The authors have no acknowledgements.

1. البكتيريا تعليق التحضير: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من لوحة الثقافة مجزع، تطعيم جو معقم و مطهر مستعمرة واحدة في 250 مل زجاجة معقمة تحتوي على 100 ​​مل من وسائط النمو المناسب (الجدول 1) عن طريق عقيمة بتلقيح الحلقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع زجاجة في حاضنة تهتز المدارية في ظروف مناسبة (الجدول 1) لمدة 1-2 أيام، والتحقق من النمو بشكل دوري. ضبط سرعة شاكر إلى 140 دورة في الدقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جو معقم و مطهر نقل تعليق البكتيرية إلى قسمين العقيمة 50 مل أنابيب مخروطية وأنابيب الطرد المركزي في 3000 x ج لمدة 20 دقيقة في 23 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح في وطاف resuspend كل بيليه الجرثومي مع 15 مل من الماء ببتون العقيمة. دوامة الضرورة. الجمع بين الثقافة البكتيريا علقت في أنبوب واحد / حاوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عيار الثقافة الأسهم في ثلاث نسخ في القسم 4 لتحديد عيار الثقافة الأسهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الثلاجة لمدة تصل إلى 2 أسابيع في 477؛ 2 ° C لحين الحاجة إليها. إعادة عيار الثقافة في وقت الاستخدام، راجع الخطوة 4.8. </li></ol> 2. صفائح الدم إعداد المنتج: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع فصادة معيار المنتج الصفائح الدموية البشرية في بنك الدم المعتمدين. المنتج الصفائح الدموية يجب أن تستوفي المواصفات جمع التالية: 90-360 حجم مل و 0.8 -3.8 × 10 6 الصفائح / تركيز ميكرولتر. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن المنتج الصفائح الدموية وقد استراح مدة لا تقل عن 2 ساعة قبل تجهيزها للحد من العوامل المسببة للأمراض. تخزين المنتجات في 22 ± 2 درجة مئوية في حاضنة الصفائح الدموية دون التحريض على هذه ساعة 2. بعد ساعتين ضمان تحريكها المنتج الصفائح الدموية في 22 ± 2 درجة مئوية في حاضنة الصفائح الدموية. استخدام المنتج لمدة تصل إلى 22 ساعة جمع آخر. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام حقنة 3 مل إزالة عينة 2 مل لقياس 22C درجة الحموضة في المنتج الصفائح الدموية. استخدام محلل غازات الدم للتأكد من المنتج لديها درجة الحموضة&gt; 6.6. استخدام نفس العينة لقياس تركيز الصفائح الدموية من الناتج الصفائح الدموية باستخدام محلل الدموية. التأكد من هذا المنتج يلبي ،80-3،8 × 10 6 الصفائح / ميكرولتر شرط تركيز المجموعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم بصريا دوامة من الناتج الصفائح الدموية. إذا كان المنتج لديه &quot;0&quot; دوامة سيتم تجاهل المنتج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد حقيبة الصفائح الدموية تحت مصدر البيضاء الضوء المباشر والضغط على كيس الصفائح الدموية لفترة وجيزة. نلاحظ بصريا نمط دوامات من العينة الصفائح الدموية. تسجيل المنتج باستخدام المقياس التالي. ملاحظة: 2 - إيجابي الدوامة: يحوم التجانس واضحة في جميع أنحاء كيس كامل مع تباين قوي. 1 - متوسط ​​الدوامة: بعض التجانس وضوحا، ولكن فقط في عدد قليل من الأماكن ومع تباين الفقراء. 0 - الدوامة السلبية: التجانس عكر المتبقية قبل وبعد الضغط على كيس الصفائح الدموية </li></ol> 3. فيتامين بي وضوء الأشعة فوق البنفسجية العملية: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترانSFER المنتج الصفائح الدموية إلى ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية ضوء الإضاءة وتخزين حقيبة باستخدام جهاز أنابيب لرسو السفن العقيمة. بعد نقل إزالة فارغة حدة الصفائح الدموية كيس جمع باستخدام سداده أنابيب والتخلص من الحقيبة فارغة كنفايات biohazardous. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة كيس 35 مل من 500 ميكرومتر الريبوفلافين حل سهم من ضوء التفاف لها الخارجي واقية. قفص الاتهام العقيمة عدة الريبوفلافين على خط مدخل من الحقيبة المعالجة والتخزين. السماح للمحتويات لتصب في وحدة الصفائح الدموية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شنق الريبوفلافين الحقيبة / المعالجة والتخزين حقيبة مجموعة من الحقيبة الريبوفلافين والتعبير بلطف الهواء المتبقية للخروج من الحقيبة المعالجة والتخزين وداخل كيس الريبوفلافين. ضمان كمية صغيرة من المنتج الصفائح الدموية وأعرب أيضا في الحقيبة الريبوفلافين لشطف أي الريبوفلافين المتبقية في المنتج الصفائح الدموية. السماح للحل الريبوفلافين والصفائح الدموية استنزاف مرة أخرى في كيس المعالجة والتخزين وثم المشبك خط مدخل. إزالة كيس الريبوفلافين فارغة لناجي السداده أنابيب والتخلص من الحقيبة فارغة كنفايات biohazardous. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قفص الاتهام معقم 6 &quot;خط أنابيب مع موصل حقنة الإناث على خط مدخل من الإضاءة وتخزين حقيبة. نعلق حقنة برميل 10 مل (إزالة المكبس) على الرابط حقنة الإناث. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جو معقم و مطهر إضافة 5 مل من البكتيريا الأسهم في برميل حقنة عن طريق ماصة. فتح المشبك على خط مدخل والسماح للبكتيريا لتصب المنتج الصفائح الدموية. شطف برميل حقنة عن طريق السماح للبعض المنتجات الصفائح الدموية في التدفق الى 10 مل حقنة برميل. إزالة 10 مل حقنة برميل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جو معقم و مطهر إرفاق حقنة 30 مل وتدفق مدخل الميناء ما لا يقل عن مرتين للتأكد من البكتيريا السهم مختلطة في منتج الصفائح الدموية. بعد أن المنتج هو تمتزج جيدا، استخدم نظيفة 5-10 مل حقنة وإزالة 2 مل عينة ما قبل المعالجة. باستخدام حقنة جديدة ضمان أي هواء عرض من الخطوة التلقيح أو أخذ العينات خطوة إزالة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عيار العينة قبل المعالجة في قسم 4. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة السطر مدخل من الكيس المعالجة والتخزين ووزن المنتج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع المنتج في إضاءة واتبع الأوامر التي تظهر على الشاشة لبدء العلاج الصفائح الدموية القياسية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدخل في ID المشغل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين وتركيب كيس إلى الصوانى المنور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدخل معرف عينة في المنور باستخدام إما قارئ الباركود أو لوحة المفاتيح الإدخال اليدوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح نوع المنتج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق المشبك الكوارتز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سيقوم الجهاز تلقائيا الإضاءة تسليم 6.24 J / مل من الطاقة. الوقت المعتاد للعلاج يأخذ 5-10 دقيقة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد العلاج قفص الاتهام معقم 6 &quot;خط أنابيب مع موصل حقنة الإناث على خط مبة عينة من العلاج وحقيبة التخزين. ضمان المنتج هو تمتزج جيدا ثم نعلق حقنة 5 مل وإزالة عينة بعد العلاج 2 مل. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عيار ما بعد العلاج سامالتنوير القائل في قسم 4. </li></ol></li></ol> 4. البكتيرية العيار الحجمي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقدير عيار من عينات ما قبل العلاج وبعد العلاج وإعداد العدد المناسب من 5 مل أنابيب التخفيف اللازمة لإجراء التخفيف المتسلسل نقطة نهاية كل عينة. جو معقم و مطهر ملء الأنابيب المطلوبة مع 1.8 مل من البيبتون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عيار كل عينة باستخدام نظام التخفيف المتسلسل 10 أضعاف. جو معقم و مطهر نقل 0.2 مل من العينة غير مخفف لأنبوب تخفيف الأول (10 -1). دوامة هذا الأنبوب التخفيف ونقل 0.2 مل إلى أنبوب تخفيف المقبل. مواصلة التخفيف المتسلسل من خلال العدد المطلوب من التخفيفات. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل جو معقم و مطهر 100 ميكرولتر من كل تخفيف لتكون مطلية على لوحة أجار المناسبة (الجدول 1). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام رش خلية العقيمة، توزيعها بالتساوي العينة على كل لوحة أجار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عكس واحتضان لوحات في ظروف مناسبة ( <stroنانوغرام&gt; الجدول 1) لمدة 1-2 أيام التحقق من النمو بشكل دوري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد لوحات مع 30-300 المستعمرات. تعتبر لوحات تحتوي على أكثر من 300 المستعمرات أكثر من أن تحصى (TNTC). تعتبر لوحات تحتوي على أقل من 30 المستعمرات لتكون أقل من الحد من الكمي (LOQ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب عيار من كل عينة الاختبار وتسجيل النتائج على النحو كفو / مل. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام المعادلة التالية لحساب كفو / مل: <img alt="المعادلة 1" fo:content-width="2.5in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq1.jpg" width="250" /></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا لم تكن هناك مستعمرات على أدنى وحة التخفيف، واستخدام المعادلة التالية لحساب الحد كشفها (اللد): <img alt="المعادلة 2" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq2.jpg" width="100" /> و <img alt="المعادلة 3" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq3.jpg" width="100" /> الى اين: N = أقل عدد من الجسيمات (كفو) في صroduct التي يمكن أن يتم الكشف عن بثقة. P = احتمال أن الكائنات الحية الدقيقة سيكون التي لم يتم كشفها. لالثقة 95٪ من الكشف عن الكائنات الحية الدقيقة، P = 0.05. V = إجمالي حجم المنتج في مل ت = حجم مطلي (مل) س مستوى التخفيف من لوحة </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للسيطرة سلبية، لوحة 0.5 مل من البيبتون التي يتم استخدامها لالتخفيفات المسلسل على كل من اثنين من لوحات أجار. استخدام نفس نوع اللوحة كما العينات لفحصها. عكس واحتضان لوحة في الظروف المناسبة لمدة 1-2 أيام فحص للنمو بشكل دوري. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا لوحظ نمو على أي لوحة أجار، لا بد من التخلص منها زجاجة من البيبتون المستخدمة؛ وتبطل أيضا نتائج الدراسة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمكافحة إيجابي، وإعادة عيار الثقافة الأسهم من البكتيريا الذي تم استخدامه. عكس واحتضان لوحات في الظروف المناسبة لمدة 1-2 أيام فحص للنمو بشكل دوري. يجب عيار يكون ± 1.0 تسجيل كفو / مل من السجلإد عيار الأوراق المالية (انظر القسم 1.5) للدراسة أن تعتبر صالحة. </li></ol>

<ol>
	<li>Brecher, M. E., Hay, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+contamination+of+blood+components.">Bacterial contamination of blood components.</a> Clin. Microbiol. Rev. 18 (1), 195-204 (2005).</li><li>Brecher, M. E., Holland, P. V., Pineda, A. A., Tegtmeier, G. E., Yomtovian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+bacteria+in+inoculated+platelets:+implications+for+bacteria+detection+and+the+extension+of+platelet+storage.">Growth of bacteria in inoculated platelets: implications for bacteria detection and the extension of platelet storage.</a> Transfusion. 40 (11), 1308-1312 (2000).</li><li>Cardo, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+inactivation+of+Leishmania+donovani+infantum+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light.">Pathogen inactivation of Leishmania donovani infantum in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Vox Sang. 90 (2), 85-91 (2006).</li><li>Cardo, L. J., Salata, J., Mendez, J., Reddy, H., Goodrich, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+inactivation+of+Trypanosoma+cruzi+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light.">Pathogen inactivation of Trypanosoma cruzi in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Transfus. Apher. Sci. 37 (2), 131-137 (2007).</li><li>Dodd, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+viral+risks+of+blood+and+blood+products.">Current viral risks of blood and blood products.</a> Ann. Med. 32 (7), 469-474 (2000).</li><li>Dodd, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+contamination+and+transfusion+safety:+experience+in+the+United+States.">Bacterial contamination and transfusion safety: experience in the United States.</a> Transfus. Clin. Biol. 10 (1), 6-9 (2003).</li><li>Dumont, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+single-donor+apheresis+platelets+for+bacterial+contamination:+the+PASSPORT+study+results.">Screening of single-donor apheresis platelets for bacterial contamination: the PASSPORT study results.</a> Transfusion. 50 (3), 589-599 (2010).</li><li>Goodrich, R. P., Gilmour, D., Hovenga, N., Keil, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+laboratory+comparison+of+pathogen+reduction+technology+treatment+and+culture+of+platelet+products+for+addressing+bacterial+contamination+concerns.">A laboratory comparison of pathogen reduction technology treatment and culture of platelet products for addressing bacterial contamination concerns.</a> Transfusion. 49 (6), 1205-1216 (2009).</li><li>Greco-Stewart, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serratia+marcescens+strains+implicated+in+adverse+transfusion+reactions+form+biofilms+in+platelet+concentrates+and+demonstrate+reduced+detection+by+automated+culture.">Serratia marcescens strains implicated in adverse transfusion reactions form biofilms in platelet concentrates and demonstrate reduced detection by automated culture.</a> Vox Sang. 102 (3), 212-220 (2012).</li><li>Keil, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Plasmodium+spp.+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light.">Inactivation of Plasmodium spp. in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Transfusion. 53 (10), 2278-2286 (2013).</li><li>Kleinman, S., Chan, P., Robillard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risks+associated+with+transfusion+of+cellular+blood+components+in+Canada.">Risks associated with transfusion of cellular blood components in Canada.</a> Transfus. Med Rev. 17 (2), 120-162 (2003).</li><li>Larsen, C. P., Ezligini, F., Hermansen, N. O., Kjeldsen-Kragh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Six+years'+experience+of+using+the+BacT/ALERT+system+to+screen+all+platelet+concentrates,+and+additional+testing+of+outdated+platelet+concentrates+to+estimate+the+frequency+of+false-negative+results.">Six years' experience of using the BacT/ALERT system to screen all platelet concentrates, and additional testing of outdated platelet concentrates to estimate the frequency of false-negative results.</a> Vox Sang. 88 (2), 93-97 (2005).</li><li>Mundt, J. M., Rouse, L., Van den Bossche, J., Goodrich, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+and+Biological+Mechanisms+of+Pathogen+Reduction+Technologies.">Chemical and Biological Mechanisms of Pathogen Reduction Technologies.</a> Photochem. Photobiol. , (2014).</li><li>Murphy, W. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+platelet+concentrates+for+bacterial+contamination:+low+numbers+of+bacteria+and+slow+growth+in+contaminated+units+mandate+an+alternative+approach+to+product+safety.">Screening platelet concentrates for bacterial contamination: low numbers of bacteria and slow growth in contaminated units mandate an alternative approach to product safety.</a> Vox Sang. 95 (1), 13-19 (2008).</li><li>Brien, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+incidence+and+residual+risk+of+HIV,+HBV+and+HCV+at+Canadian+Blood+Services.">Current incidence and residual risk of HIV, HBV and HCV at Canadian Blood Services.</a> Vox Sang. 103 (1), 83-86 (2012).</li><li>Pearce, S., Rowe, G. P., Field, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+platelets+for+bacterial+contamination+at+the+Welsh+Blood+Service.">Screening of platelets for bacterial contamination at the Welsh Blood Service.</a> Transfus. Med. 21 (1), 25-32 (2011).</li><li>Ramirez-Arcos, S., Kou, Y., Perkins, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+universal+point-of-issue+assay+for+bacterial+detection+in+buffy+coat+platelet+components.">Evaluation of a universal point-of-issue assay for bacterial detection in buffy coat platelet components.</a> Vox Sang. 107 (2), 192-195 (2014).</li><li>Reddy, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+testing+of+a+novel+riboflavin-based+technology+for+pathogen+reduction+and+white+blood+cell+inactivation.">Toxicity testing of a novel riboflavin-based technology for pathogen reduction and white blood cell inactivation.</a> Transfus. Med. Rev. 22 (2), 133-153 (2008).</li><li>Ruane, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemical+inactivation+of+selected+viruses+and+bacteria+in+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+light.">Photochemical inactivation of selected viruses and bacteria in platelet concentrates using riboflavin and light.</a> Transfusion. 44 (6), 877-885 (2004).</li><li>Tonnetti, L., Proctor, M. C., Reddy, H. L., Goodrich, R. P., Leiby, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Mirasol+pathogen+reduction+technology+system+against+Babesia+microti+in+apheresis+platelets+and+plasma.">Evaluation of the Mirasol pathogen reduction technology system against Babesia microti in apheresis platelets and plasma.</a> Transfusion. 50 (5), 1019-1027 (2010).</li><li>Vanlandingham, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemical+inactivation+of+chikungunya+virus+in+plasma+and+platelets+using+the+Mirasol+pathogen+reduction+technology+system.">Photochemical inactivation of chikungunya virus in plasma and platelets using the Mirasol pathogen reduction technology system.</a> Transfusion. 53 (2), 284-290 (2013).</li><li>Walther-Wenke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+bacterial+contamination+of+blood+components+in+Germany:+effect+of+contamination+reduction+measures.">Monitoring bacterial contamination of blood components in Germany: effect of contamination reduction measures.</a> Vox Sang. 100 (4), 359-366 (2011).</li></ol>

ويعمل كل مؤلفي هذه الورقة حاليا من قبل شركة Terumo البنك المركزي التونسي، المطور والشركة المصنعة لنظام Mirasol PRT. رسوم النشر لهذا المقالة الفيديو تم دفعها من قبل شركة Terumo فريق اللواء القتالي.

الفحص الجرثومي أصبح ممارسة شائعة في المؤسسات المصرفية الدم والعديد من المواقع التي تخدم كوسيلة أساسية لمنع نقل الصفائح الدموية ملوثة جرثوميا. على الرغم من أن الفحص البكتيري المحجور عادة غالبية سريعة النمو البكتيريا سالبة الجرام مثل S. marcescens، E. القولونية E. و المذرقية، وهو يناضل من أجل كشف بطيئة النمو البكتيريا موجبة الجرام مثل S. الذهبية، العقدية النيابة. وS. البشروية 8. للأسف، وتورط هذه البكتيريا إيجابية الجرام ثلاثة في ما يزيد عن 50٪ من جميع وحدات الصفيحات الملوثة ونقل الصفائح الدموية من المنتجات التي تحتوي على هذه الكائنات الثلاث قد يؤدي إلى وفيات المرضى 1. ويعتمد الفحص البكتيري على عيار البكتيرية في منتج الصفائح الدموية لتكون عالية بما فيه الكفاية بما فيه الكفاية بحيث يرد كائن واحد على الأقل داخل النموذجية 4-8 مل عينة الفحص. إذا كان عيار البكتيرية ليست عالية بما فيه الكفاية للبكتيريا ليتم القبض في حجم العينة 4-8 مل، يتم وضع وحدة بشكل غير صحيح بأنها سلبية ويتم تحريرها لنقل الدم. قد يكون نهجا بديلا للفحص الجرثومي لتوظيف عملية استباقية التي يمكن القيام بها على جميع وحدات الصفائح الدموية والتي يمكن أن تجعل الكائنات تلويث غير عملي. في هذه الدراسة، تم إضافة التتر عالية من البكتيريا عمدا لوحدات الصفائح الدموية لاختبار قدرتها على الحد الإجمالية للعملية الحد من العوامل المسببة للأمراض ضوء ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية. على الرغم من أن الحمل البكتيري اختبارها في هذه الدراسة تتجاوز بكثير تلك التي توجد عادة في منتجات الدم في وقت التبرع، تساعد هذه الدراسة إلى إثبات أن عملية ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية قادرة على الحد بشكل كبير من عيار البكتيريا قادرة على البقاء في وحدة صفائح الدم الملوثة 2،6-5،4 سجل (الحد 99،7-99،9996٪ من تلويث البكتيريا) (الشكل 2). للحصول على ACCURAالشركة المصرية للاتصالات تخفيض قيمة السجل، فمن الأهمية بمكان أن المشغل لها تقنية العقيم جيدة جنبا إلى جنب مع مهارات pipetting لدقيقة عند تنفيذ الخطوات عيار البكتيرية. pipetting لغير دقيقة عند إجراء التخفيفات المسلسل يمكن أن يؤدي إلى تراكم الأخطاء، وبالتالي لقياس عيار دقيق. البيانات التي تم جمعها في هذه الدراسة تدعم العمل السابق مع الريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية، التي تحدت النظام ضد انخفاض مستوى، تجرثم ذات الصلة سريريا (&lt;20 CFU / وحدة). وقد تم تصميم الدراسة السابقة لتقليد حدث تلوث السريري الفعلي وأظهرت النتائج الريبوفلافين وكان ضوء الأشعة فوق البنفسجية فعالة في منع نمو البكتيريا خلال فترة التخزين الصفائح الدموية لمدة 7 أيام. النمذجة استنادا إلى بيانات من دراسة سابقة تشير إلى أن تقديرات المخاطر الحالية من التلوث الجرثومي للمنتجات الصفائح الدموية يمكن أن تخفض بنسبة تصل إلى 98٪ من المستويات الحالية 8. عملية ضوء ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية تقل عن مثيلاتها في الشاشة البكتيريةجي، والتي أظهرت فعالية 66٪ للكشف عن الملوثات البكتيرية في وحدات الصفيحات عندما تحدى مع الحمولة الجرثومية ذات الصلة سريريا 8 فقط. كما هو الحال مع كل التقنيات والعلاج PRT منتجات الصفائح الدموية لمنع المضاعفات المرتبطة مع وحدات الصفيحات ملوثة جرثوميا لها حدودها. نظم PRT ليست فعالة ضد الجراثيم البكتيرية وليس تعطيل الذيفان الداخلي، وبالتالي حتى لو كان نظام PRT قادر على تعطيل التتر عالية من البكتيريا سالبة الجرام من الذيفان الداخلي المتبقي لا يزال يسبب صدمة إنتانية في المتلقي. وأفضل أداء PRT في وقت مبكر أثناء التخزين قبل البكتيريا يمكن أن تنتشر إلى التتر عالية. في الختام، كما يتضح من مزيج من هاتين الدراستين، فإن عملية ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية هي فعالة في تخفيض الأحمال البكتيرية كل الكائنات إيجابية سلبية الغرام والغرام ويمكن أن تقدم بديلا صالحا للفحص الجرثومي. حافة صورة بشكل روتينيمنتجات ز الصفائح الدموية مع الريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية أيضا لديه فائدة إضافية تتمثل في الحد من انتقال محتمل من العوامل الأخرى التي تنتقل عن طريق الدم مثل الفيروسات والطفيليات.

نقل الصفائح الدموية والبلازما وكرات الدم الحمراء معبأة ومنتجات الدم كلها تلعب دورا رئيسيا في الطب الحديث، ويمكن استخدامها لعلاج الحالات الطبية المختلفة، واستبدال السوائل الحيوية، وفي نهاية المطاف إنقاذ الأرواح. الصفائح الدموية هي نتاج الخلوية التي يتم عزلها إما من الدم الكامل والمجمعة إلى جرعة transfusable أو جمعها من خلال عملية فصل مكونات الدم الصفائح الدموية. الدور الرئيسي الصفائح الدموية في الجسم لوقف النزيف في مواقع الجرح وللمساعدة في الحفاظ الارقاء. المرضى الذين يعانون من انخفاض عدد خلايا الصفائح الدموية (الصفيحات) عرضة لأحداث نزيف عفوية ويتم نقل الصفائح الدموية مع لجلب خلايا الصفائح الدموية على عد مرة أخرى إلى المعدل الطبيعي. يتم تخزين الصفائح الدموية التي تم جمعها لمدة أقصاها 5-7 أيام ويتم تخزينها في 22 ± 2 ° C بينما في إطار التحريض المستمر. وعلى الرغم من توفير خصائص نقل الصفائح الدموية الحياة لا يزال هناك خطر طفيف للمستفيدين نقل بسبب التعاونntamination من هذه المنتجات من قبل الطفيليات والبكتيريا والفيروسات 11. تنفيذ الفيروسي اختبار الحمض النووي (NAT) قد انخفض بشكل كبير من خطر انتقال الفيروس من وكلاء المنقولة بالدم كبير، مثل فيروس التهاب الكبد الوبائي (سي)، وفيروس التهاب الكبد B (HBV) وفيروس نقص المناعة البشري (HIV) 5. ونشر مؤخرا من خدمات الدم الكندية يقدر المخاطر المتبقية لهذه العوامل أن تكون 1 في 8 ملايين التبرعات لفيروس نقص المناعة البشرية، 1 في 6.7 مليون التبرعات لHCV و 1 في 1700000 التبرعات لHBV 15. على الرغم من أن البكتيريا حشد عادة أقل من الاهتمام في الرأي العام، وقد قدرت وتيرة التلوث الجرثومي في منتجات الصفائح الدموية أن يكون مرتفعا كما 1: 1000 (7) ولأن يتم نقل الملايين من المنتجات الصفائح الدموية في كل عام يتعرض العديد من المستلمين من المحتمل أن تكون مهددة للحياة مضاعفات مثل الإنتان 6. وتشير البحوث إلى أن الحمل البكتيري في الوقتتلوث منخفضة، &lt;100 مستعمرة (كفو) / المنتج 2،16، إلا أن المواد الغذائية الغنية البيئة ودرجة حرارة الغرفة تخزين يسمح تلويث البكتيريا على التكاثر إلى التتر عالية بشكل خطير قبل نقل الدم. حاليا، الطرق المعتمدة فقط المتاحة لمنع المنتجات الملوثة البكتريا من الوصول إلى المتلقي الصفائح الدموية هي من خلال استخدام نظم ثقافة قائمة ونقطة السريع للاختبارات الرعاية. لفترة وجيزة، لأنظمة الثقافة القائمة يتم تخزين المنتجات الصفائح الدموية على المحرض على 22 درجة مئوية لمدة 12-24 ساعة للسماح للبكتيريا تتكاثر في المنتج الذي يتم فيه إزالة عينة 4-8 مل من المنتج الصفائح الدموية وتلقيح في زجاجة تحتوي وسائل الإعلام المغذيات. يتم وضع الزجاجة إلى أداة التي تراقب الزجاجة لنمو البكتيريا. إذا كانت أداة بالكشف عن نمو البكتيريا في زجاجة وترفع علم ذلك ويتم تجاهل وحدة الصفائح الدموية المقابلة. ومع أن هذه العملية ناجحة بشكل معقول في الكشف عن غرو سريعالكائنات الجناح، العديد من الأنواع بطيئة المتنامية التي لا تنمو إلى عيار مرتفع بما فيه الكفاية ليتم الكشف عن، وبالتالي خلق إمكانية للوحدات سلبية كاذبة ان يفرج عنها لنقل 7،12،14،16،22. على عكس أنظمة الكشف عن ثقافة قائمة، وعادة ما يقوم نقطة السريع للاختبارات الرعاية في وقت لاحق في فترة التخزين الصفائح الدموية عند زيادة الحمولة الجرثومية بشكل كبير. يطلب من التتر أعلى نقطة منذ اختبارات الرعاية أقل حساسية من نظم ثقافة قائمة، وإلا موثوق كشف البكتيريا بمجرد وصولها إلى عيار ≥1 × 10 3 خلية / مل 17. ولكن مثل هذه الاختبارات يمكن أن توفر النتائج في غضون 1 ساعة من أخذ العينات. وقد أدى التباين في أداء هذه الاختبارات إلى الإفراج عن منتج سلبي كاذبة، مما تسبب في رد فعل للصرف الصحي فادح في المتلقي 9. وسيلة بديلة لمكافحة قضية التلوث الجرثومي للمنتجات الصفائح الدموية هي من خلال الاستخدام الروتيني لبروك للحد من مسببات المرضوفاق سطيف التي يمكن تعطيل البكتيريا الملوثة بدلا من محاولة كشفها. باستخدام الريبوفلافين باعتبارها الضيائي، بالاشتراك مع ضوء الأشعة فوق البنفسجية، وقد تبين للحد من العدوى من مجموعة واسعة من الملوثات المسببة للأمراض التي تنتقل عن طريق الدم، بما في ذلك البكتيريا 3،4،8،10،19-21. استخدام لريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية ضوء للحد من مسببات المرض غير سامة وغير مطفرة، وقد أظهرت مكونات المعالجة ضوء ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية أن تكون آمنة للمتلقي نقل فضلا عن تلك التعامل مع منتجات الدم 18. باختصار، يمكن جزيئات الريبوفلافين المنتسبين مع الأحماض النووية (DNA و RNA) من البكتيريا، والطفيليات والفيروسات وأية خلية الأنوية (مثل خلايا الدم البيضاء). التعرض للأشعة فوق البنفسجية ينشط الريبوفلافين، مما تسبب في تغيير كيميائي لمجموعات وظيفية من الأحماض النووية (في المقام الأول قواعد جوانين)، وبالتالي منع تكرار و / أو نسخ من الأحماض النووية ومغادرة الحي المعطل 13. خلايا منزوع النواة مثل لوحةيتيح ولا تتأثر خلايا الدم الحمراء التي كتبها الكيمياء الريبوفلافين نظرا لعدم وجود الحمض النووي. العمل السابق مع التكنولوجيا ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية ضوء تقييم مجموعة مختارة من البكتيريا باستخدام التصميم التجريبي يهدف إلى تقليد المنتج الصفائح الدموية الملوثة مع الحمولة الجرثومية ذات الصلة سريريا (&lt;20 CFU / المنتج) 8. وكان الهدف من هذه الدراسة هو تقييم عملية ضوء ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية ضد عيار عالية التلوث الجرثومي (&gt; 1.0 × 10 5 خلية / مل) في منتجات الصفائح الدموية العلاج في البلازما من أجل قياس قدرة الحد البكتيرية الكلية للنظام. واستنادا إلى البيانات التي تم جمعها من الدراسات hemovigilance 1، وقد تم اختيار لجنة من تحدث عادة الكائنات الإيجابية السلبية وغرام غرام للتقييم في هذه الدراسة، وشملت الأنواع التالية: المكورات العنقودية البشروية، المكورات العنقودية الذهبية، العقدية هين، العقدية المقيحة، السراتية الذابلة، يرسينيا القولون ،neotomae البروسيلا، الشمعية العصوية (شكل الخضري)، Esherichia القولونية، الزائفة الزنجارية والكلبسيلة الرئوية. جميع الكائنات الحية، باستثناء B. الشمعية، تم الحصول عليها من ATCC ووضع أولوية الحصول على السلالات البكتيرية التي تم تحديدها على أنها معزولة عن مكونات الدم. وB. اختبار الشمعية في هذه الدراسة هو سلالة السريرية معزولة داخليا من منتج الصفائح الدموية الملوثة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mirasol Illuminator</td>
			<td>Terumo BCT</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mirasol Treatment/Storage Bag</td>
			<td>Terumo BCT</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematology Analyzer</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td>Ac&#8226;T diff&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Gas Analyzer</td>
			<td>Siemens</td>
			<td>RapidLab 1265&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Docking Device</td>
			<td>Terumo BCT</td>
			<td>TSCD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet Incubator</td>
			<td>Helmer</td>
			<td>PC2200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital Incubator Shaker</td>
			<td>Lab-Line</td>
			<td align="right">4628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry Incubator</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>Iso-temp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II A/B3 Biosafety Cabinet</td>
			<td>Thermo-forma</td>
			<td align="right">1286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing Sealer</td>
			<td>Sebra</td>
			<td>Smart Sealer II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table Top Centrifuge</td>
			<td>IEC</td>
			<td>Centra GP8R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td align="right">309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td align="right">309650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Dilution Tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>211-0058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td align="right">430290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>P-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette</td>
			<td>Rainin</td>
			<td>R-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Repeat Pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td align="right">4780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-200 &#181;L Filter Tip</td>
			<td>Costar</td>
			<td align="right">4810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL Disposable Serrological Pipette</td>
			<td>Costar</td>
			<td align="right">4489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Disposable Serrological Pipette</td>
			<td>Costar</td>
			<td align="right">4487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mL 500 &#181;M Riboflavin</td>
			<td>Terumo BCT</td>
			<td>35 mL 500 &#181;M&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brucella Agar with 5% Horse Blood</td>
			<td>BBL</td>
			<td align="right">221547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>B9993</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone Water</td>
			<td>BD</td>
			<td align="right">257087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypticase Soy Broth</td>
			<td>BD</td>
			<td align="right">299113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypticase Soy Agar</td>
			<td>Remel</td>
			<td>R01917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Inactivated Horse Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td align="right">26050</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

treatment of platelet products with riboflavin and uv light: effectiveness against high titer bacterial contamination

منذ فترة طويلة واعترف تلوث حدات الصفائح الدموية عن طريق البكتيريا باعتباره خطرا نقل كبير بسبب ظروف التخزين بعد التبرع الخاصة بهم. يتم تخزين المنتجات بشكل روتيني عند 22 درجة مئوية على شاكر تهييج، وهي حالة يمكن أن تعزز نمو البكتيريا. على الرغم من أن العدد الكلي للبكتيريا يعتقد أن قدم إلى منتج الصفائح الدموية منخفضة للغاية، ويمكن لهذه البكتيريا تتكاثر إلى عيار عالية جدا قبل نقل الدم، ما قد يؤدي في أحداث سلبية خطيرة. وكان الهدف من هذه الدراسة لتقييم عملية الحد من العوامل المسببة للأمراض الريبوفلافين استنادا ضد فريق من البكتيريا التي تم تحديدها على أنها ملوثات المشتركة للمنتجات الصفائح الدموية. وشملت هذه اللوحة الكائنات التالية: S. البشروية، S. المذهبة، S. هين، المقيحة S.، S. marcescens، Y. القولون، B. neotomae، B. الشمعية، كولاي، P. الزنجارية وK. الرئوية. تم تلقيح كل وحدة صفائح مع الحمولة الجرثومية عالية وأزيلت عينات بأوراسكوم تليكوم القابضة قبل وبعد العلاج. مستعمرة تشكيل الفحص، باستخدام نظام نقطة التخفيف نهاية، وكان يستخدم لتحديد ما قبل العلاج وبعد العلاج التتر البكتيرية. تم احتساب الحد سجل عن طريق طرح عيار بعد العلاج من عيار ما قبل المعالجة. وقد لوحظت التخفيضات السجل التالي: S. البشروية 4.7 سجل (99.998٪)، المكورات العنقودية الذهبية 4.8 سجل (99.998٪)، S. هين 3.7 سجل (99.98٪)، S. المقيحة 2.6 سجل (99.7٪)، S. marcescens 4.0 سجل (99.99٪)، Y. القولون 3،3 سجل (99.95٪)، B. neotomae 5.4 سجل (99.9996٪)، B. الشمعية 2.6 سجل (99.7٪)، E. القولونية ≥5.4 سجل (99.9996٪)، P. الزنجارية 4.7 سجل (99.998٪) وK . الرئوية 2.8 سجل (99.8٪). نتائج هذه الدراسة تشير إلى أن العملية يمكن أن تساعد على خفض خطر نقل الأحداث السلبية الحادة المرتبطة التلوث الجرثومي.

تم تقييم الحد من أحد عشر الأنواع البكتيرية المختلفة باستخدام عملية PRT ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية ضوء القائمة. هذه العوامل تمثل بعض الملوثات أكثر شيوعا من منتجات الصفائح الدموية وتشمل خمسة موجبة الجرام وستة الكائنات السلبية الغرام. تم تقييم لا يقل عن ستة منتجات الصفائح الدموية في الكائن الحي وذلك بحقن كل منتج مع ما يكفي من البكتيريا لانتاج&gt; 1.0 × 10 5 خلية / مل عيار النهائي من البكتيريا في المنتجات الصفائح الدموية. قبل العلاج وإزالة عينة لتحديد عيار قبل المعالجة، وبعد ذلك كان يعامل المنتج الصفائح الدموية على الفور مع الريبوفلافين وعملية للأشعة فوق البنفسجية. بعد العلاج من المنتجات الصفائح الدموية لوحظت تخفيضات السجل التالي: S. البشروية 4.7 سجل (99.998٪)، المكورات العنقودية الذهبية 4.8 سجل (99.998٪)، S. هين 3.7 سجل (99.98٪)، S. المقيحة 2.6 سجل (99.7٪)، S. marcescens 4.0 سجل (99.99٪)، Y. القولون 3،3 سجل (99.95٪)، B.neotomae 5.4 سجل (99.9996٪)، B. الشمعية 2.6 سجل (99.7٪)، E. القولونية ≥ 5.4 سجل (99.9996٪)، P. الزنجارية 4.7 سجل (99.998٪) وK. الرئوية 2.8 سجل (99.8٪) (الشكل 2). اجتمع جميع وحدات مواصفات النظام كما سبق للالريبوفلافين وعملية للأشعة فوق البنفسجية. تم إجراء اختبار تخفيض إضافي مع S. المقيحة باستخدام معطف الشهباء الصفائح الدموية المشتقة. لم يلاحظ وجود اختلاف كبير في الحد من S. المقيحة في معطف الشهباء الصفائح الدموية المشتقة مقابل الصفائح الدموية فصادة (لا تظهر البيانات). <img alt="الجدول 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820table1.jpg" /> الجدول 1: شروط النمو الأنواع البكتيرية تقييمها باستخدام ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية. وقد تم اختيار لجنة من كل من سلبية الغرام والغرام البكتيريا الإيجابية التي ثبت تلوث منتجات الصفائح الدموية لهذه الدراسة. شروط النمو (درجة الحرارة ونوع الوسائط) تستخدم لنشر وتيتيص يتم عرض الكائنات الحية. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig1.jpg" /> الشكل 1: ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية عملية تخفيض ضوء العوامل المسببة للأمراض. تم حله الريبوفلافين في المياه المالحة 0.9٪ عند تركيز الاسمي 500 ميكرومتر. وكان محلول معقم اتصال واستنزفت في كل منتج الصفائح الدموية. تمت إضافة البكتيريا جو معقم و مطهر لكل وحدة الصفائح الدموية ومن ثم تعامل مع 6.2 J / مل من الطاقة للأشعة فوق البنفسجية (حوالي 6-10 دقائق). في هذا المختبر في دراسة تم أخذ عينات وحدة صفائح الدم بعد المعالجة لتحديد عيار البكتيرية النهائي. <img alt="الرقم 2" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig2.jpg" /> الشكل 2: الحد من الأنواع البكتيرية المختلفة عندما تعامل مع الريبوفلافين وفيتامين بي ضوء الأشعة فوق البنفسجية، وكان يستخدم الأشعة فوق البنفسجية للحد من الحمل البكتيري من الملوثات البكتيرية الشائعة لمنتجات الصفائح الدموية. الحد سجل 10 هو الفرقبين متوسط ​​عيار قبل المعالجة ومتوسط ​​عيار بعد العلاج. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52820/52820fig2highres.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination at JoVE.com

Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

The storage conditions of platelet products create an ideal environment for bacterial contaminants to multiply to dangerous levels. The goal of this study was to use a colony forming assay to evaluate a riboflavin based pathogen reduction process against high titer bacterial contamination in human platelet products.

علاج منتجات صفائح الدم مع فيتامين بي وضوء الأشعة فوق البنفسجية: فعالية ضد ارتفاع العيار الحجمي البكتيرية تلوث

Contamination of platelet units by bacteria has long been acknowledged as a significant transfusion risk due to their post-donation storage conditions. ...

treatment-platelet-products-with-riboflavin-uv-light-effectiveness

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

13.5K Views.  Scientific Affairs. The storage conditions of platelet products create an ideal environment for bacterial contaminants to multiply to dangerous levels. The goal of this study was to use a colony forming assay to evaluate a riboflavin based pathogen reduction process against high titer bacterial contamination in human platelet products.

Video: Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen interactions 1. The major cell types of the innate immune system, macrophages and neutrophils, develop during the first days of embryogenesis prior to the maturation of lymphocytes that are required for adaptive immune responses. The ease of obtaining large numbers of embryos, their accessibility due to external development, the optical transparency of embryonic and larval stages, a wide range of genetic tools, extensive mutant resources and collections of transgenic reporter lines, all add to the versatility of the zebrafish model. Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. typhimurium) and Mycobacterium marinum can reside intracellularly in macrophages and are frequently used to study host-pathogen interactions in zebrafish embryos. The infection processes of these two bacterial pathogens are interesting to compare because S. typhimurium infection is acute and lethal within one day, whereas M. marinum infection is chronic and can be imaged up to the larval stage 2, 3. The site of micro-injection of bacteria into the embryo (Figure 1) determines whether the infection will rapidly become systemic or will initially remain localized. A rapid systemic infection can be established by micro-injecting bacteria directly into the blood circulation via the caudal vein at the posterior blood island or via the Duct of Cuvier, a wide circulation channel on the yolk sac connecting the heart to the trunk vasculature. At 1 dpf, when embryos at this stage have phagocytically active macrophages but neutrophils have not yet matured, injecting into the blood island is preferred. For injections at 2-3 dpf, when embryos also have developed functional (myeloperoxidase-producing) neutrophils, the Duct of Cuvier is preferred as the injection site. To study directed migration of myeloid cells towards local infections, bacteria can be injected into the tail muscle, otic vesicle, or hindbrain ventricle 4-6. In addition, the notochord, a structure that appears to be normally inaccessible to myeloid cells, is highly susceptible to local infection 7. A useful alternative for high-throughput applications is the injection of bacteria into the yolk of embryos within the first hours after fertilization 8. Combining fluorescent bacteria and transgenic zebrafish lines with fluorescent macrophages or neutrophils creates ideal circumstances for multi-color imaging of host-pathogen interactions. This video article will describe detailed protocols for intravenous and local infection of zebrafish embryos with S. typhimurium or M. marinum bacteria and for subsequent fluorescence imaging of the interaction with cells of the innate immune system.

Transparent zebrafish embryos have proved useful model hosts to visualize and functionally study interactions between innate immune cells and intracellular bacterial pathogens, such as Salmonella typhimurium and Mycobacterium marinum. Micro-injection of bacteria and multi-color fluorescence imaging are essential techniques involved in the application of zebrafish embryo infection models.

إصابة الأجنة الزرد مع مسببات الأمراض البكتيرية بين الخلايا

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

A Parasite Rescue and Transformation Assay for Antileishmanial Screening Against Intracellular Leishmania donovani Amastigotes in THP1 Human Acute Monocytic Leukemia Cell Line

Leishmaniasis is one of the world's most neglected diseases, largely affecting the poorest of the poor, mainly in developing countries. Over 350 million people are considered at risk of contracting leishmaniasis, and approximately 2 million new cases occur yearly1. Leishmania donovani is the causative agent for visceral leishmaniasis (VL), the most fatal form of the disease. The choice of drugs available to treat leishmaniasis is limited 2;current treatments provide limited efficacy and many are toxic at therapeutic doses. In addition, most of the first line treatment drugs have already lost their utility due to increasing multiple drug resistance 3. The current pipeline of anti-leishmanial drugs is also severely depleted. Sustained efforts are needed to enrich a new anti-leishmanial drug discovery pipeline, and this endeavor relies on the availability of suitable in vitro screening models.
In vitro promastigotes 4 and axenic amastigotes assays5 are primarily used for anti-leishmanial drug screening however, may not be appropriate due to significant cellular, physiological, biochemical and molecular differences in comparison to intracellular amastigotes. Assays with macrophage-amastigotes models are considered closest to the pathophysiological conditions of leishmaniasis, and are therefore the most appropriate for in vitro screening. Differentiated, non-dividing human acute monocytic leukemia cells (THP1) (make an attractive) alternative to isolated primary macrophages and can be used for assaying anti-leishmanial activity of different compounds against intracellular amastigotes.
Here, we present a parasite-rescue and transformation assay with differentiated THP1 cells infected in vitro with Leishmania donovani for screening pure compounds and natural products extracts and determining the efficacy against the intracellular Leishmania amastigotes. The assay involves the following steps: (1) differentiation of THP1 cells to non-dividing macrophages, (2) infection of macrophages with L. donovani metacyclic promastigotes, (3) treatment of infected cells with test drugs, (4) controlled lysis of infected macrophages, (5) release/rescue of amastigotes and (6) transformation of live amastigotes to promastigotes. The assay was optimized using detergent treatment for controlled lysis of Leishmania-infected THP1 cells to achieve almost complete rescue of viable intracellular amastigotes with minimal effect on their ability to transform to promastigotes. Different macrophage:promastigotes ratios were tested to achieve maximum infection. Quantification of the infection was performed through transformation of live, rescued Leishmania amastigotes to promastigotes and evaluation of their growth by an alamarBlue fluorometric assay in 96-well microplates. This assay is comparable to the currently-used microscopic, transgenic reporter gene and digital-image analysis assays. This assay is robust and measures only the live intracellular amastigotes compared to reporter gene and image analysis assays, which may not differentiate between live and dead amastigotes. Also, the assay has been validated with a current panel of anti-leishmanial drugs and has been successfully applied to large-scale screening of pure compounds and a library of natural products fractions (Tekwani et al. unpublished).

A Parasite Rescue and Transformation Assay for Antileishmanial Screening Against Intracellular Leishmania donovani Amastigotes in THP1 Human Acute Monocytic Leukemia Cell Line

A parasite-rescue and transformation assay with THP1 cells infected in vitro with Leishmania donovani has been optimized for anti-leishmanial drug screening. The assay involves differentiation of THP1 cells, infection with promastigotes, treatment with test drugs, controlled lysis of the infected macrophages, rescue of amastigotes, transformation to promastigotes and monitoring promastigote growth and proliferation with a fluorometric assay.

A الفحص الإنقاذ والتحول لفحص مضاد الليشمانيات الطفيلي داخل الخلايا ضد<em&gt; الليشمانيا الدونوفانية</em&gt; Amastigotes في THP1 الحادة اللوكيميا الإنسان الوحيدات الخط الخليوي

Leishmaniasis is  one of the world's most neglected diseases, largely affecting the  poorest of the poor, mainly in developing countries. Over 350 million ...

A Tetracycline-regulated Cell Line Produces High-titer Lentiviral Vectors that Specifically Target Dendritic Cells

Lentiviral vectors (LVs) are a powerful means of delivering genetic material to many types of cells. Because of safety concerns associated with these HIV-1 derived vectors, producing large quantities of LVs is challenging. In this paper, we report a method for producing high titers of self-inactivating LVs. We retrovirally transduce the tet-off stable producer cell line GPR to generate a cell line, GPRS, which can express all the viral components, including a dendritic cell-specific glycoprotein, SVGmu. Then, we use concatemeric DNA transfection to transfect the LV transfer plasmid encoding a reporter gene GFP in combination with a selectable marker. Several of the resulting clones can produce LV at a titer 10-fold greater than what we achieve with transient transfection. Plus, these viruses efficiently transduce dendritic cells in vitro and generate a strong T cell immune response to our reporter antigen. This method may be a good option for producing strong LV-based vaccines for clinical studies of cancer or infectious diseases.

Here, we use retroviral transduction and concatemeric transfection to create a cell line that can express the components of a lentiviral vector (LV) in the absence of tetracycline. This LV encodes GFP and is pseudotyped with a glycoprotein, SVGmu, which is specific for a receptor on dendritic cells.

خط خلية التتراسيكلين التنظيم وتنتج ناقلات lentiviral عالي عيار التي تستهدف على وجه التحديد خلايا الجذعية

Lentiviral  vectors (LVs) are a powerful means of delivering genetic material to many types  of cells. Because of safety concerns associated with these ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence factors, which can subvert and manipulate key host functions. The study of host/pathogen interactions is therefore extremely important to understand bacterial infections and develop alternative strategies to counter infectious diseases. This approach however, requires the development of new high-throughput assays for the unbiased, automated identification and characterization of bacterial virulence determinants. Here, we describe a method for the generation of a GFP-tagged mutant library by transposon mutagenesis and the development of high-content screening approaches for the simultaneous identification of multiple transposon-associated phenotypes. Our working model is the intracellular bacterial pathogen Coxiellaburnetii, the etiological agent of the zoonosis Q fever, which is associated with severe outbreaks with a consequent health and economic burden. The obligate intracellular nature of this pathogen has, until recently, severely hampered the identification of bacterial factors involved in host pathogen interactions, making of Coxiella the ideal model for the implementation of high-throughput/high-content approaches.

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Coxiella burnetii is an obligate intracellular Gram-negative bacterium responsible for the zoonotic disease Q fever. Here we describe methods for the generation of Coxiella fluorescent transposon mutants as well as the automated identification and analysis of the resulting internalization, replication and cytotoxic phenotypes.

جيل ومتعدد المظهري فحص عالية المحتوى من<em&gt; الكوكسيلا البورنيتية</em&gt; المسوخ ينقول

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional Chinese medicine and food safety/toxicology. Many of the classical analysis techniques require expensive equipment and/or expertise. Notably, enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) have become an emerging method for the analysis of foods and natural products. This method is based on antibody-mediated detection of the target components. However, as many of the bioactive components in natural products are small (&lt;1,000 Da) and do not induce an immune response, creating monoclonal antibodies (mAbs) against them is often difficult. In this protocol, we provide a detailed explanation of the steps required to generate mAbs against target molecules as well as those needed to create the associated indirect competitive (ic)ELISA for the rapid analysis of the compound in multiple samples. The procedure describes the synthesis of the artificial antigen (i.e., the hapten-carrier conjugate), immunization, cell fusion, monoclonal hybridoma preparation, characterization of the mAb, and the ELISA-based application of the mAb. The hapten-carrier conjugate was synthesized by the sodium periodate method and evaluated by MALDI-TOF-MS. After immunization, splenocytes were isolated from the immunized mouse with the highest antibody titer and fused with the hypoxanthine-aminopterin-thymidine (HAT)-sensitive mouse myeloma cell line Sp2/0 -Ag14 using a polyethylene glycol (PEG)-based method. The hybridomas secreting mAbs reactive to the target antigen were screened by icELISA for specificity and cross-reactivity. Furthermore, the limiting dilution method was applied to prepare monoclonal hybridomas. The final mAbs were further characterized by icELISA and then utilized in an ELISA-based application for the rapid and convenient detection of the example hapten (naringin (NAR)) in natural products.

This article provides a detailed protocol for the preparation and evaluation of monoclonal antibodies against natural products for use in various immunoassays. This procedure includes immunization, cell fusion, indirect competitive ELISA for positive clone screening, and monoclonal hybridoma preparation. The specifications for antibody characterization using MALDI-TOF-MS and ELISA analyses are also provided.

جيل من الأجسام المضادة ضد المنتجات الطبيعية

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing activity by assessing the ability of antibodies in serum to bind to bacteria and activate complement. This complement activation results in the lysis and killing of the target bacteria. These assays are valuable because they go beyond quantifying antibody production to elucidate the biological functions that these antibodies have, allowing researchers to study the role that antibodies may play in preventing infection. SBAs have been used to study immune responses for many human pathogens, but there is no widely accepted methodology for Shigella at present. Historically, SBAs have been very labor-intensive, requiring many time-consuming steps to accurately quantify surviving bacteria. This protocol describes a simple, robust, and high-throughput assay that measures functional antibodies specific for Shigella in serum in vitro. The method described here offers many advantages over traditional SBAs, including the use of frozen bacterial stocks, 96 well assay plates, a micro-culture system, and automated colony-counting. All of these modifications make this assay less labor-intensive and more high-throughput. This protocol is simpler and faster to perform than traditional SBAs while still using simple technologies and readily available reagents. The protocol has been successfully applied in multiple independent laboratories and the assay is robust and reproducible. The assay can be used to assess immune responses in pre-clinical as well as clinical studies. Quantifying shigellacidal antibody titers both before and after antigen exposure (either by immunization or infection) allows for a broader understanding of how functional antibody responses are generated and their contribution to protective immunity. The development of this standardized, well-characterized assay may greatly facilitate Shigella vaccine design.

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

Here we present a protocol to measure Shigellacidal activity of antibodies in serum. Serum is mixed with bacteria and exogenous complement, incubated, and the reaction mixture is plated on agar plates. Viable bacteria form colonies which are counted, using an automated colony enumerator, and used to determine the bactericidal titer.

الفائق دوسنتاريا-مقايسة جراثيم معينة

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental procedure in which phagocytic cells are co-cultured with bacterial units. The immune cells will phagocytose and kill the bacterial cultures in a complement-dependent manner. The efficiency of the immune-mediated cell killing is dependent on a number of factors and can be used to determine how different bacterial cultures compare with regard to resistance to cell death. In this way, the efficacy of potential immune-based therapeutics can be assessed against specific bacterial strains and/or serotypes. In this protocol, we describe a simplified OPKA that utilizes basic culture conditions and cell counting to determine bacterial cell viability after co-culture with treatment conditions and HL-60 immune cells. This method has been successfully utilized with a number of different pneumococcal serotypes, capsular and acapsular strains, and other bacterial species. The advantages of this OPKA protocol are its simplicity, versatility (as this assay is not limited to antibody treatments as opsonins), and minimization of time and reagents to assess basic experimental groups.

This opsonophagocytic killing assay is used to compare the ability of phagocytic immune cells to respond to and kill bacteria based on different treatments and/or conditions. Classically, this assay serves as the gold&#160;standard for assessing effector functions of antibodies raised against a bacterium as opsonin.

أوبسونوفاجوسيتيك قتل المقايسة لتقييم الاستجابات المناعية ضد مسببات الأمراض البكتيرية

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...

Measurement of Specific Mycobacterial Mistranslation Rates with Gain-of-function Reporter Systems

The translation of genes into proteins is prone to errors. Although the average rate of translational error in model systems is estimated to be 1/10,000 per codon, the actual error rates vary widely, depending on the species, environment, and codons being studied. We have previously shown that mycobacteria use a two-step pathway for the generation of aminoacylated glutamine and asparagine tRNAs and that this is specifically associated with relatively high error rates due to the modulation of mistranslation rates by an essential component of the pathway, the amidotransferase GatCAB. We modified a previously employed Renilla-Firefly dual-luciferase system that had been used to measure mistranslation rates in Escherichia coli for use in mycobacteria to measure specific mistranslation rates of glutamate at glutamine codons and aspartate for asparagine codons. Although this reporter system was suitable for the accurate estimation of specific error rates, lack of sensitivity and requirements for excessive manipulation steps made it unsuitable for high-throughput applications. Therefore, we developed a second gain-of-function reporter system, using Nluc luciferase and green fluorescent protein (GFP), which is more amenable to medium/high-throughput settings. We used this system to identify kasugamycin as a small molecule that can decrease mycobacterial mistranslation. Although the reporters that we describe here have been used to measure specific types of mycobacterial mistranslation, they may be modified to measure other types of mistranslation in a number of model systems.

In this article, we present two complementary methods to measure specific rates of translational error and mistranslation in the model mycobacterium, Mycobacterium smegmatis, using gain-of-function reporter systems. The methods can be employed to measure accurate error rates in low throughput or relative error rates in a more high-throughput setting.

قياس معدلات المتفطرات المحددة مع أنظمه المراسلة التي تكتسب وظيفة

The translation of genes into proteins is prone to errors. Although the average rate of translational error in model systems is estimated to be 1/10,000 ...

Production of High-Titer Infectious Influenza Pseudotyped Particles with Envelope Glycoproteins from Highly Pathogenic H5N1 and Avian H7N9 Viruses

The occasional direct transmission of the highly pathogenic avian influenza A virus H5N1 (HPAI H5N1) and H7N9 to humans and their lethality are serious public health issues and suggest the possibility of an epidemic. However, our molecular understanding of the virus is rudimentary, and it is necessary to study the biological properties of its envelope proteins as therapeutic targets and to develop strategies to control infection. We developed a solid viral pseudotyped particle (pp) platform to study avian influenza virus, including the functional analysis of its hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) envelope glycoproteins, the reassortment characteristics of the HAs and NAs, receptors, tropisms, neutralizing antibodies, diagnosis, infectivity, for the purposes of drug development and vaccine design. Here, we describe an experimental procedure to establish pps with the envelope glycoproteins (HA, NA) from two influenza A strains (HAPI H5N1 and 2013 avian H7N9). Their generation is based on the capacity of some viruses, such as murine leukemia virus (MLV), to incorporate envelope glycoproteins into a pp. In addition, we also detail how these pps are quantified with RT-qPCR, and the infectivity detection of native and mismatched virus pps depending on the origin of the HAs and NAs. This system is highly flexible and adaptable and can be used to establish viral pps with envelope glycoproteins that can be incorporated in any other type of enveloped virus. Thus, this viral particle platform can be used to study wild viruses in many research investigations.

This protocol describes an experimental process to produce high-titer infectious viral pseudotyped particles (pp) with envelope glycoproteins from two influenza A strains and how to determine their infectivity. This protocol is highly adaptable to develop pps of any other type of enveloped viruses with different envelope glycoproteins.

إنتاج جسيمات الإنفلونزا المعدية العالية التهابات بالمغلفات بالبروتينات السكرية المسببة للامراض الشديدة H5N1 وفيروسات الطيور H7N9

The occasional direct transmission of the highly pathogenic avian influenza A virus H5N1 (HPAI H5N1) and H7N9 to humans and their lethality are serious ...

Establishing a Porcine Ex Vivo Cornea Model for Studying Drug Treatments against Bacterial Keratitis

When developing novel antimicrobials, the success of animal trials is dependent on accurate extrapolation of antimicrobial efficacy from in vitro tests to animal infections in vivo. The existing in vitro tests typically overestimate antimicrobial efficacy as the presence of host tissue as a diffusion barrier is not accounted for. To overcome this bottleneck, we have developed an ex vivo porcine corneal model of bacterial keratitis using Pseudomonas aeruginosa as a prototypic organism. This article describes the preparation of the porcine cornea and protocol for establishment of the infection. Bespoke glass molds enable straightforward setup of the cornea for infection studies. The model mimics in vivo infection as bacterial proliferation is dependent on the ability of the bacterium to damage corneal tissue. Establishment of infection is verified as an increase in the number of colony forming units assessed via viable plate counts. The results demonstrate that infection can be established in a highly reproducible fashion in the ex vivo corneas using the method described here. The model can be extended in the future to mimic keratitis caused by microorganisms other than P. aeruginosa. The ultimate aim of the model is to investigate the effect of antimicrobial chemotherapy on the progress of bacterial infection in a scenario more representative of in vivo infections. In so doing, the model described here will reduce the use of animals for testing, improve success rates in clinical trials and ultimately enable rapid translation of novel antimicrobials to the clinic.

This article describes a step-by-step protocol to set up an ex vivo porcine model of bacterial keratitis. Pseudomonas aeruginosa is used as a prototypic organism. This innovative model mimics in vivo infection as bacterial proliferation is dependent on the ability of the bacterium to damage corneal tissue.

إنشاء نموذج بورسين السابقين فيفو القرنية لدراسة العلاجات الدوائية ضد التهاب القرنية البكتيرية

When developing novel antimicrobials, the success of animal trials is dependent on accurate extrapolation of antimicrobial efficacy from in vitro tests to ...