Name: the mouse isolated perfused kidney technique
Uploaded: 2016-11-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique at JoVE.com

The authors would like to thank Hans-Joachim Schurek for invaluable scientific advice. The authors would like to thank Monique Carrel and Mich&#232;le Heidemeyer for excellent technical assistance, David Penton Ribas and Nourdine Faresse for a critical reading of the manuscript and Carsten Wagner and J&#252;rg Biber for the NaPi-2a antibody. This work was supported by the Swiss National Centre for Competence in Research "Kidney.CH" and by a project grant (310030_143929/1) from the Swiss National Science Foundation.

أجريت جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات وصفها في هذه المخطوطة وفقا للقانون السويسري والموافقة عليها من قبل الإدارة البيطرية للكانتون زيورخ، سويسرا. 1. إعداد العازلة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد حلول 1-4 والحل الهرمون المضاد لإدرار البول (ADH) (الجدول 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد العازلة غسيل الكلى (الجدول 1). ملاحظة: هذا هو عازلة تستخدم المخزن المؤقت لغسيل الكلى خلال نضح. وفي وقت لاحق، سوف تضعف كريات الدم الحمراء في هذا المخزن المؤقت لتشكيل الإرواء النهائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد كرات الدم الحمراء. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع 250 مل من تركيز كريات الدم الحمراء البشرية (مادة اختبار تم الحصول عليها من بنك الدم المحلي) إلى 500 مل مع العازلة غسيل الكلى. أجهزة الطرد المركزي في 2000 x ج لمدة 8 دقائق. إزالة المنطقة العازلة، والحرص على عدم إزالة أي خلايا الدم الحمراء. تكرار 3X. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد (ألبومين المصل البقري، BSA) الزلال العازلة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في 200 مل من dialysiالصورة العازلة، حل 44 غرام من جيش صرب البوسنة باستخدام بقضيب. تصفية حل مع ورقة الترشيح. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الإرواء. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصفية كريات الدم الحمراء من الخطوة 1.3.1 من خلال ورق الترشيح في المخزن المؤقت BSA. ملء تصل إلى الحجم الكلي 800 مل مع العازلة غسيل الكلى. ملاحظة: هذا هو الإرواء النهائي. يجب أن يكون الهيماتوكريت الآن بين 8 و 12٪. سائل الإرواء يمكن تخزينها لمدة تصل إلى 12 ساعة عند 4 درجات مئوية. </li></ol></li></ol> 2. المبادرة للغسيل والأوكسجين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على حمام ماء المحيطة الخزان أكبر العازلة، أصغر خزان العازلة، وغرفة رطبة (جلب، غرفة صغيرة مزدوجة الجدران إلى 37 درجة مئوية، و 100٪ الرطوبة عقد في وقت لاحق الكلى) إلى 37 درجة مئوية (الشكل 2) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء خزان مؤقت أكبر مع العازلة غسيل الكلى وخزان أصغر مع الإرواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل 5٪ CO 2/95٪ O 2 تدفق الغاز إلى المخزن المؤقت لغسيل الكلى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل على غسيل الكلى المستمر للسائل الإرواء ضد المخزن المؤقت لغسيل الكلى. احرص على استخدام أنابيب غسيل الكلى المنخفضة للتدفق. انتقل إلى الخطوة 3. </li></ol><img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig2.jpg" /> الشكل 2: رسم تخطيطي للحلبة الإرواء. يظهر مخطط المكونات الرئيسية لدائرة نضح واتجاه تدفق العازلة. وتحفظ كل مكونات محاطة الأزرق الداكن عند 37 درجة مئوية مع حمام ماء / الحرارة. 1: فقاعات غسيل الكلى عازلة لا يقل عن 3 أضعاف حجم المخزن المؤقت نضح مستمر مع 95٪ O 2/5٪ CO 2. 2: يتم مدال غسيل الكلى العازلة والعازلة نضح باستمرار ضد بعضها البعض في أنبوب غسيل الكلى عن طريق مضخة الأسطوانة. 3: ونتيجة لهذا غسيل الكلى، وإثراء المخزن المؤقت نضح مع 9٪ O يتم الاحتفاظ 05/02٪ CO 2 والكهارل مستويات througho المستمرالتحرير الارواء. 4: مضخة بكرة يفجر المنطقة العازلة نضح نحو الكلى. 5: windkessel يزيل موجات تحوي وبمثابة فخ فقاعة. 6: الضغط على (متصلة إلى 4. (مضخة بكرة) للحفاظ على الضغط المستمر مع السماح للتدفق بالتناوب بحرية). 7: طوال التروية، يبقى الكلى في غرفة رطبة للرطوبة الهواء 100٪ و 37 درجة مئوية درجة حرارة الكلى. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> 3. الجراحي إجراء الجزء 1 (رسم تخطيطي لجميع الأربطة، انظر الشكل 3) ملاحظة: إجراء جميع الحروف المركبة باستخدام 5-0 موضوع الجراحي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس عن طريق الحقن داخل الصفاق (10 ميكرولتر / غرام من وزن الجسم، و 20 ملغ / مل الكيتامين و 1 ملغ / مل زيلازين يذوب في 0.9٪ كلوريد الصوديوم). تأكيد عمق كاف من anesthتقييم الأثر البيئي من خلال اختبار لغياب ردود الفعل الخلفي القدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح الماوس في موقف ضعيف في غرفة رطبة. حماية العينين مع مرهم التعليم والتدريب المهني. وضع حقنة 1 مل تحت العمود الفقري لرفع السفن قطني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء عملية فتح البطن وسيطة من قمة العانة لافتتاح القص أولا الجلد، ثم عضلات البطن، مع مقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأمعاء ووضعه على الجانب الأيسر من جانبي الماوس من البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحرير المثانة من النسيج الضام، واستكشاف كل من الحالب ومجرى البول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رباط حول الحالب الأيسر (ضمد الأول). أغلقه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رباط حول مجرى البول (ضمد الثاني). أغلقه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع &quot;اسو&quot; رباط حول المثانة كاملة (ضمد الثالث). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شق المثانة 1 مم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقني؛ يدخل القنية فتح مع 2 سم PE 50 الأنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار ضمد الثالث حول الأنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الحالب الأيسر والقاصي مجرى البول من الأربطة. هؤلاء الاشخاصالآن تعلق دير إلى الحالب الأيمن فقط وتتحرك بحرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح الشريان الأورطي البطني من النسيج الضام والدهون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع البطن ضمد منتصف الشريان الأورطي (IV رباط). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رباط حول الشريان الأبهر أسفل الحجاب الحاجز بين الشريان المساريقي العلوي والجذع الاضطرابات الهضمية (V رباط). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رباط حول الشريان المساريقي العلوي (السادس رباط). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رباط الأبهر دون الحق مباشرة وفوق الشريان الكلوي الأيسر (رباط السابع). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رباط حول حزمة الذيلية الوريد (الوريد) (الثامن رباط). انتقل إلى الخطوة 4. </li></ol><img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig3.jpg" /> الشكل 3: رسم تخطيطي للالحروف المركبة وضعها خلال جراحة. عرض من البطن مفتوحة بعد فتح البطن. تم نقل الأمعاء إلى اليسار. L و R يشير إلى الكلى اليسار واليمين. التظهر خطوط سوداء مجال ربطة منها. توضع الأربطة أولا ثم أغلقت، في تسلسل معين في النص. يصادف العاشر موقع شق لإقناء؛ إدخال القنية الشريان الأورطي. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> 4. الاشعال من حلبة الإرواء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء تشغيل المضخة الدوارة وملء الأنبوب مع الإرواء. الحرص على تفريغ جميع فقاعات الهواء منه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شغل الجهاز windkessel إلى حوالي منتصف مستوى مع الإرواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معايرة محول الضغط على 0 ملم زئبق عندما يتم تعبئة جميع الأنابيب وتدفق هو 0. الحفاظ على إبرة نضح على مستوى الكلى خلال هذا الوقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إبقاء تدفق على مستوى الحد الأدنى ثابت (0.6 مل / دقيقة) وانتقل إلى الخطوة 5. </li></ol> 5. الجراحي إجراء الجزء 2 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع المشبك بين ضمد الرابع والمتفرعة من رينا اليسارل الشريان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير في الذيلية الأبهر من ضمد الرابع، مع الحرص على عدم قطع الجدار الظهري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمدد فتح في الشريان الأورطي مع الموسع السفينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقني؛ يدخل القنية الشريان الأورطي مع إبرة (2 سم، وسحبت PE 50)، ودفع الطرف فقط إلى المشبك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح المشبك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع غيض من cranially الإبرة حتى يصل تقاطع الصحيح الشريان الكلوي والشريان الأورطي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار ضمد السابع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار ضمد الرابع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الصدر مع مقص من قبل تشريح الحجاب الحاجز. مع خفض واحد، فصل الشريان الأبهر، الوريد الأجوف والقلب والأعصاب الخضري. مع هذه الخطوة، هو التضحية الحيوانية عن طريق استنزاف السريع تحت التخدير العميق المستمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء السيطرة على ضغط مضخة نضح. الحفاظ على الضغط المتوسط ​​بين 80 و 100 مم زئبق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار خامسا رباط </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار ضمد السادس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار ضمد الثامن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحرة الكلية اليمنى من TISSU الضامه وتضمينها في داخل كبسولة الدهنية مع مقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الشريان الأورطي قريب إلى ضمد V. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الشريان المساريقي العلوي إلى أقصى حد لضمد السادس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع حزمة السفينة الداعمة الكلى بها، مع الحرص على عدم قطع في الأوعية أنفسهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الكبد في اتصال الكلى. رعاية لتحرير الكلى، ولكن ترك جزء صغير من تمسكا الكبد لذلك، بحيث يتم الحفاظ على الوريد الأجوف مفتوحة بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتخاذ حزمة الكلى من الماوس. إزالة الماوس من غرفة رطبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع &quot;اسو&quot; رباط حول ربط الكبد والكلى (التاسع رباط). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقني؛ يدخل القنية الوريد الأجوف مع خط وريدي (2 سم PE 50). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار ضمد التاسع. تدفق الوريدي من خلال خط وريدي يجب أن تبدأ على الفور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق غرفة رطبة. </li></ol> 6. تحليل المصب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال ساعة التالية، تراقب باستمرار تدفق الدم وintravasculضغط ع 15. جمع تدفق الوريدي، والتي يمكن استخدامها لتحليل، على سبيل المثال، الكلوي الإفراج الرينين 7. جمع البول لتحليل تركيز بالكهرباء والكبيبي معدل الترشيح 14. بعد 1 ساعة من نضح والكلى يمكن المفاجئة المجمدة لالنشاف الغربية أو أن تكون ثابتة للتصوير النهج 16. </li></ol>

<ol>
	<li>Carrel, A., Lindbergh, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+culture+of+whole+organs.">The culture of whole organs.</a> Science (New York, N.Y.). 81 (2112), 621-623 (1935).</li><li>Skutul, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> &#220;ber Durchstr&#246;mungsapparate Pfl&#252;ger's Archiv. 123 (4-6), 249-273 (1908).</li><li>Nizet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+kidney:+possibilities,+limitations+and+results.">The isolated perfused kidney: possibilities, limitations and results.</a> Kidney Int. 7 (1), 1-11 (1975).</li><li>Weiss, C., Passow, H., Rothstein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoregulation+of+flow+in+isolated+rat+kidney+in+the+absence+of+red+cells.">Autoregulation of flow in isolated rat kidney in the absence of red cells.</a> Am J Physiol. 196 (5), 1115-1118 (1959).</li><li>Schurek, H. J., Kriz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+and+functional+evidence+for+oxygen+deficiency+in+the+isolated+perfused+rat+kidney.">Morphologic and functional evidence for oxygen deficiency in the isolated perfused rat kidney.</a> Lab Invest. 53 (2), 145-155 (1985).</li><li>Stolte, H., Schurek, H. J., Alt, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+albumin+filtration:+a+comparison+of+micropuncture+studies+in+the+isolated+perfused+rat+kidney+with+in+vivo+experimental+conditions.">Glomerular albumin filtration: a comparison of micropuncture studies in the isolated perfused rat kidney with in vivo experimental conditions.</a> Kidney Int. 16 (3), 377-384 (1979).</li><li>Schweda, F., Wagner, C., Kr&#228;mer, B. K., Schnermann, J., Kurtz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preserved+macula+densa-dependent+renin+secretion+in+A1+adenosine+receptor+knockout+mice.">Preserved macula densa-dependent renin secretion in A1 adenosine receptor knockout mice.</a> AJP Renal Physiol. 284 (4), F770-F777 (2003).</li><li>Moers, C., Smits, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Machine+perfusion+or+cold+storage+in+deceased-donor+kidney+transplantation.">Machine perfusion or cold storage in deceased-donor kidney transplantation.</a> N Engl J Med. 360 (1), 7-19 (2009).</li><li>Nicholson, M. L., Hosgood, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+after+ex+vivo+normothermic+perfusion:+the+first+clinical+study.">Renal transplantation after ex vivo normothermic perfusion: the first clinical study.</a> Am J Transplant. 13 (5), 1246-1252 (2013).</li><li>Worner, M., Poore, S., Tilkorn, D., Lokmic, Z., Penington, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+low-cost,+small+volume+circuit+for+autologous+blood+normothermic+perfusion+of+rabbit+organs.">A low-cost, small volume circuit for autologous blood normothermic perfusion of rabbit organs.</a> Art Org. 38 (4), 352-361 (2014).</li><li>Kaths, J. M., Spetzler, V. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+Ex+Vivo+Kidney+Perfusion+for+the+Preservation+of+Kidney+Grafts+prior+to+Transplantation.">Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation.</a> J Vis Exp. (101), e52909 (2015).</li><li>Song, J. J., Guyette, J. P., Gilpin, S. E., Gonzalez, G., Vacanti, J. P., Ott, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+and+experimental+orthotopic+transplantation+of+a+bioengineered+kidney.">Regeneration and experimental orthotopic transplantation of a bioengineered kidney.</a> Nature Med. 19 (5), 646-651 (2013).</li><li>Hall, A. M., Crawford, C., Unwin, R. J., Duchen, M. R., Peppiatt-Wildman, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+imaging+of+the+functioning+kidney.">Multiphoton imaging of the functioning kidney.</a> JASN. 22 (7), 1297-1304 (2011).</li><li>Lindell, S. L., Williams, N., Brusilovsky, I., Mangino, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+IPK:+A+Powerful+Tool+to+Partially+Characterize+Renal+Reperfusion+and+Preservation+Injury.">Mouse IPK: A Powerful Tool to Partially Characterize Renal Reperfusion and Preservation Injury.</a> Open Transplant J. 5, 15-22 (2011).</li><li>Wagner, C., De Wit, C., Kurtz, L., Gr&#252;nberger, C., Kurtz, A., Schweda, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connexin40+is+essential+for+the+pressure+control+of+renin+synthesis+and+secretion.">Connexin40 is essential for the pressure control of renin synthesis and secretion.</a> Circ Res. 100 (4), 556-563 (2007).</li><li>Czogalla, J., Vohra, T., Penton, D., Kirschmann, M., Craigie, E., Loffing, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mineralocorticoid+receptor+(MR)+regulates+ENaC+but+not+NCC+in+mice+with+random+MR+deletion.">The mineralocorticoid receptor (MR) regulates ENaC but not NCC in mice with random MR deletion.</a> Pfl&#252;ger's Archiv. , (2016).</li><li>Poosti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision-cut+kidney+slices+(PCKS)+to+study+development+of+renal+fibrosis+and+efficacy+of+drug+targeting+ex+vivo.">Precision-cut kidney slices (PCKS) to study development of renal fibrosis and efficacy of drug targeting ex vivo.</a> Dis Model Mech. 8 (10), 1227-1236 (2015).</li><li>Rahgozar, M., Guan, Z., Matthias, A., Gob&#233;, G. C., Endre, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+facilitates+autoregulation+in+the+perfused+mouse+kidney:+An+optimized+in+vitro+model+for+assessment+of+renal+vascular+and+tubular+function.">Angiotensin II facilitates autoregulation in the perfused mouse kidney: An optimized in vitro model for assessment of renal vascular and tubular function.</a> Nephrology. 9 (5), 288-296 (2004).</li></ol>

The authors have no competing financial interests and nothing else to disclose.

الماوس معزولة الكلى perfused هو أداة لدراسة وظائف الكلى في بيئة تسيطر عليها خارج الجسم لمدة 1 ساعة، سد الفجوة بين التجارب المجراة على الحيوانات سليمة، والتي قد تكون معيبة بسبب تأثير العوامل النظامية عديدة، وفي التجارب المختبرية في شرائح كليون معزولة ...

وقد نضح معزولة من الأجهزة موضوع جهد مستمر بين فسيولوجي لعقود عديدة 1. هذه التقنية تتيح وظيفة الجهاز، دون التأثيرات الجهازية مثل ارتفاع ضغط الدم، والهرمونات، أو الأعصاب، لدراستها. يعتبر كارل إدوارد Loebell أن يكون أول من وصف نضح الناجح لالكلى معزولة، في عام 1849 2. ومنذ ذلك الحين، شهدت جهاز نضح صقل كبير. قدم فراي وغروبر رئة اصطناعية لالأوكسجين ونابض مضخات نضح المستمر 2. في حين الباحثين في وقت مبكر درس أساسا الكلى من الثدييات وهي كبيرة والخنازير والكلاب 2 3 -The التقرير الأول للاستخدام الكلى الفئران، التي فايس وآخرون. ، كان علامة فارقة في دراسة صغيرة الثدييات جهاز نضح (4). Schurek وآخرون. ذكرت ضرورة إضافة الكريات الحمراء الثدييات إلى الإرواء إذا أنبوبي كلوي كافيةكان الأوكسجين إلى أن يتحقق 5. حاسمة لتجارب طويلة الأمد كانت مقدمة من غسيل الكلى المستمر من المخزن المؤقت من قبل نفس المجموعة البحثية 6. في عام 2003، Schweda وآخرون. كانوا أول من الإبلاغ عن الكلى الماوس وظيفية معزولة perfused (MIPK) 7، والمكرر في وقت لاحق من قبل Rahgozar وآخرون. 18 ويندل وآخرون. 14. بينما من الناحية الفنية أكثر تحديا من الفئران المعزولة الكلى perfused، واستخدام MIPK يحمل ميزة تمكن من استخدام مجموعة واسعة من الفئران المعدلة وراثيا. تعرض هذه الورقة على تفاصيل طريقة المؤلفين من أجل perfusing الكلى الماوس معزولة لمدة 1 ساعة. يسمح أسلوب التقييم المستمر لمعدل الكلوي تدفق، ومقاومة الأوعية الدموية، والإفراج عن هرمون، تحليل غازات الدم وتحليل البول، وتطبيق المخدرات. وبعد هذا الإجراء، يمكن معالجتها الكلى للتحليل الجزيئي والكيمياء الحيوية، وتكون ثابتة للفحص المجهري، أوزرعه في الماوس المتلقي (الشكل 1). <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig1.jpg" /> الشكل 1: نظرة عامة على احتمال الإدخال / الإخراج إلى الكلى Perfused المعزولة. بغا: تحليل الدم الغاز. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> هذه التقنية من المرجح أن تلقي اهتماما متزايدا في السنوات القادمة، كما يتم مناقشة العديد من التطبيقات المبتكرة مع فجر لفترات طويلة نضح الكلى سوي الحرارة قبل الزرع (مع أو من دون تطبيق المضادة للرفض أو عقاقير تحرير الجينوم) 8، 9، 10 ، 11، والهندسة الحيوية الكلى كلها من السقالات decellularized 12، وتطبيق جرعات عالية من الأصباغ الفلورية لmultiphoton التصوير 13 </sup&gt;. بل هو أيضا نموذج مثالي مع الذي لدراسة دور الجينات المحددة خلال قصور كلوي حاد 14. ويرد بروتوكول خطوة بخطوة للسماح غيرها من المختبرات لأداء معزولة الماوس نضح الكلى بنجاح. أولا، يتم تحديد تكوين وإعداد المخزن المؤقت. ثم، يتم وصف عملية جراحية في التفاصيل وتعرض الخطوات الحاسمة. ويرد الثالث، البيانات التي تمثل من الإعداد الناجح: تدفق الدم الكلوي، ومقاومة الأوعية الدموية، معدل الترشيح الكبيبي، والكهارل كسور إفراز للجميع القياسات وظيفية من الميكروسكوب الجدوى والإلكترون انتقال مورفولوجية قطاعات كليون مختلفة من الكلى perfused ثابت بعد 1 ساعة من نضح.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Perfusion Circuit:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Moist chamber 834/8</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-2901</td><td></td></tr><tr><td>Cannular with basket and side port</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-2947</td><td></td></tr><tr><td>Thermostat TC120-ST5&amp;nbsp;</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-4544</td><td></td></tr><tr><td>ISM 827/230V Roller Pump Reglo Analogue</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-0114</td><td></td></tr><tr><td>Reservoir jacketed for buffer solution 1 L</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3438</td><td></td></tr><tr><td>Reservoir jacketed for buffer solution 0.5 L</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3436</td><td></td></tr><tr><td>Pressure Transducer APT300&amp;nbsp;</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3862</td><td></td></tr><tr><td>TAM-D Plugsys Transducer</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-1793</td><td></td></tr><tr><td>SCP Plugsys servo controller</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-2806</td><td></td></tr><tr><td>Windkessel&amp;nbsp;</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3717</td><td></td></tr><tr><td>HSE-USB data acquisition</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3330</td><td></td></tr><tr><td>Low-Flux Dialysator Diacap Polysulfone</td><td>B.Braun</td><td>7203525</td><td></td></tr><tr><td>PE-Tubing for aorta cannulation 1.19 mm I.D. x 1.70 mm O.D.</td><td>Scientific Commodities Inc.</td><td>BB31695-PE/8</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Buffer reagents:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aminoplasmal 10%</td><td>B.Braun</td><td>134518064</td><td></td></tr><tr><td>Sodium pyruvate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256-25G</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamic acid monosodium salt hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1626-100G</td><td></td></tr><tr><td>L-(-)-Malic acid sodium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1125-25G</td><td></td></tr><tr><td>Sodium-L-Lactate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7022-10G</td><td></td></tr><tr><td>alpha-Ketoglutaric acid sodium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K1875-25G</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>31434-1KG-R</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761-5KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60130-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Urea</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>U5378-500G</td><td></td></tr><tr><td>Creatinine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4255-10G</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Roche</td><td>10835242001</td><td></td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; * 6H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2393-500G</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; * 6H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O&amp;nbsp;</td><td>Riedel-de-Ha&amp;euml;n</td><td>12074</td><td></td></tr><tr><td>NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638-500G</td><td></td></tr><tr><td>Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876-500G</td><td></td></tr><tr><td>Antidiuretic Hormone dDAVP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V2013-1MG</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Inulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filter used for erythrocyte filtration</td><td>Macherey-Nagel</td><td>MN 615</td><td></td></tr><tr><td>BGA Analysis:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ABL 80 flex</td><td>Radiometer Medical ApS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Electron Microscope:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Philips CM100 TEM</td><td>FEI</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

the mouse isolated perfused kidney technique

الماوس معزولة الكلى perfused (MIPK) هي تقنية للحفاظ على الكلى الماوس تحت المجراة سابقا الظروف perfused وظيفية لمدة 1 ساعة. وهذا شرط أساسي لدراسة علم وظائف الأعضاء من الجهاز معزولة وللعديد من التطبيقات المبتكرة التي قد يكون من الممكن في المستقبل، بما في ذلك decellularization نضح عن الهندسة الحيوية الكلى أو إدارة مكافحة الرفض أو المخدرات تحرير الجينوم في جرعات عالية لرئيس الكلية للزرع. خلال ذلك الوقت من نضح، والكلى يمكن التلاعب بها، ويمكن تقييم وظائف الكلى، ومختلف المواد الصيدلانية تدار. بعد العملية، والكلى يمكن زرعها أو تجهز لعلم الأحياء الجزيئي، وتحليل الكيمياء الحيوية، أو المجهري. وتصف هذه الورقة الإرواء والتقنية الجراحية اللازمة لنضح خارج الجسم الحي الكلى الماوس. وترد تفاصيل جهاز نضح وقدمت بيانات تظهر الخامسiability من إعداد والكلى: تدفق الدم الكلوي، ومقاومة الأوعية الدموية، والبول بيانات وظيفية، الميكروسكوب الإلكتروني النافذ من شرائح كليون المختلفة وقراءات المورفولوجية، والبقع الغربية من البروتينات نقل شرائح كليون المختلفة وقراءات الجزيئية.

مع طريقة وصفها، يمكن أن الكلى الماوس معزولة لا تزال قابلة للحياة لا يقل عن 1 ساعة. نحن اختبار قابلية الأنسجة بعد 1 ساعة من نضح مستمر مع وظيفية (تدفق الكلوي الدم ومقاومة الأوعية الدموية، وتحليل غازات الدم من التدفق الوريدي، معدل الترشيح الكبيبي، البول...

Watch this Scientific Journal Video about The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique at JoVE.com

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

الماوس معزولة الكلى perfused (MIPK) هي تقنية للحفاظ على الكلى الماوس تحت المجراة سابقا الظروف perfused وظيفية لمدة 1 ساعة. ويرد في مخازن وتقنية جراحية في التفاصيل.

الماوس معزولة تقنية الكلى Perfused

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

the-mouse-isolated-perfused-kidney-technique

Research

JoVE Journal

Biology

21.6K Views.  University of Zürich.  الماوس معزولة الكلى perfused (MIPK) هي تقنية للحفاظ على الكلى الماوس تحت المجراة سابقا الظروف perfused وظيفية لمدة 1 ساعة. ويرد في مخازن وتقنية جراحية في التفاصيل. 

Video: The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients revealed that only a mild increase in serum creatinine levels (0.3 to 0.4 mg/dl) is associated with a 70% greater risk of death than in persons without any increase 1. Along these lines, surgical procedures requiring cross-clamping of the aorta and renal vessels are associated with a renal failure rates of up to 30% 4. Similarly, AKI after cardiac surgery occurs in over 10% of patients under normal circumstances and is associated with dramatic increases in mortality. AKI are also common complications after liver transplantation. At least 8-17% of patients end up requiring renal replacement therapy 5. Moreover, delayed graft function due to tubule cell injury during kidney transplantation is frequently related to ischemia-associated AKI 6. Moreover, AKI occurs in approximately 20% of patients suffering from sepsis 6.The occurrence of AKI is associated with dramatic increases of morbidity and mortality 1. Therapeutic approaches are very limited and the majority of interventional trials in AKI have failed in humans. Therefore, additional therapeutic modalities to prevent renal injury from ischemia are urgently needed 3, 7-9. 
To elucidate mechanisms of renal injury due to ischemia and possible therapeutic strategies murine models are intensively required 7-13. Mouse models provide the possibility of utilizing different genetic models including gene-targeted mice and tissue specific gene-targeted mice (cre-flox system). However, murine renal ischemia is technically challenging and experimental details significantly influence results. We performed a systematic evaluation of a novel model for isolated renal artery occlusion in mice, which specifically avoids the use of clamping or suturing the renal pedicle 14. This model requires a nephrectomy of the right kidney since ischemia can be only performed in one kidney due to the experimental setting. In fact, by using a hanging-weight system, the renal artery is only instrumented once throughout the surgical procedure. In addition, no venous or urethral obstruction occurs with this technique. We could demonstrate time-dose-dependent and highly reproducible renal injury with ischemia by measuring serum creatinine. Moreover, when comparing this new model with conventional clamping of the whole pedicle, renal protection by ischemic preconditioning is more profound and more reliable. Therefore his new technique might be useful for other researchers who are working in the field of acute kidney injury.

A precise murine model for acute kidney injury (AKI) due to ischemia is an important tool to investigate acute kidney injury and possibly find therapeutic tools to treat renal injury. The hanging weight system offers a tool for immediate and reliable renal artery occlusion and reperfusion without causing renal congestion.

استخدام نظام تعليق الوزن المعزولة عن انسداد الشريان الكلوي

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients ...

Medicine

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and podocytes with their slit diaphragms. The delicate structure of the glomerular filter, especially the slit diaphragm, relies on the interplay of diverse cell surface proteins. Studying these cell surface proteins has so far been limited to in vitro studies or histologic analysis. Here, we present a murine in vivo biotinylation labeling method, which enables the study of glomerular cell surface proteins under physiologic and pathophysiologic conditions. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of a protein of interest. Semi-quantitation of glomerular cell surface abundance is readily available with this novel method, and all proteins accessible to biotin perfusion and immunoprecipitation can be studied. In addition, isolation of glomeruli with or without biotinylation enables further analysis of glomerular RNA and protein as well as primary glomerular cell culture (i.e., primary podocyte cell culture).

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Here we present a protocol for murine in vivo labeling of glomerular cell surface proteins with biotin. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of the protein of interest.

عزل جلوميرولي و في فيفو وسم البروتينات السطحية خلية الكبيبي

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and ...

Biochemistry

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

الماوس زرع الكلى: نماذج من طعم خيفي رفض

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Reliable and High Efficiency Extraction of Kidney Immune Cells

Immune system activation occurs in multiple kidney diseases and pathophysiological processes. The immune system consists of both adaptive and innate components and multiple cell types. Sometimes, the cell type of interest is present in very low numbers among the large numbers of total cells isolated from the kidney. Hence, reliable and efficient isolation of kidney mononuclear cell populations is important in order to study the immunological problems associated with kidney diseases. Traditionally, tissue isolation of kidney mononuclear cells have been performed via enzymatic digestions using different varieties and strengths of collagenases/DNAses yielding varying numbers of viable immune cells. Recently, with the development of the mechanical tissue disruptors for single cell isolation, the collagenase digestion step is avoided and replaced by a simple mechanical disruption of the kidneys after extraction from the mouse. Herein, we demonstrate a simple yet efficient method for the isolation of kidney mononuclear cells for every day immune cell extractions. We further demonstrate an example of subset analysis of immune cells in the kidney. Importantly, this technique can be adapted to other soft and non-fibrous tissues such as the liver and brain.

Techniques that are reliable and efficient for the isolation of kidney immune cells are needed for downstream applications. This requires surface antibody labeling of a small number of kidney immune cells. Herein, we describe a concise method for isolation of kidney immune cells that seemingly achieves this goal.

موثوقة وعالية استخراج كفاءة الكلى الخلايا المناعية

Immune system activation occurs in multiple kidney diseases and pathophysiological processes.  The immune system consists of both adaptive and innate ...

Immunology and Infection

Comparative Proteomic Analysis of Whole Kidney, Medulla, and Cortical Tubules in Diabetic Pathogenesis of Kidney Injury in Mice

Defining the sequence of events in renal disease is the cornerstone of clinical practice in the nephrologist toolkit. Tissue proteomic analyses are a significant approach to understanding the fundamental physiological and molecular processes of renal pathophysiology. The methods and protocols we present here will allow for the molecular dissection of the kidney in each specific region of interest related to disease sequelae. To determine the effects of disease on specific kidney regions and structures with unique functions, the goals of this protocol are to demonstrate simplified mouse kidney compartmentalization and renal cortical tubule isolation techniques in tandem with streamlined label-free quantitative proteomic workflows. Combining these methods will assist in the identification of perturbed molecular patterns in the whole kidney, medullary compartments, and cortical tubule structures of kidneys, with the ultimate and eventual goal of single-cell proteomics in pathological contexts. Applying these methods in virtually any disease model will be helpful in delineating mechanisms of pathology related to kidney dysfunction.

Here, we present a detailed protocol for proteomic analysis of the whole kidney, isolated cortical tubule, and medullary proteomes. The study also compares regional proteomes in a diabetic mouse model and non-diabetic mice.

التحليل البروتيني المقارن للكلى الكاملة والنخاع والأنابيب القشرية في التسبب السكري لإصابة الكلى في الفئران

Defining the sequence of events in renal disease is the cornerstone of clinical practice in the nephrologist toolkit. Tissue proteomic analyses are a ...

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the key steps to investigate TRMs. There are slight variations in lymphocyte isolation protocols for different organs. Kidney is an essential non-lymphoid organ with numerous immune cell infiltration especially after pathogen exposure or autoimmune activation. In recent years, multiple labs including our own have started characterizing kidney resident CD8+ T cells in various physiological and pathological settings in both mouse and human. Due to the abundance of T lymphocytes, kidney represents an attractive model organ to study TRMs in non-mucosal or non-barrier tissues. Here, we will describe a protocol commonly used in TRM-focused labs to isolate CD8+ T cells from mouse kidneys following systemic viral infection. Briefly, using an acute lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) infection model in C57BL/6 mice, we demonstrate intravascular CD8+ T cell labeling, enzymatic digestion, and density gradient centrifugation to isolate and enrich lymphocytes from mouse kidneys to make samples ready for the subsequent flow cytometry analysis.

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Following viral infection, kidney harbors a relatively large number of CD8+ T cells and offers an opportunity to study non-mucosal TRM cells. Here, we describe a protocol to isolate mouse kidney lymphocytes for flow cytometry analysis.

عزل الماوس الكلى المقيم CD8+ الخلايا T لتحليل تدفق cytometry

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

Optical Clearing and Imaging of Immunolabeled Kidney Tissue

Optical clearing techniques render tissue transparent by equilibrating the refractive index throughout a sample for subsequent three-dimensional (3-D) imaging. They have received great attention in all research areas for the potential to analyze microscopic multicellular structures that extend over macroscopic distances. Given that kidney tubules, vasculature, nerves, and glomeruli extend in many directions, which have been only partially captured by traditional two-dimensional techniques so far, tissue clearing also opened up many new areas of kidney research. The list of optical clearing methods is rapidly growing, but it remains difficult for beginners in this field to choose the best method for a given research question. Provided here is a simple method that combines antibody labeling of thick mouse kidney slices; optical clearing with cheap, non-toxic and ready-to-use chemical ethyl cinnamate; and confocal imaging. This protocol describes how to perfuse kidneys and use an antigen-retrieval step to increase antibody- binding without requiring specialized equipment. Its application is presented in imaging different multicellular structures within the kidney, and how to troubleshoot poor antibody penetration into tissue is addressed. We also discuss the potential difficulties of imaging endogenous fluorophores and acquiring very large samples and how to overcome them. This simple protocol provides an easy-to-setup and comprehensive tool to study tissue in three dimensions.

The combination of antibody labeling, optical clearing, and advanced light microscopy allows three-dimensional analysis of complete structures or organs. Described here is a simple method to combine immunolabeling of thick kidney slices, optical clearing with ethyl cinnamate, and confocal imaging that enables visualization and quantification of three-dimensional kidney structures.

التطهير البصري والتصوير من أنسجة الكلى المسماة بالمناعة

Optical clearing techniques render tissue transparent by equilibrating the refractive index throughout a sample for subsequent three-dimensional (3-D) ...

An Effective Mouse Model of Unilateral Renal Ischemia-Reperfusion Injury

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models are the only available resources that mimic the complexities of the IRI-associated damage encountered in vivo. This paper describes an effective mouse model of unilateral renal IRI that delivers highly reproducible data. Ischemia is induced by occluding the right renal pedicle for 30 min followed by reperfusion. In addition to the surgical procedure, a sequential overview of the expected physiological and histopathological changes following renal IRI will be provided by comparing data from seven different reperfusion times (4 h, 8 h, 16 h, 1 day, 2 days, 4 days, and 7 days). Critical data for planning experiments ahead, such as mean surgical time, average anesthetic consumption, and body weight changes over time, will be shared. This work will help researchers implement a reliable renal IRI model and select the appropriate reperfusion time that aligns with their intended investigative goals.

Renal ischemia-reperfusion injury is associated with high morbidity and mortality in hospitalized patients. Here, we present a simple and effective mouse model of unilateral renal ischemia-reperfusion injury and provide a sequential overview of representative pathological changes observed in the kidney.

نموذج فعال للفأر لإصابة نقص التروية الكلوية أحادية الجانب

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models ...

Isolation, Characterization, And High Throughput Extracellular Flux Analysis of Mouse Primary Renal Tubular Epithelial Cells

Mitochondrial dysfunction in the renal tubular epithelial cells (TECs) can lead to renal fibrosis, a major cause of&#160;chronic kidney disease (CKD). Therefore, assessing mitochondrial function in primary TECs may provide valuable insight into the bioenergetic status of the cells, providing insight into the pathophysiology of CKD. While there are a number of complex protocols available for the isolation and purification of proximal tubules in different species, the field lacks a cost-effective method optimized for&#160;tubular cell isolation without the need for purification. Here, we provide an isolation protocol that allows for studies focusing on both primary mouse proximal and distal renal TECs. In addition to cost-effective reagents and minimal animal procedures required in this protocol, the isolated cells maintain high energy levels after isolation and can be sub-cultured up to four&#160;passages, allowing for continuous studies. Furthermore, using a high throughput extracellular flux analyzer, we assess the mitochondrial respiration directly in the isolated TECs in a 96-well plate for which we provide recommendations for the optimization of cell density and compound concentration. These observations suggest that this protocol can be used for renal tubular ex vivo studies with a consistent, well-standardized production of renal TECs. This protocol may have broader future applications to study mitochondrial dysfunction associated with renal disorders for drug discovery or drug characterization purposes.

This protocol provides a cost-effective approach to isolate and characterize mouse primary renal tubular cells that can subsequently be sub-cultured to assess renal biological functions ex vivo, including mitochondrial bioenergetics.

تحليل الجريان خارج الخلية عزل وتوصيف وإنتاجية عالية للماوس الأساسي كلوي أنبوبي الخلايا الظهارية

Mitochondrial dysfunction in the renal tubular epithelial cells (TECs) can lead to renal fibrosis, a major cause of&#160;chronic kidney disease (CKD). ...

Glomeruli Isolation: A Technique to Obtain Intact Glomeruli from Murine Kidney

Source: Eymael, J. et al. <a href="https://www.jove.com/video/60324" target="_blank">Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation.</a> J. Vis. Exp. (2020)
This video describes the method to isolate intact glomeruli from mouse kidneys. The encapsulated and decapsulated glomeruli thus obtained can further be used for culturing parietal epithelial cell outgrowths from the murine kidney.

عزل الكبيبات: تقنية للحصول على كبيبات سليمة من كلية الفئران

Source: Eymael, J. et al. Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation. J. Vis. Exp. ...