We wish to thank Peter Munro PhD for his assistance with optic nerve sectioning. This study was supported by the Medical Research Council (G0901303), and in part by the Dorothy Hodgkin Postgraduate Award/Medical Research Council, the Helen Hamlyn Trust, Fight for Sight, and Moorfields special trustess,.

Ethics Statement: Alle Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit dem Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) durchgeführt wurden, und wurden im Einvernehmen mit Großbritannien Home Office Richtlinien (genehmigt <a href="http://goo.gl/FLkirW" target="_blank">http://goo.gl/FLkirW</a> , letzter Zugriff 10 Juni , 2014) und der ARVO Erklärung für die Nutzung von Tieren in Ophthalmic und Vision Research ( <a href="http://goo.gl/4LFOjD" target="_blank">http://goo.gl/4LFOjD</a> , letzter Zugriff 10. Juni 2014). 1. Ocular Hypertension Induktions <ol><li> Induzieren experimentellen Glaukom durch Erhöhung des Augeninnendrucks (IOP) durch einseitige Injektion von paramagnetischen Mikrosphären in der vorderen Kammer des Brown-Norway-Ratten, basierend auf der Methode von Samsel et al. 3 Andere pigmentierte Ratten geeignet sein können, obwohl diese müssten validiert zuerst durch den Benutzer. </li><li> Haus von 250 bis 300 g weiblichEx-Züchter Brown Norway Ratten in einem ständigen schlechten Lichtverhältnissen (40-60 lux) auf Tagesschwankungen IOP 7 zu minimieren, mit Zugang zu Futter und Wasser ad libitum. </li><li> Sie intra IOP-Messungen an wachen Tieren 8 vor der Anästhesie und Wulst Injektion, unter Verwendung eines Rebound-Tonometer zur Verwendung im Rattenauge 9 kalibriert. IOP wird als Mittelwert von fünf Ablesungen vorgenommen. </li><li> Betäuben Ratten mit 37,5 mg / kg Ketamin und 0,25 mg / kg intraperitoneal Medetomidinhydrochlorid geliefert. Narkosetiefe Bestätigen Sie durch Testen hinteren Fuß Reflexe Tieres, vor der Jod-Anwendung (siehe Schritt 1.5), und Perlen Injektion Povidon (siehe Schritt 1.8). Verwalten 0,5% Proparacainhydrochlorid zur Analgesie. HINWEIS: die Schüler jederzeit erweitern Sie nicht. Dies wird helfen, die Perlen, sich besser in die Kammerwinkel zu regeln, und verhindern, dass die Bindung an der Linse. Bewerben Augensalbe zur Hornhaut Trocknen auf un-betriebenen andere Auge zu verhindern. </li><li> WAsche der operativen Augen mit 5% Povidon-Iod in Wasser 10 5 min vor der Injektion. </li><li> Nach 5 min Docht die Povidoniod Ausschalten mit steriler Gaze, und waschen Sie das Auge mit 0,9% steriler Kochsalzlösung. Halten Sie die Augen während der Narkose bei regelmäßiger Anwendung steriler Kochsalzlösung feucht. </li><li> Legen Sie einen Ringmagneten um das Auge. </li><li> Injizieren 25 ul einer Lösung, die 30 mg / ml des gamma-Bestrahlung sterilisiert 8 um magnetischen Mikrokügelchen in Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) in die vordere Augenkammer, mit einer 33 G Nadel abgeschrägt. <ol><li> Um Perlen herzustellen, Waschen durch Resuspendieren und dann 3mal Zentrifugieren bei 10.000 xg für 5 Minuten mit 1 ml HBSS, bevor die endgültige 30 mg / ml Lösung. Pflegen sterilen Bedingungen im gesamten. </li><li> Für die Injektion vorsichtig sein, um zu vermeiden, die Nadel an der Iris, um das Risiko von Iris Trauma zu minimieren. Dies kann durch Ausrichten der Nadel tangential zur Hornhautoberfläche verhindert werden, die parallel zudie Iris wie möglich. Dies wird auch dazu beitragen, Perlenverlust von der Injektionsstelle zu minimieren. Hinweis: Spritzen Sie Perlen mit einer schnellen Rate, um eine gleichmäßige Verteilung auf der Kammerwinkel, die entscheidend für die Anhebung IOP ist zu gewährleisten. Zusätzlich Shop Perlen, Nadeln und Magnetringe getrennt, so dass die Perlen bilden keine Cluster, so dass sie nur schwer in die Spritze zu laden und zu injizieren, und die Nadel nicht magnetisiert werden. </li></ol></li><li> Lassen Sie die Nadel an Ort und Stelle für 1 min nach der Injektion um sicherzustellen, dass es sich in Perlen der Kammerwinkel zu wässrigen Kondensat ab, das Trabekelwerk behindern. Leicht Winkel der Nadel nach der Perlen wurden zunächst einige Leckage von wässrigen zu ermöglichen, um eine vorübergehende Erhöhung des Augeninnendruck zu minimieren siedelt. Am Ende der Operation zu spülen Sie die Nadel durch mit ersten phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS), dann 70% Ethanol, gefolgt von destilliertem Wasser, um die weitere Verwendung der Nadel in getrennten Verfahren zu gewährleisten. Alternativ könnte man verwendenEinweg-Nadeln, wenn die richtige Spurweite und Spritze Kombination zur Verfügung. Optional: Nadeln mit Hilfe eines Schweißkantenformer, deren Nutzung zu verlängern geschärft werden. </li><li> Zu diesem Zeitpunkt ggf. entfernen Sie den Magneten, und verwenden Sie es, um die Kügelchen in Bereiche unvollständige Abdeckung ziehen. </li><li> Lassen Sie den Magneten an Ort und Stelle um das Auge für weitere 10 min nach der Injektion, um sicherzustellen, Perlen absetzen gut in die Kammerwinkel. </li><li> Reverse Anästhesie unter Verwendung von 0,25 mg / kg atipemezole Hydrochlorid. </li><li> Verabreichen Chloramphenicol oder anderen Antibiotika-Salbe, beispielsweise Gentamycin oder Terramycin topisch auf eine Infektion zu verhindern, und 0,5% Proparacain-Hydrochlorid zur Analgesie. Lassen Sie Tiere auf eine Wärmematte erholen, bis sie die Bewegung wieder zu erlangen, dann in einen warmen Box und Versorgung mit zusätzlicher Nahrung, zu übertragen, wie als Nahrungsergänzungsmittel oder angefeuchtet normalen Ernährung, bis die Wiederherstellung abgeschlossen ist. Systemische oder lokale Analgesie sollte Tiere mit Anzeichen von Schmerzen 24 Stunden nach der Operation gegeben werden. Wenn thestrotz Behandlung e anhaltenden Beschwerden sollten die Tiere auf humane Weise getötet werden. </li><li> Verwenden Sie das andere Auge als nicht operierten Kontrolle. </li><li> Nehmen IOP-Messungen alle 2-3 Tage nach der Wulst Verabreichung und alle 2-3 Tage danach mit einem Rebound-Tonometer zur Verwendung im Rattenauge 9 kalibriert. </li><li> Die Kriterien für die Aufnahme in die Augen Studien können sein: wenn 1) die IOP über der kontralateralen Kontrolldruck von 5 mm Hg erhöht, und 2) nicht über 60 mm Hg nicht übersteigt. </li><li> Augen, wo der Druck wieder zum Ausgangswert (in der Regel von 1 Woche nach der Injektion) sollte nicht in die Studien aufgenommen werden, ist es jedoch möglich, wieder zu injizieren Perlen in die Augen, die zu hohen Augeninnendruck entwickeln, wenn gewünscht ausfallen. </li><li> Euthanize Tiere durch CO 2 Erstickung am Ende des Experiments. </li><li> Präparieren Sie die Augen und Sehnerven, und befestigen Sie in 4% Paraformaldehyd (PFA) über Nacht für weitere histologische Analyse. </li></ol> 2. Beurteilung der Netzhaut Neuron Schaden Mit TUNEL Shaltigen <ol><li> Um apoptotischen Zellen zu quantifizieren in ganze Berg retinasuse der Desoxyribonukleotidyltransferase vermittelte dUTP nick-Kennzeichnung (TUNEL) Assay, nach den Anweisungen des Herstellers. </li><li> Präparieren der Netzhaut von der Augenmuschel, Waschen für 3 x 5 min in 0,3% Triton X-100 in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (T-PBS). </li><li> Permeabilisieren Gewebe in 3% T-PBS für 2 Stunden. </li><li> Pre-äquilibrieren Retinae in Äquilibrierungspuffer 10 min, vor der Inkubation TUNEL Reaktionslösung 1 h bei 37 ° C. </li><li> 3 x 5 min in 0,3% T-PBS waschen das Gewebe gründlich in 0,3% T-PBS mit 5 uM DAPI und Flachhalterung bei der Montage Medien. </li><li> Zur Quantifizierung TUNEL positiven Kerne mit einem konfokalen Mikroskop bis 10 um z-Stacks durch die Ganglienzellschicht bei 20-facher Vergrößerung zu nehmen. Nehmen Sie 3 Bilder auf jedem der 4 Blütenblätter, an Orten in der Nähe des Sehnervs, in der Mitte der Peripherie, und am äußersten Peripherie der Netzhaut, was eine Gesamtzahl von 12 Bildern pro ganze mount, Probenahme ca. 7.000 Zellen. Morphologischer Kriterien unterschieden nicht neuronale (endotheliale und Glia-Zellen) aus neuronalen Zellen. </li><li> Wählen Sie die Bereiche für die Bildgebung nur mit der DAPI-Kanal und Maske Ermittler zu den Behandlungsgruppen. </li></ol> 3. Bewertung Optic Nerve Damage Mit Toluidinblaufärbung <ol><li> Fix Sehnerven Nacht in Karnovsky-Lösung bei 4 ° C. </li><li> Saures Proben für 2 Stunden in 1% (w / v) Osmiumtetroxid und anschließend in 100% Ethanol dehydriert. </li><li> Sehnerven in Propylenoxid inkubieren für 30 Minuten, und legen Sie in einer 50:50 Mischung von Propylenoxid: Araldit Nacht. </li><li> Wechseln diese Lösung zu 100% Araldit, gefolgt von einer Inkubation über Nacht bei 60 ° C. </li><li> Cut Semidünnschnitten (0,75 mm dick) und Fleck mit 1% Toluidinblau / Borax (TB) in 50% Ethanol vor der Sachprüfung mittels Lichtmikroskopie. </li></ol> 4. Statistische Analyse <ol><li> Die statistische analysiert mit einem entsprechenden Statistik-Software-Paket. Ein Zwei-Wege-ANOVA mit der Newman-Keul Post-hoc-Test kann verwendet werden, um die statistische Signifikanz berechnen IOP über die Zeit verändert werden. </li><li> Ein p-Wert von weniger als 0,05 kann als signifikant angesehen werden. </li></ol>

<ol>
	<li>Quigley, H. A., Broman, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+number+of+people+with+glaucoma+worldwide+in+2010+and+2020.">The number of people with glaucoma worldwide in 2010 and 2020.</a> Br J Ophthalmol. 90 (3), 262-267 (2006).</li><li>Weinreb, R. N., Aung, T., Medeiros, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathophysiology+and+treatment+of+glaucoma:+a+review.">The pathophysiology and treatment of glaucoma: a review.</a> JAMA. 311 (18), 1901-1911 (2014).</li><li>Samsel, P. A., Kisiswa, L., Erichsen, J. T., Cross, S. D., Morgan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+the+induction+of+experimental+glaucoma+using+magnetic+microspheres.">A novel method for the induction of experimental glaucoma using magnetic microspheres.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (3), 1671-1675 (2011).</li><li>Libby, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inherited+glaucoma+in+DBA/2J+mice:+pertinent+disease+features+for+studying+the+neurodegeneration.">Inherited glaucoma in DBA/2J mice: pertinent disease features for studying the neurodegeneration.</a> Vis Neurosci. 22 (5), 637-648 (1017).</li><li>Morrison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+intraocular+pressure+and+optic+nerve+injury+models+in+the+rat.">Elevated intraocular pressure and optic nerve injury models in the rat.</a> J Glaucoma. 14 (4), 315-317 (2005).</li><li>Levkovitch-Verbin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translimbal+laser+photocoagulation+to+the+trabecular+meshwork+as+a+model+of+glaucoma+in+rats.">Translimbal laser photocoagulation to the trabecular meshwork as a model of glaucoma in rats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 43 (2), 402-410 (2002).</li><li>Moore, C. G., Johnson, E. C., Morrison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythm+of+intraocular+pressure+in+the+rat.">Circadian rhythm of intraocular pressure in the rat.</a> Curr Eye Res. 15 (2), 185-191 (1996).</li><li>Morrison, J. C., Jia, L., Cepurna, W., Guo, Y., Johnson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+and+sensitivity+of+the+TonoLab+rebound+tonometer+in+awake+Brown+Norway+rats.">Reliability and sensitivity of the TonoLab rebound tonometer in awake Brown Norway rats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (6), 2802-2808 (2009).</li><li>Wang, W. H., Millar, J. C., Pang, I. H., Wax, M. B., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+measurement+of+rodent+intraocular+pressure+with+a+rebound+tonometer.">Noninvasive measurement of rodent intraocular pressure with a rebound tonometer.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46 (12), 4617-4621 (2005).</li><li>Isenberg, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ocular+application+of+povidone-iodine.">The ocular application of povidone-iodine.</a> Community Eye Health. 16 (46), 30-31 (2003).</li><li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+chronic+pressure-induced+optic+nerve+damage.">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Exp Eye Res. 64 (1), 85-96 (1997).</li><li>Foxton, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-A+is+necessary+and+sufficient+for+retinal+neuroprotection+in+models+of+experimental+glaucoma.">VEGF-A is necessary and sufficient for retinal neuroprotection in models of experimental glaucoma.</a> Am J Pathol. 182 (4), 1379-1390 (2013).</li></ol>

David T. Shima is an employee of Hofmann-La Roche, Switzerland. The remaining authors declare they have no competing financial interests.

Hier zeigen wir ein Verfahren zum Induzieren erhöhten IOP bei der Ratte durch Injektion von magnetischen Mikrokügelchen in die Vorderkammer des Auges. Diese Methode ist einfach durchzuführen und erfordert nur wenig chirurgischem Know-how oder Stunden des Übens und Raffinesse. Weiterhin ist das Verfahren wirksam sind; selten, die mehr als eine einzige Injektion von Perlen, eine starke, robuste Druckanstieg (ca. 10% Reinjektion Rate) zu induzieren. Dies kann einen Vorteil gegenüber bestehenden induzierbaren Methoden, wie dem technisch anspruchs episceral Vene bereitzustellen Sklerose 11 Modell oder Laserphotokoagulation Protokoll 6, die mehrere Verfahren zu erhöhten IOP maintain erfordern kann. Damit die Methode, um erfolgreich sein, jedoch gibt es einige kleine kritische Schritte, die ergriffen werden müssen. Erstens ist es sinnvoll, eine Ringförmigen Magneten benutzen, um Korne in den Kammerwinkel zu zeichnen. Dieser Schritt ist eine Modifizierung des ursprünglichen Protokolls where wurden die Kügelchen in die vordere Kammer injiziert, und dann freihändig bewegt um das Auge 3. Mit einem Ringmagneten bedeutet, dass Mikrokügelchen sollten gleichmäßig um den Winkel zu regeln, minimale manuelle Umverteilung erfordern. Zu langsam, und die Perlen werden in erster Linie sammeln sich auf der einen Seite der Winkel, was zu unvollständigen Erfassung und möglicherweise ohne Druckanstieg - Zweitens sollte die Injektionsgeschwindigkeit schnell. Im Allgemeinen jedoch ist das Verfahren einfach genug, daß der Benutzer leicht Modifikationen des Protokolls, wie beispielsweise Variation der Größe oder das Volumen der Mikrokügelchen-Partikel, vielleicht, um zu versuchen, den Grad der IOP Elevation verändert werden. Allerdings ist ein möglicher Nachteil der Methode, dass ein wenig Kontrolle über das Ausmaß der Bluthochdruck, die in etwa 5-10% der Fälle haben wir beobachtet stieg über 60 mmHg hat. Übermäßiger Anstieg der IOP kann sehr schädlich für Netzhautgewebe sein und machen die Erforschung der Mechanismen und biologie des Zelltods Herausforderung. Das Verfahren erzeugt jedoch eine konsistente neuronale Pathologie, sowohl in der Netzhaut und des Sehnerven, die pharmakologisch 12 manipuliert werden kann. Dies kann das Modell attraktiv für die Entwicklung neuartiger Therapeutika zur Behandlung von Glaukom zu machen. Darüber hinaus, da die Perlen in den Kammerwinkel ausgerichtet, lässt dies die Sichtachse frei für Echtzeit-Bildgebung der Netzhaut oder der Papille. Wir gehen davon aus, dass dieses Modell angepasst und für zukünftige Anwendungen in anderen Spezies, einschließlich der Maus verwendet werden.

Primäres Glaukom ist eine verheerende Augenkrankheit schätzungsweise 60,5 Millionen Menschen in aller Welt 1 zu beeinflussen, was zu lebensverändernden Sehverlust und Erblindung 2 führen kann. Die Erforschung der Krankheitsmechanismen und Entwicklung neuartiger Therapeutika für Glaukom, sind abhängig von guten Modellen der Krankheit, die einige der Markenzeichen der Pathologie zu rekapitulieren. Wir stellen hier eine Ratte Glaukommodell basierend auf der Methode von Samsel et al. 3 Das Ziel dieses Verfahrens ist es, den Augeninnendruck (IOP) in das Auge durch die Injektion von magnetischen Mikrokügelchen in die vordere Kammer, und mit einem Magnetring direkt erhöhen sie in den Kammerwinkel. Dies behindert Kammerwasserabfluss, der IOP erhöht, was zu Nervenschäden und Zellverlust. Das Protokoll wurde entwickelt, um zu versuchen, ein einfacheres, induzierbar Modell von Glaukom ist. Dieses Protokoll kann einige Vorteile haben,gegenüber bestehenden Techniken. Genetische Maus-Modellen wie dem DBA / 2J zur Verfügung, die nicht verlangen, Verfahren einzuleiten; aber diese können eine unvorhersehbare Auftreten von Krankheitsprogression 4. Demgegenüber induzierbare Modelle, von denen die meisten auf chirurgisch Hebe IOP bei Nagetieren zu verlassen, haben den Vorteil, dass die Einleitung durch den Benutzer gesteuert werden. Einige dieser Methoden können Nachteile der eigenen jedoch haben, auch als technisch anspruchs 5, und kann mehrere Verfahren erfordern erhöhten IOP 6 zu halten. Im Gegensatz dazu ist die induzierbare Verfahren in diesem Manuskript detailliert eine einfache, wirksame und reproduzierbare Technik, die stabile, robuste Druckerhöhungen mit einem minimalen Bedarf an Reinjektion produziert. Zusätzlich, es werden aber keine teure Ausrüstung und erfordert nur grundlegende chirurgische Fähigkeiten durchzuführen. Dieses Protokoll kann für die Leser, die sich um eine technisch weniger anspruchsvolle induzierbaren einzurichten geeignetGlaukom-Modell in ihrem Labor.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="784">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:324px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:175px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:324px;">250-300g female Brown Norway ex-breeder rats</td>
			<td style="width:175px;">Harlan UK</td>
			<td style="width:119px;">203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Tonolab Rebound Tonometer</td>
			<td style="width:175px;">Tiolat</td>
			<td style="width:119px;">TV02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:324px;">Ketaset (Ketamine)</td>
			<td style="width:175px;">Fort Dodge Animal health</td>
			<td>BN1000118</td>
			<td>37.5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Domitor (medetomidine hydrochloride)</td>
			<td style="width:175px;">Orion Pharma</td>
			<td style="width:119px;">140-999</td>
			<td>0.25 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Povidone iodine</td>
			<td style="width:175px;">Ecolab</td>
			<td>BN4369LE10</td>
			<td>5% in H2O</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Minim&#39;s Saline Solution</td>
			<td style="width:175px;">Bausch and Lomb</td>
			<td>PL00033/5017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Toroidal magnet</td>
			<td style="width:175px;">Supermagnete</td>
			<td>R-10-07-03-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Magnetic Microspheres</td>
			<td style="width:175px;">Bangs Laboratories</td>
			<td>UMC4N/9692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">HBSS</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">14025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">33-guage bevelled needle</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td>7747-01</td>
			<td>Custom needle</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Luer tip syringe</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td>80601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Antisedan (atipemezole hydrochloride )</td>
			<td style="width:175px;">Orion Pharma</td>
			<td style="width:119px;">141-003</td>
			<td>0.25 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Chloramphenicol ointment</td>
			<td style="width:175px;">Medicom</td>
			<td>18956-0005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">TUNEL staining kit</td>
			<td style="width:175px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G3250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">DAPI</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Vectashield Mounting Media</td>
			<td style="width:175px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental glaucoma induced by ocular injection of magnetic microspheres

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present here a protocol for elevating intraocular pressure (IOP) in the rat, by injecting magnetic microspheres into the anterior chamber of the eye. The use of magnetic particles allows the user to manipulate the beads into the iridocorneal angle, thus providing a very effective blockade of fluid outflow from the trabecular meshwork. This leads to long-lasting IOP rises, and eventually neuronal death in the ganglion cell layer (GCL) as well as optic nerve pathology, as seen in patients with the disease. This method is simple to perform, as it does not require machinery, specialist surgical skills, or many hours of practice to perfect. Furthermore, the pressure elevations are very robust, and reinjection of the magnetic microspheres is not usually required unlike in some other models using plastic beads. Additionally, we believe this method is suitable for adaptation for the mouse eye.

Die Injektion von magnetischen Kügelchen in den Kammerwinkel konsequent führte zu einer anhaltenden und robusten Druckanstieg (Abbildung 1), die an dem ersten Zeitpunkt, 3 Tage nach der Injektion leicht beobachtbar war. Ferner wurde der Druckanstieg während der gesamten Dauer des Experiments gehalten und obwohl unser Zeitverlauf beendet bei 18 Tage nach der Injektion wurden andere berichteten Druck bestehen bleibt langfristig 3. Die mittlere IOP gemittelt über die gesamte Länge des Experiments für die Steuerung, nicht-Wulst-injizierten Augen betrug 19,7 ± 0,3 mmHg gegenüber 40,5 ± 2,8 mmHg für Wulst-injizierten Augen (P &lt;0,001). Zusätzlich erhöhte Spitzen IOD von 22,8 ± 0,3 mmHg auf 49,9 ± 2,3 mmHg. Um zu bestimmen, ob die Erhöhung in IOP führt zum Tod von retinalen Ganglienzellen, führten wir TUNEL-Färbung an Retinae und Histologie an Quer Sehnerv Abschnitte (Abbildung 2). In der Netzhaut<html> Wir beobachteten einen Anstieg der TUNEL-Färbung (2A) in sicken injizierten Augen mit erhöhtem IOP. Die Anzahl an apoptotischen Kernen stieg etwa 15-fach, von 1,6 ± 0,5 Zellen in kontralateralen Kontrollen auf 24,5 ± 0,5 Zellen in hypertensive Retinae (2B; P &lt;0,05). Ferner ist in den Augen, in denen magnetische Kügelchen injiziert aber Druck nicht erhöht (wahrscheinlich aufgrund einer unvollständigen Blockade der Kammerwinkel), waren die Anzahlen von TUNEL-positiven Zellen nicht signifikant verschieden von denen der nicht-injizierten Kontrollen (P&gt; 0,05). Dies legt nahe, dass der Zelltod auf Druck ansteigt, nicht auf direkte Toxizität der magnetischen Mikrokugeln zusammen. Schließlich wurde untersucht, Sehnerv Pathologie in der Glaukommodell und sah Akkumulation von Toluidinblau in vielen der Axone, anzeigt Degeneration dieser zellulären Prozesse (2C). ure 1 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 52.400 / 52400fig1highres.jpg &quot;/&gt; Abbildung 1. Erhöhung des intraokularen Drucks unter Verwendung von magnetischen Mikrosphären. Die Injektion von magnetischen Mikrokügelchen in die vordere Kammer induziert eine robuste, signifikanten Anstieg des intraokularen Drucks (IOP) im Vergleich zur contralateralen Kontroll, nicht injizierten Augen. Y-Achsen-Einheiten = Millimeter Quecksilbersäule (mmHg). Daten = Mittelwert ± SEM. * = P &lt;0,001;. N = 12. Dieser Wert wurde von Foxton et al, Am modifiziert. J. Pathol 182 (4):. 1379-1390. <img alt="Abbildung 2" src="/files/ftp_upload/52400/52400fig2highres.jpg" /> Abbildung 2. Erhöhung von IOP durch Injektion von magnetischen Mikrokügelchen in den Kammerwinkel, induzierten neuronalen Tod in der Ganglienzellschicht (GCL). (A) Repräsentative Bilder der Netzhaut von der Kontrolle (links) und Glaukom (rechts) die Augen für apoptotische Kerne befleckt von TUNEL (grün;weiße Pfeile) und DAPI (blau), die die Anzahl der apoptotischen Kernen erhöht IOP stieg. (B) Quantifizierung von TUNEL-positiven Zellen in der GCL und zeigt, daß die Augen mit erhöhtem IOP (Mitte), signifikant mehr apoptotische Zellen im Vergleich zu Kontrolle (links). Im Gegensatz dazu wird in sicken injizierten Augen, wo der Druck nicht steigt (rechts), keine signifikante Erhöhung der TUNEL-Färbung beobachtet wurde. Daten = Mittelwert ± SEM. * = P &lt;0,05; N = 7-8 (C) Repräsentative Bilder der Sehnerv Färbung und zeigt einen Anstieg der Toluidinblau-Ansammlung (schwarze Pfeile) in beschädigten Axone von Glaukom (rechts), aber keine Kontrolle Augen (links).. Maßstabsbalken = 50 um. Diese Zahl hat sich von Foxton et al modifiziert., Am. J. Pathol 182 (4):. 1379-1390.

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Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres

We present a method for inducing elevated intraocular pressure (IOP), by injecting magnetic microspheres into the rat eye, to model glaucoma. This leads to strong pressure rises, and extensive neuronal death. This protocol is easy to perform, does not require repeat injections, and produces stable long-lasting IOP rises.

Experimentelle Glaukom von Ocular Injektion von magnetischen Mikrokügelchen Induzierte

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

17.0K Aufrufe.  University College London Institute of Ophthalmology. We present a method for inducing elevated intraocular pressure (IOP), by injecting magnetic microspheres into the rat eye, to model glaucoma. This leads to strong pressure rises, and extensive neuronal death. This protocol is easy to perform, does not require repeat injections, and produces stable long-lasting IOP rises.

Serie: Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres

Generation of Alginate Microspheres for Biomedical Applications

Alginate-based materials have received considerable attention for biomedical applications because of their hydrophilic nature, biocompatibility, and physical architecture. Applications include cell encapsulation, drug delivery, stem cell culture, and tissue engineering scaffolds. In fact, clinical trials are currently being performed in which islets are encapsulated in PLO coated alginate microbeads as a treatment of type I diabetes. However, large numbers of islets are required for efficacy due to poor survival following transplantation. The ability to locally stimulate microvascular network formation around the encapsulated cells may increase their viability through improved transport of oxygen, glucose and other vital nutrients. Fibroblast growth factor-1 (FGF-1) is a naturally occurring growth factor that is able to stimulate blood vessel formation and improve oxygen levels in ischemic tissues. The efficacy of FGF-1 is enhanced when it is delivered in a sustained fashion rather than a single large-bolus administration. The local long-term release of growth factors from islet encapsulation systems could stimulate the growth of blood vessels directly towards the transplanted cells, potentially improving functional graft outcomes. In this article, we outline procedures for the preparation of alginate microspheres for use in biomedical applications. In addition, we describe a method we developed for generating multilayered alginate microbeads. Cells can be encapsulated in the inner alginate core, and angiogenic proteins in the outer alginate layer. The release of proteins from this outer layer would stimulate the formation of local microvascular networks directly towards the transplanted islets.

In the following sections, we outline procedures for the preparation of alginate microspheres for use in biomedical applications. We specifically illustrate a technique for creating multilayered alginate microspheres for the dual purpose of cell and protein encapsulation as a potential treatment for type 1 diabetes.

Erzeugung von Alginat-Mikrokugeln für biomedizinische Anwendungen

Alginate-based materials have received considerable attention for biomedical applications because of their hydrophilic nature, biocompatibility, and ...

Forschung

Medizin

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy and stem cell transplantations have become key therapeutic tools for treating blindness resulting from retinal degenerative diseases. Several forms of autologous transplantation for age-related macular degeneration (AMD), such as iris pigment epithelial cell transplantation, have generated encouraging results, and human clinical trials have begun for other forms of gene and stem cell therapies.2 These include RPE65 gene replacement therapy in patients with Leber's congenital amaurosis and an RPE cell transplantation using human embryonic stem (ES) cells in Stargardt's disease.3-4 Now that there are gene therapy vectors and stem cells available for treating patients with retinal diseases, it is important to verify these potential therapies in animal models before applying them in human studies. The mouse has become an important scientific model for testing the therapeutic efficacy of gene therapy vectors and stem cell transplantation in the eye.5-8 In this video article, we present a technique to inject gene therapy vectors or stem cells into the subretinal space of the mouse eye while minimizing damage to the surrounding tissue.

This surgical technique illustrates the injection of gene therapy vectors and stem cells into the subretinal space of the mouse eye.

Subretinalen Injektion von Vektoren für die Gentherapie und Stammzellen in die Maus Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

A Laser-induced Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension to Characterize Visual Defects

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model of ocular hypertension to mimic human high-tension glaucoma. Here laser illumination is applied to the corneal limbus to photocoagulate the aqueous outflow, inducing angle closure. The changes of IOP are monitored using a rebound tonometer before and after the laser treatment. An optomotor behavioral test is used to measure corresponding changes in visual capacity. The representative result from one mouse which developed sustained IOP elevation after laser illumination is shown. A decreased visual acuity and contrast sensitivity is observed in this ocular hypertensive mouse. Together, our study introduces a valuable model system to investigate neuronal degeneration and the underlying molecular mechanisms in glaucomatous mice.

Chronic ocular hypertension is induced using laser photocoagulation of the trabecular meshwork in mouse eyes. The intraocular pressure (IOP) is elevated for several months after laser treatment. The decrease of visual acuity and contrast sensitivity of experimental animals are monitored using the optomotor test.

Ein Laser-induzierten Maus-Modell der chronischen Ocular Hypertension zu Sehfehler Charakterisierung

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the occurrence of subretinal hemorrhage can affect photoreceptor cell death in the detached retina. Hence, it is advantageous to create reproducible RDs without subretinal hemorrhage for evaluating photoreceptor cell death. We modified a previously reported method to create bullous and persistent RDs in a reproducible location with rare occurrence of subretinal hemorrhage. The critical step of this modified method is the creation of a self-sealing scleral incision, which can prevent leakage of sodium hyaluronate after injection into the subretinal space. To make the self-sealing scleral incision, a scleral tunnel is created, followed by scleral penetration into the choroid with a 30 G needle. Although choroidal hemorrhage may occur during this step, astriction with a surgical spear reduces the rate of choroidal hemorrhage. This method allows a more reproducible and reliable model of photoreceptor death in diseases that involve RD such as rhegmatogenous RD, retinopathy of prematurity, diabetic retinopathy, central serous chorioretinopathy, and age-related macular degeneration (AMD).

Creating experimental retinal detachments with a reproducible and sustained height of detachment, and without subretinal hemorrhage, is important for studying the pathophysiology of photoreceptor cell loss in retinal disease and evaluating potential therapeutic interventions. Here, we report such a method in detail.

Modell Netzhautablösung in Nagetiere durch subretinale Injektion von Natriumhyaluronat

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Noninvasive Assessment of Cardiac Abnormalities in Experimental Autoimmune Myocarditis by Magnetic Resonance Microscopy Imaging in the Mouse

Myocarditis is an inflammation of the myocardium, but only ~10% of those affected show clinical manifestations of the disease. To study the immune events of myocardial injuries, various mouse models of myocarditis have been widely used. This study involved experimental autoimmune myocarditis (EAM) induced with cardiac myosin heavy chain (Myhc)-&#945; 334-352 in A/J mice; the affected animals develop lymphocytic myocarditis but with no apparent clinical signs. In this model, the utility of magnetic resonance microscopy (MRM) as a non-invasive modality to determine the cardiac structural and functional changes in animals immunized with Myhc-&#945; 334-352 is shown. EAM and healthy mice were imaged using a 9.4 T (400 MHz) 89 mm vertical core bore scanner equipped with a 4 cm millipede radio-frequency imaging probe and 100 G/cm triple axis gradients. Cardiac images were acquired from anesthetized animals using a gradient-echo-based cine pulse sequence, and the animals were monitored by respiration and pulse oximetry. The analysis revealed an increase in the thickness of the ventricular wall in EAM mice, with a corresponding decrease in the interior diameter of ventricles, when compared with healthy mice. The data suggest that morphological and functional changes in the inflamed hearts can be non-invasively monitored by MRM in live animals. In conclusion, MRM offers an advantage of assessing the progression and regression of myocardial injuries in diseases caused by infectious agents, as well as response to therapies.

This study demonstrates the successful establishment of magnetic resonance microscopy imaging as a non-invasive tool to assess the cardiac abnormalities in mice affected with autoimmune myocarditis. The data indicate that the technique can be used to monitor the disease-progression in live animals.

Nicht-invasive Beurteilung der Herzfehlbildungen in experimentellen autoimmunen Myokarditis von Magnetic Resonance Imaging Microscopy in der Maus

Myocarditis is an inflammation of the myocardium, but only ~10% of those affected show clinical manifestations of the disease. To study the immune events ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Gallengang-Ligation in Mice: Induktion von Entzündungsleber-Verletzung und Fibrose von obstruktiver Cholestase

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial neurodegenerative disease. With the advent of numerous transgenic mouse lines, there is increasing interest in inducible murine models of ocular hypertension. Here, we present an occlusion model of glaucoma based on the injection of magnetic microbeads into the anterior chamber of the eye using a modified microneedle with a facetted bevel. The magnetic microbeads are attracted to the iridocorneal angle using a handheld magnet to block the drainage of aqueous humour from the anterior chamber. This disruption in aqueous dynamics results in a steady elevation of intraocular pressure, which subsequently leads to the loss of retinal ganglion cells, as observed in human glaucoma patients. The microbead occlusion model presented in this manuscript is simple compared to other inducible models of glaucoma and also highly effective and reproducible. Importantly, the modifications presented here minimize common issues that often arise in occlusion models. First, the use of a bevelled glass microneedle prevents backflow of microbeads and ensures that minimal damage occurs to the cornea during the injection, thus reducing injury-related effects. Second, the use of magnetic microbeads ensures the ability to attract most beads to the iridocorneal angle, effectively reducing the number of beads floating in the anterior chamber avoiding contact with other structures (e.g., iris, lens). Lastly, the use of a handheld magnet allows flexibility when handling the small mouse eye to efficiently direct the magnetic microbeads and ensure that there is little reflux of the microbeads from the eye when the microneedle is withdrawn. In summary, the microbead occlusion mouse model presented here is a powerful investigative tool to study neurodegenerative changes that occur during the onset and progression of glaucoma.

Here, we present a protocol to induce ocular hypertension in the murine eye that results in the loss of retinal ganglion cells as observed in glaucoma. Magnetic microbeads are injected into the anterior chamber and attracted to the iridocorneal angle using a magnet to block the outflow of aqueous humour.

Ein Magnet Microbead Occlusion Modell Ocular Hypertension Abhängige Glaucoma in Mäusen zu induzieren

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial ...

Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report

This study is aimed at examining whether a suprachoroidal graft of autologous cells can improve best corrected visual acuity (BCVA) and responses to microperimetry (MY) in eyes affected by dry Age-related Macular Degeneration (AMD) over time through the production and secretion of growth factors (GFs) on surrounding tissue. Patients were randomly assigned to each study group. All patients were diagnosed with dry AMD and with BCVA equal to or greater than 1 logarithm of the minimum angle of resolution (logMAR). A suprachoroidal autologous graft by Limoli Retinal Restoration Technique (LRRT) was carried out on group A, which included 11 eyes from 11 patients. The technique was performed by implanting adipocytes, adipose-derived stem cells obtained from the stromal vascular fraction, and platelets from platelet-rich plasma in the suprachoroidal space. Conversely, group B, including 14 eyes of 14 patients, was used as a control group. For each patient, diagnosis was verified by confocal scanning laser ophthalmoscope and spectral domain-optical coherence tomography (SD-OCT). In group A, BCVA improved by 0.581 to 0.504 at 90 days and to 0.376 logMAR at 180 days (+32.20%) postoperatively. Furthermore, MY test increased by 11.44 dB to 12.59 dB at 180 days. The different cell types grafted behind the choroid were able to ensure constant GF secretion in the choroidal flow. Consequently, the results indicate that visual acuity (VA) in the grafted group can increase more than in the control group after six months.

Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report

The goal of this study is to assess whether the suprachoroidal graft of adipose-derived stem cells included in the stromal vascular fraction and platelets derived from platelet-rich plasma by the Limoli Retinal Restoration Technique can improve visual acuity and retinal sensitivity responses in eyes affected by dry age-related macular degeneration.

Regenerative Therapie durch Suprachoroidal Zelle Autotransplantation in trockene altersbedingte Makuladegeneration: vorläufige In Vivo Bericht

This study is aimed at examining whether a suprachoroidal graft of autologous cells can improve best corrected visual acuity (BCVA) and responses to ...

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known risk factor for glaucoma. This protocol demonstrates a step-by-step guide on this technique in Long Evans rats and C57BL/6 mice. Under general anesthesia, a "purse-string" suture is applied on the conjunctiva, around the equator and behind the limbus of the eye. The fellow eye serves as an untreated control. Over the duration of our study, which was a period of 8 weeks for rats and 12 weeks for mice, IOP remained elevated, as measured regularly by rebound tonometry in conscious animals without topical anesthesia. In both species, the sutured eyes showed electroretinogram features consistent with preferential inner retinal dysfunction. Optical coherence tomography showed selective thinning of the retinal nerve fiber layer. Histology of the rat retina in cross-section found reduced cell density in the ganglion cell layer, but no change in other cellular layers. Staining of flat-mounted mouse retinae with a ganglion cell specific marker (RBPMS) confirmed ganglion cell loss. The circumlimbal suture is a simple, minimally invasive and cost-effective way to induce ocular hypertension that leads to ganglion cell injury in both rats and mice.

Chronic ocular hypertension is induced by applying a circumlimbal suture in rats and mice, leading to functional and structural deterioration of the retinal ganglion cells consistent with glaucoma.

Ein Modell des Glaukoms induziert durch Circumlimbal Naht bei Ratten und Mäusen

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

A Rabbit Model of Aqueous-Deficient Dry Eye Disease Induced by Concanavalin A Injection into the Lacrimal Glands: Application to Drug Efficacy Studies

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for quality of life and health care costs. The lack of informative animal models that recapitulate its key features impedes the search for new therapeutic agents for DED. Available DED animal models have limited reproducibility and efficacy. A model is presented here in which DED is induced by injecting the mitogen concanavalin A (Con A) into the orbital lacrimal glands of rabbits. Innovative aspects of this model are the use of ultrasound (US) guidance to ensure optimal and reproducible injection of Con A into the inferior lacrimal gland; injection of Con A into all orbital lacrimal glands that limits compensatory production of tears; and use of periodic repeat injections of Con A that prolong the state of DED at will. DED and its response to test agents are monitored with a panel of parameters that assess tear production, the stability of the tear film, and the status of the corneal and conjunctival mucosa. They include tear osmolarity, tear break-up time, Schirmer&#39;s tear test, rose bengal staining, and tear lactoferrin levels. The induction of DED and the monitoring of its parameters are described in detail. This model is simple, robust, reproducible, and informative. This animal model is suitable for the study of tear physiology and of the pathophysiology of DED as well as for the assessment of the efficacy and safety of candidate agents for the treatment of DED.

This article describes the development of a method to induce acute or chronic dry eye disease in rabbits by injecting concanavalin A to all portions of the orbital lacrimal gland system. This method, superior to those already reported, generates a reproducible, stable model of dry eye suitable for the study of pharmacological agents.

A Rabbit Model of Aqueous-Deficient Dry Eye Disease Induced by Concanavalin A Injection into the Lacrimal Dlands: Application to Drug Efficacy Studies

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for ...