We wish to thank Peter Munro PhD for his assistance with optic nerve sectioning. This study was supported by the Medical Research Council (G0901303), and in part by the Dorothy Hodgkin Postgraduate Award/Medical Research Council, the Helen Hamlyn Trust, Fight for Sight, and Moorfields special trustess,.

بيان الأخلاق: تم إجراء جميع التجارب على الحيوانات وفقا للجنة رعاية واستخدام المؤسسية الحيوان (IACUC)، وتمت الموافقة في اتفاق مع المبادئ التوجيهية المملكة المتحدة وزارة الداخلية ( <a href="http://goo.gl/FLkirW" target="_blank">http://goo.gl/FLkirW</a> ، بالرجوع إليه آخر مرة 10 يونيو ، 2014) وبيان ARVO لاستخدام الحيوانات في العيون والبحوث الرؤية ( <a href="http://goo.gl/4LFOjD" target="_blank">http://goo.gl/4LFOjD</a> ، بالرجوع إليه آخر مرة 10 يونيو، 2014). 1. بصري ارتفاع ضغط الدم التعريفي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حمل الزرق التجريبي رفع ضغط العين (IOP) عن طريق الحقن من جانب واحد المجهرية ممغطس في الغرفة الأمامية من الفئران براون النرويج، استنادا إلى طريقة Samsel وآخرون قد تكون 3 الفئران مصطبغة أخرى مناسبة، على الرغم من أن هذه سوف تحتاج إلى التحقق من صحة لأول مرة من قبل المستخدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> منزل 250-300 غرام أنثىالفئران السابق مربي براون النرويج في بيئة الإضاءة المنخفضة الدائمة (40-60 لوكس) للحد من تقلبات نهاري في IOP 7، مع الحصول على الغذاء والماء بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخذ قياسات IOP الأساسية في الحيوانات مستيقظا 8 قبل التخدير وحقن حبة، وذلك باستخدام مقياس توتر العين انتعاش معايرة للاستخدام في العين الفئران 9. يؤخذ IOP كما يعني من خمس قراءات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران مع 37.5 ملغم / كغم من الكيتامين، و 0.25 مغ / كغ medetomidine هيدروكلوريد تسليمها البريتونى. تأكيد عمق التخدير عن طريق اختبار ردود الافعال القدم الخلفية الحيوان، وذلك قبل تطبيق البوفيدون اليود (راجع الخطوة 1.5)، وحقن حبة (راجع الخطوة 1.8). إدارة 0.5٪ بروباراكايين هيدروكلوريد لتسكين الألم. ملاحظة: لا تمدد التلميذ في أي مرحلة. وهذا سوف يساعد حبات ليستقر أفضل في زاوية القزحية القرنوية، ومنع ملزم من العدسة. تطبيق مرهم العين لمنع جفاف القرنية على تديرها الامم المتحدة العين المقابل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Wالرماد العين المنطوق مع 5٪ البوفيدون اليود في الماء 10 5 دقائق قبل الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 5 دقائق، الفتيل والبوفيدون اليود قبالة باستخدام شاش معقم، وغسل العين مع 0.9٪ محلول ملحي معقم. إبقاء العين رطبة أثناء التخدير مع التطبيق المنتظم للملحي معقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع المغناطيس حلقية حول العين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ 25 ميكرولتر من محلول يحتوي على 30 ملغ / مل من أشعة غاما تشعيع تعقيمها 8 ميكرون المجهرية المغناطيسية في محلول الملح هانك المتوازن (HBSS) في الغرفة الأمامية، وذلك باستخدام إبرة مشطوف 33 G. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإعداد الخرز، وغسل خلال اعادة وقف، ثم الطرد المركزي 3 مرات في 10،000 x ج لمدة 5 دقائق مع 1 مل HBSS، قبل أن يقدم 30 ملغ / مل الحل النهائي. الحفاظ على ظروف معقمة طوال الوقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحقن، وتوخي الحذر لتجنب إدخال الإبرة إلى القزحية، للحد من خطر الصدمة القزحية. هذا يمكن الوقاية منها عن طريق ويوجه الإبرة عرضية على سطح القرنية، كما موازية لالقزحية وقت ممكن. وهذا سوف يساعد أيضا على تقليل الخسائر حبة من موقع الحقن. ملاحظة: حقن الخرز بمعدل سريع لضمان حتى التوزيع في جميع أنحاء زاوية القزحية القرنوية، وهو أمر حاسم في رفع IOP. بالإضافة إلى ذلك، الخرز متجر، والإبر والحلقات المغناطيسية بشكل منفصل بحيث لا تشكل حبات العناقيد، مما يجعل من الصعب تحميل في حقنة وحقن، ولا تصبح الإبرة الممغنطة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك الإبرة في مكانها لمدة 1 دقيقة بعد الحقن لضمان أن حبات تستقر في الزاوية القزحية القرنوية لعرقلة الصرف المائي من الشبكة التربيقية. قليلا زاوية إبرة بعد الخرز وقد استقر في البداية للسماح لبعض تسرب مائي، للحد من الزيادات العابرة في IOP. في نهاية عملية جراحية مسح الإبرة من خلال مع الفوسفات الأولى مخزنة المالحة (PBS)، ثم الايثانول 70٪، تليها الماء المقطر، لضمان استمرار استخدام الإبرة في إجراءات منفصلة. بدلا من ذلك، يمكن للمرء استخدامالإبر المتاح إذا كان مقياس الصحيح والمحاقن الجمع هو متاح. ويمكن شحذ الإبر باستخدام beveller لإطالة استخدامها: اختياري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في هذه المرحلة إذا لزم الأمر، وإزالة المغناطيس، واستخدامها لرسم حبات في مناطق التغطية غير مكتملة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك المغناطيس في مكان حول العين لمدة 10 دقيقة بعد الحقن لضمان مزيد من الخرز تستقر بشكل جيد في زاوية القزحية القرنوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التخدير العكسي باستخدام 0.25 مغ / كغ atipemezole هيدروكلوريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة الكلورامفينيكول، أو مرهم مضاد حيوي آخر، على سبيل المثال الجنتاميسين أو طرمايسين موضعيا لمنع العدوى، و 0.5٪ هيدروكلوريد بروباراكايين لتسكين الألم. ترك الحيوانات لاسترداد على حصيرة الحرارة حتى استعادة الحركة، ثم نقل إلى مربع دافئ والعرض مع تغذية إضافية، مثل المكملات الغذائية أو مبلل حمية منتظمة حتى الشفاء الكامل. وينبغي إيلاء تسكين النظامية أو المحلي على الحيوانات التي تظهر علامات الألم 24 ساعة بعد الجراحة. إذا تسااستمرت الأعراض ه على الرغم من العلاج، والحيوانات يجب اعدام إنسانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام العين المقابل كعنصر تحكم unoperated. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخذ قياسات IOP كل 2-3 أيام بعد إعطاء حبة، وكل 2-3 أيام بعد ذلك باستخدام مقياس توتر العين انتعاش معايرة للاستخدام في العين الفئران 9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معايير بما في ذلك العينين في الدراسات يمكن أن تكون: إذا 1) IOP مرتفعة فوق السيطرة على ضغط المقابل بنسبة 5 مم زئبق، و2) لا تتجاوز 60 مم زئبق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عيون حيث لا ينبغي أن تدرج يعود الضغط إلى خط الأساس (عادة بنسبة 1 في الاسبوع بعد الحقن) في الدراسات، إلا أنه من الممكن إعادة حقن الخرز في العيون التي تفشل في تطوير IOP عالية اذا شئت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الحيوانات CO 2 الاختناق في نهاية التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح العين والأعصاب البصرية، وإصلاح في 4٪ بارافورمالدهيد (PFA) بين عشية وضحاها لمزيد من التحليل النسيجي. </li></ol> 2. تقييم الشبكية العصبية الأضرار عن طريق TUNEL Staining <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحديد الخلايا أفكارك في جبل بأكمله retinasuse في deoxynucleotidyl محطة بوساطة ترانسفيراز dUTP نيك وضع العلامات (TUNEL) الفحص، وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح شبكية العين من الكأس العين، وغسل لمدة 3 × 5 دقائق في 0.3٪ تريتون X-100 في الفوسفات مخزنة المالحة (T-PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Permeabilize الأنسجة في 3٪ T-PBS لمدة 2 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل تتوازن شبكية العين في موازنة العازلة لمدة 10 دقيقة، قبل الحضانة في TUNEL محلول التفاعل لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الأنسجة لمدة 3 × 5 دقائق في 0.3٪ T-PBS، وشطف في 0.3٪ T-PBS تحتوي على 5 ميكرومتر دابي، وشقة جبل في وسائل الإعلام المتصاعدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحديد نوى إيجابية TUNEL استخدام المجهر متحد البؤر أن تأخذ 10 ميكرون ض أكوام من خلال طبقة الخلايا العقدية في 20X التكبير. يستغرق 3 الصور على كل من 4 بتلات، في مواقع قريبة من العصب البصري، في منتصف المحيط، وعلى هامش بكثير من شبكية العين، وإعطاء ما مجموعه 12 صورة في مون كلهر، وأخذ العينات حوالي 7،000 الخلايا. معايير شكلية تميز غير العصبية (البطانية والدبقية) الخلايا من الخلايا العصبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد مجالات التصوير فقط باستخدام قناة دابي، والمحققين قناع لمجموعات العلاج. </li></ol> 3. تقييم تلف العصب البصري عن طريق طولويدين الأزرق تلطيخ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح الأعصاب البصرية بين عشية وضحاها في حل Karnovsky لفي 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علاج العينات لمدة 2 ساعة في 1٪ (ث / ت) رباعي أكسيد الأوزميوم ثم يذوى في الإيثانول بنسبة 100٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الأعصاب البصرية في أكسيد البروبيلين لمدة 30 دقيقة، ووضع في 50:50 خليط من أكسيد البروبيلين: بين عشية وضحاها araldite. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير هذا الحل إلى 100٪ araldite، تليها الحضانة بين عشية وضحاها في 60 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع semithin أقسام (0.75 مم) وصمة عار مع 1٪ طولويدين الأزرق / البوراكس (TB) في 50٪ من الإيثانول قبل الفحص بواسطة المجهر الضوئي. </li></ol> 4. التحليل الإحصائي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنفيذ آنا الإحصائيlyses باستخدام حزمة البرامج الإحصائية المناسبة. A-اتجاهين ANOVA مع اختبار ما بعد خاص-نيومان-Keul ويمكن أن تستخدم لحساب دلالة إحصائية لIOP يتغير مع مرور الوقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن اعتبار قيمة p من أقل من 0.05 كبيرا. </li></ol>

<ol>
	<li>Quigley, H. A., Broman, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+number+of+people+with+glaucoma+worldwide+in+2010+and+2020.">The number of people with glaucoma worldwide in 2010 and 2020.</a> Br J Ophthalmol. 90 (3), 262-267 (2006).</li><li>Weinreb, R. N., Aung, T., Medeiros, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathophysiology+and+treatment+of+glaucoma:+a+review.">The pathophysiology and treatment of glaucoma: a review.</a> JAMA. 311 (18), 1901-1911 (2014).</li><li>Samsel, P. A., Kisiswa, L., Erichsen, J. T., Cross, S. D., Morgan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+the+induction+of+experimental+glaucoma+using+magnetic+microspheres.">A novel method for the induction of experimental glaucoma using magnetic microspheres.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (3), 1671-1675 (2011).</li><li>Libby, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inherited+glaucoma+in+DBA/2J+mice:+pertinent+disease+features+for+studying+the+neurodegeneration.">Inherited glaucoma in DBA/2J mice: pertinent disease features for studying the neurodegeneration.</a> Vis Neurosci. 22 (5), 637-648 (1017).</li><li>Morrison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+intraocular+pressure+and+optic+nerve+injury+models+in+the+rat.">Elevated intraocular pressure and optic nerve injury models in the rat.</a> J Glaucoma. 14 (4), 315-317 (2005).</li><li>Levkovitch-Verbin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translimbal+laser+photocoagulation+to+the+trabecular+meshwork+as+a+model+of+glaucoma+in+rats.">Translimbal laser photocoagulation to the trabecular meshwork as a model of glaucoma in rats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 43 (2), 402-410 (2002).</li><li>Moore, C. G., Johnson, E. C., Morrison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythm+of+intraocular+pressure+in+the+rat.">Circadian rhythm of intraocular pressure in the rat.</a> Curr Eye Res. 15 (2), 185-191 (1996).</li><li>Morrison, J. C., Jia, L., Cepurna, W., Guo, Y., Johnson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+and+sensitivity+of+the+TonoLab+rebound+tonometer+in+awake+Brown+Norway+rats.">Reliability and sensitivity of the TonoLab rebound tonometer in awake Brown Norway rats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (6), 2802-2808 (2009).</li><li>Wang, W. H., Millar, J. C., Pang, I. H., Wax, M. B., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+measurement+of+rodent+intraocular+pressure+with+a+rebound+tonometer.">Noninvasive measurement of rodent intraocular pressure with a rebound tonometer.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46 (12), 4617-4621 (2005).</li><li>Isenberg, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ocular+application+of+povidone-iodine.">The ocular application of povidone-iodine.</a> Community Eye Health. 16 (46), 30-31 (2003).</li><li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+chronic+pressure-induced+optic+nerve+damage.">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Exp Eye Res. 64 (1), 85-96 (1997).</li><li>Foxton, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-A+is+necessary+and+sufficient+for+retinal+neuroprotection+in+models+of+experimental+glaucoma.">VEGF-A is necessary and sufficient for retinal neuroprotection in models of experimental glaucoma.</a> Am J Pathol. 182 (4), 1379-1390 (2013).</li></ol>

David T. Shima is an employee of Hofmann-La Roche, Switzerland. The remaining authors declare they have no competing financial interests.

نحن هنا لشرح طريقة لإحداث IOP مرتفعة في الفئران، عن طريق حقن المجهرية المغناطيسية في الغرفة الأمامية للعين. وهذه طريقة بسيطة للقيام بها، ويتطلب خبرة جراحية قليلا، أو ساعة من الممارسة والصقل. وعلاوة على ذلك، فإن الإجراء هو فعال؛ نادرا ما يتطلب أكثر من حقنة واحدة من حبات للحث على، وارتفاع قوي قوي في الضغط (ما يقرب من 10٪ معدل إعادة حقن). قد توفر هذه ميزة على أساليب محرض القائمة، مثل الوريد episceral تحديا تقنيا التصلب 11 نموذج، أو الليزر الضوئي بروتوكول 6، والتي يمكن أن تتطلب إجراءات متعددة لرفع الحفاظ على IOP. من أجل أن طريقة لتكون ناجحة ومع ذلك، هناك بعض الخطوات الحاسمة الصغيرة التي تحتاج إلى اتخاذها. أولا أنه من المفيد استخدام مغناطيس على شكل حلقية لرسم حبات في زاوية القزحية القرنوية. هذه الخطوة هو تعديل البروتوكول الأصلي، وهره تم حقن حبات في الغرفة الأمامية، ثم انتقل مرفوعة حول العين 3. باستخدام مغناطيس حلقي يعني أن المجهرية يجب أن تستقر بالتساوي في جميع أنحاء زاوية، والتي تتطلب الحد الأدنى من إعادة توزيع اليدوي. ثانيا، ينبغي أن يكون معدل الحقن بسرعة - بطيئة جدا وسوف الخرز تتراكم في الغالب على جانب واحد من زاوية، مما يؤدي إلى تغطية غير مكتملة، وربما عدم ارتفاع الضغط. وبصفة عامة على الرغم من هذه الطريقة واضحة بما فيه الكفاية أن المستخدم يمكن بسهولة إجراء تعديلات على البروتوكول، مثل متفاوتة الحجم أو حجم الجسيمات المكروية، ربما في محاولة لتغيير درجة ارتفاع IOP. ومع ذلك، واحد العيب المحتمل للطريقة هو أن على المرء أن سيطرة تذكر على مدى ارتفاع ضغط الدم، والتي ارتفعت في حوالي 5-10٪ من الحالات لاحظنا فوق 60 مم زئبق. ارتفاع المفرطة في IOP يمكن أن تكون مدمرة جدا لأنسجة الشبكية، ويمكن أن تجعل دراسة آليات والبيولوجيةبليد الحركة من موت الخلايا تحديا. ومع ذلك، ينتج الأسلوب علم الأمراض العصبية ثابت، سواء في شبكية العين والعصب البصري، والتي يمكن التلاعب عقاقيري 12. وهذا قد جعل نموذج جاذبية لتطوير علاجات جديدة لعلاج الجلوكوما. بالإضافة إلى ذلك، لأن الخرز وتوجه إلى زاوية القزحية القرنوية، وهذا يترك محور البصري الحرة للتصوير المباشر لشبكية العين أو البصرية القرص. ونحن نتوقع أن هذا النموذج سيتم تكييفها واستخدامها في التطبيقات المستقبلية في الأنواع الأخرى، بما في ذلك الماوس.

الزرق الأساسي هو مرض العين المدمر تؤثر يقدر ب 60500000 الناس في جميع أنحاء العالم 1، والذي يمكن أن يؤدي إلى تغيير الحياة وفقدان البصر والعمى 2. البحث في آليات المرض، وتطوير علاجات جديدة للزرق، تعتمد على نماذج جيدة من هذا المرض الذي ألخص بعض من السمات المميزة لعلم الأمراض. نقدم هنا نموذجا الزرق الفئران على أساس طريقة Samsel وآخرون. 3 ويتمثل الهدف العام من هذه التقنية هو زيادة ضغط العين (IOP) في العين عن طريق حقن المجهرية المغناطيسية في الغرفة الأمامية، وباستخدام رنين مغناطيسي، مباشرة لهم في زاوية القزحية القرنوية. هذا يعوق تدفق مائي، مما يزيد IOP، مما يؤدي إلى تلف الخلايا العصبية وفقدان الخلية. وقد تم تطوير هذا البروتوكول في محاولة لتوفير أبسط، نموذج محرض من الزرق. قد يكون هذا البروتوكول بعض المزاياعلى التقنيات الموجودة. هي المتاحة، والتي لا تتطلب إجراءات لبدء نماذج الماوس الوراثية مثل DBA / 2J. ولكن هذه قد يكون لها بداية لا يمكن التنبؤ به من تطور المرض (4). في المقابل، نماذج محرض، وهي في معظمها تعتمد على رفع جراحيا IOP في القوارض، لديها ميزة أن الشروع يمكن التحكم من قبل المستخدم. بعض من هذه الأساليب قد يكون لها عيوب خاصة بهم مع ذلك، بما في ذلك كونه تحديا تقنيا 5، ويمكن أن تتطلب إجراءات متعددة للحفاظ على IOP ارتفاع 6. في المقابل، فإن طريقة محرض بالتفصيل في هذه المخطوطة هي تقنية بسيطة وفعالة، وقابلة للتكرار أن تنتج، ويزيد من قوة مستقرة في الضغط، مع الحد الأدنى من الحاجة إلى إعادة حقن. بالإضافة إلى ذلك، أنها لا تنطوي على معدات باهظة الثمن، ويتطلب فقط المهارات الجراحية الأساسية لأداء. قد يكون هذا البروتوكول المناسب للقراء الذين يتطلعون لاقامة تطالب أقل من الناحية الفنية محرضنموذج الزرق في المختبرات الخاصة بهم.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="784">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:324px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:175px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:324px;">250-300g female Brown Norway ex-breeder rats</td>
			<td style="width:175px;">Harlan UK</td>
			<td style="width:119px;">203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Tonolab Rebound Tonometer</td>
			<td style="width:175px;">Tiolat</td>
			<td style="width:119px;">TV02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:324px;">Ketaset (Ketamine)</td>
			<td style="width:175px;">Fort Dodge Animal health</td>
			<td>BN1000118</td>
			<td>37.5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Domitor (medetomidine hydrochloride)</td>
			<td style="width:175px;">Orion Pharma</td>
			<td style="width:119px;">140-999</td>
			<td>0.25 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Povidone iodine</td>
			<td style="width:175px;">Ecolab</td>
			<td>BN4369LE10</td>
			<td>5% in H2O</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Minim&#39;s Saline Solution</td>
			<td style="width:175px;">Bausch and Lomb</td>
			<td>PL00033/5017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Toroidal magnet</td>
			<td style="width:175px;">Supermagnete</td>
			<td>R-10-07-03-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Magnetic Microspheres</td>
			<td style="width:175px;">Bangs Laboratories</td>
			<td>UMC4N/9692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">HBSS</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">14025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">33-guage bevelled needle</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td>7747-01</td>
			<td>Custom needle</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Luer tip syringe</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td>80601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Antisedan (atipemezole hydrochloride )</td>
			<td style="width:175px;">Orion Pharma</td>
			<td style="width:119px;">141-003</td>
			<td>0.25 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Chloramphenicol ointment</td>
			<td style="width:175px;">Medicom</td>
			<td>18956-0005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">TUNEL staining kit</td>
			<td style="width:175px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G3250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">DAPI</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Vectashield Mounting Media</td>
			<td style="width:175px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental glaucoma induced by ocular injection of magnetic microspheres

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present here a protocol for elevating intraocular pressure (IOP) in the rat, by injecting magnetic microspheres into the anterior chamber of the eye. The use of magnetic particles allows the user to manipulate the beads into the iridocorneal angle, thus providing a very effective blockade of fluid outflow from the trabecular meshwork. This leads to long-lasting IOP rises, and eventually neuronal death in the ganglion cell layer (GCL) as well as optic nerve pathology, as seen in patients with the disease. This method is simple to perform, as it does not require machinery, specialist surgical skills, or many hours of practice to perfect. Furthermore, the pressure elevations are very robust, and reinjection of the magnetic microspheres is not usually required unlike in some other models using plastic beads. Additionally, we believe this method is suitable for adaptation for the mouse eye.

حقن حبات مغناطيسية في زاوية القزحية القرنوية يتسبب باستمرار ارتفاع لفترات طويلة وقوية في الضغط (الشكل 1)، والذي كان يمكن ملاحظتها بسهولة في نقطة لأول مرة، 3 أيام بعد الحقن. وعلاوة على ذلك، تم الإبقاء على الزيادة في الضغط طوال مدة التجربة، وعلى الرغم بالطبع قتنا انتهى في 18 أيام بعد الحقن، وذكر آخرون أن يستمر الضغط على المدى الطويل 3. بلغ متوسط ​​متوسط ​​IOP على طول الكامل للتجربة للسيطرة، وكانت عيون حقن غير حبة-19.7 ± 0.3 مم زئبق، مقارنة مع 40.5 ± 2.8 مم زئبقي للعيون حقن حبة (P &lt;0.001). بالإضافة إلى ذلك، زيادة الذروة IOP من 22.8 ± 0.3 مم زئبق إلى 49.9 ± 2.3 ملم زئبقي. لتحديد ما إذا كان الارتفاع في IOP يؤدي إلى موت خلايا الشبكية العقدة، أجرينا TUNEL تلطيخ على شبكية العين، والأنسجة على المقاطع العرضية العصب البصري (الشكل 2). في شبكية العين<html> لاحظنا زيادة في TUNEL تلطيخ (الشكل 2A) في عيون حقن حبة مع IOP مرتفعة. ارتفع عدد نوى أفكارك حوالي 15 أضعاف، من 1.6 ± 0.5 الخلايا في الضوابط المقابل، إلى 24.5 ± 0.5 الخلايا في شبكية العين ارتفاع ضغط الدم (الشكل 2B؛ P &lt;0.05). وعلاوة على ذلك، في عيون التي حقنت حبات مغناطيسية ولكن لم لا تزيد الضغط (على الأرجح بسبب انسداد غير كامل من زاوية القزحية القرنوية)، كانت أعداد خلايا TUNEL إيجابية لا تختلف كثيرا عن تلك الضوابط uninjected (P&gt; 0.05). هذا يشير إلى أن موت الخلايا كان مرتبطا إلى زيادة الضغط، وليس بسبب سمية مباشرة للالمجهرية المغناطيسية. وأخيرا، فإننا التحقيق البصري علم الأمراض العصبية في نموذج الزرق، ورأيت تراكم طولويدين الأزرق في العديد من المحاور، مشيرا إلى انحطاط هذه العمليات الخلوية (الشكل 2C). لدى عودتهم 1 &quot;SRC =&quot; / الملفات / ftp_upload / 52400 / 52400fig1highres.jpg &quot;/&gt; الشكل 1. ارتفاع ضغط العين باستخدام المجهرية المغناطيسية. حقن المجهرية المغناطيسية في الغرفة الأمامية التي يسببها لذلك، الارتفاع الكبير قوي في ضغط العين (IOP) بالمقارنة مع السيطرة المقابل، عيون غير المحقونة. وحدات Y-محور = ملليمتر من الزئبق (ملم زئبقي). البيانات = يعني ± SEM. * = P &lt;0.001، تم تعديل N = 12. وهذا الرقم من فوكستون وآخرون، AM. J. Pathol 182 (4): 1379-1390. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/52400/52400fig2highres.jpg" /> الشكل 2. الارتفاع من IOP عن طريق الحقن المجهرية المغناطيسية في زاوية القزحية القرنوية، التي يسببها موت الخلايا العصبية في طبقة الخلايا العقدية (GCL). (A) صور الممثل شبكية العين من سيطرة (اليسار) والجلوكوما (يمين) عيون الملون للنوى أفكارك التي كتبها TUNEL (الخضراء.السهام البيضاء) ودابي (الأزرق)، مما يشير إلى زيادة عدد نوى أفكارك كما ارتفع IOP. (B) الكمي لخلايا إيجابية TUNEL في GCL، وتبين أن عيون مع ارتفاع IOP (وسط)، وكان الخلايا بشكل ملحوظ أكثر أفكارك في المقارنة ل التحكم (يسار). في المقابل، في عيون حقن حبة حيث لم يرتفع الضغط (إلى اليمين)، لم يلاحظ أي زيادة كبيرة في TUNEL تلطيخ. البيانات = يعني ± SEM. * = P &lt;0.05، N = 7-8 (C) صور الممثل البصري تلطيخ العصبية، مما يدل على زيادة في تراكم طولويدين الأزرق (الأسهم السوداء) في محاور التالفة من الجلوكوما (يمين)، ولكن ليس السيطرة عيون (يسار). الحانات النطاق = 50 ميكرومتر. تم تعديل هذا الرقم من فوكستون وآخرون، صباحا. J. Pathol 182 (4): 1379-1390.

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres at JoVE.com

Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres

We present a method for inducing elevated intraocular pressure (IOP), by injecting magnetic microspheres into the rat eye, to model glaucoma. This leads to strong pressure rises, and extensive neuronal death. This protocol is easy to perform, does not require repeat injections, and produces stable long-lasting IOP rises.

التجريبية الزرق المستحث بواسطة حقن العيني من المجهرية المغناطيسي

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present ...

experimental-glaucoma-induced-ocular-injection-magnetic

Research

JoVE Journal

Medicine

16.9K Views.  University College London Institute of Ophthalmology. We present a method for inducing elevated intraocular pressure (IOP), by injecting magnetic microspheres into the rat eye, to model glaucoma. This leads to strong pressure rises, and extensive neuronal death. This protocol is easy to perform, does not require repeat injections, and produces stable long-lasting IOP rises.

Video: Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres

Generation of Alginate Microspheres for Biomedical Applications

Alginate-based materials have received considerable attention for biomedical applications because of their hydrophilic nature, biocompatibility, and physical architecture. Applications include cell encapsulation, drug delivery, stem cell culture, and tissue engineering scaffolds. In fact, clinical trials are currently being performed in which islets are encapsulated in PLO coated alginate microbeads as a treatment of type I diabetes. However, large numbers of islets are required for efficacy due to poor survival following transplantation. The ability to locally stimulate microvascular network formation around the encapsulated cells may increase their viability through improved transport of oxygen, glucose and other vital nutrients. Fibroblast growth factor-1 (FGF-1) is a naturally occurring growth factor that is able to stimulate blood vessel formation and improve oxygen levels in ischemic tissues. The efficacy of FGF-1 is enhanced when it is delivered in a sustained fashion rather than a single large-bolus administration. The local long-term release of growth factors from islet encapsulation systems could stimulate the growth of blood vessels directly towards the transplanted cells, potentially improving functional graft outcomes. In this article, we outline procedures for the preparation of alginate microspheres for use in biomedical applications. In addition, we describe a method we developed for generating multilayered alginate microbeads. Cells can be encapsulated in the inner alginate core, and angiogenic proteins in the outer alginate layer. The release of proteins from this outer layer would stimulate the formation of local microvascular networks directly towards the transplanted islets.

In the following sections, we outline procedures for the preparation of alginate microspheres for use in biomedical applications. We specifically illustrate a technique for creating multilayered alginate microspheres for the dual purpose of cell and protein encapsulation as a potential treatment for type 1 diabetes.

جيل من المجهرية الجيني للتطبيقات الطبية الحيوية

Alginate-based materials have received considerable attention for biomedical applications because of their hydrophilic nature, biocompatibility, and ...

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy and stem cell transplantations have become key therapeutic tools for treating blindness resulting from retinal degenerative diseases. Several forms of autologous transplantation for age-related macular degeneration (AMD), such as iris pigment epithelial cell transplantation, have generated encouraging results, and human clinical trials have begun for other forms of gene and stem cell therapies.2 These include RPE65 gene replacement therapy in patients with Leber's congenital amaurosis and an RPE cell transplantation using human embryonic stem (ES) cells in Stargardt's disease.3-4 Now that there are gene therapy vectors and stem cells available for treating patients with retinal diseases, it is important to verify these potential therapies in animal models before applying them in human studies. The mouse has become an important scientific model for testing the therapeutic efficacy of gene therapy vectors and stem cell transplantation in the eye.5-8 In this video article, we present a technique to inject gene therapy vectors or stem cells into the subretinal space of the mouse eye while minimizing damage to the surrounding tissue.

This surgical technique illustrates the injection of gene therapy vectors and stem cells into the subretinal space of the mouse eye.

تحت الشبكية حقن المتجهات العلاج الجيني والخلايا الجذعية في العين ماوس

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

A Laser-induced Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension to Characterize Visual Defects

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model of ocular hypertension to mimic human high-tension glaucoma. Here laser illumination is applied to the corneal limbus to photocoagulate the aqueous outflow, inducing angle closure. The changes of IOP are monitored using a rebound tonometer before and after the laser treatment. An optomotor behavioral test is used to measure corresponding changes in visual capacity. The representative result from one mouse which developed sustained IOP elevation after laser illumination is shown. A decreased visual acuity and contrast sensitivity is observed in this ocular hypertensive mouse. Together, our study introduces a valuable model system to investigate neuronal degeneration and the underlying molecular mechanisms in glaucomatous mice.

Chronic ocular hypertension is induced using laser photocoagulation of the trabecular meshwork in mouse eyes. The intraocular pressure (IOP) is elevated for several months after laser treatment. The decrease of visual acuity and contrast sensitivity of experimental animals are monitored using the optomotor test.

نموذج الفأر الليزر التي يسببها ارتفاع ضغط الدم المزمن المقلة لتوصيف العيوب البصرية

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the occurrence of subretinal hemorrhage can affect photoreceptor cell death in the detached retina. Hence, it is advantageous to create reproducible RDs without subretinal hemorrhage for evaluating photoreceptor cell death. We modified a previously reported method to create bullous and persistent RDs in a reproducible location with rare occurrence of subretinal hemorrhage. The critical step of this modified method is the creation of a self-sealing scleral incision, which can prevent leakage of sodium hyaluronate after injection into the subretinal space. To make the self-sealing scleral incision, a scleral tunnel is created, followed by scleral penetration into the choroid with a 30 G needle. Although choroidal hemorrhage may occur during this step, astriction with a surgical spear reduces the rate of choroidal hemorrhage. This method allows a more reproducible and reliable model of photoreceptor death in diseases that involve RD such as rhegmatogenous RD, retinopathy of prematurity, diabetic retinopathy, central serous chorioretinopathy, and age-related macular degeneration (AMD).

Creating experimental retinal detachments with a reproducible and sustained height of detachment, and without subretinal hemorrhage, is important for studying the pathophysiology of photoreceptor cell loss in retinal disease and evaluating potential therapeutic interventions. Here, we report such a method in detail.

شبكية العين مفرزة النموذجي في القوارض بواسطة حقن تحت الشبكية من هيالورونات الصوديوم

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Noninvasive Assessment of Cardiac Abnormalities in Experimental Autoimmune Myocarditis by Magnetic Resonance Microscopy Imaging in the Mouse

Myocarditis is an inflammation of the myocardium, but only ~10% of those affected show clinical manifestations of the disease. To study the immune events of myocardial injuries, various mouse models of myocarditis have been widely used. This study involved experimental autoimmune myocarditis (EAM) induced with cardiac myosin heavy chain (Myhc)-&#945; 334-352 in A/J mice; the affected animals develop lymphocytic myocarditis but with no apparent clinical signs. In this model, the utility of magnetic resonance microscopy (MRM) as a non-invasive modality to determine the cardiac structural and functional changes in animals immunized with Myhc-&#945; 334-352 is shown. EAM and healthy mice were imaged using a 9.4 T (400 MHz) 89 mm vertical core bore scanner equipped with a 4 cm millipede radio-frequency imaging probe and 100 G/cm triple axis gradients. Cardiac images were acquired from anesthetized animals using a gradient-echo-based cine pulse sequence, and the animals were monitored by respiration and pulse oximetry. The analysis revealed an increase in the thickness of the ventricular wall in EAM mice, with a corresponding decrease in the interior diameter of ventricles, when compared with healthy mice. The data suggest that morphological and functional changes in the inflamed hearts can be non-invasively monitored by MRM in live animals. In conclusion, MRM offers an advantage of assessing the progression and regression of myocardial injuries in diseases caused by infectious agents, as well as response to therapies.

This study demonstrates the successful establishment of magnetic resonance microscopy imaging as a non-invasive tool to assess the cardiac abnormalities in mice affected with autoimmune myocarditis. The data indicate that the technique can be used to monitor the disease-progression in live animals.

تقييم موسع من القلب شذوذ في التجريبية المناعة الذاتية التهاب عضلة القلب بواسطة التصوير بالرنين المغناطيسي المجهر في ماوس

Myocarditis is an inflammation of the myocardium, but only ~10% of those affected show clinical manifestations of the disease. To study the immune events ...

A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial neurodegenerative disease. With the advent of numerous transgenic mouse lines, there is increasing interest in inducible murine models of ocular hypertension. Here, we present an occlusion model of glaucoma based on the injection of magnetic microbeads into the anterior chamber of the eye using a modified microneedle with a facetted bevel. The magnetic microbeads are attracted to the iridocorneal angle using a handheld magnet to block the drainage of aqueous humour from the anterior chamber. This disruption in aqueous dynamics results in a steady elevation of intraocular pressure, which subsequently leads to the loss of retinal ganglion cells, as observed in human glaucoma patients. The microbead occlusion model presented in this manuscript is simple compared to other inducible models of glaucoma and also highly effective and reproducible. Importantly, the modifications presented here minimize common issues that often arise in occlusion models. First, the use of a bevelled glass microneedle prevents backflow of microbeads and ensures that minimal damage occurs to the cornea during the injection, thus reducing injury-related effects. Second, the use of magnetic microbeads ensures the ability to attract most beads to the iridocorneal angle, effectively reducing the number of beads floating in the anterior chamber avoiding contact with other structures (e.g., iris, lens). Lastly, the use of a handheld magnet allows flexibility when handling the small mouse eye to efficiently direct the magnetic microbeads and ensure that there is little reflux of the microbeads from the eye when the microneedle is withdrawn. In summary, the microbead occlusion mouse model presented here is a powerful investigative tool to study neurodegenerative changes that occur during the onset and progression of glaucoma.

Here, we present a protocol to induce ocular hypertension in the murine eye that results in the loss of retinal ganglion cells as observed in glaucoma. Magnetic microbeads are injected into the anterior chamber and attracted to the iridocorneal angle using a magnet to block the outflow of aqueous humour.

وميكروبيدات انسداد المغناطيسي نموذج للحث على بصري ارتفاع ضغط الدم التي تعتمد الزرق في الفئران

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial ...

Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report

This study is aimed at examining whether a suprachoroidal graft of autologous cells can improve best corrected visual acuity (BCVA) and responses to microperimetry (MY) in eyes affected by dry Age-related Macular Degeneration (AMD) over time through the production and secretion of growth factors (GFs) on surrounding tissue. Patients were randomly assigned to each study group. All patients were diagnosed with dry AMD and with BCVA equal to or greater than 1 logarithm of the minimum angle of resolution (logMAR). A suprachoroidal autologous graft by Limoli Retinal Restoration Technique (LRRT) was carried out on group A, which included 11 eyes from 11 patients. The technique was performed by implanting adipocytes, adipose-derived stem cells obtained from the stromal vascular fraction, and platelets from platelet-rich plasma in the suprachoroidal space. Conversely, group B, including 14 eyes of 14 patients, was used as a control group. For each patient, diagnosis was verified by confocal scanning laser ophthalmoscope and spectral domain-optical coherence tomography (SD-OCT). In group A, BCVA improved by 0.581 to 0.504 at 90 days and to 0.376 logMAR at 180 days (+32.20%) postoperatively. Furthermore, MY test increased by 11.44 dB to 12.59 dB at 180 days. The different cell types grafted behind the choroid were able to ensure constant GF secretion in the choroidal flow. Consequently, the results indicate that visual acuity (VA) in the grafted group can increase more than in the control group after six months.

Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report

The goal of this study is to assess whether the suprachoroidal graft of adipose-derived stem cells included in the stromal vascular fraction and platelets derived from platelet-rich plasma by the Limoli Retinal Restoration Technique can improve visual acuity and retinal sensitivity responses in eyes affected by dry age-related macular degeneration.

العلاج التجديدي بخلية سوبراتشورويدال أوتوجرافت في الجافة المرتبطة بالسن البقعي: تقرير أولى في فيفو

This study is aimed at examining whether a suprachoroidal graft of autologous cells can improve best corrected visual acuity (BCVA) and responses to ...

An Experimental Model of Diet-Induced Metabolic Syndrome in Rabbit: Methodological Considerations, Development, and Assessment

In recent years, obesity and metabolic syndrome (MetS) have become a growing problem for public health and clinical practice, given their increased prevalence due to the rise of sedentary lifestyles and unhealthy eating habits. Thanks to animal models, basic research can investigate the mechanisms underlying pathological processes such as MetS. Here, we describe the methods used to develop an experimental rabbit model of diet-induced MetS and its assessment. After a period of acclimation, animals are fed a high-fat (10% hydrogenated coconut oil and 5% lard), high-sucrose (15% sucrose dissolved in water) diet for 28 weeks. During this period, several experimental procedures were performed to evaluate the different components of MetS: morphological and blood pressure measurements, glucose tolerance determination, and the analysis of several plasma markers. At the end of the experimental period, animals developed central obesity, mild hypertension, pre-diabetes, and dyslipidemia with low HDL, high LDL, and an increase of triglyceride (TG) levels, thus reproducing the main components of human MetS. This chronic model allows new perspectives for understanding the underlying mechanisms in the progression of the disease, the detection of preclinical and clinical markers that allow the identification of patients at risk, or even the testing of new therapeutic approaches for the treatment of this complex pathology.

We describe methods to develop an experimental model of diet-induced metabolic syndrome (MetS) in rabbits using a high-fat, high-sucrose diet. Animals developed central obesity, mild hypertension, pre-diabetes, and dyslipidemia, thus reproducing the main components of human MetS. This chronic model will allow acquisition of knowledge underlying mechanisms of disease progression.

نموذج تجريبي لمتلازمة التمثيل الغذائي الناجمة عن النظام الغذائي في الأرانب: الاعتبارات المنهجية، والتنمية، والتقييم

In recent years, obesity and metabolic syndrome (MetS) have become a growing problem for public health and clinical practice, given their increased ...

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known risk factor for glaucoma. This protocol demonstrates a step-by-step guide on this technique in Long Evans rats and C57BL/6 mice. Under general anesthesia, a "purse-string" suture is applied on the conjunctiva, around the equator and behind the limbus of the eye. The fellow eye serves as an untreated control. Over the duration of our study, which was a period of 8 weeks for rats and 12 weeks for mice, IOP remained elevated, as measured regularly by rebound tonometry in conscious animals without topical anesthesia. In both species, the sutured eyes showed electroretinogram features consistent with preferential inner retinal dysfunction. Optical coherence tomography showed selective thinning of the retinal nerve fiber layer. Histology of the rat retina in cross-section found reduced cell density in the ganglion cell layer, but no change in other cellular layers. Staining of flat-mounted mouse retinae with a ganglion cell specific marker (RBPMS) confirmed ganglion cell loss. The circumlimbal suture is a simple, minimally invasive and cost-effective way to induce ocular hypertension that leads to ganglion cell injury in both rats and mice.

Chronic ocular hypertension is induced by applying a circumlimbal suture in rats and mice, leading to functional and structural deterioration of the retinal ganglion cells consistent with glaucoma.

نموذج زرق المستحث بخياطة سيركومليمبال في الجرذان والفئران

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

A Rabbit Model of Aqueous-Deficient Dry Eye Disease Induced by Concanavalin A Injection into the Lacrimal Glands: Application to Drug Efficacy Studies

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for quality of life and health care costs. The lack of informative animal models that recapitulate its key features impedes the search for new therapeutic agents for DED. Available DED animal models have limited reproducibility and efficacy. A model is presented here in which DED is induced by injecting the mitogen concanavalin A (Con A) into the orbital lacrimal glands of rabbits. Innovative aspects of this model are the use of ultrasound (US) guidance to ensure optimal and reproducible injection of Con A into the inferior lacrimal gland; injection of Con A into all orbital lacrimal glands that limits compensatory production of tears; and use of periodic repeat injections of Con A that prolong the state of DED at will. DED and its response to test agents are monitored with a panel of parameters that assess tear production, the stability of the tear film, and the status of the corneal and conjunctival mucosa. They include tear osmolarity, tear break-up time, Schirmer&#39;s tear test, rose bengal staining, and tear lactoferrin levels. The induction of DED and the monitoring of its parameters are described in detail. This model is simple, robust, reproducible, and informative. This animal model is suitable for the study of tear physiology and of the pathophysiology of DED as well as for the assessment of the efficacy and safety of candidate agents for the treatment of DED.

This article describes the development of a method to induce acute or chronic dry eye disease in rabbits by injecting concanavalin A to all portions of the orbital lacrimal gland system. This method, superior to those already reported, generates a reproducible, stable model of dry eye suitable for the study of pharmacological agents.

نموذج أرنب من مرض العين الجاف المُقوّل المُسبّب بواسطة Concanavalin حقنة في الغدد اللارِسية: تطبيق على دراسات فعالية الدواء

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for ...