この作品は、自然科学とカナダの工学研究評議会（RGPIN 238382から2011）およびヘルスリサーチ（MOP115076）のカナダの研究所からの助成金を介してサポートされていました。ヘザー・ポールは、自然科学とカナダの工学研究審議会大学院奨学金とアルバータ革新健康ソリューション奨学金によってサポートされていました。ミーガン・ハラムは、自然科学と工学研究評議会大学院奨学金、フレデリック・バンティングとチャールズベストカナダ大学院奨学金、およびアルバータ州の小児病院研究所研修遺伝学賞、子どもの発達、および健康によってサポートされていました。

このプロトコルは、カルガリー大学の動物実験委員会によって承認され、 実験動物の管理と使用に関する指針に準拠しました。 子孫から1.個別のダム<ol><li> 12を搾乳する前に、5分の最小のための彼女の子孫からダムを区切ります。 注：ダムは、しかし長い4時間以上の分離の期間は、乳組成物14 を変更することができる 、分離1,6,13後5-6時間までに搾乳することができます。分離時間はミルク収集量12に影響を与えるようには見えないが、それは、一貫した分離時間は、研究を通じて維持されることをお勧めします。授乳15全体に変更されることがあり乳組成物は、そのための試みは、一貫性のあるミルクのコレクションの一日を維持するためになされるべきです。最大の牛乳生産は、泌乳14日目12で発生することが示唆されています。 </li><li>温暖化室を使用して、子犬が適切な体を維持することができる確実temperatu搾乳手順の間、母親の存在なしに再。 注：以下に示す研究では、搾乳は、したがって、何の温暖化室は使用されなかった、ダムは約22週齢で子孫21日齢時、離乳で実施しました。 </li></ol> 2.セットアップと準備<ol><li>搾乳手順に必要なすべての材料を収集します。 注：すべての材料は、材料や機器の表に記載されています。 </li><li>搾乳が行われ、アンダーパッド吸収性ベンチでパッドをカバーするベンチに加熱パッドを配置します。 </li><li>麻酔システムを設定します。システムに十分な酸素や開始前イソフルランを持っていることを確認してください。マシンへの最初の麻酔導入のために使用される麻酔マスクを取り付けます。近くの初期麻酔マスクと異なる場合、麻酔の維持のために使用されるマスクを配置します。 </li><li>オキシトシン1 mlシリンジに、25G針を取り付け無菌技術を用いて注入。 </li><li>母体の体温は搾乳手順の間に維持されるように、加熱パッドをオンにします。注：あまりにも高温になり、やけどを起こさないパッドを確実にするために加熱パッドの温度を監視します。あるいは、特定の温度に設定することができる加熱手術台などの熱源を使用します。 </li></ol> 3.イソフルランを使用してダムを麻酔<ol><li>酸素タンクを開き、毎分1リットル（千CC）への流れを向けます。イソフルランの流れをオンにして、5％に設定されています。注意：麻酔薬の直接吸入を避け、麻酔蒸気の蓄積を防ぎます。 </li><li>ダムを麻酔。 </li><li>必要に応じて、吸収ベンチパッドの上にダム仰向けに配置し、メンテナンスマスクに切り替え。ペダル反射の欠如によって麻酔を確認してください。 </li><li>麻酔の維持のために2〜3％のイソフルランの流れを減らします。継続ドを確保するための手順を通じてダムを監視呼吸のPRESSIONは発生しません。注：一度麻酔下で、ダムの目が乾燥や傷​​になってから目を防ぐために、無菌の目の潤滑剤を使用して保護する必要があります。 </li></ol> 4.オキシトシン注射液<ol><li>オキシトシンを確認します（20 USP単位/ ml）を、その有効期限を経過していません。 /アルコールクレンジングパッドを拭き、滅菌アルコールでオキシトシンのバイアルを消毒します。 </li><li>無菌技術を使用して、シリンジ内にオキシトシンの2 IU（0.1 ml）を描きます。搾乳される各ダムのための新しい針と注射器を使用してください。 注：オキシトシンの投与量は、一般的に1の単回注射から5 IU 1,6,12,16の範囲。あるいは、4 IU / kg体重の投与量は、12を使用することができます。難易搾乳が発生した場合2 IUの単回投与は、一回繰り返すことができます。 </li><li>腹腔内にオキシトシンを注入。角度で、針が頭の方を向いて腹部の右下の象限に針を挿入します15〜30°の、約0.5cmの深さです。 </li><li>注射前に、負圧を確保するために、プランジャーを後方に引いて。任意の流体（血液、尿、腸の内容物など ）が注射器内に吸引されている場合は、針を削除し、新しい針と注射器で注入を試みます。何の流体が吸引されていない場合はオキシトシンを注入し、すぐにバイオハザード容器に針と注射器を廃棄します。 </li><li>ミルクレットダウンを刺激するオキシトシンのために約5〜15分待ちます。 </li></ol>搾乳サイトの5準備<ol><li>牛乳が収集されるからサイト/乳首を選択してください。乳は、任意の乳頭12から回収することができます。 </li><li>毛皮は、牛乳の吸い上げによるサンプル収集の難しさを引き起こす可能性があるとして慎重に、トリマーで搾乳される乳首の周りに毛皮を削除します。穏やかな - 乳首の周りの皮膚は非常に敏感で、乾燥していてもよく、のような傷や涙の影響を受けやすいです。 </li><li>乳首iの滅菌必要じゃないが、毛を除去した後、必要に応じて、ぬるま湯で乳首をきれいに。複数のサイトのような少なくとも二つの部位を調製するミルクコレクションのために必要とされてもよいです。 注：ミルク分析は、微生物プロファイリングが含まれる場合は、乳頭領域は、ヨウ素5に滅菌を必要とするかもしれません。 </li></ol> 6.ミルクコレクション<ol><li>静かに手動でコレクションのミルクを排出、乳首の根元を絞ります。 注：ミルク分析は、微生物プロファイリングが含まれている場合は、ミルクの最初の数滴は廃棄されるべきです。 </li><li>毛細管を充填し、毛細管内にミルク液滴を集めます。大容量（例えば、50μl）を収容するキャピラリーチューブは、プロセスを容易にします。 注：ミルクを収集することが困難に遭遇した場合には、オキシトシンの第二の用量を投与することができます。これは、投与量は4 IUの合計を超えないことをお勧めします。 </li><li>により滅菌マイクロチューブに毛細管からミルクを分配します毛管作用を介して毛細管から引き出されているミルクを観察する - マイクロ遠心チューブの側面に乳首からミルクを引き出すために使用された管の端部に触れます。 注：1 mlシリンジに取り付けた18 G針を使用してチューブに引き込まれていないミルクを「吹き飛ばし」。 </li><li>継続的に痛みや呼吸抑制の兆候がダムを監視し、それに応じてイソフルランの流れを調整します。 </li><li>このセクションで説明するように、十分なミルクが選ばれたミルク分析のために収集されるまで、ミルクを収集し続けます。 creamatocritとタンパク質濃度の決意は、以下に説明するために、ミルクの0.25ミリリットルを収集します。 注：ミルクレットダウンが遅くなるか、選択したサイトが十分に牛乳を追放しない場合、別の搾乳サイトを使用してください。動物当たりの乳の約2.5 mlで最大17、または乳頭あたり0.5 mlまで収集することができます。著者は、O、麻酔下の合計時間は約45〜60分に制限されることをお勧めします搾乳の45分rは。 </li><li>新鮮な牛乳サンプルからcreamatocrit測定用マイクロヘマトクリット管にミルクを収集し、粘土シーラントでチューブの端部をシールします。ダムIDでミクロヘマトクリットチューブにラベルを付け、直立ミルク試料を保存します。 </li><li>搾乳が完了すると、イソフルランと酸素の流れをオフにします。ダムからマスクを外し、目を覚ましまでダムの監視を継続します。それは完全に意識されていない場合、ダムが吸引さまたは復元中のダムの目を傷から寝具を防止するために、ケージの寝具ではなく直接よりも、回復期間中に、吸収ベンチパッドの上に置かれるべきであることをお勧めします。 注：それは胸骨recumbancyを維持するのに十分な意識を取り戻したまで無人ダムに放置しないでください。 </li><li>更なる分析が必要とされない場合は、-80℃でミルクを凍結。他の人はミルクが-20℃18で3時間まで4℃で、または5ヶ月間保存することができることを示唆しています。 </li></ol> 7. Creamatocrit測定<ol><li>ミルクcreamatocrit（ミルク試料中のクリームの割合）19を計算することにより、ミルク中の脂肪含量を推定します。 注：母乳で測定が新鮮または凍結のいずれかミルクがcreamatocrit測定のために使用することができることを実証している、しかし、新鮮な牛乳は、より高度に脂質濃度11（R = 0.90対R = 0.92）相関しています。解凍したミルクはcreamatocrit 11値でわずかな減少と関連しているようcreamatocrit測定のための新鮮または凍結したミルクの使用は、研究全体の一貫性が保たれるべきです。 </li><li>新鮮な牛乳の場合、ミクロヘマトクリット管に乳首からミルクのサンプルを収集します。少なくとも¾フル（約15〜20μl）を記入してください。また、よく混合した後、キャピラリーチューブに採取した試料からの新鮮な牛乳を描きます。粘土シーラントで終了をシール。 </li><li>で、ヘマトクリットスピナーに毛細管を配置密封端遠心機はバランスが取れて確保し、外側に向かって指しています。 </li><li>ヘマトクリットスピン（13,700×gで120秒）を開始します。 注：スピン時間や速度は使用遠心分離機のモデルに応じて変更されることがあります。 </li><li>スピンが完了した後に遠心分離機からチューブを外し、creamatocritを算出するための測定を行います。クリーム層と透明層内に試料の分離を観察します。 </li><li>測定し、チューブ内の流体の合計の長さと脂肪（クリーム）の長さノギスや定規を使用したレイヤを記録します。 注：（クリーム層/ミルク列の全長の長さ）として算出したミルク試料19内のクリーム層の割合は、100（ 図1A）xとcreamatocritが発現されます。次のようにcreamatocrit測定から脂肪濃度及びエネルギー値を計算する：脂肪濃度（g / L）=（creamatocrit（％） - 0.59）/0.146（ 図1B）19。エネルギー値（KCアル/ L）+ 290（66.8 * creamatocrit（％）（ 図1C）= 19。 </li></ol> 8.タンパク質濃度の決意<ol><li>タンパク質標準としてウシ血清アルブミンを用いて、例えば、ローリー法6のような標準的なタンパク質アッセイを用いて、全乳タンパク質の濃度を決定します。 注：乳タンパク質の測定値がアッセイの標準曲線内に入るようにするためのミルクの希釈が必要であり得ます。 </li></ol>

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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+and+energy+contents+of+expressed+human+breast+milk+in+prolonged+lactation.">Fat and energy contents of expressed human breast milk in prolonged lactation.</a> Pediatrics. 116 (3), e432-e435 (2005).</li></ol>

著者らは、開示すること、関心の競合がありません。全ての動物実験は、CCAC承認されたプロトコルに従って行いました。

Investigations into maternal milk components have increased as interest in early life development research rises. As the sole source of nutrition during the neonatal period, the bioactive compounds in milk are essential for ideal growth and development, especially in the context of intestinal and immune health3. The method presented here is a simple, non-invasive method of collecting milk from the lactating rat in amounts sufficient for downstream analysis, such as oligosaccharide profiling6. The me...

ミルクは乳児の成長と発展の1,2のためのエネルギーや栄養素を提供し、新生児の哺乳動物のための唯一の栄養源です。ミルクは、主に、細胞、脂質、およびタンパク質1で構成されている間、それはまた、酵素、炭水化物、ホルモン、抗体、成長因子、サイトカイン、エキソソーム、マイクロベシクル、及びそのような低分子RNAを含む子孫の若年期の発達を調節する生物活性化合物の多数を含んでいますマイクロRNA 1,2として。幼児は病気2を受けにくい母乳証拠と相まって免疫子孫と腸の健康3の確立に母乳の基本的な役割は、人生の早い段階で病気のプロセスに関連付けられたミルク成分と関与する分子メカニズムを識別することの重要性を強調して彼らの行動です。開発ラットは早い段階で、栄養様々な生理学的、および化学的介入の効果を調べるための人気モデルであります-Life開発4。ラットのミルクの分析は、したがって、母体および子孫の健康に新たな洞察を提供してもよいです。 現在の科学の進歩は今健康と病気の特定の乳成分の効果の詳細な調査のための機会を増やしています。例えば、牛乳細菌プロファイルのシークエンスが幼児の腸5の初期の腸の植民地化におけるそれらの役割を解明した、ミルクオリゴ糖の質量分析は、母体の食事6、中に分泌マイクロRNAの深いシーケンシングを介しミルクオリゴ糖プロフィールの変更への洞察を提供してきました母乳の脂肪球は、遺伝子転写、代謝、および免疫機能7の可能な役割を強調しています。 ラットモデルは、母体の研究8,9で使用される最も人気のあるモデル生物の1つを表します。一つの利点は、唯一approximat持続が短い妊娠及び授乳期間であり、エリー21日各;したがって、授乳に妊娠の開始からの合計時間は貴重なデータを生成することができる時間の短い期間を示します。マウスと比較してラットの大きなサイズは、ミルクのコレクションとの関連で、ミルクおよびミルクの収集の容易さの体積に対して有意な利点を提供し得ます。マウスでの牛乳の生産は、例えば、より多くのミルク10を生成する重いマウスを用いた全体重に依存するように思われます。 ここでは、授乳中のラットからミルクを手動で収集するための一般的な説明が提供されています。このプロトコルは、最小限の設備を必要とする、非侵襲性で、安価で、さらに下流の分析のためにミルクの適切なボリュームを収集するために使用することができます。簡単に言えば、ダムはミルクレットダウンは、オキシトシンによって刺激され、イソフルランで麻酔され、ミルクはミルクのマニュアル発現によりキャピラリーチューブに回収されます。最後に、ミルクの2つの主要コンポーネントは、簡単なdescriptio脂肪とタンパク質であるとして、creamatocrit測定値11及び標準的なタンパク質アッセイを使用して総タンパク質濃度の定量化を用いて、乳脂肪含有量を推定するnが示されています。

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;Equipment - Milking&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 ml syringes</td><td>BD-Canada</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>25 G needles</td><td>BD-Canada</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>18 G needles</td><td>BD-Canada</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td>50 &amp;mu;l Microdispenser Capillary Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-169D</td><td></td></tr><tr><td>Oxytocin (20 USP Units/ml)</td><td>Bimeda-MTC</td><td>1OXY015</td><td></td></tr><tr><td>PPC Vet Isoflurane Inhalation Anesthetic, 250 ml</td><td>Fresenius Kabi</td><td>M60302</td><td>Used on the order of a veterinarian</td></tr><tr><td>Sterile Alcohol Prep Pad</td><td>Dukal</td><td>853</td><td></td></tr><tr><td>Absorbent Bench Underpad</td><td>VWR</td><td>82020-845</td><td></td></tr><tr><td>Maxi-Therm Hyper/Hypothermia Blanket</td><td>Cincinnati Sub-Zero</td><td>274</td><td></td></tr><tr><td>Rodent Anesthesia Machine with Vaporizer</td><td>Benson Medical Industries Inc.</td><td></td><td>Subject to individual laboratory needs</td></tr><tr><td>Animal Masks</td><td>Benson Medical Industries Inc.</td><td>50100/50102</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge Tubes</td><td>Axygen</td><td>MCT-060-C</td><td></td></tr><tr><td>ChroMini Professional Trimmer</td><td>Wahl</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;Equipment - Creamatocrit&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>StatSpin SafeCrit Plastic Microhematocrit Tubes (Untreated)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-274-914</td><td></td></tr><tr><td>Critoseal Capillary Tube Sealant Tray</td><td>VWR</td><td>470161-478</td><td></td></tr><tr><td>StatSpin CritSpin Microhematocrit Centrifuge</td><td>Beckman Coulter, Inc</td><td>X00-004999-001</td><td></td></tr></tbody></table>

milk collection in the rat using capillary tubes and estimation of milk fat content by creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also contains a vast number of bioactive compounds that greatly affect the development of the neonate. The analysis of milk components will help elucidate key factors that link maternal metabolism and health with offspring growth and development. The laboratory rat represents a popular model organism for maternal studies, and rat milk can be used to examine the effect of various maternal physiological, nutritional, and pharmacological interventions on milk components, which may then impact offspring health. Here a simple method of manually collecting milk from the lactating rat that can be performed by a single investigator, does not require specialized vacuum or suction equipment, and provides sufficient milk for subsequent downstream analysis is described. A method for estimating the fat content of milk by measuring the percentage of cream within the milk sample, known as the creamatocrit, is also presented. These methods can ultimately be used to increase insight into maternal-child health and to elucidate maternal factors that are involved in proper growth and development of offspring.

ミルクは、コントロールを消費しウィスターダム（約22週齢、350〜400グラムを秤量）（AIN-93G、n = 5）を、高タンパク質から離乳時に説明したように収集された（40％カゼイン重量/重量、N = 5）しました、または高いプレバイオティクス繊維（21.6％重量/重量、1：オリゴフルクトース及びイヌリンの1の比率、N = 4）妊娠中や授乳を通してダイエット。オキシトシン投与量は、IU 2でした。ミルク?...

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Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.

キャピラリーチューブ、Creamatocritによって乳脂肪含量の推定を用いたラットにおける牛乳コレクション

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also ...

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JoVE Journal

Biology

12.3K ビュー.  University of Calgary. Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.

ビデオ: Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

The Use of Gas Chromatography to Analyze Compositional Changes of Fatty Acids in Rat Liver Tissue during Pregnancy

Gas chromatography (GC) is a highly sensitive method used to identify and quantify the fatty acid content of lipids from tissues, cells, and plasma/serum, yielding results with high accuracy and high reproducibility. In metabolic and nutrition studies GC allows assessment of changes in fatty acid concentrations following interventions or during changes in physiological state such as pregnancy. Solid phase extraction (SPE) using aminopropyl silica cartridges allows separation of the major lipid classes including triacylglycerols, different phospholipids, and cholesteryl esters (CE). GC combined with SPE was used to analyze the changes in fatty acid composition of the CE fraction in the livers of virgin and pregnant rats that had been fed various high and low fat diets. There are significant diet/pregnancy interaction effects upon the omega-3 and omega-6 fatty acid content of liver CE, indicating that pregnant females have a different response to dietary manipulation than is seen among virgin females.

Pregnancy leads to significant changes to the fatty acid composition of maternal tissues. Lipid profiles can be obtained via gas chromatography to allow identification and quantification of fatty acids in individual lipid classes among rats fed various high and low fat diets during pregnancy.

妊娠中にラット肝組織中の脂肪酸の組成変化を分析するために、ガスクロマトグラフィーの使用

Gas chromatography (GC) is a highly sensitive method used to identify and quantify the fatty acid content of lipids from tissues, cells, and plasma/serum, ...

化学

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary epithelium using transplantation techniques takes advantage of the hormonal environment provided by the adolescent rodent host. These studies are ideally suited to explore the impact of various biological manipulations on mammary gland development and dissect many aspects of mammary gland biology. A common, but limiting, feature is that transplanted epithelial cells are strongly influenced by the surrounding stroma and outcompeted by endogenous epithelium; to utilize native mammary tissue, the abdominal-inguinal white fat pad must be cleared to remove host mammary epithelium prior to the transplantation. A major obstacle when using the rat model organism is that clearing the developing mammary tree in post-weaned rats is not efficient. When transplanted into gland-free fat pads, donor epithelial cells can repopulate the cleared host fat pad and form a functional mammary gland. The interscapular fat pad is an alternative location for these grafts. A major advantage is that it lacks ductal structures yet provides the normal stroma that is necessary to promote epithelial outgrowth and is easily accessible in the rat. Another major advantage of this technique is that it is minimally invasive, because it eliminates the need to cauterize and remove the growing endogenous mammary tree. Additionally, the interscapular fat pad contains a medial blood vessel that can be used to separate sites for grafting. Because the endogenous glands remain intact, this technique can also be used for studies comparing the endogenous mammary gland to the transplanted gland. This paper describes the method of mammary epithelial cell transplantation into the interscapular white fat pad of rats.

This article describes a transplantation method to graft donor rat mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of recipient animals. This method can be used to examine host and/or donor effects on mammary epithelium development and eliminates the need for pre-clearing, thereby extending the usefulness of this technique.

間肩甲膜白脂肪パッドへのラット乳腺上皮細胞移植

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

がん研究

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two Sprague-Dawley rats were used in this study. Animals were orally treated twice a day for two days with B. subtilis BSB3 strain or PBS. The next day after the last treatment, each group was divided and two experimental groups (one treated with PBS and one treated with B. subtilis) were placed at 45 oC for 25 min. Two control groups stayed for 25 min at room temperature. All rats were euthanized and different parameters were analyzed in all groups. Adverse effects of heat stress are registered by the decrease of villi height and total mucosal thickness in the intestinal epithelium; translocation of bacteria from the lumen; increased vesiculation of erythrocytes and elevation of the lipopolysaccharides (LPS) level in the blood. The protective efficacy of treatment is evaluated by prevention of these side effects. The protocol was set up for the oral treatment of rats with bacteria for prevention of heat stress complications, but this protocol can be modified and used for other routes of administration and for analysis of different compounds.

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

We described a protocol for prevention of heat stress effects in rats by oral pre-treatment with beneficial bacteria. This protocol can be modified and used for various routes of administration and for analysis of different compounds.

熱の予防によりラットに悪影響をストレス<em&gt;枯草菌</em&gt;ひずみ

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two ...

免疫・感染学

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the tail vein is thin so that it is sometimes hard to puncture. In addition, the tail vein has low blood flow and requires a long sampling time to get sufficient blood. The present report describes a simple blood sampling method, the vacuum blood collection method, which is usually used to obtain blood samples from patients, here used for non-anesthetized rats. The 22 G butterfly needle tip was inserted into one of the lateral tail veins approximately 2-3 cm from the tip of the tail at an angle of approximately 20&#176;, and blood was collected in the vacuum collection tube by inserting the rubber end of the butterfly needle into the vacuum blood collection tube. The present experimental results show that the success rate was 95% in the experimental group and 90% in the beginner group. The success rate and puncture times were similar between two groups. The sampling duration was significantly shorter in the experimental group compared to beginner group. In conclusion, this vacuum blood collection method for sequential blood sampling from the tail vein of non- anesthetized rats is feasible and easy-to-learn, which might serve as a reliable alternative to other conventionally used blood sampling techniques for rats.

Here, we describe a simple tail vein blood sampling method in non-anesthetized rats using a vacuum extraction tube system. This method reduces the risk of direct exposure to blood and simplifies taking multiple samples from a single venipuncture.

真空の血のコレクション システムと非麻酔下ラットの尾静脈からの採血を繰り返す

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

医学

Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for the design of personalized microtissues for health screening and drug testing. Current strategies are often quite complex and fail to accurately fully depict the multicellular and functional properties of thermogenic adipose tissue. Microvascular fragments, small intact microvessels comprised of arteriole, venules, and capillaries isolated from adipose tissue, serve as a single autologous source of cells that enable vascularization and adipose tissue formation. This article describes methods for optimizing culture conditions to enable the generation of three-dimensional, vascularized, and functional thermogenic adipose tissues from microvascular fragments, including protocols for isolating microvascular fragments from adipose tissue and culture conditions. Additionally, best practices are discussed, as are techniques for characterizing the engineered tissues, and sample results from both rodent and human microvascular fragments are provided. This approach has the potential to be utilized for the understanding and development of treatments for obesity and metabolic disease.

Here, we present a detailed protocol outlining the use of microvascular fragments isolated from rodent or human fat tissue as a straightforward approach to engineer functional, vascularized beige adipose tissue.

微小血管断片からの血管新生熱発生脂肪組織の三次元培養

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for ...

生物工学

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits (Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of this research model are the ease of breeding and sample collection, relatively short gestation period, and large litter sizes. Commonly assessed routes of immunization include subcutaneous, intramuscular, intranasal, and intradermal. Nonterminal sample collection for the chronological detection of the immunologic responses to these immunizations include the collection of blood, from both dams and kits, and milk from the lactating does. In this article, we will demonstrate techniques our lab has utilized in studies of maternal immunization in New Zealand White rabbits (Oryctolagus cuniculus), including intranasal immunization and milk collection.

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits Oryctolagus cuniculus

This article describes and demonstrates the administration of intranasal vaccines and the collection of milk from lactating rabbits (Oryctolagus cuniculus) as a means to assess mucosal immunity in a translationally appropriate model of maternal immunization.

ニュージーランド白ウサギにおける母体免疫の研究における鼻腔内免疫とミルクコレクション (オリクトラグス・キュニクルス)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of ...

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

マウスおよびリーブス」キョン鹿のためのミルク収集方法

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

生物学

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for investigating the mechanisms of developmental processes. Immediately centrifuged (IC) rat serum is commonly used for WEC and is essential for the growth and development of cultured mouse and rat embryos ex vivo. For the culture of midgestation embryos (i.e., E8.0-12.5 for the mouse, and E10.0-14.5 for the rat), 100% rat serum is the best media for supporting the growth of the embryo ex vivo. To prepare rat serum suitable for WEC, the collected blood should be centrifuged immediately to separate the blood cells from the plasma fraction. After centrifugation, the fibrin clot forms in the upper layer; this clot should be squeezed gently using a pair of sterile forceps and subsequently centrifuged to completely separate the blood cells from the serum. In this video article, we demonstrate our standard protocol for the preparation of optimal IC rat serum, including blood collection from the abdominal aorta of male rats and extraction of the serum by centrifugation.

Mammalian whole embryo culture (WEC) is widely used in teratology and developmental biology. Immediately centrifuged rat serum is commonly provided as a medium for both mouse and rat WEC. In this video, we demonstrate our standard protocol for the preparation of high-quality rat serum suitable for mammalian WEC.

哺乳類の全胚培養に適したラット血清の調製

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...

脳波記録の同時実施によるラットからの脳脊髄液および血液の回収

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure molecules of interest, such as hormones, growth factors, proteins, or small non-coding RNAs. A specific example is the sampling of biological liquids in the research of biomarkers for epilepsy. In these studies, it is desirable to compare the levels of molecules in cerebrospinal fluid (CSF) and in plasma, by withdrawing CSF and plasma in parallel and considering the time distance of the sampling from and to seizures. The combined CSF and plasma sampling, coupled with video-EEG monitoring in epileptic animals, is a promising approach for the validation of putative diagnostic and prognostic biomarkers. Here, a procedure of combined CSF withdrawal from cisterna magna and blood sampling from the lateral tail vein in epileptic rats that are continuously video-EEG monitored is described. This procedure offers significant advantages over other commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, and reduced time of anesthesia. Additionally, it can be used to obtain CSF and plasma samples in both tethered and telemetry EEG recorded rats, and it may be used repeatedly across multiple days of experiment. By minimizing the stress due to sampling by shortening isoflurane anesthesia, measures are expected to reflect more accurately the true levels of investigated molecules in biofluids. Depending on the availability of an appropriate analytical assay, this technique may be used to measure the levels of multiple, different molecules while performing EEG recording at the same time.

著者スポットライト:てんかんバイオマーカー探索のための高品質なCSFおよび血液サンプルの取得 

The protocol shows repeated cerebrospinal fluid and blood collections from epileptic rats performed in parallel with continuous video-electroencephalogram (EEG) monitoring. These are instrumental for exploring possible links between changes in various body fluid molecules and seizure activity.

脳波記録中のラットの側尾静脈からの脳脊髄液および血液のサンプリング

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

キャピラリーチューブ、Creamatocritによって乳脂肪含量の推定を用いたラットにおける牛乳コレクション

要約

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この動画の章

妊娠中にラット肝組織中の脂肪酸の組成変化を分析するために、ガスクロマトグラフィーの使用

間肩甲膜白脂肪パッドへのラット乳腺上皮細胞移植

熱の予防によりラットに悪影響をストレス

真空の血のコレクションシステムと非麻酔下ラットの尾静脈からの採血を繰り返す

微小血管断片からの血管新生熱発生脂肪組織の三次元培養

ニュージーランド白ウサギにおける母体免疫の研究における鼻腔内免疫とミルクコレクション (オリクトラグス・キュニクルス)

マウスおよびリーブス」キョン鹿のためのミルク収集方法

哺乳類の全胚培養に適したラット血清の調製

脳波記録中のラットの側尾静脈からの脳脊髄液および血液のサンプリング

脳波記録中のラットの側尾静脈からの脳脊髄液および血液のサンプリング

キャピラリーチューブ、Creamatocritによって乳脂肪含量の推定を用いたラットにおける牛乳コレクション

要約

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妊娠中にラット肝組織中の脂肪酸の組成変化を分析するために、ガスクロマトグラフィーの使用

間肩甲膜白脂肪パッドへのラット乳腺上皮細胞移植

熱の予防によりラットに悪影響をストレス

真空の血のコレクション システムと非麻酔下ラットの尾静脈からの採血を繰り返す

微小血管断片からの血管新生熱発生脂肪組織の三次元培養

ニュージーランド白ウサギにおける母体免疫の研究における鼻腔内免疫とミルクコレクション (オリクトラグス・キュニクルス)

マウスおよびリーブス」キョン鹿のためのミルク収集方法

哺乳類の全胚培養に適したラット血清の調製

脳波記録中のラットの側尾静脈からの脳脊髄液および血液のサンプリング

脳波記録中のラットの側尾静脈からの脳脊髄液および血液のサンプリング

真空の血のコレクションシステムと非麻酔下ラットの尾静脈からの採血を繰り返す