Funding for this work was provided by: AG007218 and NIH F32 AG031606.
Images were generated in the Core Optical Imaging Facility, which is supported by UTHSCSA, NIH-NCI P30 CA54174 (CTRC at UTHSCSA) and NIH-NIA P01AG19316.

ملاحظة: تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي من جامعة تكساس مركز العلوم الصحية في سان انطونيو، وكانت متسقة مع المبادئ التوجيهية صلوا اليها. 1. التخدير لإعداد القشرية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في غرفة الاستقراء مع 2-3٪ isofluorane مختلطة مع الأكسجين للحث على التخدير. نلاحظ انخفاض معدل التنفس كما هو الناجم عن الماوس. قرصة مخلب من الماوس لتحديد ما إذا كان الفأر هو على استعداد للانتقال إلى مخروط الأنف. ملاحظة: مستوى التخدير هو خطوة حاسمة في أي تحضير في الجسم الحي، وينبغي الحرص على عدم للحث على المستوى الذي سوف يسبب نقص التروية العالمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم تخدير الماوس بما فيه الكفاية، ونقل الحيوان إلى الجراحة / منصة التصوير ووضع الأنف الماوس، في مخروط الأنف وتطبيق 1-1،2٪ isofluorane للحفاظ على حالة تخدير. تأكد من أن الفأر هو ملقى على درجة حرارة المشتركntrolled سادة التدفئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم (37 درجة مئوية +/- 0.5 ° C) في جميع أنحاء الإجراءات المتبقية. وضع مرهم التعليم والتدريب المهني في العيون لمنع جفاف بينما تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة علم وظائف الأعضاء من الفأرة باستخدام نظام قياس التأكسج نبض باستخدام الذيل أو القدم كليب المتوفرة مع النظام. تأكد من أن معدل التنفس ويحتفظ بين 50-65 الأنفاس / دقيقة. تأكد من أن معدل ضربات القلب لا يزال بين 300-450 نبضة في الدقيقة وتشبع الأكسجين يحتفظ بين 97-98٪ لضمان البقاء على المدى الطويل للحيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يتم تخدير الماوس بشكل كاف، حلق شعر على الجمجمة باستخدام كليبرز الكهربائية، إزالة الشعر المتبقي ونظيفة مع betadine، تليها مسحة الإيثانول. كرر هذا الإجراء حتى ثلاث مرات لضمان بيئة الجراحية المعقمة. </li></ol> 2. إجراء العمليات الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع فروة الرأس وتنظيفها بالكامل وحليق، وجعل 5 ملم شق في فروة الرأس من الفأرة للكشف عن fissu الجمجمةالدقة وتحديد bregma. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام قضيب من القطن المعقم لإزالة أي رباط المتبقية المغطي الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الغراء حلقة العرف الفولاذ المقاوم للصدأ (الشكل 1) مع لاصق الأنسجة حتى العظم المغطي القشرة الجدارية باستخدام إحداثيات التجسيمي من Bregma: -1 الى -3 ملم والوحشي: 2-4 ملم. ملاحظة: الغراء يحدد عادة في غضون 2 دقيقة بعد وضع الحلقة على العظام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يضعوا عصابة لحامل التجسيمي (الشكل 2) لتحقيق الاستقرار في الماوس ولمنع الحركة أثناء التصوير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت المجهر الجراحي الصف تشريح، حفر ببطء قسم 1-2 ملم في الجمجمة باستخدام سرعة تسيطر عليها مثل DREMEL أداة (Meisinger 3.9 مم مثقاب) والتأكد من الحفاظ على مستوى المنطقة كما هو حفر عليه. تحقيق ذلك باستخدام نمط التعرج. لتجنب حرارة بناء، ضبط سرعة الحفر إلى الأقل وأخذ فترات راحة متكررة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما تصبح الجمجمة الجمجمة تسلق في المظهر، ومواصلة رقيقمن الجمجمة باستخدام شفرة مشرط باستخدام نفس نمط التعرج للحفاظ على مستوى سطح ضعفت لتسهيل إزالة السلس للطبقات رقيقة من الجمجمة الجمجمة. استخدام غيض من شفرة مشرط جعل السكتات الدماغية خطية صغيرة مع الضغط الخفيف لإزالة طبقات رقيقة من العظام في وقت واحد. مواصلة هذا العمل حتى بشكل واضح الأوعية الدموية وضوحا من خلال المجهر تشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا يثقب المجرب من خلال أو كسر في الجمجمة أثناء عملية رقيق، الموت ببطء الحيوان بسبب الضرر المحتمل أن القشرة الكامنة. ملاحظة: الجمجمة الماوس ما يقرب من 300 ميكرون في سمك ويتكون من اثنين من طبقات رقيقة من العظم المضغوط (الطبقة الداخلية واحد خارجي واحد)، وطبقة من العظم الإسفنجي تقع بين طبقتين من العظم المضغوط. الطبقة الخارجية من العظم المضغوط ويتم إزالة معظم العظم الإسفنجي داخل منطقة حفر 5 مم أدى إلى التقريبية طبقة 50 ميكرون من العظم المضغوط المتبقية (انظر الشكل 2B). Visualizسوف أوجه من الأوعية الدموية ضمان النهائية الجمجمة ضعيفة سليمة ما يقرب من 50 ميكرون في سمك. لذا الجمجمة لا تزال موجودة عندما ضعفت هذه سمك. </li></ol> 3. المجهر مجموعة المتابعة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام نظام مجهر مقلوب (التقليدية، متحد البؤر أو النظامين الفوتون) الذي يحتوي على العاكس موضوعي. ملاحظة: من الممكن أيضا للاستفادة من المجهر تستقيم القياسية. فإن العامل المحدد أن تكون المساحة بين مرحلة والأهداف. تعديلات على مرحلة قد تكون ضرورية لتحقيق هذا الإعداد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين منصة الجراحية / التصوير إلى مرحلة العرف الذي يقع جانبا قاعدة المجهر. ملاحظة: يرصد منصة باستخدام جاك مختبر للسماح الحركة الرأسية من منصة العمليات الجراحية / التصوير تحت الهدف. هي التي شنت جاك مختبر لوحة الملصقة على أربعة أعمدة اسطوانية. (انظر الشكل 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع العاكس موضوعي يحتوي على 20Xالهدف خلال نافذة الجمجمة. استخدام مصدر ضوء خارجي للعثور على نافذة الجمجمة من خلال النظر من خلال العدسات المجهر ووضع الهدف في مجال التصوير. ملاحظة: سيتم يرمز منطقة التصوير من خلال وجود الأوعية الدموية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحقيق أهداف المياه القائمة، استخدم السائل الدماغي الشوكي الاصطناعي (ACSF) (130 ملي كلوريد الصوديوم، و 30 ملي بوكل، 12 ملي KH 2 PO 4، 200 ملي NaHCO 3 و 30 ملي HEPES، و 100 ملي الجلوكوز) باعتبارها وسيلة نظرا لاحتمالات تسرب داخل تجويف الجمجمة أثناء التصوير (الشكل 3). </li></ol> 4. روز البنغال صبغ إعداد وإدارة وتحريض السكتة الدماغية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 20 ملغ حل / مل جديدة من روز البنغال في السائل الشوكي الدماغي الاصطناعي (ACSF)؛ تصفية وتعقيم قبل الإدارة. لا إعادة استخدام أو تخزين البنغال روز مرة واحدة وقد تم مزجه. جعل حل جديد لكل تجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعطاء حقن الوريد 0.1 مل ذيل روز البنغال بينما الصورةتعليب النافذة الجمجمة مع ليزر 561 نانومتر لضمان حقن كاف من الحل. ملاحظة: سيتم تصور روز البنغال في 5 ثانية بعد الحقن في الأوعية الدموية في الدماغ. ينبغي أن تملأ وعاء كامل مع روز البنغال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الحقن كافية من روز البنغال صبغ اختيار سفينة مناسبة للتخثر على أساس قطر الأوعية الدموية (40-80 ميكرون) لضمان استنساخ حجم الآفة بشكل خاص. التفريق بين الشرايين والأوردة من خلال النظر في اتجاه تدفق الدم: والشرايين تنتقل من قطر أكبر للسفن القطر الأصغر، وعروق تتحرك من أصغر لسفن القطر الأكبر. ويتم إنجاز هذا بسهولة عن طريق التصور مرة واحدة يتم حقن روز البنغال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير الإعداد المجهر على النحو التالي: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زيادة مدة بقاء. ملاحظة: هذا وسوف تختلف وفقا لنظام المجهر يجري استخدامها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زيادة قوة الليزر إلى 100٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الصور التسلسل الزمني في 1 إطار / ثانية باستخدامأقصى سرعة المسح الضوئي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح الماوس حتى يتم تشكيل جلطة مستقرة داخل السفينة. ملاحظة: هذا يتحقق عادة في غضون 5 دقائق من المسح المستمر (انظر الشكل 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تحريض تشكيل الجلطة باستخدام روز البنغال، وإزالة الماوس من منطقة التصوير إلى مجهر تشريح. إزالة بعناية حلقة من الصلب غير القابل للصدأ من الجمجمة الجمجمة. دراسة نافذة في الجمجمة عن أي نزيف. في حالة حدوث نزيف، إنهاء التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام 6.0 حيدة خياطة لإغلاق الجرح على الجمجمة. وضع مرهم مضاد حيوي على طول خط خياطة لمنع العدوى. حقن Buprenex (0.05 ملغ / كلغ) تحت الجلد كل 12 ساعة لمدة ثلاثة أيام لإدارة الألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عودة الماوس إلى غرفة الإنعاش بعد إزالة من مخدر حتى مستيقظا تماما والتحرك بحرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عودة الماوس إلى قفص نظيفة لمزيد من التحقيق في وقت لاحق. </li></ol> 5. التصوير الطولي على اللاحقة أيام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توظيف الأساليب التالية لإجراء التصوير الطولي في أيام لاحقة آخر photothrombosis. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس كما هو موضح في المادة 1 من الطرق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على الكافية التخدير إعادة فتح فروة الرأس عن طريق إزالة أي الغرز المتبقية لإعادة فتح الجلد المغطي مجال التصوير المحفورة سابقا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام قضيب من القطن المعقم لإزالة أي رباط المتبقية المغطي الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الغراء حلقة العرف الفولاذ المقاوم للصدأ (الشكل 1) مع لاصق الأنسجة حتى العظم المغطي مجال التصوير السابق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يضعوا عصابة لحامل التجسيمي (الشكل 2) لتحقيق الاستقرار في الماوس ولمنع الحركة أثناء التصوير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الأوعية الدموية الكامنة وراء الجمجمة ضعيفة سابقا. استخدام الوريد الذيل حقن FITC-ديكستران للتحقق من وجود تجلط يسببها سابقا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام 6.0 حيدة خياطة لإغلاق فيCISION على الجمجمة. وضع مرهم مضاد حيوي على طول خط خياطة لمنع العدوى. حقن Buprenex (0.05mg / كلغ) تحت الجلد كل 12 ساعة لمدة ثلاثة أيام لإدارة الألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عودة الماوس إلى غرفة الإنعاش بعد إزالة من مخدر حتى مستيقظا تماما والتحرك بحرية. </li></ol></li></ol> 6. التأكيد من السكتة الدماغية التعريفي (بعد الوفاة) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في ختام دراسة، تحقق من حجم المخ باستخدام 2،3،5-triphenyltetrazolium كلوريد (TTC) تلطيخ كما هو مبين في الشكل (5). إن طريقة الكامل يمكن العثور عليه في 12. </li></ol>

<ol>
	<li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis.">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Annals of Neurology. 17, 497-504 (1985).</li><li>Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+aggregation+in+the+cerebral+microcirculation:+effect+of+aspirin+and+other+agents.">Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents.</a> Circulation Research. 40, 320-328 (1977).</li><li>Owens, A. P., Mackman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sources+of+tissue+factor+that+contribute+to+thrombosis+after+rupture+of+an+atherosclerotic+plaque.">Sources of tissue factor that contribute to thrombosis after rupture of an atherosclerotic plaque.</a> Thrombosis Research. 129, S30-S33 (2012).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx : the journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2, 396-409 (2005).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of stroke models in rats. , (2009).</li><li>Herz, R. C., Kasbergen, C. M., Hillen, B., Versteeg, D. H., de Wildt, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+middle+cerebral+artery+occlusion+by+an+intraluminal+thread+compromises+collateral+blood+flow.">Rat middle cerebral artery occlusion by an intraluminal thread compromises collateral blood flow.</a> Brain Research. 791, 223-228 (1998).</li><li>Brint, S., Jacewicz, M., Kiessling, M., Tanabe, J., Pulsinelli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+brain+ischemia+in+the+rat:+methods+for+reproducible+neocortical+infarction+using+tandem+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+and+ipsilateral+common+carotid+arteries.">Focal brain ischemia in the rat: methods for reproducible neocortical infarction using tandem occlusion of the distal middle cerebral and ipsilateral common carotid arteries.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism : Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 8, 474-485 (1988).</li><li>Zheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinergic+receptor+stimulation+reduces+cytotoxic+edema+and+brain+infarcts+in+mouse+induced+by+photothrombosis+by+energizing+glial+mitochondria.">Purinergic receptor stimulation reduces cytotoxic edema and brain infarcts in mouse induced by photothrombosis by energizing glial mitochondria.</a> PloS One. 5, e14401 (2010).</li><li>Zheng, D. M., Wewer, J., Lechleiter, J. P. 2. Y. 1. R. -. i. n. i. t. i. a. t. e. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IP3R-dependent+stimulation+of+astrocyte+mitochondrial+metabolism+reduces+and+partially+reverses+ischemic+neuronal+damage+in+mouse.">IP3R-dependent stimulation of astrocyte mitochondrial metabolism reduces and partially reverses ischemic neuronal damage in mouse.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 33, 600-611 (2013).</li><li>Witte, O. W., Stoll, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+and+remote+effects+of+focal+cortical+infarctions:+secondary+damage+and+reactive+plasticity.">Delayed and remote effects of focal cortical infarctions: secondary damage and reactive plasticity.</a> Advances in Neurology. 73, 207-227 (1997).</li><li>Hagemann, G., Redecker, C., Neumann-Haefelin, T., Freund, H. J., Witte, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+long-term+potentiation+in+the+surround+of+experimentally+induced+focal+cortical+infarction.">Increased long-term potentiation in the surround of experimentally induced focal cortical infarction.</a> Annals of Neurology. 44, 255-258 (1998).</li><li>Kramer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TTC+staining+of+damaged+brain+areas+after+MCA+occlusion+in+the+rat+does+not+constrict+quantitative+gene+and+protein+analyses.">TTC staining of damaged brain areas after MCA occlusion in the rat does not constrict quantitative gene and protein analyses.</a> Journal of Neuroscience Methods. 187, 84-89 (2010).</li><li>Blinder, P., Shih, A. Y., Rafie, C., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topological+basis+for+the+robust+distribution+of+blood+to+rodent+neocortex.">Topological basis for the robust distribution of blood to rodent neocortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107, 12670-12675 (2010).</li><li>Nishimura, N., Rosidi, N. L., Iadecola, C., Schaffer, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+of+collateral+flow+after+occlusion+of+a+single+cortical+penetrating+arteriole.">Limitations of collateral flow after occlusion of a single cortical penetrating arteriole.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 30, 1914-1927 (2010).</li><li>Nishimura, N., Schaffer, C. B., Friedman, B., Lyden, P. D., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penetrating+arterioles+are+a+bottleneck+in+the+perfusion+of+neocortex.">Penetrating arterioles are a bottleneck in the perfusion of neocortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104, 365 (2007).</li><li>Blum, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+after+silent+stroke:+Hippocampus+and+infarcts+both+matter.">Memory after silent stroke: Hippocampus and infarcts both matter.</a> Neurology. 78, 38-46 (2012).</li><li>Heinsius, T., Bogousslavsky, J., Van Melle, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+infarcts+in+the+middle+cerebral+artery+territory+Etiology+and+outcome+patterns.">Large infarcts in the middle cerebral artery territory Etiology and outcome patterns.</a> Neurology. 50, 341-350 (1998).</li><li>Wardlaw, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+causes+lacunar+stroke.">What causes lacunar stroke.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery &amp; Psychiatry. 76, 617-619 (2005).</li><li>Inoue, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+stroke+under+anticoagulant+therapy].+Rinsho+shinkeigaku.">Ischemic stroke under anticoagulant therapy]. Rinsho shinkeigaku.</a> Clinical Neurology. 50, 455-460 (2010).</li><li>Tiannan Wang, W. C., Xie, Y., Zhang, W., Ding, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+the+Volume+of+the+Focal+Cerebral+Ischemic+Lesion+through+Photothrombosis.">Controlling the Volume of the Focal Cerebral Ischemic Lesion through Photothrombosis.</a> American Journal of Biomedical Sciences. 2, 33-42 (2009).</li><li>Head, B. P., Patel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetics+and+brain+protection.">Anesthetics and brain protection.</a> Current Opinion in Anaesthesiology. 20, 395-399 (2007).</li><li>Kirsch, J. R., Traystman, R. J., Hurn, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetics+and+cerebroprotection:+experimental+aspects.">Anesthetics and cerebroprotection: experimental aspects.</a> International Anesthesiology Clinics. 34, 73-93 (1996).</li><li>Koerner, I. P., Brambrink, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+protection+by+anesthetic+agents.">Brain protection by anesthetic agents.</a> Current Opinion in Anaesthesiology. 19, 481-486 (2006).</li><li>Gelb, A. W., Bayona, N. A., Wilson, J. X., Cechetto, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propofol+anesthesia+compared+to+awake+reduces+infarct+size+in+rats.">Propofol anesthesia compared to awake reduces infarct size in rats.</a> Anesthesiology. 96, 1183-1190 (2002).</li><li>Bhardwaj, A., Castro, I. A., Alkayed, N. J., Hurn, P. D., Kirsch, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetic+choice+of+halothane+versus+propofol:+impact+on+experimental+perioperative+stroke.">Anesthetic choice of halothane versus propofol: impact on experimental perioperative stroke.</a> Stroke; A Journal Of Cerebral Circulation. 32, 1920-1925 (2001).</li><li>Barretto, R. P., Messerschmidt, B., Schnitzer, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+fluorescence+imaging+with+high-resolution+microlenses.">In vivo fluorescence imaging with high-resolution microlenses.</a> Nature Methods. 6, 511-512 (2009).</li></ol>

تعلن الكتاب أنه ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة.

ابتليت القدرة على ترجمة التجريبية الفيزيولوجيا المرضية السكتة الدماغية من الحيوان إلى الإنسان التطبيق مع الفشل. ومع ذلك، فإن استخدام نماذج حيوانية، مثل نموذج photothrombosis، ويسمح لفهم أفضل للالسكتة الدماغية الفيزيولوجيا المرضية واستكشاف طرق علاجية جديدة لتوفير الحماي...

تقنية الموضحة تصاريح التصور في الجسم الحي الاستجابات الخلوية التالية تحريض روز البنغال على الفور photothrombosis في الماوس سليمة. روز البنغال (4،5،6،7-tetrachloro-2، 4، 5، 7&#39;-tetraiodofluorescein) هو صبغ حساس يستخدم للحث على السكتة الدماغية في النماذج الحيوانية (الماوس والفئران). بعد حقن البلعة من RB عن طريق الوريد الذيل وإضاءة لاحقة من خلال الجمجمة ضعيفة مع ضوء الليزر 564 نانومتر، الجلطة هو فعل يسبب السكتة الدماغية الفسيولوجية 1. طريقة وصفت في الأصل من قبل روزنبلوم وايل الصبان في عام 1977، وتكييفها في وقت لاحق من قبل واتسون في منتصف 1980s 1،2. وباختصار، فإن المشع روز البنغال مع الضوء الأخضر الإثارة (ليزر 561 نانومتر في حالتنا)، الذي يولد إنتاج أنواع الاكسجين التفاعلية، والذي ينشط في وقت لاحق العامل النسيجي، وهو البادئ شلال التخثر. تحريض شلال التخثر ينتج الدماغية ليهأيون التي هي ذات الصلة مرضي السكتة الدماغية السريرية 3. السكتة الدماغية لديها الفيزيولوجيا المرضية المعقدة ويرجع ذلك إلى تفاعل العديد من خلايا مختلفة الأنواع بما في ذلك الخلايا العصبية، الدبقية، البطانة والجهاز المناعي. اختيار أفضل أسلوب لدراسة تتطلب عملية الخلوية معينة اعتبارات متعددة. تقنيات تجريبية تقع على نطاق واسع في واحدة من ثلاث فئات: في المختبر، في الجسم الحي وسيليكون ولكل منها مزايا وعيوب في الدراسات المختبرية لديها عيب أساسي لإزالة الخلايا من بيئتها الطبيعية، وبالتالي قد لا تتكاثر آثار ينظر في حالها. الحيوانات الحية. في الجسم الحي تقنيات توفير لتعزيز النسخ التجريبية من الحالات المرضية مع زيادة أهمية متعدية. وفي سيليكون وتشير بصفة عامة إلى النمذجة الحاسوبية من مرض أو عملية الخلوية، وحين تستخدم بشكل متزايد لدراسة التفاعلات المخدرات المحتملة للامتحانسبيل، ما زال يتعين اختبار أي معلومات استقاها في الخلايا أو الأنسجة الحية. يجب أن النموذج المثالي من السكتة الدماغية في إعداد مختبر تظهر ملامح مرضية مشابهة لتلك التي ظهرت في عدد السكان. في حين أن هناك خصائص مشتركة الفسيولوجية من السكتة الدماغية في البشر، وهناك أيضا العديد من الاختلافات تبعا لنوع الإصابة من ذوي الخبرة. السكتة الدماغية في البشر كما يحدث انسداد صغيرة أو كبيرة سفينة، والآفات نزفية، والشريان إلى الشريان أو الانسدادات القلب والتي تؤدي إلى احتشاء أحجام متنوعة فضلا عن الاختلافات في الآليات المتعلقة بكل علم الأمراض. الاستفادة من استخدام نماذج السكتة الدماغية الحيوان هو الجيل من عوائق استنساخه التي تحاكي خصائص السكتة الدماغية الإنسان. وتشمل النماذج الأكثر شيوعا السكتة الدماغية الحيوان انسداد الشريان باستخدام: وسط انسداد الشريان الدماغي (أساليب خيوط صمية أو اللف) التي نماذج القاصي MCAO ونموذج photothrombosis. مزايا لوقد استعرض د عيوب كل نموذج في مكان آخر (انظر 4 و 5). نماذج عالمية الدماغية (MCAO)، في حين أن من السهل نسبيا لأداء هي أقل أهمية من السكتة الدماغية البشرية من هي نماذج السكتة الدماغية التنسيق. وبالإضافة إلى ذلك، وهذه الأساليب تختلف اختلافا كبيرا في إحداث تقرحات احتشاء الدماغ استنساخه. نموذج photothrombosis هو تكرار للغاية طالما يتحكم المجرب التجارب بشكل جيد، وتوفير ميزة واضحة على نماذج MCAO. ومع ذلك، ويرجع ذلك إلى الأوعية الدموية الدقيقة إهانة وقد وصفت نموذج لعرض غبش الدماغية الحد الأدنى، المنطقة التي يعتقد أن الخلايا لتكون انقاذها 6،7. بالإضافة إلى ذلك، وذمة وعائية المنشأ وتشكيل السامة للخلايا وذمة ويمكن أيضا أن يتسبب الإشعاع التالي من منطقة التصوير. على الرغم من هذه القيود وفرت تقنية نظرة جديدة في العديد من العمليات الفسيولوجية التالية السكتة الدماغية 8، 9، 10، 11.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col span="2" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rose Bengal</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>330000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane Anesthetic</td>
			<td>MWI Veterinary Supply</td>
			<td>088-076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>aCSF&#160;</td>
			<td>126 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH2PO4, 2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM glucose and 26 mM NaHCO3 (pH 7.4).</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>[header]</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Scissors</td>
			<td>Bioindustrial Products</td>
			<td>500-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors 14 cm</td>
			<td>Bioindustrial Products</td>
			<td>12-055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Dumont High Tech #5 style, straight</td>
			<td>Bioindustrial Products</td>
			<td>TWZ-301.22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabJack 132X80</td>
			<td>Optosigma Co</td>
			<td>123-6670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platform for Labjack 8X 8</td>
			<td>Optosigma Co</td>
			<td>145-1110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ear bar holder from stereotaxic setup</td>
			<td>Stoelting/Cyborg</td>
			<td>51654</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispomed Labvent Rodent anesthesia machine</td>
			<td>DRE, Inc.</td>
			<td>15001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tech IV Isoflurane vaporizer</td>
			<td>DRE, Inc.</td>
			<td>34001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F Air Canister</td>
			<td>DRE, Inc</td>
			<td>80120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bain circuit breathing tube</td>
			<td>DRE, Inc</td>
			<td>86111B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent adapter for bain tube</td>
			<td>DRE, Inc</td>
			<td>891000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2 regulator for oxygen tanks</td>
			<td>DRE, Inc</td>
			<td>CE001E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent induction chamber</td>
			<td>DRE, Inc</td>
			<td>15004C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethicon Silk 6-0; 18 in with P-3 needle</td>
			<td>Suture Express</td>
			<td>1639G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective inverter Optical Adapter</td>
			<td>LSM technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foredom drill Dual voltage 110/120</td>
			<td>Foredom</td>
			<td>134.53</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rose bengal photothrombosis by confocal optical imaging in vivo: a model of single vessel stroke

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to image cellular events in an intact animal. Additionally, the ability to induce physiological disease states such as stroke in vivo increases its utility. The technique described herein allows for physiological assessment of cellular responses within the CNS following a stroke and can be adapted for other pathological conditions being studied. The technique presented uses laser excitation of the photosensitive dye Rose Bengal in vivo to induce a focal ischemic event in a single blood vessel. 
The video protocol demonstrates the preparation of a thin-skulled cranial window over the somatosensory cortex in a mouse for the induction of a Rose Bengal photothrombotic event keeping injury to the underlying dura matter and brain at a minimum. Surgical preparation is initially performed under a dissecting microscope with a custom-made surgical/imaging platform, which is then transferred to a confocal microscope equipped with an inverted objective adaptor. Representative images acquired utilizing this protocol are presented as well as time-lapse sequences of stroke induction. This technique is powerful in that the same area can be imaged repeatedly on subsequent days facilitating longitudinal in vivo studies of pathological processes following stroke.

وكان الهدف من هذا الأسلوب للحث على السكتة الدماغية في النماذج الحيوانية (الماوس والفئران) بعد حقن البلعة من RB عن طريق الوريد الذيل وإضاءة لاحقة من جمجمة ضعفت مع ضوء الليزر 561 نانومتر. الصور في الشكل (4) تدل على تطور تكوين جلطة في وعاء واحد بعد التشعيع في المنطق?...

Watch this Scientific Journal Video about Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo:  A Model of Single Vessel Stroke at JoVE.com

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo:  A Model of Single Vessel Stroke

Here, we describe a semi-invasive optical microscopy approach for the induction of a Rose Bengal photothrombotic clot in the somatosensory cortex of a mouse in vivo. The technical aspects of the imaging procedure are described from induction of a photothrombotic event to application and data collection.

روز البنغال Photothrombosis بواسطة التصوير الضوئي متحد البؤر<em&gt; في فيفو</em&gt;: نموذج لسفينة واحدة السكتة الدماغية

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to ...

rose-bengal-photothrombosis-confocal-optical-imaging-vivo-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo: A Model of Single Vessel Stroke

14.9K Views.  The University of Texas Health Science Center San Antonio. Here, we describe a semi-invasive optical microscopy approach for the induction of a Rose Bengal photothrombotic clot in the somatosensory cortex of a mouse in vivo. The technical aspects of the imaging procedure are described from induction of a photothrombotic event to application and data collection. 

Video: Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo:  A Model of Single Vessel Stroke

Non-invasive Optical Measurement of Cerebral Metabolism and Hemodynamics in Infants

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can accurately screen for brain injury, monitor injury evolution, or assess response to therapy. The energy used by neurons is derived largely from tissue oxidative metabolism, and neural hyperactivity and cell death are reflected by corresponding changes in cerebral oxygen metabolism (CMRO2). Thus, measures of CMRO2 are reflective of neuronal viability and provide critical diagnostic information, making CMRO2 an ideal target for bedside measurement of brain health.
Brain-imaging techniques such as positron emission tomography (PET) and single-photon emission computed tomography (SPECT) yield measures of cerebral glucose and oxygen metabolism, but these techniques require the administration of radionucleotides, so they are used in only the most acute cases.
Continuous-wave near-infrared spectroscopy (CWNIRS) provides non-invasive and non-ionizing radiation measures of hemoglobin oxygen saturation (SO2) as a surrogate for cerebral oxygen consumption. However, SO2 is less than ideal as a surrogate for cerebral oxygen metabolism as it is influenced by both oxygen delivery and consumption. Furthermore, measurements of SO2 are not sensitive enough to detect brain injury hours after the insult 1,2, because oxygen consumption and delivery reach equilibrium after acute transients 3. We investigated the possibility of using more sophisticated NIRS optical methods to quantify cerebral oxygen metabolism at the bedside in healthy and brain-injured newborns. More specifically, we combined the frequency-domain NIRS (FDNIRS) measure of SO2 with the diffuse correlation spectroscopy (DCS) measure of blood flow index (CBFi) to yield an index of CMRO2 (CMRO2i) 4,5.
With the combined FDNIRS/DCS system we are able to quantify cerebral metabolism and hemodynamics. This represents an improvement over CWNIRS for detecting brain health, brain development, and response to therapy in neonates. Moreover, this method adheres to all neonatal intensive care unit (NICU) policies on infection control and institutional policies on laser safety. Future work will seek to integrate the two instruments to reduce acquisition time at the bedside and to implement real-time feedback on data quality to reduce the rate of data rejection.

We combined frequency-domain near-infrared spectroscopy measures of cerebral hemoglobin oxygenation with diffuse correlation spectroscopy measures of cerebral blood flow index to estimate an index of oxygen metabolism. We tested the utility of this measure as a bedside screening tool to evaluate the health and development of the newborn brain.

غير الغازية قياس بصري من الأيض الدماغي وديناميكا الدم في الأطفال الرضع

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality  and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can  accurately ...

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite fluorescent in situ elements through the optical fibers, and then record some of the emitted photons, via the same optical fibers. The light source is a laser that sends the exciting light through an element within the fiber bundle and as it scans over the sample, recreates an image pixel by pixel. As this scan is very fast, by combining it with dedicated image processing software, images in real time with a frequency of 12 frames/sec can be obtained.
We developed a technique to quantitatively characterize capillary morphology and function, using a confocal fluorescence videomicroscopy device. The first step in our experiment was to record 5 sec movies in the four quadrants of the tumor to visualize the capillary network. All movies were processed using software (ImageCell, Mauna Kea Technology, Paris France) that performs an automated segmentation of vessels around a chosen diameter (10 &mu;m in our case). Thus, we could quantify the 'functional capillary density', which is the ratio between the total vessel area and the total area of the image. This parameter was a surrogate marker for microvascular density, usually measured using pathology tools.
The second step was to record movies of the tumor over 20 min to quantify leakage of the macromolecular contrast agent through the capillary wall into the interstitium. By measuring the ratio of signal intensity in the interstitium over that in the vessels, an 'index leakage' was obtained, acting as a surrogate marker for capillary permeability.

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

In this paper, we present a method to analyze tumor microvessels in vivo using dynamic contrast-enhanced fluorescence videomicroscopy. Two quantitative parameters were acquired: functional capillary density reflecting the vascularity of the tumor, and index leakage reflecting the leakiness of the endothelial wall.

في الجسم الحي التصوير من ورم الأوعية الدموية باستخدام الإسفار متحد البؤر Videomicroscopy

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite ...

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of Willis perforation (CWp) and proven by intracranial pressure (ICP) monitoring. Thereby a homogenous blood distribution in subarachnoid spaces surrounding the arterial circulation and cerebellar fissures is achieved. Animal physiology is maintained by intubation, mechanical ventilation, and continuous on-line monitoring of various physiological and cardiovascular parameters: body temperature, systemic blood pressure, heart rate, and hemoglobin saturation. Thereby the cerebral perfusion pressure can be tightly monitored resulting in a less variable volume of extravasated blood. This allows a better standardization of endovascular filament perforation in mice and makes the whole model highly reproducible. Thus it is readily available for pharmacological and pathophysiological studies in wild type and genetically altered mice.

A standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage by intraluminal Circle of Willis perforation is described. Vessel perforation and subarachnoid bleeding are monitored by intracranial pressure monitoring. In addition various vital parameters are recorded and controlled to maintain physiologic conditions.

A نموذج من الفئران تحت العنكبوتية نزف

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent marker. Mouse models (brain tumor and arthritis) were used to evaluate the usefulness of this method. Saposin C (SapC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles tagged with CellVue Maroon (CVM) fluorophore were administered intravenously. Animals were then placed in the rotational holder (MARS) of the in vivo imaging system. Images were acquired in 10&#176; steps over 380&#176;. A rectangular&#160;region of interest (ROI) was placed across the full image width at the model disease site. Within the ROI, and for every image, mean fluorescence intensity was computed after background subtraction. In the mouse models studied, the labeled nanovesicles were taken up in both the orthotopic and transgenic brain tumors, and in the arthritic sites (toes and ankles). Curve analysis of the multi angle image ROIs determined the angle with the highest signal. Thus, the optimal angle for imaging each disease site was characterized. The MAROI method applied to imaging of fluorescent compounds is a noninvasive, economical, and precise tool for in vivo quantitative analysis of the disease states in the described mouse models.

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo quantitation of a fluorescent marker delivered by saposin C (SapC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles. Employing mouse models of cancer and arthritis, we demonstrate how the MAROI signal curve analysis can be used for the precise mapping and biological characterization of disease processes.

في فيفو التصوير الضوئي من أورام الدماغ والتهاب المفاصل عن طريق نيون SapC-DOPS Nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

excitotoxic المواد تحفيز الدماغ باعتبارها Microslices<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من السكتة الدماغية

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Combined In vivo Optical and &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in vivo optical and &#956;CT imaging allow the visualization of biological phenomena in an anatomical context. These imaging modalities may be especially useful to study conditions that impact bone. In particular, orthopaedic implant infections are an important problem in clinical orthopaedic surgery. These infections are difficult to treat because bacterial biofilms form on the foreign surgically implanted materials, leading to persistent inflammation, osteomyelitis and eventual osteolysis of the bone surrounding the implant, which ultimately results in implant loosening and failure. Here, a mouse model of an infected orthopaedic prosthetic implant was used that involved the surgical placement of a Kirschner-wire implant into an intramedullary canal in the femur in such a way that the end of the implant extended into the knee joint. In this model, LysEGFP mice, a mouse strain that has EGFP-fluorescent neutrophils, were employed in conjunction with a bioluminescent Staphylococcus aureus strain, which naturally emits light. The bacteria were inoculated into the knee joints of the mice prior to closing the surgical site. In vivo bioluminescent and fluorescent imaging was used to quantify the bacterial burden and neutrophil inflammatory response, respectively. In addition, &#956;CT imaging was performed on the same mice so that the 3D location of the bioluminescent and fluorescent optical signals could be co-registered with the anatomical &#956;CT images. To quantify the changes in the bone over time, the outer bone volume of the distal femurs were measured at specific time points using a semi-automated contour based segmentation process. Taken together, the combination of in vivo bioluminescent/fluorescent imaging with &#956;CT imaging may be especially useful for the noninvasive monitoring of the infection, inflammatory response and anatomical changes in bone over time.

Combined In vivo Optical and  &amp;#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Combined optical and &#956;CT imaging in a mouse model of orthopaedic implant infection, utilizing a bioluminescent engineered strain of Staphylococcus aureus, provided the capability to noninvasively and longitudinally monitor the dynamics of the bacterial infection, as well as the corresponding inflammatory response and anatomical changes in the bone.

جنبا إلى جنب<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; بصري وμCT التصوير لرصد العدوى، التهاب، وتشريح العظام في العدوى زراعة العظام في الفئران

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in ...

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an increased risk of vascular morbidity.&#160;Yet, albeit&#160;the mounting clinical evidence, there is a paucity of clear studies of vascular toxicity and therefore the etiology of a heterogeneous group of vascular/cardiovascular disorders remains to be elucidated. Moreover, the mechanism that may underlie vascular toxicity can completely differ from the principles of chemotherapy-induced cardiotoxicity, which is related to direct myocyte injury. We have established a real-time, in vivo molecular imaging platform&#160;to evaluate&#160;the potential&#160;acute&#160;vascular toxicity of anti-cancer therapies.
We have set up a platform of in vivo, high-resolution molecular imaging&#160;in mice,&#160;suitable for visualizing vasculature within confined organs and reference blood vessels within the same individuals whereas each individual serve as its own control. Blood vessel walls were impaired after doxorubicin administration, representing a unique mechanism of vascular toxicity that may be the early event in end-organ injury. Herein, the method of fibered confocal fluorescent microscopy (FCFM) based imaging is described, which provides an innovative mode to understand physiological phenomena at the cellular and sub-cellular levels in animal subjects.

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

We herein describe the method of fibered confocal fluorescent microscopy (FCFM) based imaging, which provides an innovative mode to understand physiological phenomena at the cellular and sub-cellular levels in animal subjects.

الناجم عن العلاج الكيميائي الأوعية الدموية سمية - في الوقت الحقيقي<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير من سفينة انخفاض

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an ...

Photothrombosis-induced Focal Ischemia as a Model of Spinal Cord Injury in Mice

Spinal cord injury (SCI) is a devastating clinical condition causing permanent changes in sensorimotor and autonomic functions of the spinal cord (SC) below the site of injury. The secondary ischemia that develops following the initial mechanical insult is a serious complication of the SCI and severely impairs the function and viability of surviving neuronal and non-neuronal cells in the SC. In addition, ischemia is also responsible for the growth of lesion during chronic phase of injury and interferes with the cellular repair and healing processes. Thus there is a need to develop a spinal cord ischemia model for studying the mechanisms of ischemia-induced pathology. Focal ischemia induced by photothrombosis (PT) is a minimally invasive and very well established procedure used to investigate the pathology of ischemia-induced cell death in the brain. Here, we describe the use of PT to induce an ischemic lesion in the spinal cord of mice. Following retro-orbital sinus injection of Rose Bengal, the posterior spinal vein and other capillaries on the dorsal surface of SC were irradiated with a green light resulting in the formation of a thrombus and thus ischemia in the affected region. Results from histology and immunochemistry studies show that PT-induced ischemia caused spinal cord infarction, loss of neurons and reactive gliosis. Using this technique a highly reproducible and relatively easy model of SCI in mice can be achieved that would serve the purpose of scientific investigations into the mechanisms of ischemia induced cell death as well as the efficacy of neuroprotective drugs. This model will also allow exploration of the pathological changes that occur following SCI in live mice like axonal degeneration and regeneration, neuronal and astrocytic Ca2+ signaling using two-photon microscopy.

Photothrombosis is a minimally invasive and highly reproducible procedure to induce focal ischemia in the spinal cord and serves as a model of spinal cord injury in mice.

Photothrombosis الناجم عن نقص التروية التنسيق نموذجا من اصابات الحبل الشوكي في الفئران

Spinal cord injury (SCI) is a devastating clinical condition causing permanent changes in sensorimotor and autonomic functions of the spinal cord (SC) ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently labelled structures in large biological specimens, and is down to cellular resolution. Meanwhile, the constant refinement of underlying protocols and the enhanced availability of specialized commercial systems enable us to investigate the microstructure of whole mouse organs and even allow for the characterization of cellular behavior in various live-cell imaging approaches. Here, we describe a protocol for the spatial whole-mount visualization and quantification of the CD45+ leukocyte population in inflamed mouse hearts. The method employs a transgenic mouse strain (CD11c.DTR)that has recently been shown to serve as a robust, inducible model for the study of the development of fulminant fatal myocarditis, characterized by lethal cardiac arrhythmias. This protocol includes myocarditis induction, intravital antibody-mediated cell staining, organ preparation, and LSFM with subsequent computer-assisted image post-processing. Although presented as a highly-adapted method for our particular scientific question, the protocol represents the blueprint of an easily adjustable system that can also target completely different fluorescent structures in other organs and even in other species.

Here, we describe a light-sheet microscopy approach to visualize the cardiac CD45+ leukocyte infiltrate in a murine model of aseptic fulminant myocarditis, which is induced by the intratracheal diphtheria toxin treatment of CD11c.DTR mice.

التصور الكمي من التسلل الكريات البيض في نموذج الفئران من التهاب عضلة القلب مداهم من قبل ورقة ضوء المجهري

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore largely based on animal studies, despite the high diversity among species in placental anatomy, hemodynamics and duration of the pregnancy. The vast majority of human placenta studies are ex vivo perfusion studies or in vitro trophoblast studies. Although in vitro studies and animal models are essential, extrapolation of the results from such studies to the human placenta in vivo is uncertain. We aimed to study human placenta physiology in vivo at term, and present a detailed protocol of the method. Exploiting the intraabdominal access to the uterine vein just before the uterine incision during planned cesarean section, we collect blood samples from the incoming and outgoing vessels on the maternal and fetal sides of the placenta. When combining concentration measurements from blood samples with volume blood flow measurements, we are able to quantify placental and fetal uptake and release of any compound. Furthermore, placental tissue samples from the same mother-fetus pairs can provide measurements of transporter density and activity and other aspects of placental functions in vivo. Through this integrative use of the 4-vessel sampling method we are able to test some of the current concepts of placental nutrient transfer and metabolism in vivo, both in normal and pathological pregnancies. Furthermore, this method enables the identification of substances secreted by the placenta to the maternal circulation, which could be an important contribution to the search for biomarkers of placenta dysfunction.

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

We present a detailed method to study human placental physiology in vivo at term. The method combines blood sampling from the incoming and outgoing vessels on the maternal and fetal sides of the placenta with ultrasound measurements of volume blood flow and placental tissue sampling.

نهج أخذ العينات 4-السفينة إلى الدراسات التكاملية من فسيولوجيا المشيمة الإنسان<em&gt; في فيفو</em

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore ...