يسمح الواجب اتباعها كل حيوان على حدة. التصوير لديه القدرة على الحد بشكل كبير من أعداد الحيوانات التي يحتاجون إليها بسبب القدرة على الحصول على بيانات من العديد من النقاط الزمنية دون الحاجة إلى الأنسجة العينة لتحديد الحمولة الممرض 3-4. يصف هذا البروتوكول لتصور طرق العدوى في الحيوانات الحية باستخدام التصوير تلألؤ بيولوجي لسلالات من البكتيريا معربا عن المؤتلف luciferase. الخنفساء فوق (CBRLuc) وluciferases يراعة (FFluc) الاستفادة luciferin باعتبارها الركيزة 5-6. ضوء على حد سواء التي تنتجها وCBRluc FFluc وطول موجة واسعة من 500 نانومتر إلى 700 نانومتر ، مما يجعل هذه luciferases صحفيين ممتازة للتصوير الضوئي في النماذج الحيوانية الحية 7-9. هذا هو في المقام الأول لأن هناك حاجة موجات الضوء أكبر من 600 نانومتر لتجنب امتصاص الهيموغلوبين ، وبالتالي ، والسفر من خلال أنسجة الثدييات بكفاءة. هو عرض وراثيا Luciferase في البكتيريا لإنتاج إشارة ضوئية 10. يتم تلقيح الفئران الرئوي مع البكتيريا bioluminescent intratracheally للسماح للرصد العدوى في الوقت الحقيقي. بعد الحقن luciferin ، يتم الحصول على الصور باستخدام نظام التصوير IVIS. خلال التصوير ، ويتم تخدير الفئران مع isoflurane باستخدام نظام XGI - 8 Anethesia الغاز. ويمكن تحليل الصور لتوطين وتحديد مصدر إشارة ، والذي يمثل موقع عدوى بكتيرية (ق) والرقم ، على التوالي. بعد التصوير ، ويتم تحديد CFU خارجا على النسيج المتجانس للتأكد من وجود البكتيريا. وتستخدم عدة جرعات من الجراثيم البكتيرية لربط الأرقام مع التألق. ويمكن تطبيق التصوير لدراسة تطور المرض وتقييم فعالية مركبات مضادة للجراثيم واللقاحات.

Watch this Scientific Journal Video about Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice at JoVE.com

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

يتم وصف أساليب التصوير تلألؤ بيولوجي من الالتهابات البكتيرية في الحيوانات الحية. يتم تعديل في التعبير عن مسببات الأمراض luciferase التصوير الضوئي السماح الجسم كله من الإصابات في الحيوانات الحية. يمكن أن يصاب النماذج الحيوانية مع التعبير عن مسببات الأمراض luciferase وبطبيعة الحال ينجم عن ذلك من تصور المرض في الوقت الحقيقي من خلال التصوير تلألؤ بيولوجي.

Luciferase به لالتهابات جرثومية في صورة الفئران

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

using-luciferase-to-image-bacterial-infections-in-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

20.3K Views.  Texas A&M Health Science Center. يتم وصف أساليب التصوير تلألؤ بيولوجي من الالتهابات البكتيرية في الحيوانات الحية. يتم تعديل في التعبير عن مسببات الأمراض luciferase التصوير الضوئي السماح الجسم كله من الإصابات في الحيوانات الحية. يمكن أن يصاب النماذج الحيوانية مع التعبير عن مسببات الأمراض luciferase وبط?...

Video: Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Assessing Stomatal Response to Live Bacterial Cells using Whole Leaf Imaging

Stomata are natural openings in the plant epidermis responsible for gas exchange between plant interior and environment. They are formed by a pair of guard cells, which are able to close the stomatal pore in response to a number of external factors including light intensity, carbon dioxide concentration, and relative humidity (RH). The stomatal pore is also the main route for pathogen entry into leaves, a crucial step for disease development. Recent studies have unveiled that closure of the pore is effective in minimizing bacterial disease development in Arabidopsis plants; an integral part of plant innate immunity. Previously, we have used epidermal peels to assess stomatal response to live bacteria (Melotto et al. 2006); however maintaining favorable environmental conditions for both plant epidermal peels and bacterial cells has been challenging. Leaf epidermis can be kept alive and healthy with MES buffer (10 mM KCl, 25 mM MES-KOH, pH 6.15) for electrophysiological experiments of guard cells. However, this buffer is not appropriate for obtaining bacterial suspension. On the other hand, bacterial cells can be kept alive in water which is not proper to maintain epidermal peels for long period of times. When an epidermal peel floats on water, the cells in the peel that are exposed to air dry within 4 hours limiting the timing to conduct the experiment. An ideal method for assessing the effect of a particular stimulus on guard cells should present minimal interference to stomatal physiology and to the natural environment of the plant as much as possible. We, therefore, developed a new method to assess stomatal response to live bacteria in which leaf wounding and manipulation is greatly minimized aiming to provide an easily reproducible and reliable stomatal assay. The protocol is based on staining of intact leaf with propidium iodide (PI), incubation of staining leaf with bacterial suspension, and observation of leaves under laser scanning confocal microscope. Finally, this method allows for the observation of the same live leaf sample over extended periods of time using conditions that closely mimic the natural conditions under which plants are attacked by pathogens.

We have developed a simple and reproducible protocol to access stomatal response to live bacteria. This method minimizes wounding and manipulation of the leaf as compared to the use of epidermal peels reported previously.

تقييم الاستجابة للعيش فوهي الخلايا البكتيرية باستخدام التصوير الجامعة ليف

Stomata are natural openings in the plant epidermis responsible for gas exchange between plant interior and environment. They are formed by a pair of ...

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of Listeria, which results in systemic infection2. After injection, Listeria quickly disseminates to the spleen and liver due to uptake by CD8&alpha;+ dendritic cells and Kupffer cells3,4. Once phagocytosed, various bacterial proteins enable Listeria to escape the phagosome, survive within the cytosol, and infect neighboring cells5. During the first three days of infection, different innate immune cells (e.g. monocytes, neutrophils, NK cells, dendritic cells) mediate bactericidal mechanisms that minimize Listeria proliferation. CD8+ T cells are subsequently recruited and responsible for the eventual clearance of Listeria from the host, typically within 10 days of infection6.
Successful clearance of Listeria from infected mice depends on the appropriate onset of host immune responses6	. There is a broad range of sensitivities amongst inbred mouse strains7,8. Generally, mice with increased susceptibility to Listeria infection are less able to control bacterial proliferation, demonstrating increased bacterial load and/or delayed clearance compared to resistant mice. Genetic studies, including linkage analyses and knockout mouse strains, have identified various genes for which sequence variation affects host responses to Listeria infection6,8-14. Determination and comparison of infection kinetics between different mouse strains is therefore an important method for identifying host genetic factors that contribute to immune responses against Listeria. Comparison of host responses to different Listeria strains is also an effective way to identify bacterial virulence factors that may serve as potential targets for antibiotic therapy or vaccine design.
We describe here a straightforward method for measuring bacterial load (colony forming units [CFU] per tissue) and preparing single-cell suspensions of the liver and spleen for FACS analysis of immune responses in Listeria-infected mice. This method is particularly useful for initial characterization of Listeria infection in novel mouse strains, as well as comparison of immune responses between different mouse strains infected with Listeria. We use the Listeria monocytogenes EGD strain15 that, when cultured on blood agar, exhibits a characteristic halo zone around each colony due to &beta;-hemolysis1 (Figure 1). Bacterial load and immune responses can be determined at any time-point after infection by culturing tissue homogenate on blood agar plates and preparing tissue cell suspensions for FACS analysis using the protocols described below. We would note that individuals who are immunocompromised or pregnant should not handle Listeria, and the relevant institutional biosafety committee and animal facility management should be consulted before work commences.

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes is a model organism for studying immune responses and genetic susceptibility to intracellular bacteria in mice. This method enables one to measure bacterial load and generate single-cell suspensions of the liver and spleen from mice for FACS analysis to determine changes in immune cells due to Listeria infection.

قياس الحمولة الجرثومية والاستجابات المناعية في الفئران المصابة المستوحدة الليستيريا</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

This protocol outlines the steps required to longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging tomography with integrated &mu;CT (DLIT-&mu;CT) and the subsequent use of this data to generate a four dimensional (4D) movie of the infection cycle. To develop the 4D infection movies and to validate the DLIT-&mu;CT imaging for bacterial infection studies using an IVIS Spectrum CT, we used infection with bioluminescent C. rodentium, which causes self-limiting colitis in mice. In this protocol, we outline the infection of mice with bioluminescent C. rodentium and non-invasive monitoring of colonization by daily DLIT-&mu;CT imaging and bacterial enumeration from feces for 8 days.
The use of the IVIS Spectrum CT facilitates seamless co-registration of optical and &mu;CT scans using a single imaging platform. The low dose &mu;CT modality enables the imaging of mice at multiple time points during infection, providing detailed anatomical localization of bioluminescent bacterial foci in 3D without causing artifacts from the cumulative radiation. Importantly, the 4D movies of infected mice provide a powerful analytical tool to monitor bacterial colonization dynamics in vivo.

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

Multi-modality imaging is a valuable approach for studying bacterial colonization in small animal models. This protocol outlines infection of mice with bioluminescent Citrobacter rodentium and the longitudinal monitoring of bacterial colonization using composite 3D diffuse light imaging tomography with &mu;CT imaging to create a 4D movie of C. rodentium infection.

4D التصوير تعدد الوسائط من<em&gt; الليمونية rodentium</em&gt; التهابات في الفئران

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model itself. Early phases of inflammation and infection have been widely studied by using the Pseudomonas aeruginosa agar-beads mouse model, while only few reports have focused on the long-term chronic infection in vivo. The main challenge for long term chronic infection remains the low bacterial burden by P. aeruginosa and the low percentage of infected mice weeks after challenge, indicating that bacterial cells are progressively cleared by the host.
This paper presents a method for obtaining efficient long-term chronic infection in mice. This method is based on the embedding of the P. aeruginosa clinical strains in the agar-beads in vitro, followed by intratracheal instillation in C57Bl/6NCrl mice. Bilateral lung infection is associated with several measurable read-outs including weight loss, mortality, chronic infection, and inflammatory response. The P. aeruginosa RP73 clinical strain was preferred over the PAO1 reference laboratory strain since it resulted in a comparatively lower mortality, more severe lesions, and higher chronic infection. P. aeruginosa colonization may persist in the lung for over three months. Murine lung pathology resembles that of CF patients with advanced chronic pulmonary disease.
This murine model most closely mimics the course of the human disease and can be used both for studies on the pathogenesis and for the evaluation of novel therapies.

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

We describe the agar-beads method to establish persistent long-term chronic Pseudomonas aeruginosa airway infection in the mouse model.

على المدى الطويل المزمن<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; عدوى مجرى الهواء في الفئران

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood vessels resulting in vascular leak, the development of purpuric rashes and eventual tissue necrosis. Studying the pathogenesis of this infection was previously limited by the human specificity of the bacteria, which makes in vivo models difficult. In this protocol, we describe a humanized model for this infection in which human skin, containing dermal microvessels, is grafted onto immunocompromised mice. These vessels anastomose with the mouse circulation while maintaining their human characteristics. Once introduced into this model, N. meningitidis adhere exclusively to the human vessels, resulting in extensive vascular damage, inflammation and in some cases the development of purpuric rash. This protocol describes the grafting, infection and evaluation steps of this model in the context of N. meningitidis infection. The technique may be applied to numerous human specific pathogens that infect the blood stream.

Neisseria meningitidis is a human specific pathogen that infects blood vessels. In this protocol human microvessels are introduced into a mouse by grafting human skin onto immunocompromised mice. Bacteria adhere extensively to the human vessels, leading to vascular damage and development of the purpuric rash typically observed in human cases.

أنسنة نموذج الفأر لدراسة الالتهابات البكتيرية استهداف الأوعية الدموية الدقيقة

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes is a Gram-positive facultative intracellular pathogen that is capable of causing serious invasive infections in immunocompromised patients, the elderly, and pregnant women. The most common manifestations of listeriosis in humans include meningitis, encephalitis, and fetal abortion. A significant but much less documented sequelae of invasive L. monocytogenes infection involves the heart. The death rate from cardiac illness can be up to 35% despite treatment, however very little is known regarding L. monocytogenes colonization of cardiac tissue and its resultant pathologies. In addition, it has recently become apparent that subpopulations of L. monocytogenes have an enhanced capacity to invade and grow within cardiac tissue. This protocol describes in detail in vitro and in vivo methods that can be used for assessing cardiotropism of L. monocytogenes isolates. Methods are presented for the infection of H9c2 rat cardiac myoblasts in tissue culture as well as for the determination of bacterial colonization of the hearts of infected mice. These methods are useful not only for identifying strains with the potential to colonize cardiac tissue in infected animals, but may also facilitate the identification of bacterial gene products that serve to enhance cardiac cell invasion and/or drive changes in heart pathology. These methods also provide for the direct comparison of cardiotropism between multiple L. monocytogenes strains.

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes causes fetal infections in pregnant women and meningitis in susceptible populations. Subpopulations of bacteria can colonize cardiac tissue, causing myocarditis in patients and laboratory animals. Here we present a protocol that describes how to assess L. monocytogenes cardiac cell invasion in vitro and cardiac colonization in infected animals.

تقييم الغزو البكتيري لخلايا القلب في الثقافة والاستعمار القلب في الفئران المصابة باستخدام monocytogenes الليستيريا

Listeria monocytogenes is a Gram-positive facultative intracellular pathogen that is capable of causing serious invasive infections in immunocompromised ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence factors, which can subvert and manipulate key host functions. The study of host/pathogen interactions is therefore extremely important to understand bacterial infections and develop alternative strategies to counter infectious diseases. This approach however, requires the development of new high-throughput assays for the unbiased, automated identification and characterization of bacterial virulence determinants. Here, we describe a method for the generation of a GFP-tagged mutant library by transposon mutagenesis and the development of high-content screening approaches for the simultaneous identification of multiple transposon-associated phenotypes. Our working model is the intracellular bacterial pathogen Coxiellaburnetii, the etiological agent of the zoonosis Q fever, which is associated with severe outbreaks with a consequent health and economic burden. The obligate intracellular nature of this pathogen has, until recently, severely hampered the identification of bacterial factors involved in host pathogen interactions, making of Coxiella the ideal model for the implementation of high-throughput/high-content approaches.

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Coxiella burnetii is an obligate intracellular Gram-negative bacterium responsible for the zoonotic disease Q fever. Here we describe methods for the generation of Coxiella fluorescent transposon mutants as well as the automated identification and analysis of the resulting internalization, replication and cytotoxic phenotypes.

جيل ومتعدد المظهري فحص عالية المحتوى من<em&gt; الكوكسيلا البورنيتية</em&gt; المسوخ ينقول

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is imperative to design experiments using human cells and tissues. An advantage of organ culture is maintenance of three-dimensional (3D) structural organization and extracellular matrix. The goal of the method described here is successful establishment of ex vivo human gestational tissue organ cultures and their healthy culture maintenance for 72-96 hr. The protocol details the immediate processing of research-consented, placental and decidual specimens fresh from the operating suite. These are abundant specimens that would otherwise be discarded. Detailed instructions on the sterile collection of these samples, including morphologic details on how to select appropriate tissues to establish 3D organ cultures, is provided. Placental villous and decidual tissues are microdissected into 2-3 mm3 pieces and placed separately on matrix-lined transwell filters and cultured for several days. Villous and decidual organ cultures are well suited for the study of human host-pathogen interaction. As compared to other model organisms, these human cultures are particularly advantageous to examine mechanism of infection for pathogens that demonstrate variable patterns of host specificity. As an example, we demonstrate infection of placental and decidual organ cultures with the clinically relevant, facultative intracellular bacterial pathogen Listeria monocytogenes.

A simple method to establish primary human placental (villous) and decidual organ cultures is described. Villous and decidual organ cultures are invaluable tools for studying pathogenesis at the human maternal-fetal interface. Infection with the facultative intracellular bacterium Listeria monocytogenes is demonstrated.

الثقافات المشيمة وساقطي الجهاز الإنسان لدراسة العدوى في واجهة الأم والجنين

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Using the Protozoan Paramecium caudatum as a Vehicle for Food-borne Infections in Zebrafish Larvae

Due to their transparency, genetic tractability, and ease of maintenance, zebrafish (Danio rerio) have become a widely-used vertebrate model for infectious diseases. Larval zebrafish naturally prey on the unicellular protozoan Paramecium caudatum. This protocol describes the use of P. caudatum as a vehicle for food-borne infection in larval zebrafish. P. caudatum internalize a wide range of bacteria and bacterial cells remain viable for several hours. Zebrafish then prey on P. caudatum, the bacterial load is released in the foregut upon digestion of the paramecium&#160;vehicle, and the bacteria colonize the intestinal tract. The protocol includes a detailed description of paramecia maintenance, loading with bacteria, determination of bacterial degradation and dose, as well as infection of zebrafish by feeding with paramecia. The advantage of using this method of food-borne infection is that it closely mimics the mode of infection observed in human disease, leads to more robust colonization compared to immersion protocols, and allows the study of a wide range of pathogens. Food-borne infection in the zebrafish model can be used to investigate bacterial gene expression within the host, host-pathogen interactions, and hallmarks of pathogenicity including bacterial burden, localization, dissemination and morbidity.

Using the Protozoan Paramecium caudatum as a Vehicle for Food-borne Infections in Zebrafish Larvae

Zebrafish (Danio rerio) are becoming a widely-used vertebrate animal model for microbial colonization and pathogenesis. This protocol describes the use of the protozoan Paramecium caudatum as a vehicle for food-borne infection in zebrafish larvae. P. caudatum readily internalizes bacteria and get taken up by larval zebrafish through natural preying behavior.

استخدام البرزي caudatum براميسيوم كوسيلة للأمراض المنقولة بالأغذية في "اليرقات الزرد"

Due to their transparency, genetic tractability, and ease of maintenance, zebrafish (Danio rerio) have become a widely-used vertebrate model for ...

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing activity by assessing the ability of antibodies in serum to bind to bacteria and activate complement. This complement activation results in the lysis and killing of the target bacteria. These assays are valuable because they go beyond quantifying antibody production to elucidate the biological functions that these antibodies have, allowing researchers to study the role that antibodies may play in preventing infection. SBAs have been used to study immune responses for many human pathogens, but there is no widely accepted methodology for Shigella at present. Historically, SBAs have been very labor-intensive, requiring many time-consuming steps to accurately quantify surviving bacteria. This protocol describes a simple, robust, and high-throughput assay that measures functional antibodies specific for Shigella in serum in vitro. The method described here offers many advantages over traditional SBAs, including the use of frozen bacterial stocks, 96 well assay plates, a micro-culture system, and automated colony-counting. All of these modifications make this assay less labor-intensive and more high-throughput. This protocol is simpler and faster to perform than traditional SBAs while still using simple technologies and readily available reagents. The protocol has been successfully applied in multiple independent laboratories and the assay is robust and reproducible. The assay can be used to assess immune responses in pre-clinical as well as clinical studies. Quantifying shigellacidal antibody titers both before and after antigen exposure (either by immunization or infection) allows for a broader understanding of how functional antibody responses are generated and their contribution to protective immunity. The development of this standardized, well-characterized assay may greatly facilitate Shigella vaccine design.

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

Here we present a protocol to measure Shigellacidal activity of antibodies in serum. Serum is mixed with bacteria and exogenous complement, incubated, and the reaction mixture is plated on agar plates. Viable bacteria form colonies which are counted, using an automated colony enumerator, and used to determine the bactericidal titer.

الفائق دوسنتاريا-مقايسة جراثيم معينة

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing ...