نريد إنشاء نموذج للسكتة الدماغية ينتج جلطة دموية مشابهة لعينات المرضى ويستجيب للعلاج السريري ذي الصلة بالتخثر لذلك ، نقوم بتعديل نموذج السكتة الدماغية الضوئية الكلاسيكية وخلط الثرومبين والصبغة الديناميكية الضوئية وردة البنغال قبل التنشيط الضوئي. يسعدنا أن هذا الإجراء يخلق بالفعل جلطة دموية شديدة الحساسية لانحلال الخثرة بوساطة tPA.
يستخدم نموذج السكتة الدماغية الخثاري الضوئي المعدل هذا إجراءات جراحية بسيطة للغاية مع معدل وفيات منخفض ينتج عنه حجم وموقع احتشاء متسق للغاية. يمكنك أيضا إنتاج جلطة دموية مختلطة من الفيبرين والصفائح الدموية تشبه تلك الموجودة في مريض السكتة الدماغية الحادة. لذلك ، نعتقد أنه من المفيد جدا لأبحاث السكتة الدماغية قبل السريرية تطوير علاجات أكثر فعالية للتخثر.
نأمل أن يستخدم المزيد من الناس نموذجنا. سيوضح الإجراء الدكتور يو يو صن ، الأستاذ المساعد البحثي في مجموعتنا. قبل 30 دقيقة من الجراحة ، قم بإعداد الماوس عن طريق حقن مسكن.
بعد تخدير الفأر ، قم بإجراء قرصة إصبع القدم للتأكد من تخديره بالكامل. ثم قم بإزالة الشعر على الرقبة اليسرى والرأس باستخدام كريم إزالة الشعر. ضع الماوس على محول الصغير في وضع ضعيف ، وعقم منطقة الجلد الجراحية عن طريق مسحها بثلاث ضربات متناوبة من بوفيدون اليود و 70٪ إيثانول.
تحت مجهر التشريح ، قم بعمل شق عنق الرحم الأيسر بطول 0.5 سم باستخدام مقص دقيق وملقط مستقيم على بعد حوالي 0.2 سم من خط الوسط. بعد ذلك ، باستخدام زوج من الملقط المسنن الناعم ، اسحب الأنسجة الرخوة واللفافة لفضح LCCA. ثم باستخدام زوج من الملقط الأملس الناعم ، افصل LCCA بعناية عن العصب المبهم.
ضع خيطا دائما مزدوج العقدة حول LCCA باستخدام خياطة حريرية 5-0. اقلب الماوس إلى وضعية الانبطاح ، وقم بتدوير لفة مشبك الأنف بمقدار 15 درجة. ثم تعقيم المنطقة الجراحية عن طريق مسح الجلد بثلاث ضربات متناوبة من Betadine و 70٪ إيثانول.
قم بعمل شق 0.8 سم في فروة الرأس باستخدام مقص دقيق وملقط مستقيم على طول العين اليسرى والأذن لكشف العضلة الصدغية. بعد ذلك ، قم بعمل شق طوله 0.5 سم على طول حافة العضلة الصدغية على العظم الجداري الأيسر. ثم قم بعمل شق عمودي ثان طوله 0.3 سم على العضلة الصدغية واسحب العضلة لكشف حافة العظم الجداري والعظم الحرشفي.
تأكد من تصور معلم الخيط الإكليلي بين العظام الأمامية والجدارية. بعد ذلك ، رطب الجمجمة عن طريق تطبيق محلول ملحي معقم للكشف عن MCA الأيسر ، وقم بتمييز فرع MCA القريب على العظم الحرشفية بعلامة. ارسم برفق دائرة قطرها ملليمتر واحد تحيط بهذه المنطقة المحددة باستخدام مثقاب أسنان هوائي.
ثم قم بتخفيف الجمجمة بعمق حوالي 0.2 ملم دون لمس الجزء السفلي من الجافية. أوقف الحفر عندما تبقى طبقة رقيقة جدا من العظام. بعد ذلك ، قم بخلط محلول الثرومبين والبنغال الوردي بناء على وزن جسم الفأر ، وقم بحقن الخليط ببطء في الجيوب الأنفية المدارية الخلفية بإبرة قياس 31.
ضع مرهم العين على كلتا العينين لمنع الجفاف. ضع المصباح بضوء ليزر 532 نانومتر على الموقع المحفور على مسافة بوصتين لمدة 20 دقيقة. تصور الإضاءة في الفرع القريب من MCA من خلال نظارات الإسقاط بالليزر.
بعد 20 دقيقة ، أوقف إضاءة الليزر. اصنع نافذة قحفية قطرها ثلاثة ملليمترات على العظم الجداري للجمجمة ، وضع غطاء زجاجي عليها. ثم حدد موقع MCA البعيد تحت عدسة هدف الغمر بالماء 20x.
قم بتسمية الصفائح الدموية المنتشرة عن طريق حقن الوريد الخلفي للأجسام المضادة المترافقة DyLight 488 المضادة ل GP1b-beta قبل خمس دقائق من التصوير. ثم حقن الخلف المداري خليط محلول الثرومبين والورد البنغال. قم بتنشيط MCA ضوئيا باستخدام نظام ليزر 532 نانومتر مع شعاع ليزر قطره 10 ميكرومتر ، وسجل الصورة حتى تكوين الجلطة.
لإدارة tPA ، ضع المخدر على وسادة دافئة بدرجة حرارة 37 درجة مئوية. لف ذيله بشاش رطب دافئ بدرجة حرارة 45 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة في النقطة الزمنية المحددة بعد التنشيط الضوئي. بعد ذلك ، قم بحقن tPA البشري المؤتلف من خلال الوريد الذيل.
حقن 50 ٪ كبلعة ، وبث 50 ٪ المتبقية على مدى 30 دقيقة باستخدام مضخة التسريب. لمراقبة تدفق الدم الدماغي ، قم بعمل شق في خط الوسط على فروة الرأس مع كشف الجمجمة. رطب الجمجمة بمحلول ملحي معقم ، وقم بتطبيق جل الموجات فوق الصوتية عليه برفق ، مع التأكد من تجنب فقاعات الشعر أو الهواء في الجل.
راقب تدفق الدم الدماغي في نصفي الكرة المخية تحت جهاز تصوير تباين بقع الليزر لمدة 10 دقائق. يظهر وضع العلامات المناعية أنه في تجلط الدم الضوئي القائم على صبغة البنغال الوردية ، كان فرع MCA مكتظا بالصفائح الدموية الإيجابية CD41 والقليل من الفيبرين. في المقابل ، في الثرومبين بالإضافة إلى تجلط الدم الضوئي البنغال الوردي ، تم انسداد فرع MCA بواسطة جلطات الصفائح الدموية والفيبرين المختلطة عشوائيا.
أظهر تحليل النشاف المناعي زيادة أكبر من الضعف في ترسب الفيبرين في نصف الكرة المماثل في الثرومبين بالإضافة إلى تجلط البنغال الضوئي مقارنة بالبنغال الوردية وحدها. أظهر التصوير داخل الجسم القائم على المجهر متحد البؤر أن حقن الثرومبين في الوريد فشل في تحفيز تجمعات الصفائح الدموية ، حتى تحت إضاءة الليزر. شكلت الصفائح الدموية جلطات متجانسة في نموذج تجلط الدم الضوئي في البنغال الوردية ولكن المجاميع غير المتساوية مع مناطق باهتة متعددة في نموذج الثرومبين بالإضافة إلى البنغال الوردية.
تم قياس CBF لنفس الفأر قبل وبعد 24 ساعة من tPA مقابل العلاج بالمركبة بواسطة تصوير تباين البقع بالليزر وتم تطبيعه إلى نصف الكرة المقابل. في تجلط الدم الضوئي البنغال الوردي ، أدى علاج tPA إلى اتجاه لاستعادة CBF ، لا سيما في منطقة الحدود الإقفارية مقارنة بالفئران المعالجة بالمركبات. في الثرومبين بالإضافة إلى تجلط الدم البنغالي الوردي ، كان تعافي CBF في الفئران المعالجة ب tPA أكثر بروزا ، وغالبا ما أصبحت فروع MCA القريبة مرئية في 24 ساعة.
في تجلط الدم الضوئي البنغال الوردي ، تم الكشف عن حجم احتشاء مماثل في الفئران المعالجة بالمركبات والمعالجة ب tPA. في المقابل ، في الثرومبين بالإضافة إلى تجلط الدم الضوئي البنغال الوردي ، قلل العلاج المحللي tPA بشكل كبير من الاحتشاء عند 0.5 أو ساعة أو ساعة أو ساعتين ، ولكن ليس في ست ساعات بعد التنشيط الضوئي مقارنة بالفئران المعالجة بالمركبات ، فإن توليد الفيبرين بوساطة الثرومبين أمر بالغ الأهمية لتشكيل الجلطة في هذا الإجراء. يمكن استخدام هذه الطريقة للتحقيق في تكوين الجلطة ومواصلة دراسة علاجات التخثر.
بعد هذا الإجراء ، يمكن تطبيق طرق أخرى لعلاج انحلال الخثرة وتحديد الفعالية اللاحقة. إن إضافة الثرومبين يجعل من الممكن ضبط تركيبة الجلطة من فقيرة بالفيبرين إلى غنية بالفيبرين ، مما يسمح للباحثين بتطوير استراتيجيات علاجية ذات صلة سريريا.
