The authors have no acknowledgements.

1. חיידקים השעיה הכנה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצלחת תרבות מפוספסת, סביבה נקיה מחיידקים לחסן מושבה אחת לתוך בקבוק סטרילי 250 מיליליטר מכיל של תקשורת הצמיחה המתאימה (טבלת 1) 100 מיליליטר בדרך של לולאת inoculating סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הבקבוק לתוך חממה רועדת מסלולית בתנאים המתאימים (טבלת 1) במשך 1-2 ימים, בדיקה לצמיחה מעת לעת. קבע את המהירות שייקר עד 140 סל&quot;ד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסביבה נקיה מהחיידקים להעביר את ההשעיה החיידקים לתוך צינורות שני 50 מיליליטר סטרילי חרוטי ו צנטריפוגות הצינורות ב 3000 XG במשך 20 דקות ב 23 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant ו resuspend כל גלולה חיידקים עם 15 מיליליטר של מים סטריליים peptone. מערבולת במידת צורך. מערבבים את תרבות חיידקים המושעית לצינור אחד / מיכל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כייל מניית התרבות בשלושה עותקים לסעיף 4 כדי לקבוע את כייל תרבות המניה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכניס למקרר לתקופה של עד 2 שבועות ב 477; עד צורך 2 מעלות צלזיוס. Re-כייל התרבות בעת השימוש, ראה שלב 4.8. </li></ol> 2. טסיות מוצרי הכנה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף מוצר טסיות סטנדרטי apheresis אדם בבנק דם מוכר. מוצר טסיות הדם חייב לעמוד במפרטי האוסף הבאים: 90-360 מיליליטר נפח וx 0.8 -3.8 10 6 טסיות דם / ריכוז μl. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהמוצר של טסיות דם שנח על מינימום של 2 שעות לפני עיבוד להפחתת הפתוגן. אחסן את המוצרים ב 22 ± 2 מעלות צלזיוס בחממה טסיות ללא תסיסה לשעה 2 אלה. אחרי שעות להבטיח מוצר טסיות הדם נסער ב 22 ± 2 מעלות צלזיוס בחממה של טסיות דם. השתמש במוצר לתקופה של עד 22 שעות שלאחר איסוף. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מזרק 3 מיליליטר להסיר מדגם 2 מיליליטר למדוד 22C pH של מוצר טסיות הדם. יש להשתמש מנתח גז דם כדי להבטיח את המוצר pH&gt; 6.6. השתמש באותו המדגם כדי למדוד את ריכוז טסיות של מוצר טסיות הדם באמצעות נתח המטולוגיות. להבטיח המוצר עומד .80-3.8 x 10 6 טסיות / דרישת ריכוז אוסף μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבחינה ויזואלית להעריך את המערבולת של מוצר טסיות הדם. אם למוצר יש &quot;0&quot; מערבולת המוצר ייפסל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את התיק של טסיות דם תחת מקור לבן-אור ישיר ולסחוט את השקית של טסיות דם לזמן קצר. מבחינה ויזואלית לבחון את הדפוס המתערבל של מדגם טסיות הדם. ציון המוצר תוך שימוש בסולם הבא. הערה: 2 - חיובית מערבולת: מסתחרר inhomogeneity הגלוי לאורך כל השקית עם ניגוד חזק. 1 - ביניים מערבולת: inhomogeneity חלק גלוי, אלא רק בכמה מקומות ועם ניגוד עני. 0 - מערבולת שלילית: הומוגניות דלוח שנותרה לפני ואחרי לסחוט את שקית טסיות הדם </li></ol> תהליך 3. אור ריבופלבין וUV: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טראןספיר מוצר טסיות הדם לשקית תאורת אור ריבופלבין וUV ואחסון באמצעות התקן עגינה צינור סטרילי. לאחר ההעברה להסיר את שקית איסוף הריקה יחידת טסיות דם באמצעות אוטם צינורות וזורקים את השקית הריקה כמו פסולת ביולוגית מסוכנת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר כיס 35 מיליליטר של 500 מיקרומטר ריבופלבין פתרון מניות מלעטוף חיצוני מגן האור שלה. מזח סטרילי ערכת ריבופלאבין על קו הכניסה של תיק הטיפול ואחסון. לאפשר את התוכן לנקז לתוך יחידת טסיות הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתלות את תיק שקיק / טיפול ואחסון ריבופלבין להגדיר מנרתיק ריבופלבין ועדינות להביע אוויר שייר מתוך תיק הטיפול ואחסון ולתוך שקית ריבופלבין. להבטיח כמות קטנה של מוצר טסיות בא לידי ביטוי גם בכיס ריבופלאבין לשטוף כל ריבופלאבין שייר למוצר טסיות הדם. אפשר פתרון ריבופלבין וטסיות דם לנקז בחזרה לשקית הטיפול ואחסון ולאחר מכן מהדק את קו הכניסה. הסר את השקית הריקה ריבופלאביןing אוטם צינורות וזורקים את השקית הריקה כמו פסולת ביולוגית מסוכנת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזח סטרילי קו צינורות &quot;6 עם מחבר מזרק נקבה על קו הכניסה של תיק התאורה ואחסון. צרף חבית מזרק 10 מיליליטר (להסיר את הבוכנה) על מחבר מזרק הנקבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סביבה נקיה מחיידקים להוסיף 5 מיליליטר של חיידקי המניה לתוך חבית המזרק באמצעות פיפטה. פתח את המהדק על קו הכניסה ולאפשר לחיידקים כדי לנקז לתוך מוצר טסיות דם. יש לשטוף את חבית המזרק על ידי מתן כמה מוצר טסיות דם לזרום בחזרה לחבית מזרק 10 מיליליטר. הסר את חבית מזרק 10 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסביבה נקיה מהחיידקים לצרף מזרק 30 מ&quot;ל ולשטוף את נמל הכניסה מינימאלית של שתי פעמים כדי להבטיח את חיידקי המניות מעורבות למוצר טסיות הדם. לאחר שהמוצר הוא גם מעורב, להשתמש במזרק 5-10 מיליליטר נקי ולהסיר מדגם טרום טיפול 2 מיליליטר. באמצעות מזרק חדש להבטיח כל אוויר הציג מהצעד החיסון או דגימת צעד מוסר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כייל המדגם טרום טיפול לסעיף 4. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את קו הכניסה משקית הטיפול ואחסון ולשקול את המוצר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את המוצר אל נורת ובצע את הפקודות על המסך כדי להתחיל טיפול טסיות סטנדרטי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן בזיהוי מפעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Secure והר השקית לגליל דיו הפנס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן את קוד זיהוי לדוגמא לפנס או באמצעות הקורא ברקוד או לוח המקשים להזנה הידני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סוג מוצר סריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את מהדק קוורץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשיר התאורה באופן אוטומטי לספק 6.24 / מיליליטר J של אנרגיה. זמן הטיפול האופייני לוקח 5-10 דקות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות מזח סטרילי טיפול קו 6 &quot;צינורות עם מחבר מזרק נקבה על קו הנורה מדגם של טיפול ושקית אחסון. ודא שהמוצר גם מעורב ולאחר מכן לצרף מזרק 5 מ&quot;ל ולהסיר מדגם לאחר טיפול 2 מיליליטר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כייל לאחר הטיפול סםPLE לסעיף 4. </li></ol></li></ol> 4. בקטריאלי כייל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאמוד את כייל של הדגימות לפני טיפול ואחרי טיפול, ולהכין את המספר המתאים של 5 מיליליטר צינורות דילול צורך לבצע דילול סדרתי נקודת סיום של כל דגימה. סביבה נקיה מחיידקים למלא את הצינורות הנדרשים עם 1.8 מיליליטר של מים peptone. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כייל כל דגימה באמצעות תכנית דילול סדרתי של פי 10. הסביבה נקיה מחיידקים להעביר 0.2 מיליליטר מהמדגם חי לצינור הראשון דילול (10 -1). מערבולת צינור זה דילול והעברה 0.2 מיליליטר לצינור הדילול הבא. המשך דילול סדרתי דרך המספר הנדרש של דילולים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת הסביבה נקיה מחיידקים של כל דילול 100 μl להיות מצופה לצלחת מתאימה אגר (טבלה 1). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מפזר תא סטרילי, שווה להפיץ את המדגם על כל צלחת אגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך דגירה הצלחות בתנאים המתאימים ( <strong&gt; לוח 1) במשך 1-2 ימי בדיקה לצמיחה מעת לעת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוזן צלחות עם 30-300 מושבות. צלחות המכילות יותר מ -300 מושבות נחשבות רבה מספור (TNTC). צלחות המכילות פחות מ -30 מושבות נחשבות מתחת לגבול כימות (LOQ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשב את כייל של כל דגימת בדיקה ולהקליט את התוצאות כCFU / ml. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במשוואה הבאה כדי לחשב CFU / מיליליטר: <img alt="משוואת 1" fo:content-width="2.5in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq1.jpg" width="250" /></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם אין מושבות על צלחת הדילול הנמוכה ביותר, להשתמש במשוואה הבאה כדי לחשב את הגבול של זיהוי (לוד): <img alt="משוואה 2" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq2.jpg" width="100" /> ו <img alt="משוואה 3" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq3.jpg" width="100" /> איפה: N = המספר הנמוך ביותר של חלקיקים (CFU) בעמ &#39;roduct שניתן לאתרם בביטחון. P = הסתברות שמיקרואורגניזם יהיה מבלי שיבחינו; לביטחון של 95% מגילוי חיידק, P = .05. V = הנפח כולל של מוצר במ&quot;ל נ &#39;רמת דילול x המצופה (מיליליטר) = נפח של צלחת </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבקרה שלילית, צלחת 0.5 מיליליטר של המים peptone המשמש לדילולי סדרתי על כל אחד משתי צלחות אגר. השתמש באותו סוג הצלחת כדגימות להיבדק. הפוך דגירה הצלחת בתנאים המתאימים ל1-2 ימי בדיקה לצמיחה מעת לעת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הצמיחה הוא ציין שתי צלחת אגר, בקבוק המים peptone שימוש חייב להיות מושלך; תוצאות המחקר גם ביטלו. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבקרה חיובית, מחדש כייל מניית התרבות של חיידקים שהיה בשימוש. הפוך דגירה הצלחות בתנאים המתאימים ל1-2 ימי בדיקה לצמיחה מעת לעת. כייל יהיה ± 1.0 להיכנס CFU / מיליליטר של הרשומהכייל מניית אד (ראה סעיף 1.5) למחקר כדי להיחשב חוקי. </li></ol>

<ol>
	<li>Brecher, M. E., Hay, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+contamination+of+blood+components.">Bacterial contamination of blood components.</a> Clin. Microbiol. Rev. 18 (1), 195-204 (2005).</li><li>Brecher, M. E., Holland, P. V., Pineda, A. A., Tegtmeier, G. E., Yomtovian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+bacteria+in+inoculated+platelets:+implications+for+bacteria+detection+and+the+extension+of+platelet+storage.">Growth of bacteria in inoculated platelets: implications for bacteria detection and the extension of platelet storage.</a> Transfusion. 40 (11), 1308-1312 (2000).</li><li>Cardo, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+inactivation+of+Leishmania+donovani+infantum+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light.">Pathogen inactivation of Leishmania donovani infantum in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Vox Sang. 90 (2), 85-91 (2006).</li><li>Cardo, L. J., Salata, J., Mendez, J., Reddy, H., Goodrich, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+inactivation+of+Trypanosoma+cruzi+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light.">Pathogen inactivation of Trypanosoma cruzi in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Transfus. Apher. Sci. 37 (2), 131-137 (2007).</li><li>Dodd, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+viral+risks+of+blood+and+blood+products.">Current viral risks of blood and blood products.</a> Ann. Med. 32 (7), 469-474 (2000).</li><li>Dodd, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+contamination+and+transfusion+safety:+experience+in+the+United+States.">Bacterial contamination and transfusion safety: experience in the United States.</a> Transfus. Clin. Biol. 10 (1), 6-9 (2003).</li><li>Dumont, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+single-donor+apheresis+platelets+for+bacterial+contamination:+the+PASSPORT+study+results.">Screening of single-donor apheresis platelets for bacterial contamination: the PASSPORT study results.</a> Transfusion. 50 (3), 589-599 (2010).</li><li>Goodrich, R. P., Gilmour, D., Hovenga, N., Keil, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+laboratory+comparison+of+pathogen+reduction+technology+treatment+and+culture+of+platelet+products+for+addressing+bacterial+contamination+concerns.">A laboratory comparison of pathogen reduction technology treatment and culture of platelet products for addressing bacterial contamination concerns.</a> Transfusion. 49 (6), 1205-1216 (2009).</li><li>Greco-Stewart, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serratia+marcescens+strains+implicated+in+adverse+transfusion+reactions+form+biofilms+in+platelet+concentrates+and+demonstrate+reduced+detection+by+automated+culture.">Serratia marcescens strains implicated in adverse transfusion reactions form biofilms in platelet concentrates and demonstrate reduced detection by automated culture.</a> Vox Sang. 102 (3), 212-220 (2012).</li><li>Keil, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Plasmodium+spp.+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light.">Inactivation of Plasmodium spp. in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Transfusion. 53 (10), 2278-2286 (2013).</li><li>Kleinman, S., Chan, P., Robillard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risks+associated+with+transfusion+of+cellular+blood+components+in+Canada.">Risks associated with transfusion of cellular blood components in Canada.</a> Transfus. Med Rev. 17 (2), 120-162 (2003).</li><li>Larsen, C. P., Ezligini, F., Hermansen, N. O., Kjeldsen-Kragh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Six+years'+experience+of+using+the+BacT/ALERT+system+to+screen+all+platelet+concentrates,+and+additional+testing+of+outdated+platelet+concentrates+to+estimate+the+frequency+of+false-negative+results.">Six years' experience of using the BacT/ALERT system to screen all platelet concentrates, and additional testing of outdated platelet concentrates to estimate the frequency of false-negative results.</a> Vox Sang. 88 (2), 93-97 (2005).</li><li>Mundt, J. M., Rouse, L., Van den Bossche, J., Goodrich, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+and+Biological+Mechanisms+of+Pathogen+Reduction+Technologies.">Chemical and Biological Mechanisms of Pathogen Reduction Technologies.</a> Photochem. Photobiol. , (2014).</li><li>Murphy, W. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+platelet+concentrates+for+bacterial+contamination:+low+numbers+of+bacteria+and+slow+growth+in+contaminated+units+mandate+an+alternative+approach+to+product+safety.">Screening platelet concentrates for bacterial contamination: low numbers of bacteria and slow growth in contaminated units mandate an alternative approach to product safety.</a> Vox Sang. 95 (1), 13-19 (2008).</li><li>Brien, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+incidence+and+residual+risk+of+HIV,+HBV+and+HCV+at+Canadian+Blood+Services.">Current incidence and residual risk of HIV, HBV and HCV at Canadian Blood Services.</a> Vox Sang. 103 (1), 83-86 (2012).</li><li>Pearce, S., Rowe, G. P., Field, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+platelets+for+bacterial+contamination+at+the+Welsh+Blood+Service.">Screening of platelets for bacterial contamination at the Welsh Blood Service.</a> Transfus. Med. 21 (1), 25-32 (2011).</li><li>Ramirez-Arcos, S., Kou, Y., Perkins, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+universal+point-of-issue+assay+for+bacterial+detection+in+buffy+coat+platelet+components.">Evaluation of a universal point-of-issue assay for bacterial detection in buffy coat platelet components.</a> Vox Sang. 107 (2), 192-195 (2014).</li><li>Reddy, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+testing+of+a+novel+riboflavin-based+technology+for+pathogen+reduction+and+white+blood+cell+inactivation.">Toxicity testing of a novel riboflavin-based technology for pathogen reduction and white blood cell inactivation.</a> Transfus. Med. Rev. 22 (2), 133-153 (2008).</li><li>Ruane, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemical+inactivation+of+selected+viruses+and+bacteria+in+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+light.">Photochemical inactivation of selected viruses and bacteria in platelet concentrates using riboflavin and light.</a> Transfusion. 44 (6), 877-885 (2004).</li><li>Tonnetti, L., Proctor, M. C., Reddy, H. L., Goodrich, R. P., Leiby, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Mirasol+pathogen+reduction+technology+system+against+Babesia+microti+in+apheresis+platelets+and+plasma.">Evaluation of the Mirasol pathogen reduction technology system against Babesia microti in apheresis platelets and plasma.</a> Transfusion. 50 (5), 1019-1027 (2010).</li><li>Vanlandingham, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemical+inactivation+of+chikungunya+virus+in+plasma+and+platelets+using+the+Mirasol+pathogen+reduction+technology+system.">Photochemical inactivation of chikungunya virus in plasma and platelets using the Mirasol pathogen reduction technology system.</a> Transfusion. 53 (2), 284-290 (2013).</li><li>Walther-Wenke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+bacterial+contamination+of+blood+components+in+Germany:+effect+of+contamination+reduction+measures.">Monitoring bacterial contamination of blood components in Germany: effect of contamination reduction measures.</a> Vox Sang. 100 (4), 359-366 (2011).</li></ol>

כל המחברים של מאמר זה מועסקים כיום על ידי Terumo BCT, מפתחת ויצרנית של מערכת Mirasol PRT. עמלות פרסום למאמר וידאו זה כבר שולם על ידי BCT Terumo.

הקרנת חיידקים הפכה מנהג נפוץ במוסדות בנקאיים דם ולמקומות רבים היא משמשת כשיטת העיקרית למניעת עירוי של טסיות דם מזוהמים bacterially. למרות שבדרך כלל הקרנת חיידקי מודעות חרם רוב חיידקים שליליים גרם גדלו במהירות כמו ס marcescens, א &#39; coli וא cloacae, זה נאבק כדי לזהות חיידקים חיוביים גרם גדלו איטי כמו ס aureus, spp סטרפטוקוקוס. וס epidermidis 8. למרבה הצער, חיידקים החיוביים אלה שלוש גרם הם מעורבים בלמעלה מ 50% מכלל היחידות של טסיות דם המזוהמים והעירוי של מוצרי טסיות דם המכילים שלושת אורגניזמים אלה הובילו לתמותת חולה 1. הקרנת חיידקים מסתמכת על כייל החיידקים במוצר טסיות דם להיות גבוה מספיק מספיק כדי שאורגניזם אחד לפחות הוא הכיל בתוך מדגם ההקרנה 4-8 מיליליטר הטיפוסי. אם כייל החיידקים הוא לא מספיק גבוה לחיידק להיות בשבי 4-8 מיליליטר נפח הדגימה, היחידה מסומנת באופן שגוי כשלילית והוא שוחרר לעירוי. גישה חלופית להקרנת חיידקים יכולה להיות להעסיק תהליך יזום שיכול להתבצע על כל היחידות של טסיות דם וזה יכול להפוך את אורגניזמים מזהמים כמו שאינו פונקציונלי. במחקר זה, titers הגבוה של חיידקים נוספו בכוונה ליחידות של טסיות דם על מנת לבחון את יכולת ההפחתה הכוללת של תהליך הפחתת הפתוגן אור ריבופלבין וUV. למרות עומסי חיידקים שנבדקו במחקר זה עולה בהרבה על אלה בדרך כלל נמצאים במוצרי דם בעת התרומה, מחקר זה מסייע להוכיח שתהליך ריבופלבין ואור UV יכול להפחית באופן משמעותי את כייל של חיידקי קיימא ביחידת טסיות דם מזוהם ב 2.6-5.4 יומן (הפחתת 99.7-99.9996% מזיהום חיידקים) (איור 2). כדי להשיג Accuraערך הפחתת יומן te, זה קריטי, כי יש לי המפעיל טכניקת aseptic טובה יחד עם כישורי pipetting מדויקים בעת ביצוע צעדי כייל חיידקים. pipetting מדויק בעת ביצוע דילולים סדרתי יכול להוביל להצטברות של שגיאות, כך מדידת כייל לא מדויקת. הנתונים שנאספו במחקר זה תומך בעבודה קודמת עם ריבופלבין ואור UV, שקרא תיגר על המערכת נגד רמה נמוכה, בקטרמיה הרלוונטית קליני (&lt;20 CFU / יחידה). המחקר קודם שנועד לחקות אירוע זיהום קליני בפועל והתוצאות הראו ריבופלבין ואור UV היה יעיל במניעת התפתחות חיידקים על פני תקופת אחסון טסיות 7 הימים. דוגמנות מבוססת על נתונים מהמחקר הקודם מצביעה על כך שהערכות הסיכון הנוכחיות של זיהום חיידקים של מוצרי טסיות דם יכולות להיות מופחתות על ידי ככל 98% מהרמות הנוכחיות 8. תהליך אור ריבופלבין וUV משווה לטובה למסך חיידקיםING, שרק הוכיח יעילות של 66% לזיהוי זיהום חיידקים ביחידות של טסיות דם כאשר קראו תיגר עם עומס חיידקים רלוונטי קליני 8. כמו בכל הטכנולוגיות, טיפול PRT של מוצרי טסיות דם למניעת סיבוכים הקשורים ליחידות של טסיות דם מזוהמות bacterially יש מגבלות. מערכות PRT אינן יעילות נגד חיידקי נבגים ולא להשבית רעלן פנימי, ובכך גם אם מערכת PRT יכול להשבית titers הגבוה של חיידקים שליליים גרם רעלן פנימי שנותר עדיין יכול לגרום להלם ספטי בנמען. PRT מבוצע הטוב ביותר מוקדם במהלך אחסון לפני החיידקים יכולים להפיץ לtiters הגבוה. לסיכום, כפי שהודגם על ידי השילוב של שני המחקרים הללו, תהליך ריבופלבין ואור UV הוא יעיל בהפחתת עומסי חיידקים של שני אורגניזמים החיוביים גרם שלילי וגרם ועשויה להציע חלופה להקרנה בקטריאלי. treatin באופן שגרתימוצרי טסיות דם גרם עם אור ריבופלבין וUV יש גם יתרון הנוסף של הפחתת שידור הפוטנציאל של סוכני דם נישא אחרים כמו וירוסים וטפילים.

עירוי של טסיות דם, פלזמה, תאי דם אדום ארוז ומוצרי דם כל לשחק תפקיד מרכזי ברפואה מודרנית ויכולים לשמש לטיפול במצבים רפואיים שונים, להחליף נוזלים חיוניים וסופו של דבר להציל חיים. טסיות דם הם מוצר סלולארי המבודדים או מכל דם ונקווה למנת transfusable או נאספים בתהליך של apheresis טסיות דם. תפקידו העיקרי של טסיות דם בגוף הוא כדי לעצור את הדימום באתרי פצע וכדי לסייע לשמור על עצירת דימום. חולים הסובלים מספירה נמוכה של טסיות תא (תרומבוציטופניה) רגישים לאירועי דימום ספונטניים ועירוי עם טסיות להביא תא טסיות דמם לספור חזרה לטווח נורמלי. טסיות דם שנאסף מאוחסנות לתקופה מקסימלית של 5-7 ימים ומאוחסנים בגיל 22 ± 2 מעלות צלזיוס בזמן שתחת תסיסה מתמדת. למרות הצלת החיים מאפיינים של עירויי טסיות דם נותרים קל סיכון למקבלי עירוי בשל שיתוףntamination של מוצרים אלה על ידי טפילים, חיידקים ווירוסים 11. ביצוע בדיקות חומצת גרעין נגיפיות (NAT) ירד הסיכון להעברה נגיפית של סוכני דם נישא עיקריים, כגון וירוס הצהבת מסוג C (HCV), נגיף הפטיטיס B. (HBV) ונגיף חיסוני חוסר אנושי (HIV) באופן משמעותי 5. פרסום האחרון משירותי הדם הקנדיים מעריך סיכון השיורי לסוכנים אלה להיות 1 ל8 מ&#39;תרומות ל- HIV, 1 ל-6.7 מ&#39;תרומות לHCV ו1 ל-1.7 מ&#39;תרומות עבור 15 HBV. למרות שבדרך כלל חיידקים לגייס פחות תשומת לב בציבור הרחב, בתדירות של זיהום חיידקים במוצרי טסיות דם כבר מוערכת כגבוה כמו 1: 1,000 7 וכי מיליוני מוצרי טסיות דם הם בעירוי בכל שנה נמענים רבים נחשפים לסיבוכים שעלולים להיות סכנת חיים כמו אלח דם 6. מחקר מצביע על כך שעומס החיידקים בזמןהזיהום הוא נמוך, &lt;100 יחידות מושבה להרכיב (CFU) / מוצר 2,16, לעומת זאת אחסון הסביבה וטמפרטורת חדר העשיר המזינה מאפשר זיהום חיידקים להתרבות לtiters הגבוה בצורה מסוכנת לפני העירוי. נכון לעכשיו, את השיטות שאושרו רק הזמינות כדי למנוע מוצרים מזוהמים bacterially מלהגיע נמען טסיות דם היא באמצעות השימוש במערכות מבוססת תרבות ונקודת בדיקת טיפול מהירה. בקצרה, למערכות תרבות המבוססת מוצרי טסיות דם מאוחסנים על תועמלן ב 22 מעלות צלזיוס במשך 12-24 שעות כדי לאפשר לחיידקים להתרבות במוצר, עליו מדגם 4-8 מיליליטר יוסר ממוצר טסיות הדם ומחוסן לתוך בקבוק המכיל תקשורת תזונתית. הבקבוק מושם לתוך מכשיר העוקב אחר הבקבוק להתפתחות חיידקים. אם המכשיר מזהה התפתחות חיידקים בבקבוק זה מסומן ויחידת טסיות הדם המתאימה נמחקת. בעוד תהליך זה הוא מוצלח למדי באיתור Gro המהיראורגניזמים אגף, רבים של המינים גדלו איטיים לא גדלים למספיק כייל גבוה כדי להתגלות, ובכך ליצור את הפוטנציאל ליחידות שווא שלילי להשתחרר לעירוי 7,12,14,16,22. בניגוד למערכות גילוי תרבות המבוססת, נקודת בדיקת טיפול מהירה מבוצעת בדרך כלל מאוחר יותר בתקופת אחסון טסיות דם כאשר עומס החיידקים גדל באופן משמעותי. Titers גבוה יותר נדרש מאז נקודת בדיקות טיפול היא פחות רגישה ממערכות התרבות מבוססת, ורק באופן מהימן לזהות חיידקים ברגע שהם מגיעים לכייל ≥1 x 10 3 CFU / מיליליטר 17. עם זאת בדיקות כאלה יכולים לספק תוצאות תוך שעה 1 של דגימה. השתנות בביצוע בדיקות אלה הובילו לשחרורו של מוצר שלילי כוזב, שגרמו לתגובה ספיגה קטלנית בנמען 9. דרך חלופית כדי להילחם בבעיה של זיהום חיידקים של מוצרי טסיות דם היא באמצעות השימוש השגרתי של proc הפחתת הפתוגןESS שיכול להשבית חיידקים מזהמים במקום לנסות לזהות אותם. באמצעות ריבופלאבין כהפוטוסנסיטייזר, בשילוב עם אור UV, הוכח להפחית את ההדבקה של מגוון רחב של מזהמים נישאים דם פתוגניים, כולל חיידקים 3,4,8,10,19-21 .the שימוש של ריבופלאבין וUV אור להפחתת הפתוגן אינו רעיל ואינו mutagenic, ורכיבים שטופל אור ריבופלבין וUV הוכחו כבטוח למקבלי עירוי, כמו גם לאלה טיפול במוצרי דם 18. בקצרה, מולקולות ריבופלאבין יכולות לקשר עם חומצות הגרעין (DNA ו- RNA) של חיידקים, טפילים, וירוסים וכל תא גרעיני (למשל תאי דם לבנים). חשיפה לאור UV מפעילה ריבופלאבין, גרימת שינוי כימי לקבוצות פונקציונליות של חומצות גרעין (בעיקר בסיסי גואנין), ובכך למנוע שכפול ו / או שעתוק של חומצות גרעין ועוזב את האורגניזם מומת 13. תאי Anucleated כמו צלחתמאפשר לי ותאי דם אדומים אינם מושפעים מכימית ריבופלאבין בשל חוסר חומצות גרעין. עבודה קודמת עם טכנולוגיית אור ריבופלבין וUV מוערכת קבוצה נבחרת של חיידקים באמצעות עיצוב ניסיוני שנועד לחקות מוצר טסיות דם מזוהם עם רלוונטי קליני עומס חיידקים (&lt;20 CFU / מוצר) 8. מטרת המחקר הייתה להעריך את תהליך אור ריבופלבין וUV נגד זיהום חיידקים גבוה כייל (&gt; 1.0 x 10 5 CFU / ml) במוצרים של טסיות דם שטופלו בפלזמה כדי למדוד את יכולת הפחתת חיידקים הכוללת של המערכת. בהתבסס על נתונים שנאספו ממחקרי hemovigilance 1, פנל של אורגניזמים חיוביים שליליים וגרמו גרם נפוץ המתרחשים נבחר להערכה במחקר זה וכלל את המינים הבאים: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, סטרפטוקוקוס mitis, pyogenes סטרפטוקוקוס, marcescens Serratia, Yersinia enterocolitica ,neotomae Brucella, cereus Bacillus (טופס וגטטיבי), Esherichia coli, Pseudomonas aeruginosa וKlebsiella pneumoniae. כל היצורים, למעט ב cereus, התקבל מATCC ועדיפות הונחה על קבלת זני חיידקים שזוהו כמבודד ממרכיבי דם. ב cereus נבדק במחקר זה הוא זן קליני המבודדים פנימי ממוצר טסיות דם מזוהם.

<table><tbody><tr><td>Mirasol Illuminator</td><td>Terumo BCT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mirasol Treatment/Storage Bag</td><td>Terumo BCT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Hematology Analyzer</td><td>Beckman-Coulter</td><td>Ac&amp;bull;T diff&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Blood Gas Analyzer</td><td>Siemens</td><td>RapidLab 1265&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Docking Device</td><td>Terumo BCT</td><td>TSCD</td><td></td></tr><tr><td>Platelet Incubator</td><td>Helmer</td><td>PC2200</td><td></td></tr><tr><td>Orbital Incubator Shaker</td><td>Lab-Line</td><td>4628</td><td></td></tr><tr><td>Dry Incubator</td><td>Fisher</td><td>Iso-temp</td><td></td></tr><tr><td>Class II A/B3 Biosafety Cabinet</td><td>Thermo-forma</td><td>1286</td><td></td></tr><tr><td>Tubing Sealer</td><td>Sebra</td><td>Smart Sealer II</td><td></td></tr><tr><td>Table Top Centrifuge</td><td>IEC</td><td>Centra GP8R</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>30 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309650</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Dilution Tube</td><td>VWR</td><td>211-0058</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Conical Tube</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette</td><td>Gilson</td><td>P-200</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette</td><td>Rainin</td><td>R-200</td><td></td></tr><tr><td>Repeat Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>4780</td><td></td></tr><tr><td>1-200 &amp;micro;l Filter Tip</td><td>Costar</td><td>4810</td><td></td></tr><tr><td>25 ml Disposable Serrological Pipette</td><td>Costar</td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Disposable Serrological Pipette</td><td>Costar</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>35 ml 500 &amp;micro;M Riboflavin</td><td>Terumo BCT</td><td>35 mL 500 &amp;micro;M&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Brucella Agar with 5% Horse Blood</td><td>BBL</td><td>221547</td><td></td></tr><tr><td>Brain Heart Infusion</td><td>Teknova</td><td>B9993</td><td></td></tr><tr><td>Peptone Water</td><td>BD</td><td>257087</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase Soy Broth</td><td>BD</td><td>299113</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase Soy Agar</td><td>Remel</td><td>R01917</td><td></td></tr><tr><td>Heat Inactivated Horse Serum</td><td>Gibco</td><td>26050</td><td></td></tr></tbody></table>

treatment of platelet products with riboflavin and uv light: effectiveness against high titer bacterial contamination

זיהום של יחידות טסיות דם על ידי חיידקים כבר הודה עוד סיכון עירוי משמעותי בשל תנאי האחסון לאחר התרומה שלהם. מוצרים מאוחסנים באופן שיגרתי על 22 מעלות צלזיוס בייקר התססה, מצב שיכול לקדם את התפתחות חיידקים. למרות שהמספר הכולל של חיידקים האמינו להיות הציג למוצר טסיות דם הוא נמוך ביותר, חיידקים אלה יכולים להתרבות לכייל גבוה מאוד לפני העירוי, שעלול לגרום בתופעות לוואי חמורות. מטרת המחקר הייתה להעריך תהליך הפחתת הפתוגן ריבופלאבין מבוסס נגד פנל של חיידקים שזוהו כמזהמים נפוצים של מוצרי טסיות דם. לוח זה כולל אורגניזמים הבאים: ס epidermidis, S. aureus, mitis ס, pyogenes ס, marcescens ס, י &#39;enterocolitica, ב neotomae, cereus ב&#39;, E. coli, פ aeruginosa וק pneumoniae. כל יחידת טסיות דם הייתה מחוסנת עם עומס חיידקים גבוה ודגימות הוסרו בoth לפני ואחרי הטיפול. מושבה להרכיב assay, באמצעות תכנית דילול נקודת סיום, שימשה כדי לקבוע titers חיידקי הטיפול מראש ולאחר טיפול. הפחתת יומן הייתה מחושבת על ידי הפחתת כייל לאחר הטיפול מכייל הטיפול מראש. ירידות היומן הבאות נצפו: ס יומן epidermidis 4.7 (99.998%), יומן S. aureus 4.8 (99.998%), ס &#39;mitis 3.7 יומן (99.98%), יומן ס pyogenes 2.6 (99.7%), יומן ס marcescens 4.0 (99.99%), י&#39; יומן enterocolitica 3.3 (99.95%), ב &#39;neotomae 5.4 יומן (99.9996%), ב&#39; cereus 2.6 יומן (99.7%), יומן E. coli ≥5.4 (99.9996%), יומן 4.7 פ aeruginosa (99.998%) ו- K . יומן pneumoniae 2.8 (99.8%). התוצאות ממחקר זה מציעות התהליך יכול לעזור להוריד את הסיכון לאירועי עירוי לוואי חמורים הקשורות לזיהום חיידקים.

ההפחתה של עשרה מיני חיידקים שונים הוערכה באמצעות תהליך PRT מבוסס אור ריבופלבין וUV. סוכנים אלה מייצגים חלק מהמזהמים הנפוצים יותר של מוצרי טסיות דם וכוללים חמש גרם חיובי ושישה אורגניזמים שליליים גרם. לפחות שישה מוצרי טסיות דם הוערכו לאורגניזם וכל מוצר היה מחוסן עם מספיק חיידקים להניב&gt; 1.0 10 5 CFU / כייל סופי מיליליטר x של חיידקים במוצר של טסיות הדם. לפני טיפול מדגם הוסר כדי לקבוע את כייל הטיפול מראש, לאחר שטופל במוצר של טסיות דם מייד עם ריבופלבין ותהליך UV. בעקבות טיפול של מוצרי טסיות דם הפחתת היומן הבא נצפו: ס יומן epidermidis 4.7 (99.998%), יומן S. aureus 4.8 (99.998%), ס &#39;mitis 3.7 יומן (99.98%), יומן ס pyogenes 2.6 (99.7%), יומן ס marcescens 4.0 (99.99%), י&#39; יומן enterocolitica 3.3 (99.95%), ב &#39;יומן neotomae 5.4 (99.9996%), יומן ב cereus 2.6 (99.7%), יומן E. coli ≥ 5.4 (99.9996%), P. יומן 4.7 aeruginosa (99.998%) וק &#39;יומן pneumoniae 2.8 (99.8%) (איור 2). כל היחידות פגשו את מפרט המערכת כאמור לעיל לריבופלבין ותהליך UV. בדיקות הפחתה נוספות בוצעו עם ס &#39; pyogenes באמצעות טסיות נגזרות מעיל באפי. לא נצפה הבדל משמעותי בהפחתה של ס pyogenes בטסיות נגזרות מעיל באפי לעומת טסיות apheresis (מידע לא מוצג). <img alt="טבלת 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820table1.jpg" /> טבלה 1: תנאי גידול למיני חיידקים הוערכו באמצעות ריבופלבין ואור UV. פנל של שני חיידקים החיוביים גרם שלילי וגרמתי שהוכחו לזהם מוצרי טסיות דם, שנבחרו למחקר זה. תנאי הגידול (סוג טמפרטורה ותקשורת) המשמשים להפצה וTiter אורגניזמים מוצגים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig1.jpg" /> איור 1: תהליך הפחתת הפתוגן אור ריבופלבין וUV. ריבופלבין פורקה ב מלוח 0.9% בריכוז נומינלי של 500 מיקרומטר. הפתרון היה סטרילי קשר ומנוקז לכל מוצר טסיות דם. חיידקים נוספו הסביבה נקיה מחיידקים לכל יחידת טסיות דם ולאחר מכן טופלו ב6.2 / מיליליטר J אנרגיית UV (כ 6-10 דקות). בזה במבחנה ללמוד את יחידת טסיות הדם לאחר הטיפול תדגם כדי לקבוע את כייל החיידקים הסופי. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig2.jpg" /> איור 2: הפחתה של מיני חיידקים שונים כאשר טופל בריבופלבין והאור UV ריבופלבין ואור UV שימש להקטנת עומסי חיידקים מזהמים חיידקים נפוצים של מוצרי טסיות דם.. יומן 10 הפחתת ההבדלבין כייל טיפול מראש הממוצע וכייל לאחר הטיפול הממוצע. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52820/52820fig2highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination at JoVE.com

Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

The storage conditions of platelet products create an ideal environment for bacterial contaminants to multiply to dangerous levels. The goal of this study was to use a colony forming assay to evaluate a riboflavin based pathogen reduction process against high titer bacterial contamination in human platelet products.

טיפול במוצרי טסיות דם עם ריבופלבין ואור UV: יעילות גבוהה נגד כייל קטריאלי זיהום

Contamination of platelet units by bacteria has long been acknowledged as a significant transfusion risk due to their post-donation storage conditions. ...

treatment-platelet-products-with-riboflavin-uv-light-effectiveness

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

13.5K Views.  Scientific Affairs. The storage conditions of platelet products create an ideal environment for bacterial contaminants to multiply to dangerous levels. The goal of this study was to use a colony forming assay to evaluate a riboflavin based pathogen reduction process against high titer bacterial contamination in human platelet products.

Video: Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

Blood centers are faced with many challenges including maximizing production yield from the blood product donations they receive as well as ensuring the highest possible level of safety for transfusion patients, including protection from transfusion transmitted diseases. This must be accomplished in a fiscally responsible manner which minimizes operating expenses including consumables, equipment, waste, and personnel costs, among others.
Several methods are available to produce platelet concentrates for transfusion. One of the most common is the buffy coat method in which a single therapeutic platelet unit (&ge; 2.0 x1011 platelets per unit or per local regulations) is prepared by pooling the buffy coat layer from up to six whole blood donations. A procedure for producing "double dose" whole blood derived platelets has only recently been developed.
Presented here is a novel method for preparing double dose whole blood derived platelet concentrates from pools of 7 buffy coats and subsequently treating the double dose units with the INTERCEPT Blood System for pathogen inactivation. INTERCEPT was developed to inactivate viruses, bacteria, parasites, and contaminating donor white cells which may be present in donated blood. Pairing INTERCEPT with the double dose buffy coat method by utilizing the INTERCEPT Processing Set with Dual Storage Containers (the "DS set"), allows blood centers to treat each of their double dose units in a single pathogen inactivation processing set, thereby maximizing patient safety while minimizing costs. The double dose buffy coat method requires fewer buffy coats and reduces the use of consumables by up to 50% (e.g. pooling sets, filter sets, platelet additive solution, and sterile connection wafers) compared to preparation and treatment of single dose buffy coat platelet units. Other cost savings include less waste, less equipment maintenance, lower power requirements, reduced personnel time, and lower collection cost compared to the apheresis technique.

This article describes the process used by &#214;rebro University Hospital to produce double dose buffy coat platelet concentrates prepared from whole blood donations and treated with the INTERCEPT Blood System for pathogen inactivation. The in vitro quality of the final platelet units are evaluated over 7 days of storage.

הכנה ואיון פעולה של הפתוגן מוצרי Double מנת באפי Coat טסיות דם באמצעות מערכת הדם ליירט

Blood centers are faced with many challenges including maximizing production yield from the blood product donations they receive as well as ensuring the ...

Medicine

PRP as a New Approach to Prevent Infection: Preparation and In vitro Antimicrobial Properties of PRP

Implant-associated infection is becoming more and more challenging to the healthcare industry worldwide due to increasing antibiotic resistance, transmission of antibiotic resistant bacteria between animals and humans, and the high cost of treating infections.
In this study, we disclose a new strategy that may be effective in preventing implant-associated infection based on the potential antimicrobial properties of platelet-rich plasma (PRP). Due to its well-studied properties for promoting healing, PRP (a biological product) has been increasingly used for clinical applications including orthopaedic surgeries, periodontal and oral surgeries, maxillofacial surgeries, plastic surgeries, sports medicine, etc.
PRP could be an advanced alternative to conventional antibiotic treatments in preventing implant-associated infections. The use of PRP may be advantageous compared to conventional antibiotic treatments since PRP is less likely to induce antibiotic resistance and PRP's antimicrobial and healing-promoting properties may have a synergistic effect on infection prevention. It is well known that pathogens and human cells are racing for implant surfaces, and PRP's properties of promoting healing could improve human cell attachment thereby reducing the odds for infection. In addition, PRP is inherently biocompatible, and safe and free from the risk of transmissible diseases.
For our study, we have selected several clinical bacterial strains that are commonly found in orthopaedic infections and examined whether PRP has in vitro antimicrobial properties against these bacteria. We have prepared PRP using a twice centrifugation approach which allows the same platelet concentration to be obtained for all samples. We have achieved consistent antimicrobial findings and found that PRP has strong in vitro antimicrobial properties against bacteria like methicillin-sensitive and methicillin-resistant Staphylococcus aureus, Group A Streptococcus, and Neisseria gonorrhoeae. Therefore, the use of PRP may have the potential to prevent infection and to reduce the need for costly post-operative treatment of implant-associated infections.

PRP as a New Approach to Prevent Infection: Preparation and In vitro Antimicrobial Properties of PRP

Implant-associated infection is a significant clinical complication. This study describes an approach using platelet-rich plasma (PRP) to prevent implant-associated infections, presents the protocol for preparing PRP with constant platelet concentration, and reports the newly identified antimicrobial properties of PRP and related protocols for examining such antimicrobial properties in vitro.

PRP כגישה חדשה למניעת זיהום: הכנה ו<em&gt; במבחנה</em&gt; מאפיינים מיקרוביאלית של PRP

Implant-associated infection is becoming more and more challenging to the healthcare industry worldwide due to increasing antibiotic resistance, ...

Enhanced Reproducibility and Precision of High-Throughput Quantification of Bacterial Growth Data Using a Microplate Reader

This study aimed to develop a repeatable, reliable, high-throughput protocol to monitor bacterial growth in 96-well plates and analyze the maximum growth rate. The growth curves and maximum growth rates of two bacterial species were determined. Issues including (i) lid condensation, (ii) pathlength correction, (iii) inoculation size, (iv) sampling time interval, and (v) spatial bias were investigated. The repeatability of the protocol was assessed with three independent technical replications, with a standard deviation of 0.03 between the runs. The maximum growth rates of Bacillus mycoides and Paenibacillus tundrae were determined to be&#160;(mean&#160;&#177; SD) 0.99 h&#8722;1 &#177;&#160; 0.03 h&#8722;1 and 0.85 h&#8722;1 &#177; 0.025 h&#8722;1, respectively. These bacteria are more challenging to monitor optically due to their affinity to clump together. This study demonstrates the critical importance of inoculation size, path length correction, lid warming, sampling time intervals, and well-plate spatial bias to obtain reliable, accurate, and reproducible data on microplate readers. The developed protocol and its verification steps can be expanded to other methods using microplate readers and high-throughput protocols, reducing the researchers&#39; innate errors and material costs.

Here, a high-throughput protocol is presented to measure growth data, including growth curves, growth rate, and maximum growth rate. The protocol was verified and validated using two biofilm-producing bacteria. The results and approach applied in this study can be expanded to other high-throughput protocols using microplate readers.

This study aimed to develop a repeatable, reliable, high-throughput protocol to monitor bacterial growth in 96-well plates and analyze the maximum growth ...

Environment

Methods to Inhibit Bacterial Pyomelanin Production and Determine the Corresponding Increase in Sensitivity to Oxidative Stress

Pyomelanin is an extracellular red-brown pigment produced by several bacterial and fungal species. This pigment is derived from the tyrosine catabolism pathway and contributes to increased oxidative stress resistance. Pyomelanin production in Pseudomonas aeruginosa is reduced in a dose dependent manner through treatment with 2-[2-nitro-4-(trifluoromethyl)benzoyl]-1,3-cyclohexanedione (NTBC). We describe a titration method using multiple concentrations of NTBC to determine the concentration of drug that will reduce or abolish pyomelanin production in bacteria. The titration method has an easily quantifiable outcome, a visible reduction in pigment production with increasing drug concentrations. We also describe a microtiter plate method to assay antibiotic minimum inhibitory concentration (MIC) in bacteria. This method uses a minimum of resources and can easily be scaled up to test multiple antibiotics in one microtiter plate for one strain of bacteria. The MIC assay can be adapted to test the affects of non-antibiotic compounds on bacterial growth at specific concentrations. Finally, we describe a method for testing bacterial sensitivity to oxidative stress by incorporating H2O2 into agar plates and spotting multiple dilutions of bacteria onto the plates. Sensitivity to oxidative stress is indicated by reductions in colony number and size for the different dilutions on plates containing H2O2 compared to a no H2O2 control. The oxidative stress spot plate assay uses a minimum of resources and low concentrations of H2O2. Importantly, it also has good reproducibility. This spot plate assay could be adapted to test bacterial sensitivity to various compounds by incorporating the compounds in agar plates and characterizing the resulting bacterial growth.

Bacterial pyomelanin production results in increased resistance to oxidative stress and virulence. We report on techniques that can be used to determine inhibition of pyomelanin production and assay the resulting increase in sensitivity to oxidative stress in bacteria, as well as determine antibiotic minimum inhibitory concentration (MIC).

שיטות לעכב קטריאלי Pyomelanin ייצור וקבעו את הגידול המקביל ברגישות לסטרס חמצונים

Pyomelanin is an extracellular red-brown pigment produced by several bacterial and fungal species. This pigment is derived from the tyrosine catabolism ...

LED-Based In Vitro Screening for Assessing Photoactivable Molecules in Bacterial Photodynamic Inactivation

The rise of multi-drug-resistant infections and the lack of new antibiotic classes have renewed interest in alternative therapies like photodynamic inactivation of bacteria (aPDI). This process involves the administration of a photosensitizer (PS) activated by a suitable visible light source, producing exacerbated levels of reactive oxygen species (ROS) that damage crucial cellular biomolecules, ultimately causing bacterial cell death. It is crucial to create standardized, easy-to-use, and reproducible initial tests to assess and compare the effectiveness of light-induced phototoxicity of potential photosensitizers. This study introduces a simple and efficient in vitro technique for assessing photodynamic activity against planktonic bacterial cells. By employing a 96-well microplate format along with a large LED panel, the system facilitates the systematic evaluation of various compounds. Such a configuration allows for high-throughput screening of potential photosensitizers in a controlled and consistent environment, simplifying the process of identifying promising candidates for further development. This flexible platform serves as an important step in advancing the development of innovative photodynamic therapies for managing antibiotic-resistant infections.

This protocol describes a straightforward and economical method for evaluating the effectiveness of potential photosensitizers in antibacterial photodynamic inactivation (aPDI), using a 96-well plate format combined with an LED panel light source. This approach enables the simultaneous testing of multiple experimental conditions, including different concentrations, compounds, and bacterial strains.

הקרנה במבחנה מבוססת LED להערכת מולקולות הניתנות להפעלה פוטודינמית בהפעלה פוטודינמית של חיידקים

The rise of multi-drug-resistant infections and the lack of new antibiotic classes have renewed interest in alternative therapies like photodynamic ...

Biochemistry

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic growth of C. albicans SN425, the inoculums grew on Yeast Nitrogen Base media. For biofilm formation, RPMI 1640 media, which have high concentrations of amino acids, were applied to help biofilm growth. Biofilms of 48 h were treated twice a day for a period of 1 min with a non-coherent light device (red light; wavelength = 635 nm; energy density = 87.6 J&#183;cm-2). As a positive control (PC), 0.12% chlorhexidine (CHX) was applied, and as a negative control (NC), 0.89% NaCl was applied to the biofilms. Colony forming units (CFU), dry-weight, soluble and insoluble exopolysaccharides were quantified after treatments. Briefly, the protocol presented here is simple, reproducible and provides answers regarding viability, dry-weight and extracellular polysaccharide amounts after red light treatment.

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Here, we present a protocol to assess the outcome of red light application on the growth of Candida albicans biofilm. A non-coherent red light device with the wavelength of 635 nm and energy density of 87.6 J&#183;cm-2 was applied throughout the growth of Candida albicans biofilms for 48 h.

פוטותרפיה יומי עם אור אדום כדי לווסת קנדידה אלביקנס Biofilm צמיחה

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

Inactivation of Pathogens via Visible-Light Photolysis of Riboflavin-5&#8242;-Phosphate

Riboflavin-5&#39;-phosphate (or flavin mononucleotide; FMN) is sensitive to visible light. Various compounds, including reactive oxygen species (ROS), can be generated from FMN photolysis upon irradiation with visible light. The ROS generated from FMN photolysis are harmful to microorganisms, including pathogenic bacteria such as Staphylococcus aureus (S. aureus). This article presents a protocol for deactivating S. aureus, as an example, via photochemical reactions involving FMN under visible light irradiation. The superoxide radical anion (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01v3.png" style="margin: auto;" />) generated during the FMN photolysis is evaluated via nitro blue tetrazolium (NBT) reduction. The microbial viability of S. aureus that is attributed to reactive <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01v3.png" style="margin: auto;" /> species was used to determine the effectiveness of the process. The bacterial inactivation rate is proportional to FMN concentration. Violet light is more efficient in inactivating S. aureus than blue light irradiation, while the red or green light does not drive FMN photolysis. The present article demonstrates FMN photolysis as a simple and safe method for sanitary processes.

Inactivation of Pathogens via Visible-Light Photolysis of Riboflavin-5&#8242;-Phosphate

Here, we present a protocol to inactivate pathogenic bacteria with reactive oxygen species produced during photolysis of flavin mononucleotide (FMN) under blue and violet light irradiation of low intensity. FMN photolysis is demonstrated to be a simple and safe method for sanitary processes.

השבתה של פתוגנים באמצעות פוטוליזה של אור נראה של ריבופלבין-5′-פוספט

Riboflavin-5&#39;-phosphate (or flavin mononucleotide; FMN) is sensitive to visible light. Various compounds, including reactive oxygen species (ROS), can ...

Bioengineering

Bacteriophage Effectiveness for Biocontrol of Foodborne Pathogens Evaluated via High-Throughput Settings

Bacterial pathogens continually challenge food safety systems worldwide. With increasing concerns about the emergence of heat- and sanitizer-resistant bacteria, novel antibacterial agents, are urgently needed. A bacteriophage-based biocontrol strategy is the therapeutic use of phages to control bacterial pathogens in agricultural settings. Phage biocontrol is increasingly accepted as a sustainable technology, effective at decontaminating foodborne pathogens. To ensure effective biocontrol outcomes, systematic screening of phage combinations against targeted bacteria under required environmental conditions is crucial. Antibacterial efficacy of phage cocktails may be affected by phage genera and combination, targeted bacterial strains, the multiplicity of infection, temperature, and time. To formulate a phage cocktail with superior efficacy, the proposed method was to systematically evaluate the effectiveness of individual phages and phage cocktails in killing foodborne bacterial pathogens under targeted conditions. Bacterial killing efficacy was monitored by measuring optical density at desired temperatures and durations. Superior phage efficacy was determined by complete inhibition of bacterial growth. The proposed method is a robust, evidence-based approach to facilitate formulating phage cocktails with superior antibacterial efficacy.

This protocol describes a robust method for using high-throughput settings to screen the antibacterial efficacy of bacteriophage cocktails.

יעילות בקטריופאז' עבור שלטונוקל ביולוגי של פתוגנים המועברים במזון מוערכת באמצעות הגדרות תפוקה גבוהה

Bacterial pathogens continually challenge food safety systems worldwide. With increasing concerns about the emergence of heat- and sanitizer-resistant ...

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, mouth, vagina, and skin. Despite the availability of antifungal medication, the mortality rate of invasive candidiasis remains ~50%. Unfortunately, the incidence of drug-resistant C. albicans is increasing globally. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) may offer an alternative or adjuvant treatment to inhibit C. albicans biofilm formation and overcome drug resistance. Rose bengal (RB)-mediated aPDT has shown effective cell killing of bacteria and C. albicans. In this study, the efficacy of RB-aPDT on multidrug-resistant C. albicans is described. A homemade green light-emitting diode (LED) light source is designed to align with the center of a well of a 96-well plate. The yeasts were incubated in the wells with different concentrations of RB and illuminated with varying fluences of green light. The killing effects were analyzed by the plate dilution method. With an optimal combination of light and RB, 3-log growth inhibition was achieved. It was concluded that RB-aPDT might potentially inhibit drug-resistant C. albicans.

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

The growing incidence of drug-resistant Candida albicans is a serious health issue worldwide. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) may offer a strategy to fight against drug-resistant fungal infections. The present protocol describes Rose bengal-mediated aPDT efficacy on a multidrug-resistant C. albicans strain in vitro.

טיפול פוטודינמי בתיווך רוז בנגל לעיכוב קנדידה אלביקנס

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, ...

An In Vitro Model to Study the Effect of 5-Aminolevulinic Acid-mediated Photodynamic Therapy on Staphylococcus aureus Biofilm

Staphylococcus aureus (S. aureus) is a common human pathogen, which causes pyogenic and systemic infections. S. aureus infections are difficult to eradicate not only due to the emergence of antibiotic-resistant strains but also its ability to form biofilms. Recently, photodynamic therapy (PDT) has been indicated as one of the potential treatments for controlling biofilm infections. However, further studies are required to improve our knowledge of its effect on bacterial biofilms, as well as the underlying mechanisms. This manuscript describes an in vitro model of PDT with 5-aminolevulinic acid (5-ALA), a precursor of the actual photosensitizer, protoporphyrin IX (PpIX). Briefly, mature S. aureus biofilms were incubated with ALA and then exposed to light. Subsequently, the antibacterial effect of ALA-PDT on S. aureus biofilm was quantified by calculating the colony forming units (CFUs) and visualized by viability fluorescent staining via confocal laser scanning microscopy (CLSM). Representative results demonstrated a strong antibacterial effect of ALA-PDT on S. aureus biofilms. This protocol is simple and can be used to develop an in vitro model to study the treatment of S. aureus biofilms with ALA-PDT. In the future, it could also be referenced in PDT studies utilizing other photosensitizers for different bacterial strains with minimal adjustments.

An In Vitro Model to Study the Effect of 5-Aminolevulinic Acid-mediated Photodynamic Therapy on Staphylococcus aureus Biofilm

This manuscript describes a protocol to study the antimicrobial effect of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy (ALA-PDT) on a Staphylococcus aureus biofilm. This protocol can be used to develop an in vitro model to study the treatment of bacterial biofilms with PDT in the future.

טיפול במוצרי טסיות דם עם ריבופלבין ואור UV: יעילות גבוהה נגד כייל קטריאלי זיהום

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video