وأيد هذا يعمل من خلال المنح المقدمة من العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا (RGPIN 238٬382-2011) والمعاهد الكندية لأبحاث الصحة (MOP115076). وأيد هيذر بول من العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا للمنح الدراسية للدراسات العليا والمنح ألبرتا ابتكارات حلول الصحة. وأيد ميغان هالام من العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث الدراسات العليا للمنح الدراسية، على منحة فريدريك بانتينغ وتشارلز أفضل كندا العليا، وجائزة لألبرتا للأطفال معهد بحوث مستشفى التدريب في علم الوراثة، تنمية الطفل، والصحة.

تمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل جامعة كالجاري جنة رعاية الحيوان ومطابقة للدليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. 1. سد منفصلة من النسل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل السد من نسلها مدة لا تقل عن 5 دقائق قبل الحلب 12. ملاحظة: يمكن تحلب السد تصل إلى 5-6 ساعة بعد الانفصال 1،6،13، لكن فترات الانفصال أطول من 4 ساعات قد يغير تركيبة حليب 14. في حين لا يظهر الوقت الفاصل للتأثير حليب حجم جمع 12، وينصح أن الوقت الفاصل ثابت أن يستمر طوال فترة الدراسة. مكونات اللبن قد تتغير طوال الرضاعة 15، ولذلك ينبغي بذل المحاولات للحفاظ على يوم جمع الحليب ثابت. ويقترح إنتاج الحليب الأقصى أن يحدث في يوم الرضاعة 14 12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام غرفة الاحتباس الحراري، وضمان الجراء هي قادرة على الحفاظ على الجسم السليم من درجات الحرارةإعادة دون وجود أمهم لمدة الإجراء حلب. ملاحظة: في دراسة قدمت أدناه، تم تنفيذ حلب عند الفطام، عندما كانت السدود حوالي 22 أسابيع من العمر والنسل 21 يوما من العمر، وكان يستخدم لذلك لا غرفة الاحتباس الحراري. </li></ol> 2. مجموعة المتابعة والتحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع كل المواد المطلوبة لإجراء حلب. ملاحظة: جميع المواد يمكن العثور عليها في جدول المواد والمعدات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع وسادة التدفئة على مقاعد البدلاء حيث الحلب ستجري وتغطي لوحة مع مقاعد البدلاء ماصة تحت وسادة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد نظام مخدر. تأكد من أن النظام لديه الأكسجين والأيزوفلورين قبل بداية كاف. إرفاق قناع التخدير التي سيتم استخدامها لتحريض التخدير الأولي إلى الجهاز. وضع قناع التي سيتم استخدامها لصيانة التخدير قريب إذا كان مختلفا عن القناع مخدر الأولي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق إبرة 25 G لحقنة 1 مل لالأوكسيتوسينالحقن باستخدام تقنية العقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على وسادة التدفئة بحيث يتم الحفاظ على درجة حرارة الجسم الأمهات أثناء إجراء حلب. ملاحظة: رصد درجات الحرارة لوحة التدفئة لضمان لوحة لا تصبح ساخنة جدا ويسبب حروقا. بدلا من ذلك، استخدام مصدر الحرارة، مثل طاولة الجراحة ساخنة، التي يمكن تعيينها إلى درجة حرارة معينة. </li></ol> 3. تخدير السد عن طريق الأيزوفلورين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح خزان الأوكسجين وتحويل تدفق إلى 1 L (1000 سم مكعب) لكل دقيقة. بدوره على تدفق الأيزوفلورين وتعيين إلى 5٪. تنبيه: تجنب استنشاق المباشر للمخدر ومنع تراكم أبخرة مخدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير السد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحول إلى قناع الصيانة إذا لزم الأمر، ووضع مستلق سد على وسادة مقعد ماصة. تأكيد تخدير بسبب نقص دواسة المنعكس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحد من تدفق الأيزوفلورين إلى 2-3٪ للصيانة من التخدير. باستمرار مراقبة السد في جميع أنحاء الداخلي لضمان المساواةلا يحدث الضغط والتنفس. ملاحظة: مرة واحدة تحت التخدير، وينبغي حماية العينين السد باستخدام مواد التشحيم العين عقيمة لمنع العينين من الجفاف أو أن تصبح خدش. </li></ol> 4. حقن الأوكسيتوسين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضمان الأوكسيتوسين (20 USP وحدة / مل) لم يجتز تاريخ انتهائها. تطهير القارورة من الأوكسيتوسين مع الكحول المعقم مسح / الكحول وسادة التطهير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام تقنية العقيم، ووضع 2 وحدة دولية (0.1 مل) من الأوكسيتوسين في حقنة. استخدام إبرة جديدة والمحاقن لكل السد التي سيتم تحلب. ملاحظة: الأوكسيتوسين جرعات تتراوح عادة من الحقن واحدة من 1-5 وحدة دولية 1،6،12،16. بدلا من ذلك، جرعة من 4 وحدة دولية / كجم من وزن الجسم يمكن استخدام 12. جرعة واحدة من 2 وحدة دولية يمكن أن يتكرر مرة واحدة إذا واجهت صعوبة في حلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الأوكسيتوسين البريتونى. ادخال الإبرة في الربع السفلي الأيمن من البطن، حيث يشير الإبرة نحو الرأس، في زاويةمن 15-30 درجة مئوية، حوالي 0.5 سم عمق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب على المكبس لضمان الضغط السلبي قبل الحقن. إذا كان يستنشق أي السائل (الدم والبول، ومحتويات الأمعاء، وما إلى ذلك) في حقنة، وإزالة الإبرة ومحاولة حقن بإبرة جديدة والمحاقن. إذا كان يستنشق أي سائل حقن الأوكسيتوسين والتخلص من الإبر والمحاقن مباشرة في وعاء واقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انتظر حوالي 5-15 دقائق لالأوكسيتوسين لتحفيز الحليب خيبة أمل. </li></ol> 5. إعداد مواقع حلب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار المواقع / الحلمات التي سيتم جمع الحليب. الحليب يمكن جمعها من أي حلمة 12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بلطف إزالة الفراء حول الحلمات أن تحلب مع قادين، والفراء قد يسبب صعوبة في جمع العينات بسبب فتل من الحليب. أن يكون لطيف - الجلد حول الحلمات حساسة للغاية ويمكن أن تكون جافة وبالتالي هو عرضة للخدوش والدموع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم ط حلمةليس ضروريا، ولكن بشكل اختياري، وتنظيف حلمة بماء فاتر بعد إزالة الفراء. إعداد موقعين على الأقل كما قد تكون هناك حاجة لجمع الحليب أكثر من موقع. ملاحظة: إذا كان تحليل الحليب ويشمل التنميط الميكروبية، قد تتطلب منطقة حلمة التعقيم مع اليود 5. </li></ol> 6. جمع الحليب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الضغط بلطف على قاعدة حلمة، وطرد الحليب لجمع يدويا. ملاحظة: إذا كان تحليل الحليب ويشمل التنميط الميكروبي، ينبغي التخلص منها قطرات القليلة الأولى من الحليب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع قطرات الحليب في أنبوب شعري، وملء الأنبوب الشعري. الأنابيب الشعرية التي تستوعب كميات أكبر (على سبيل المثال، 50 ميكرولتر) تسهيل عملية. ملاحظة: إذا واجهت صعوبة في جمع الحليب، يمكن أن تدار جرعة ثانية من الأوكسيتوسين. فمن المستحسن جرعة لا يتجاوز 4 وحدة دولية المجموع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستغناء عن الحليب من الأنابيب الشعرية إلى أنبوب microcentrifuge العقيمة التي كتبهالمس نهاية الأنبوب الذي تم استخدامه لرسم الحليب من حلمة إلى جانب أنبوب microcentrifuge - مراقبة الحليب يسحبها من الأنابيب الشعرية عبر العمل الشعري. ملاحظة: &#39;ضربة من &quot;الحليب التي لم يتم رسمها في أنبوب باستخدام إبرة 18 G تعلق على حقنة 1 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستمرار مراقبة السد لعلامات الألم أو صعوبة التنفس وضبط تدفق الأيزوفلورين وفقا لذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مواصلة جمع الحليب كما هو موضح في هذا القسم حتى تم جمع كمية كافية من الحليب لتحليل الحليب الذي تم اختياره. لcreamatocrit والبروتين تقرير تركيز هو موضح أدناه، وجمع 0.25 مل من الحليب. ملاحظة: استخدم موقع حلب مختلف إذا حليب خيبة أمل تبطئ أو الموقع المختار لا تطرد الحليب بما فيه الكفاية. A أقصى ما يقرب من 2.5 مل من الحليب لكل حيوان يمكن جمع 17، أو ما يصل إلى 0.5 مل لكل حلمة. يوصي الباحثون إلى أن إجمالي الوقت تحت التخدير أن يقتصر على ما يقرب من 45-60 دقيقة، سص 45 دقيقة من حلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الحليب في أنبوب مكداس مكروي لقياس creamatocrit من عينات الحليب الطازج، وختم نهاية الأنبوب مع الطين تسرب. تسمية أنبوب مكداس مكروي مع ID السد وتخزين عينة الحليب في وضع مستقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما الحلب غير الكامل، وإيقاف تدفق الأيزوفلورين والأكسجين. إزالة القناع من السد ومواصلة رصد السد حتى مستيقظا. فمن المستحسن أن لم يكن واعيا تماما، يجب وضع سد على وسادة مقعد ماصة خلال فترة النقاهة، وليس مباشرة على الفراش القفص لمنع الفراش من أن يستنشق أو الخدش عيون السد خلال الانتعاش. ملاحظة: لا تترك السد غير المراقب حتى استعاد وعيه أنه كاف للحفاظ على الإستلقاء القصية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا ليس هناك حاجة لمزيد من التحليلات، وتجميد الحليب في -80 ° C. واقترح آخرون أن الحليب يمكن تخزينها لمدة تصل إلى 3 ساعات في 4 درجات مئوية أو 5 أشهر في -20 ° C 18. </li></ol> 7. Creamatocrit القياس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقدير نسبة الدهون في الحليب عن طريق حساب creamatocrit الحليب (النسبة المئوية للكريم في عينة حليب) 19. ملاحظة: وقد أثبتت القياسات مع الحليب البشري أن الحليب سواء الطازجة أو المجمدة يمكن استخدامها لقياس creamatocrit، ومع ذلك يرتبط ارتباطا أكثر شدة الحليب الطازج (ص = 0.92 مقابل ص = 0.90) مع تركيز الدهون 11. يجب أن تبقى استخدام الحليب الطازج أو المجمد لقياس creamatocrit متناسقة عبر الدراسة، كما يرتبط الحليب المذوبة مع انخفاض طفيف في creamatocrit تقدر 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحصول على الحليب الطازج، وجمع عينة من الحليب من حلمة في أنبوب مكداس مكروي. ملء ما لا يقل عن ¾ الكامل (حوالي 15-20 ميكرولتر). بدلا من ذلك، رسم الحليب الطازج من العينة التي تم جمعها في أنبوب شعري بعد يمزج جيدا. ختم نهاية بالطين تسرب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أنبوب شعري في الدوار الهيماتوكريت، معنهاية مختومة لافتا نحو الخارج، وضمان أجهزة الطرد المركزي غير متوازنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء تدور الهيماتوكريت (120 ثانية في 13700 x ج). ملاحظة: الوقت سبين أو السرعة قد تتغير اعتمادا على نموذج من أجهزة الطرد المركزي المستخدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أنبوب من أجهزة الطرد المركزي بعد زيادة ونقصان اكتمال وإجراء القياسات لحساب creamatocrit. مراقبة فصل العينة إلى طبقة كريم وطبقة واضحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس وتسجيل ويبلغ طول السائل في الأنبوب وطول الدهون (كريم) طبقة باستخدام الفرجار أو مسطرة. ملاحظة: يتم التعبير عن creamatocrit كنسبة مئوية من طبقة كريم ضمن عينة الحليب 19، المحسوبة على النحو (طول طبقة كريم / يبلغ طول العمود الحليب) × 100 (الشكل 1A). حساب التركيز والطاقة القيم الدهون من قياس creamatocrit كما يلي: تركيز الدهون (ز / L) = (creamatocrit (٪) - 0.59) /0.146 (1B الشكل) 19. قيمة الطاقة (KCآل / L) = 290 + (66.8 * creamatocrit (٪) (الشكل 1C) 19. </li></ol> 8. البروتين تركيز تقرير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مصل بقري الزلال كمعيار البروتين، وتحديد تركيز البروتين الكلي الحليب باستخدام فحص البروتين القياسية، مثل لوري فحص البروتين 6. ملاحظة: التخفيف من الحليب قد يكون من الضروري للقياسات بروتين الحليب لتسقط داخل المنحنى القياسي للفحص. </li></ol>

<ol>
	<li>Izumi, H., Kosaka, N., Shimizu, T., Sekine, K., Ochiya, T., Takase, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-dependent+expression+profiles+of+microRNAs+and+mRNAs+in+rat+milk+whey.">Time-dependent expression profiles of microRNAs and mRNAs in rat milk whey.</a> PLoS ONE. 9 (2), e0088843 (2014).</li><li>Hsieh, C. C., Hern&#225;ndez-Ledesma, B., Fern&#225;ndez-Tom&#233;, S., Weinborn, V., Barile, D., de Moura Bell, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk+Proteins,+Peptides,+and+Oligosaccharides:+Effects+against+the+21st+Century+Disorders.">Milk Proteins, Peptides, and Oligosaccharides: Effects against the 21st Century Disorders.</a> BioMed Res. Int. , (2015).</li><li>Rogier, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+from+mother:+Long-term+impact+of+antibodies+in+breast+milk+on+the+gut+microbiota+and+intestinal+immune+system+of+breastfed+offspring.">Lessons from mother: Long-term impact of antibodies in breast milk on the gut microbiota and intestinal immune system of breastfed offspring.</a> Gut Microbes. 5 (5), 663-668 (2014).</li><li>Keen, C. L., L&#246;nnerdal, B., Clegg, M., Hurley, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+in+composition+of+rat+milk:+trace+elements,+minerals,+protein,+carbohydrate+and+fat.">Developmental changes in composition of rat milk: trace elements, minerals, protein, carbohydrate and fat.</a> J. of Nutr. 111 (2), 226-236 (1981).</li><li>Cabrera-Rubio, R., Collado, M. C., Laitinen, K., Salminen, S., Isolauri, E., Mira, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+milk+microbiome+changes+over+lactation+and+is+shaped+by+maternal+weight+and+mode+of+delivery.">The human milk microbiome changes over lactation and is shaped by maternal weight and mode of delivery.</a> Am. J. Clin. Nutr. 96 (3), 544-551 (2012).</li><li>Hallam, M. C., Barile, D., Meyrand, M., German, J. B., Reimer, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+high-protein+or+high-prebiotic-fiber+diets+affect+maternal+milk+composition+and+gut+microbiota+in+rat+dams+and+their+offspring.">Maternal high-protein or high-prebiotic-fiber diets affect maternal milk composition and gut microbiota in rat dams and their offspring.</a> Obesity. 22 (11), 2344-2351 (2014).</li><li>Munch, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+Profiling+of+microRNA+by+Next-Gen+Deep+Sequencing+Reveals+Known+and+Novel+miRNA+Species+in+the+Lipid+Fraction+of+Human+Breast+Milk.">Transcriptome Profiling of microRNA by Next-Gen Deep Sequencing Reveals Known and Novel miRNA Species in the Lipid Fraction of Human Breast Milk.</a> PLoS ONE. 8 (2), e50564 (2013).</li><li>Li, M., Sloboda, D. M., Vickers, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+obesity+and+developmental+programming+of+metabolic+disorders+in+offspring:+Evidence+from+animal+models.">Maternal obesity and developmental programming of metabolic disorders in offspring: Evidence from animal models.</a> Exp Diabetes Res. 2011, (2011).</li><li>Ellis, P. J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrifty+metabolic+programming+in+rats+is+induced+by+both+maternal+undernutrition+and+postnatal+leptin+treatment,+but+masked+in+the+presence+of+both:+implications+for+models+of+developmental+programming.">Thrifty metabolic programming in rats is induced by both maternal undernutrition and postnatal leptin treatment, but masked in the presence of both: implications for models of developmental programming.</a> BMC Genomics. 15, 49 (2014).</li><li>Gomez-Gallago, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+to+collect+high+volumes+of+milk+from+mice+(Mus+musculus).">A method to collect high volumes of milk from mice (Mus musculus).</a> An. Vet. Murcia. 29, 55-61 (2013).</li><li>Wang, C. D., Chu, P. S., Mellen, B. G., Shenai, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creamatocrit+and+the+nutrient+composition+of+human+milk.">Creamatocrit and the nutrient composition of human milk.</a> J. Perinatol. 19 (5), 343-346 (1999).</li><li>Rodgers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+aspects+of+milk+collection+in+the+rat.">Practical aspects of milk collection in the rat.</a> Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).</li><li>Godbole, V. Y., Grundleger, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composition+of+rat+milk+from+day+5+to+20+of+lactation+and+milk+intake+of+lean+and+preobese+zucker+pups.">Composition of rat milk from day 5 to 20 of lactation and milk intake of lean and preobese zucker pups.</a> J. Nutr. 111 (3), 480-487 (1981).</li><li>Del Prado, M., Delgado, G., Villalpando, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+lipid+intake+during+pregnancy+and+lactation+alters+milk+composition+and+production+and+litter+growth+in+rats.">Maternal lipid intake during pregnancy and lactation alters milk composition and production and litter growth in rats.</a> J. Nutr. 127 (3), 458-462 (1997).</li><li>Nicholas, K. R., Hartmann, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk+secretion+in+the+rat:+progressive+changes+in+milk+composition+during+lactation+and+weaning+and+the+effect+of+diet.">Milk secretion in the rat: progressive changes in milk composition during lactation and weaning and the effect of diet.</a> Comp. Biochem. Physiol. A. Comp. Physiol. 98 (3-4), 533-542 (1991).</li><li>Azara, C. R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+intake+during+lactation+alters+milk+nutrient+composition+and+growth+and+mineral+status+of+rat+pups.">Ethanol intake during lactation alters milk nutrient composition and growth and mineral status of rat pups.</a> Biol. Res. 41 (3), 317-330 (2008).</li><li>Keen, C. L., L&#246;nnerdal, B., Sloan, M. V., Hurley, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+milking+procedure+on+rat+milk+composition.">Effects of milking procedure on rat milk composition.</a> Physiol. Behav. 24 (3), 613-615 (1980).</li><li>Romeu-Nadal, M., Castellote, A. I., L&#242;pez-Sabater, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cold+storage+on+vitamins+C+and+E+and+fatty+acids+in+human+milk.">Effect of cold storage on vitamins C and E and fatty acids in human milk.</a> Food Chem. 106 (1), 65-70 (2008).</li><li>Lucas, A., Gibbs, J. A., Lyster, R. L., Baum, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creamatocrit:+simple+clinical+technique+for+estimating+fat+concentration+and+energy+value+of+human+milk.">Creamatocrit: simple clinical technique for estimating fat concentration and energy value of human milk.</a> Br. Med. J. 1 (6119), 1018-1020 (1978).</li><li>Furtado, K., Andrade, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+beneficial+and+adverse+effects+of+inhalable+and+injectable+anaesthetics+in+animal+models:+a+mini-review.">Comparison of the beneficial and adverse effects of inhalable and injectable anaesthetics in animal models: a mini-review.</a> OA Anaesthetics. 1 (2), 20 (2013).</li><li>Hausman Kedem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+advanced+maternal+age+upon+human+milk+fat+content.">The effect of advanced maternal age upon human milk fat content.</a> Breastfeed. Med. 8 (1), 116-119 (2013).</li><li>Mandel, D., Lubetzky, R., Dollberg, S., Barak, S., Mimouni, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+and+energy+contents+of+expressed+human+breast+milk+in+prolonged+lactation.">Fat and energy contents of expressed human breast milk in prolonged lactation.</a> Pediatrics. 116 (3), e432-e435 (2005).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم تضارب المصالح في الكشف عنها. وأجريت التجارب على الحيوانات فقط وفقا للبروتوكولات CCAC المعتمدة.

Investigations into maternal milk components have increased as interest in early life development research rises. As the sole source of nutrition during the neonatal period, the bioactive compounds in milk are essential for ideal growth and development, especially in the context of intestinal and immune health3. The method presented here is a simple, non-invasive method of collecting milk from the lactating rat in amounts sufficient for downstream analysis, such as oligosaccharide profiling6. The me...

الحليب هو المصدر الوحيد لتغذية الثدييات حديثي الولادة، وتوفير الطاقة والمواد المغذية للنمو الرضع و1،2 التنمية. بينما الحليب يتكون أساسا من الخلايا، والدهون، والبروتين 1، كما أنه يحتوي على عدد كبير من المركبات النشطة بيولوجيا التي تعدل تطوير الحياة في وقت مبكر من ذرية بما في ذلك الإنزيمات، الكربوهيدرات، الهرمونات، والأجسام المضادة، عوامل النمو، السيتوكينات، exosomes، microvesicles، والرنا صغيرة من هذا القبيل كما الرنا الميكروي 1،2. الدور الأساسي للحليب الأم في إنشاء ذرية المناعة، وصحة الأمعاء 3، بالإضافة إلى أدلة على أن الرضاعة الطبيعية الرضع أقل عرضة للإصابة بالأمراض 2، يسلط الضوء على أهمية تحديد مكونات الحليب المرتبطة بعمليات المرض في وقت مبكر من الحياة والآليات الجزيئية المشاركة في أعمالهم. الفئران النامية هو نموذج شعبية للتحقيق في تأثير مختلف الغذائية والفسيولوجية، والتدخلات الكيميائية في وقت مبكرتطوير -life 4. ولذلك فإن تحليل الحليب الفئران توفير نظرة جديدة إلى صحة الأم والأبناء. التقدم العلمي الحالية توفر الآن زيادة الفرص المتاحة للتحريات متعمقة للآثار مكونات الحليب محددة على الصحة والمرض. على سبيل المثال، تسلسل ملامح الحليب البكتيرية وتوضيح دورها في استعمار الامعاء في وقت مبكر للامعاء الرضيع 5، قدمت تحليل الطيف الكتلي من يغوساكاريدس الحليب التبصر في تغيير ملامح الحليب قليل السكاريد عن طريق النظام الغذائي للأم 6، وتسلسل عميق من الرنا الميكروي يفرز في كريات الدهون في حليب الأم يسلط الضوء على الأدوار المحتملة في النسخ الجيني، والتمثيل الغذائي، والوظيفة المناعية 7. نماذج الفئران تمثل واحدة من الكائنات النموذج الأكثر شعبية المستخدمة في الدراسات الأمهات 8،9. ميزة واحدة هي قصيرة الحمل والرضاعة فترات، approximat فقط دائماعل 21 يوما لكل منهما؛ وبالتالي فإن الوقت الإجمالي من بداية الحمل إلى الرضاعة يمثل فترة قصيرة من الوقت الذي يمكن أن تتولد البيانات القيمة. حجم أكبر من الفئران بالمقارنة مع الفئران، في سياق جمع الحليب، يمكن أن توفر ميزة كبيرة من حيث الحجم من الحليب وسهولة جمع الحليب. إنتاج الحليب في الماوس، على سبيل المثال، يبدو أن تعتمد على وزن الجسم الكلي مع الفئران أثقل إنتاج المزيد من الحليب 10. هنا، يتم توفير وصفا عاما لجمع اليدوي من الحليب من الفئران المرضعات. هذا البروتوكول يتطلب الحد الأدنى من المعدات، وغير الغازية، وغير مكلفة، ويمكن استخدامها لجمع كميات كافية من الحليب لإجراء المزيد من التحليلات المصب. وباختصار، هو تخدير السد مع isoflurane، يتم تحفيز الحليب خيبة أمل من قبل الأوكسيتوسين، ويتم جمع الحليب في الأنابيب الشعرية عن طريق التعبير المستعمل من الحليب. أخيرا، وكما عنصرين رئيسيين من الحليب والدهون والبروتينات، وdescriptio موجزويرد ن تقدير الحليب نسبة الدهون باستخدام قياسات creamatocrit 11 النوعي والكمي لتركيز البروتين الكلي باستخدام فحص البروتين القياسية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="829">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Equipment - Milking</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 ml syringes</td>
			<td style="width:191px;">BD-Canada</td>
			<td style="width:119px;">309602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">25 G needles</td>
			<td style="width:191px;">BD-Canada</td>
			<td style="width:119px;">305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18 G needles</td>
			<td style="width:191px;">BD-Canada</td>
			<td style="width:119px;">305196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 ul Microdispenser Capillary Tubes</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">21-169D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxytocin (20 USP Units/ml)</td>
			<td style="width:191px;">Bimeda-MTC</td>
			<td style="width:119px;">1OXY015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">PPC Vet Isoflurane Inhalation Anesthetic, 250 ml</td>
			<td style="width:191px;">Fresenius Kabi</td>
			<td style="width:119px;">M60302</td>
			<td>Used on the order of a veterinarian</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile Alcohol Prep Pad</td>
			<td style="width:191px;">Dukal</td>
			<td style="width:119px;">853</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Absorbent Bench Underpad</td>
			<td style="width:191px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82020-845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Maxi-Therm Hyper/Hypothermia Blanket</td>
			<td style="width:191px;">Cincinnati Sub-Zero</td>
			<td style="width:119px;">274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Rodent Anesthesia Machine with Vaporizer</td>
			<td style="width:191px;">Benson Medical Industries Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Subject to individual laboratory needs</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:353px;">Animal Masks</td>
			<td style="width:191px;">Benson Medical Industries Inc.</td>
			<td style="width:119px;">50100/50102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge Tubes</td>
			<td style="width:191px;">Axygen</td>
			<td style="width:119px;">MCT-060-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ChroMini Professional Trimmer</td>
			<td style="width:191px;">Wahl</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Equipment - Creamatocrit</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">StatSpin SafeCrit Plastic Microhematocrit Tubes (Untreated)</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">22-274-914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Critoseal Capillary Tube Sealant Tray</td>
			<td style="width:191px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">470161-478</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">StatSpin CritSpin Microhematocrit Centrifuge</td>
			<td style="width:191px;">Beckman Coulter, Inc</td>
			<td style="width:119px;">X00-004999-001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

milk collection in the rat using capillary tubes and estimation of milk fat content by creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also contains a vast number of bioactive compounds that greatly affect the development of the neonate. The analysis of milk components will help elucidate key factors that link maternal metabolism and health with offspring growth and development. The laboratory rat represents a popular model organism for maternal studies, and rat milk can be used to examine the effect of various maternal physiological, nutritional, and pharmacological interventions on milk components, which may then impact offspring health. Here a simple method of manually collecting milk from the lactating rat that can be performed by a single investigator, does not require specialized vacuum or suction equipment, and provides sufficient milk for subsequent downstream analysis is described. A method for estimating the fat content of milk by measuring the percentage of cream within the milk sample, known as the creamatocrit, is also presented. These methods can ultimately be used to increase insight into maternal-child health and to elucidate maternal factors that are involved in proper growth and development of offspring.

تم جمع الحليب كما هو موضح في الفطام من السدود ويستار (حوالي 22 أسابيع من العمر، وزنها 350-400 ز) أن تستهلك التحكم (AIN-93g و، ن = 5)، نسبة عالية من البروتين (40٪ الكازين وزن / وزن، ن = 5) ، أو الألياف تسبق التكوين الجنيني عالية (21.6٪ وزن / وزن، 1: 1 نسبة oligofructose وحبوب، ن = 4) النظام الغذائي ?...

Watch this Scientific Journal Video about Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit at JoVE.com

Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.

الحليب مجموعة في الفئران عن طريق أنابيب شعرية وتقدير من الحليب الدسم المحتوى من قبل Creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also ...

milk-collection-rat-using-capillary-tubes-estimation-milk-fat-content

Research

JoVE Journal

Biology

12.2K Views.  University of Calgary. Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.

Video: Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing measurement of multiple cellular phenotypes within a single assay. In this study, we utilized HCA to develop a novel assay for neurotoxicity. Neurotoxicity assessment represents an important part of drug safety evaluation, as well as being a significant focus of environmental protection efforts. Additionally, neurotoxicity is also a well-accepted in vitro marker of the development of neurodegenerative diseases such as Alzheimer's and Parkinson's diseases. Recently, the application of HCA to neuronal screening has been reported. By labeling neuronal cells with &beta;III-tubulin, HCA assays can provide high-throughput, non-subjective, quantitative measurements of parameters such as neuronal number, neurite count and neurite length, all of which can indicate neurotoxic effects. However, the role of astrocytes remains unexplored in these models. Astrocytes have an integral role in the maintenance of central nervous system (CNS) homeostasis, and are associated with both neuroprotection and neurodegradation when they are activated in response to toxic substances or disease states. GFAP is an intermediate filament protein expressed predominantly in the astrocytes of the CNS. Astrocytic activation (gliosis) leads to the upregulation of GFAP, commonly accompanied by astrocyte proliferation and hypertrophy. This process of reactive gliosis has been proposed as an early marker of damage to the nervous system. The traditional method for GFAP quantitation is by immunoassay. This approach is limited by an inability to provide information on cellular localization, morphology and cell number. We determined that HCA could be used to overcome these limitations and to simultaneously measure multiple features associated with gliosis - changes in GFAP expression, astrocyte hypertrophy, and astrocyte proliferation - within a single assay. In co-culture studies, astrocytes have been shown to protect neurons against several types of toxic insult and to critically influence neuronal survival. Recent studies have suggested that the use of astrocytes in an in vitro neurotoxicity test system may prove more relevant to human CNS structure and function than neuronal cells alone. Accordingly, we have developed an HCA assay for co-culture of neurons and astrocytes, comprised of protocols and validated, target-specific detection reagents for profiling &beta;III-tubulin and glial fibrillary acidic protein (GFAP). This assay enables simultaneous analysis of neurotoxicity, neurite outgrowth, gliosis, neuronal and astrocytic morphology and neuronal and astrocytic development in a wide variety of cellular models, representing a novel, non-subjective, high-throughput assay for neurotoxicity assessment. The assay holds great potential for enhanced detection of neurotoxicity and improved productivity in neuroscience research and drug discovery.

This article describes a novel protocol and reagent set designed for sensitive measurement of neurotoxic effects of compounds and treatments on co-cultures of neurons and astrocytes using high content analysis. Results demonstrate that high content analysis represents an exciting novel technology for neurotoxicity assessment.

والخلايا العصبية ونجمية المشارك الثقافة الفحص لتحليل محتوى عال من العصبية

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Isolation of Rat Portal Fibroblasts by In situ Liver Perfusion

Liver fibrosis is defined by the excessive deposition of extracellular matrix by activated myofibroblasts. There are multiple precursors of hepatic myofibroblasts, including hepatic stellate cells, portal fibroblasts and bone marrow derived fibroblasts 1. Hepatic stellate cells have been the best studied, but portal fibroblasts are increasingly recognized as important contributors to the myofibroblast pool, particularly in biliary fibrosis 2. Portal fibroblasts undergo proliferation in response to biliary epithelial injury, potentially playing a key role in the early stages of biliary scarring 3-5. A method of isolating portal fibroblasts would allow in vitro study of this cell population and lead to greater understanding of the role portal fibroblasts play in biliary fibrosis.
Portal fibroblasts have been isolated using various techniques including outgrowth 6, 7 and liver perfusion with enzymatic digestion followed by size selection 8. The advantage of the digestion and size selection technique compared to the outgrowth technique is that cells can be studied without the necessity of passage in culture. Here, we describe a modified version of the original technique described by Kruglov and Dranoff 8 for isolation of portal fibroblasts from rat liver that results in a relatively pure population of primary cells.

Isolation of Rat Portal Fibroblasts by In situ Liver Perfusion

A technique for isolating portal fibroblasts from rat liver is described. Livers are perfused and digested in situ with collagenase, followed by ex vivo digestion of the liver slurry and size selection of cells. This method provides a pure population of portal fibroblasts without the need for passage in culture.

عزل الخلايا الليفية بوابة الجرذ من قبل<em&gt; في الموقع</em&gt; الكبد الإرواء

Liver fibrosis is defined  by the excessive deposition of extracellular matrix by activated  myofibroblasts. There are multiple precursors of hepatic ...

Functional Imaging of Brown Fat in Mice with 18F-FDG micro-PET/CT

Brown adipose tissue (BAT) differs from white adipose tissue (WAT) by its discrete location and a brown-red color due to rich vascularization and high density of mitochondria. BAT plays a major role in energy expenditure and non-shivering thermogenesis in newborn mammals as well as the adults 1. BAT-mediated thermogenesis is highly regulated by the sympathetic nervous system, predominantly via &beta; adrenergic receptor 2, 3. Recent studies have shown that BAT activities in human adults are negatively correlated with body mass index (BMI) and other diabetic parameters 4-6. BAT has thus been proposed as a potential target for anti-obesity/anti-diabetes therapy focusing on modulation of energy balance 6-8. While several cold challenge-based positron emission tomography (PET) methods are established for detecting human BAT 9-13, there is essentially no standardized protocol for imaging and quantification of BAT in small animal models such as mice. Here we describe a robust PET/CT imaging method for functional assessment of BAT in mice. Briefly, adult C57BL/6J mice were cold treated under fasting conditions for a duration of 4 hours before they received one dose of 18F-Fluorodeoxyglucose (FDG). The mice were remained in the cold for one additional hour post FDG injection, and then scanned with a small animal-dedicated micro-PET/CT system. The acquired PET images were co-registered with the CT images for anatomical references and analyzed for FDG uptake in the interscapular BAT area to present BAT activity. This standardized cold-treatment and imaging protocol has been validated through testing BAT activities during pharmacological interventions, for example, the suppressed BAT activation by the treatment of &beta;-adrenoceptor antagonist propranolol 14, 15, or the enhanced BAT activation by &beta;3 agonist BRL37344 16. The method described here can be applied to screen for drugs/compounds that modulate BAT activity, or to identify genes/pathways that are involved in BAT development and regulation in various preclinical and basic studies.

Functional Imaging of Brown Fat in Mice with 18F-FDG micro-PET/CT

A method of functional imaging of mouse brown adipose tissue (BAT) is described in which cold-stimulated uptake of 18F-Fluorodeoxyglucose (FDG) in BAT is non-invasively assessed with a standardized micro-PET/CT protocol. This method is robust and sensitive to detect differences in BAT activities in mouse models.

وظيفية التصوير الشحوم البنية في الفئران مع micro-PET/CT FDG

Brown adipose tissue (BAT) differs from white adipose  tissue (WAT) by its discrete location and a brown-red color due to rich  vascularization and high ...

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Milk Collection Methods for Mice and Reeves&#039; Muntjac Deer

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

طرق جمع الحليب لالفئران وريفز &#39;Muntjac الغزلان

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Collection and Analysis of Arabidopsis Phloem Exudates Using the EDTA-facilitated Method

The plant phloem is essential for the long-distance transport of (photo-) assimilates as well as of signals conveying biotic or abiotic stress. It contains sugars, amino acids, proteins, RNA, lipids and other metabolites. While there is a large interest in understanding the composition and function of the phloem, the role of many of these molecules and thus, their importance in plant development and stress response has yet to be determined. One barrier to phloem analysis lies in the fact that the phloem seals itself upon wounding. As a result, the number of plants from which phloem sap can be obtained is limited. One method that allows collection of phloem exudates from several plant species without added equipment is the EDTA-facilitated phloem exudate collection described here. While it is easy to use, it does lead to the wounding of cells and care has to be taken to remove contents of damaged cells. In addition, several controls to prove purity of the exudate are necessary. Because it is an exudation rather than a direct collection of the phloem sap (not possible in many species) only relative quantification of its contents can occur. The advantage of this method over others is that it can be used in many herbaceous or woody plant species (Perilla, Arabidopsis, poplar, etc.) and requires minimal equipment and training. It leads to reasonably large amounts of exudates that can be used for subsequent analysis of proteins, sugars, lipids, RNA, viruses and metabolites. It is simple enough that it can be used in both a research as well as in a teaching laboratory.

Collection and Analysis of Arabidopsis Phloem Exudates Using the EDTA-facilitated Method

Knowledge of the composition of the phloem sap as well as the mechanism of its loading and long-distance transport is essential for the understanding of long-distance signaling in plant development and stress/pathogen response and of assimilate transport. This manuscript describes the collection of phloem exudates using the EDTA-facilitated method.

جمع وتحليل<em&gt; نبات الأرابيدوبسيس</em&gt; اللحاء الإفرازات باستخدام أسلوب EDTA-سهلت

The plant phloem is essential for the long-distance transport of (photo-) assimilates as well as of signals conveying biotic or abiotic stress. It ...

Cellular Redox Profiling Using High-content Microscopy

Reactive oxygen species (ROS) regulate essential cellular processes including gene expression, migration, differentiation and proliferation. However, excessive ROS levels induce a state of oxidative stress, which is accompanied by irreversible oxidative damage to DNA, lipids and proteins. Thus, quantification of ROS provides a direct proxy for cellular health condition. Since mitochondria are among the major cellular sources and targets of ROS, joint analysis of mitochondrial function and ROS production in the same cells is crucial for better understanding the interconnection in pathophysiological conditions. Therefore, a high-content microscopy-based strategy was developed for simultaneous quantification of intracellular ROS levels, mitochondrial membrane potential (&#916;&#936;m) and mitochondrial morphology. It is based on automated widefield fluorescence microscopy and image analysis of living adherent cells, grown in multi-well plates, and stained with the cell-permeable fluorescent reporter molecules CM-H2DCFDA (ROS) and TMRM (&#916;&#936;m and mitochondrial morphology). In contrast with fluorimetry or flow-cytometry, this strategy allows quantification of subcellular parameters at the level of the individual cell with high spatiotemporal resolution, both before and after experimental stimulation. Importantly, the image-based nature of the method allows extracting morphological parameters in addition to signal intensities. The combined feature set is used for explorative and statistical multivariate data analysis to detect differences between subpopulations, cell types and/or treatments. Here, a detailed description of the assay is provided, along with an example experiment that proves its potential for unambiguous discrimination between cellular states after chemical perturbation.

This paper presents a high-content microscopy workflow for simultaneous quantification of intracellular ROS levels, as well as mitochondrial membrane potential and morphology &#8211; jointly referred to as mitochondrial morphofunction &#8211; in living adherent cells using the cell-permeant fluorescent reporter molecules 5-(and-6)-chloromethyl-2&#39;,7&#39;-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester (CM-H2DCFDA) and tetramethylrhodamine methylester (TMRM).

الخلوية الأكسدة التنميط باستخدام عالية المحتوى المجهري

Reactive oxygen species (ROS) regulate essential cellular processes including gene expression, migration, differentiation and proliferation. However, ...

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in mammals. However, humans cannot oxidize cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid to cytidine monophosphate-N-glycolylneuraminic acid due to a primary exon deletion of the CMAH gene. To understand the effects and implications of the lack of CMAH activity in more detail, a Cmah knock-out model in mice is of keen interest in basic and applied research. The analysis method to determine the phenotype of this mouse model is herein described in detail, and is based on the detection of both N-acetylneuraminic acid and N-glycolylenuraminic acid in the liver and milk of wild-type and Cmah knock-out mice. Endogenous sialic acids are released and derivatized with o-phenylenediamine to generate fluorogenic derivatives, which can be subsequently analyzed by HPLC. The presented protocol can be also applied for the analysis of milk and tissue samples from various other origins, and may be of use to investigate the nutritional and health effects of N-glycolylneuraminic acid.

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

We describe a HPLC-based method for the determination of N-acetylneuraminic acid and N-glycolylenuraminic acid in mouse liver and milk.

تحديد الأحماض السياليك في الكبد وعينات الحليب من البرية من نوع و<em&gt; CMAH</em&gt; خروج المغلوب الفئران.

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in ...

Analyzing Starvation-Induced Autophagy in the Drosophila melanogaster Larval Fat Body

Autophagy is a cellular self-digestion process. It delivers cargo to the lysosomes for degradation in response to various stresses, including starvation. The malfunction of autophagy is associated with aging and multiple human diseases. The autophagy machinery is highly conserved-from yeast to humans.&#160;The larval fat body of Drosophila melanogaster, an analog for vertebrate liver and adipose tissue, provides a unique model for monitoring autophagy in vivo. Autophagy can be easily induced by nutrient starvation in the larval fat body. Most autophagy-related genes are conserved in Drosophila. Many transgenic fly strains expressing tagged autophagy markers have been developed, which facilitates the monitoring of different steps in the autophagy process. The clonal analysis enables a close comparison of autophagy markers in cells with different genotypes in the same piece of tissue. The current protocol details procedures for (1) generating somatic clones in the larval fat body, (2) inducing autophagy via amino acid starvation, and (3) dissecting the larval fat body, aiming to create a model for analyzing differences in autophagy using an autophagosome marker (GFP-Atg8a) and clonal analysis.

Analyzing Starvation-Induced Autophagy in the Drosophila melanogaster Larval Fat Body

The present protocol describes the induction of autophagy in the Drosophila melanogaster larval fat body via nutrient depletion and analyzes changes in autophagy using transgenic fly strains.

تحليل الالتهام الذاتي الناجم عن الجوع في الجسم الدهني ليرقات ذبابة الفاكهة

Autophagy is a cellular self-digestion process. It delivers cargo to the lysosomes for degradation in response to various stresses, including starvation. ...

القياس الكمي للتسلل الدهني للعضلات الهيكلية عن طريق إزالة الخلايا

Decellularization-Based Quantification of Skeletal Muscle Fatty Infiltration

Fatty infiltration is the accumulation of adipocytes between myofibers in skeletal muscle and is a prominent feature of many myopathies, metabolic disorders, and dystrophies. Clinically in human populations, fatty infiltration is assessed using noninvasive methods, including computed tomography (CT), magnetic resonance imaging (MRI), and ultrasound (US). Although some studies have used CT or MRI to quantify fatty infiltration in mouse muscle, costs and insufficient spatial resolution remain challenging. Other small animal methods utilize histology to visualize individual adipocytes; however, this methodology suffers from sampling bias in heterogeneous pathology. This protocol describes the methodology to qualitatively view and quantitatively measure fatty infiltration comprehensively throughout intact mouse muscle and at the level of individual adipocytes using decellularization. The protocol is not limited to specific muscles or specific species and can be extended to human biopsy. Additionally, gross qualitative and quantitative assessments can be made with standard laboratory equipment for little cost, making this procedure more accessible across research laboratories.

تسليط الضوء على المؤلف: القياس الكمي القائم على إزالة الخلايا للتسلل الدهني للعضلات الهيكلية  

The present study describes decellularization-based methodologies for visualizing and quantifying intramuscular adipose tissue (IMAT) deposition through intact muscle volume, as well as quantifying metrics of individual adipocytes that comprise IMAT.