Name: the mouse isolated perfused kidney technique
Uploaded: 2016-11-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique at JoVE.com

The authors would like to thank Hans-Joachim Schurek for invaluable scientific advice. The authors would like to thank Monique Carrel and Mich&#232;le Heidemeyer for excellent technical assistance, David Penton Ribas and Nourdine Faresse for a critical reading of the manuscript and Carsten Wagner and J&#252;rg Biber for the NaPi-2a antibody. This work was supported by the Swiss National Centre for Competence in Research "Kidney.CH" and by a project grant (310030_143929/1) from the Swiss National Science Foundation.

Bu yazıda anlatılan hayvanları da içeren tüm işlemler İsviçre hukukuna göre ve Zürih, İsviçre Kantonu veteriner idaresi tarafından onaylanmış gerçekleştirilmiştir bulundu. 1. Tampon Hazırlama <ol><li> 4 ve antidiüretik hormon (ADH) çözeltisi (Tablo 1) - çözümleri 1 hazırlayın. </li><li> Diyaliz tamponu (Tablo 1) hazırlayın. NOT: Bu perfüzyon sırasında diyaliz tamponu olarak kullanılmıştır tampondur. Daha sonra, eritrositler son perfüzat oluşturmak için bu tampon içinde seyreltilir. </li><li> Eritrosit hazırlanması. <ol><li> insan eritrosit konsantresi diyaliz tamponu ile 500 ml (yerel kan bankasından elde edilen test materyal) 250 ml sulandırmak. 8 dakika boyunca 2.000 x g&#39;de santrifüjleyin. herhangi eritrositler kaldırmak için dikkatli olmak, tamponu çıkarın. 3x tekrarlayın. </li></ol></li><li> tampon; albümini (BSA sığır serum albümini) hazırlayın. <ol><li> dialysi, 200 mls tamponu, bir karıştırma çubuğu kullanılarak BSA 44 g çözülür. filtre kağıdı ile çözüm Filtre. </li></ol></li><li> perfüzat hazırlayın. <ol><li> BSA tampon içine filtre kağıdı ile adım 1.3.1 den eritrositler Filtre. Diyaliz tamponu ile 800 ml arasında bir toplam hacme kadar doldurun. NOT: Bu son perfüzyon olduğunu. hematokrit Şimdi 8 ile% 12 arasında olmalıdır. Perfüzat 12 saat kadar 4 ° C&#39;de saklanabilir. </li></ol></li></ol> 2. başlatılması Diyaliz ve Oksijenizasyon <ol><li> Daha büyük bir tampon rezervuar, daha küçük bir tampon rezervuar ve nemli bir odada 37 ° C (küçük, çift cidarlı sonra böbrek tutmak için 37 ° C ve% 100 bağıl neme getirdi) çevreleyen su banyosu üzerinde çevirin (Şekil 2) . </li><li> Diyaliz tamponu ile daha büyük bir tampon rezervuar ve perfüzat ile birlikte küçük bir doldurun. </li><li> Diyaliz tamponu% 5 CO 2 /% 95 O 2 gaz girişi çevirin. </li><li> diyaliz tamponuna karşı perfüzat sürekli diyaliz açın. Düşük akı diyaliz tüp kullanmak için özen gösterin. Adım 3&#39;e geçin. </li></ol><img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig2.jpg" /> Şekil 2: Perfüzyon Devre şematik çizimi. Şema perfüzyon devresinin ana bileşenleri ve tampon akış yönünü gösterir. lacivert çevrili tüm bileşenler bir su banyosu / termostat ile 37 ° C&#39;de tutulur. 1: perfüzyon tamponu en az 3 kez hacmi Diyaliz tamponu sürekli olarak% 95 O 2/5% CO2 ile köpürtülür. 2: Diyaliz tamponu ve perfüzyon tampon maddesi sürekli bir silindir pompa ile bir diyaliz tüpü içinde birbirlerine karşı diyaliz edilir. 3: Bu diyalize perfüzyon tampon maddesi% 9 O ile zenginleştirilmiştir nedeniyle 2/5% CO2 ve elektrolit seviyeleri tutulur, sabit throughout perfüzyon. 4: Bir silindir pompa böbrek doğru perfüzyon tampon sevkeder. 5: Bir windkessel peristaltik dalgalar kaldırır ve bir baloncuk kapanı gibi davranır. 6: Basınç detektörler (serbest dalgalı akış izin verirken 4. (silindir pompasına bağlı) sürekli baskı tutmak için). 7: perfüzyon boyunca, böbrek% 100 hava nemi ve 37 ° C, böbrek sıcaklığında bir nem odasında tutulur. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 3. Cerrahi Prosedür Bölüm 1 (tüm bitişik harfler bir diyagram için, bakınız Şekil 3) Not: 5-0 cerrahi iplik kullanarak tüm bitişik harfler gerçekleştirin. <ol><li> periton içi enjeksiyon ile bir fare (% 0.9 NaCI içinde çözülmüştür vücut ağırlığı, 20 mg / ml ketamin ve 1 mg / ml ksilazin 10 ul / g) anestezisi. Analg yeterli derinliği onaylayınArka ayak reflekslerin yokluğu test ederek esia. </li><li> nemli odasında yatar pozisyonda fare sabitleyin. Veteriner merhem ile gözleri koruyun. lomber damarları yükseltmek için omurga altına 1 ml şırınga yerleştirin. </li><li> makasla ilk sternum açılış cilt, daha sonra karın kasları, kasık tepesinin bir medyan laparotomi gerçekleştirin. </li><li> bağırsak çıkarın ve karın fare yanal sol tarafına yerleştirin. </li><li> bağ dokusu mesaneyi boşaltmak ve üreterler ve üretrayı hem de keşfetmek. </li><li> Sol üreter (bağ I) etrafında bir bitişik harfleri yerleştirin. Kapat onu. </li><li> üretra (bağ II) etrafında bir bitişik harfleri yerleştirin. Kapat onu. </li><li> Bütün mesane (bağ III) etrafında bir &quot;kement&quot; bitişik harfleri yerleştirin. </li><li> Mesaneyi 1 mm İnsizyon. </li><li> 2 cm PE 50 tüpü ile açıklığa kanüle. </li><li> boru etrafında yakın bağ III. </li><li> bitişik harfler sol üreter ve üretra distalinde kesti. bladder şimdi sadece ve serbestçe hareket sağ üreter takılır. </li><li> Bağ dokusu ve yağ abdominal aorta temizleyin. </li><li> abdominal orta aort bitişik harfleri (bağ IV) yerleştirin. </li><li> superior mezenterik arter ve çölyak gövde (bağ V) arasındaki diyafram altında aort etrafında bir bitişik harfleri yerleştirin. </li><li> superior mezenterik arter (bağ VI) etrafında bir bitişik harfleri yerleştirin. </li><li> doğrudan aşağıda sağda ve sol renal arter (bağ VII) Yukarıdaki aort bitişik harfleri yerleştirin. </li><li> kaudal ven paketi (cava) (bağ VIII) etrafında bir bitişik harfleri yerleştirin. Adım 4 ile devam edin. </li></ol><img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54712/54712fig3.jpg" /> Şekil 3: Cerrahi sırasında yerleştirilen Bitişik Harfler şematik çizimi. Laparotomi sonrası açık karın görünümü. bağırsak sola dışarı taşınır. L ve R, sol ve sağ böbrek göstermektedir.siyah çizgiler ilgili ligature alanını gösterir. Harfler önce yerleştirilmiş ve daha sonra metin içinde verilen sırada, kapatılır. X aort kanülasyon için kesi yerini işaretler. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Perfüzyon Devre 4. Hazırlama <ol><li> Döner Pompayı başlatın ve perfüzat ile tüp doldurun. ondan tüm hava kabarcıklarını boşaltmak için özen gösterin. </li><li> perfüzat ile birlikte yaklaşık olarak orta-seviyeye windkessel cihazı doldurun. </li><li> Tüm boru dolu ve akış bu süre içinde böbrek düzeyinde perfüzyon iğne tutun 0&#39;dır olduğunda 0 mm Hg basınç dönüştürücü ayarlayın. </li><li> sabit asgari düzeyde (0.6 ml / dk) akışını tutmak ve Adım 5 geçin. </li></ol> 5. Cerrahi Prosedür Bölüm 2 <ol><li> ligature IV ve sol Rena dallanma arasında bir kelepçe yerleştirinl arter. </li><li> dorsal duvarı kesme özen, bağ IV aort kaudal küçük bir kesi yapmak. </li><li> Bir gemi dilatör ile aort açıklığı dilate. </li><li> Bir iğne ile aort cannulate sadece kelepçe ucu iterek, (2 cm uzunluğunda, PE 50 çekti). </li><li> kelepçesini açın. </li><li> Doğru böbrek arter ve aort kavşak ulaşıncaya kadar iğne cranially ucu itin. </li><li> Kapat bağ VII. </li><li> Kapat bağ IV. </li><li> diyafram diseksiyon ile makas ile göğüs açın. Tek bir kesim ile, aort, vena kava, kalp ve vejetatif sinir ayırın. Bu adımla birlikte, hayvan sürekli derin anestezi altında hızlı kan kaybından yoluyla kurban. </li><li> perfüzyon pompa basınç kontrolü başlatın. 80 ve 100 mmHg arasında ortalama basıncı koruyun. </li><li> Yakın bağ V. </li><li> Kapat bağ VI. </li><li> Kapat bağ VIII. </li><li> Bağ Tissu&#39;dan ücretsiz sağ böbrekE ve makasla adipoz kapsül içine gömme. </li><li> V. ligature için proksimal aort Cut </li><li> VI ligature için distal superior mezenterik arter kesin. </li><li> gemiler kendileri oyulmuş değil özen, böbrek destekleyici damar demeti kesin. </li><li> böbrek bağlantısında karaciğer kesin. böbrek serbest özen gösterin, fakat vena kava onun tarafından açık tutulur, böylece ona karaciğer yapışık küçük bir kısmını bırakın. </li><li> fare dışarı böbrek desteyi alıp. Nemli odasından fareyi çıkarın. </li><li> karaciğer ve böbrek (bağ IX) bağlantısı etrafında bir &quot;kement&quot; bitişik harfleri yerleştirin. </li><li> venöz hat (2 cm PE 50) ile vena kava cannulate. </li><li> Kapat bağ IX. venöz hattı üzerinden venöz çıkış derhal başlamalıdır. </li><li> nemli bir odada kapatın. </li></ol> 6. Alt Analizler <ol><li> Aşağıdaki saat boyunca, sürekli kan akışını ve intravascul izlemekar basıncı 15. Örneğin analizi için kullanılabilir kan çıkışı, renal renin salınımını 7 toplayın. Elektrolit konsantrasyonu ve glomerüler filtrasyon hızı 14 analiz için idrar toplayın. Perfüzyon 1 saat sonra, böbrekler Western blot ek dondurulabilir veya görüntüleme için sabit 16 yaklaşır. </li></ol>

<ol>
	<li>Carrel, A., Lindbergh, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+culture+of+whole+organs.">The culture of whole organs.</a> Science (New York, N.Y.). 81 (2112), 621-623 (1935).</li><li>Skutul, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> &#220;ber Durchstr&#246;mungsapparate Pfl&#252;ger's Archiv. 123 (4-6), 249-273 (1908).</li><li>Nizet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+kidney:+possibilities,+limitations+and+results.">The isolated perfused kidney: possibilities, limitations and results.</a> Kidney Int. 7 (1), 1-11 (1975).</li><li>Weiss, C., Passow, H., Rothstein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoregulation+of+flow+in+isolated+rat+kidney+in+the+absence+of+red+cells.">Autoregulation of flow in isolated rat kidney in the absence of red cells.</a> Am J Physiol. 196 (5), 1115-1118 (1959).</li><li>Schurek, H. J., Kriz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+and+functional+evidence+for+oxygen+deficiency+in+the+isolated+perfused+rat+kidney.">Morphologic and functional evidence for oxygen deficiency in the isolated perfused rat kidney.</a> Lab Invest. 53 (2), 145-155 (1985).</li><li>Stolte, H., Schurek, H. J., Alt, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+albumin+filtration:+a+comparison+of+micropuncture+studies+in+the+isolated+perfused+rat+kidney+with+in+vivo+experimental+conditions.">Glomerular albumin filtration: a comparison of micropuncture studies in the isolated perfused rat kidney with in vivo experimental conditions.</a> Kidney Int. 16 (3), 377-384 (1979).</li><li>Schweda, F., Wagner, C., Kr&#228;mer, B. K., Schnermann, J., Kurtz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preserved+macula+densa-dependent+renin+secretion+in+A1+adenosine+receptor+knockout+mice.">Preserved macula densa-dependent renin secretion in A1 adenosine receptor knockout mice.</a> AJP Renal Physiol. 284 (4), F770-F777 (2003).</li><li>Moers, C., Smits, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Machine+perfusion+or+cold+storage+in+deceased-donor+kidney+transplantation.">Machine perfusion or cold storage in deceased-donor kidney transplantation.</a> N Engl J Med. 360 (1), 7-19 (2009).</li><li>Nicholson, M. L., Hosgood, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+after+ex+vivo+normothermic+perfusion:+the+first+clinical+study.">Renal transplantation after ex vivo normothermic perfusion: the first clinical study.</a> Am J Transplant. 13 (5), 1246-1252 (2013).</li><li>Worner, M., Poore, S., Tilkorn, D., Lokmic, Z., Penington, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+low-cost,+small+volume+circuit+for+autologous+blood+normothermic+perfusion+of+rabbit+organs.">A low-cost, small volume circuit for autologous blood normothermic perfusion of rabbit organs.</a> Art Org. 38 (4), 352-361 (2014).</li><li>Kaths, J. M., Spetzler, V. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+Ex+Vivo+Kidney+Perfusion+for+the+Preservation+of+Kidney+Grafts+prior+to+Transplantation.">Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation.</a> J Vis Exp. (101), e52909 (2015).</li><li>Song, J. J., Guyette, J. P., Gilpin, S. E., Gonzalez, G., Vacanti, J. P., Ott, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+and+experimental+orthotopic+transplantation+of+a+bioengineered+kidney.">Regeneration and experimental orthotopic transplantation of a bioengineered kidney.</a> Nature Med. 19 (5), 646-651 (2013).</li><li>Hall, A. M., Crawford, C., Unwin, R. J., Duchen, M. R., Peppiatt-Wildman, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+imaging+of+the+functioning+kidney.">Multiphoton imaging of the functioning kidney.</a> JASN. 22 (7), 1297-1304 (2011).</li><li>Lindell, S. L., Williams, N., Brusilovsky, I., Mangino, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+IPK:+A+Powerful+Tool+to+Partially+Characterize+Renal+Reperfusion+and+Preservation+Injury.">Mouse IPK: A Powerful Tool to Partially Characterize Renal Reperfusion and Preservation Injury.</a> Open Transplant J. 5, 15-22 (2011).</li><li>Wagner, C., De Wit, C., Kurtz, L., Gr&#252;nberger, C., Kurtz, A., Schweda, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connexin40+is+essential+for+the+pressure+control+of+renin+synthesis+and+secretion.">Connexin40 is essential for the pressure control of renin synthesis and secretion.</a> Circ Res. 100 (4), 556-563 (2007).</li><li>Czogalla, J., Vohra, T., Penton, D., Kirschmann, M., Craigie, E., Loffing, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mineralocorticoid+receptor+(MR)+regulates+ENaC+but+not+NCC+in+mice+with+random+MR+deletion.">The mineralocorticoid receptor (MR) regulates ENaC but not NCC in mice with random MR deletion.</a> Pfl&#252;ger's Archiv. , (2016).</li><li>Poosti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision-cut+kidney+slices+(PCKS)+to+study+development+of+renal+fibrosis+and+efficacy+of+drug+targeting+ex+vivo.">Precision-cut kidney slices (PCKS) to study development of renal fibrosis and efficacy of drug targeting ex vivo.</a> Dis Model Mech. 8 (10), 1227-1236 (2015).</li><li>Rahgozar, M., Guan, Z., Matthias, A., Gob&#233;, G. C., Endre, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+facilitates+autoregulation+in+the+perfused+mouse+kidney:+An+optimized+in+vitro+model+for+assessment+of+renal+vascular+and+tubular+function.">Angiotensin II facilitates autoregulation in the perfused mouse kidney: An optimized in vitro model for assessment of renal vascular and tubular function.</a> Nephrology. 9 (5), 288-296 (2004).</li></ol>

The authors have no competing financial interests and nothing else to disclose.

Perfüze böbrek izole fare çok sayıda sistemik faktörlerin etkisi ile kusurlu olabilir sağlam hayvanlarda in vivo deneyler arasındaki köprü, 1 saat boyunca kontrollü bir ortamda ex vivo böbrek fonksiyonunu incelemek için bir araçtır ve in vitro deneylerde izole nefron segmentleri veya mutlaka fonksiyonu bozulmamış organ yapısı etkisini ihmal kültürlü hücreler. , Yazarların bilgisine, hiçbir alternatif bir teknik bu özel görevi vardır gerçekleştirmek için bir. Böbr...

Organların izole perfüzyon onlarca yıl 1 fizyolog arasında sürekli bir çaba konusu olmuştur. tekniği, kan basıncı, hormonlar, ya da sinirler gibi sistemik etkileri olmadan, organın işlevini sağlayan, çalışılacak. Carl Eduard Loebell 1849 2, izole edilmiş böbrek başarıyla perfüzyon tarif eden ilk olarak kabul edilir. O zamandan beri, perfüzyon aparatı önemli arıtma uğramıştır. Frey ve Gruber sürekli perfüzyon 2 oksijenasyon ve pulsatil pompalar için yapay akciğer tanıttı. Erken araştırmacılar özellikle büyük memeliler-yani, domuzlar 2 ve köpekler 3 sıçan böbreklerinde kullanımı -the ilk rapor, Weiss ve ark ait böbrekler okudu iken. Küçük memeli organ perfüzyon 4 çalışmada bir dönüm noktası oldu. Schurek ve ark. Yeterli böbrek tübüler eğer perfüzat memeli eritrosit ekleme gerekliliğini bildirdioksijen 5 elde edilebilir amaçlanmıştır. Uzun vadeli deneyler için kritik Aynı araştırma grubu 6 ile tampon sürekli diyaliz tanıtım oldu. 2003 yılında, Schweda ve ark. Daha sonra Rahgozar ve arkadaşları tarafından rafine fonksiyonel fare izole perfüze böbrek (MIPK) 7, rapor için ilk idi. 18 ve Lindell ve diğ. 14. perfüze böbrek izole sıçan daha teknik olarak daha zor olsa da, MIPK kullanımı genetik olarak değiştirilmiş farelerin geniş bir yelpazede kullanımını sağlayan avantajını taşımaktadır. Bu kağıt 1 saat boyunca izole fare böbrekleri perfüze için yazarların yöntemin ayrıntılarını sunar. yöntem böbrek akış hızı, damar direnci, hormon salınımı, kan gazı analizi, idrar analizi ve ilaçların uygulama sürekli değerlendirme sağlar. prosedür takip edilerek, böbrekler, moleküler ve biyokimyasal analiz için işlenebilir mikroskopi için sabit ya daBir alıcı fare içine nakledilen (Şekil 1). <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig1.jpg" /> Şekil 1: İzole perfüze Böbrek Olası Giriş / Çıkış bakış. BGA: Kan gazı analizi. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Birçok yenilikçi uygulamalar ile (veya anti-ret veya genom düzenleme ilaçların uygulama olmadan) 8, 9 nakilden önce uzun süreli normotermik böbrek perfüzyon şafak ile tartışılmaktadır olarak bu tekniğin büyük olasılıkla, 10, önümüzdeki yıllarda artan ilgi alacaksınız , 11, hücresizleştirilmiş iskeleler 12 gelen bütün böbreklerin Bioengineering ve multiphoton görüntüleme 13 floresan boyalar yüksek dozlarda uygulanması </sup&gt;. Ayrıca akut böbrek hasarı 14 sırasında belirli genlerin rolünü araştırmak için ideal bir modeldir. Bir adım-adım protokolü diğer laboratuarlar başarıyla izole fare böbrek perfüzyon gerçekleştirmek için izin verilir. İlk olarak, bileşim, ve tampon hazırlanması belirtilir. Daha sonra, cerrahi ayrıntılı olarak tarif edilmiştir ve kritik adımlar gösterilmektedir. Üçüncü olarak, veri başarılı bir hazırlık temsil ettiğini sunulmuştur: renal kan akımı, damar direnci, glomerüler filtrasyon hızı ve fraksiyonel elektrolit atılımı hepsi perfüze böbreklerin farklı nefron segmentlerinden morfolojisi canlılık-ve transmisyon elektron mikroskobuyla olarak fonksiyonel ölçümler perfüzyon 1 saat sonra sabit.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Perfusion Circuit:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Moist chamber 834/8</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-2901</td><td></td></tr><tr><td>Cannular with basket and side port</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-2947</td><td></td></tr><tr><td>Thermostat TC120-ST5&amp;nbsp;</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-4544</td><td></td></tr><tr><td>ISM 827/230V Roller Pump Reglo Analogue</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-0114</td><td></td></tr><tr><td>Reservoir jacketed for buffer solution 1 L</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3438</td><td></td></tr><tr><td>Reservoir jacketed for buffer solution 0.5 L</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3436</td><td></td></tr><tr><td>Pressure Transducer APT300&amp;nbsp;</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3862</td><td></td></tr><tr><td>TAM-D Plugsys Transducer</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-1793</td><td></td></tr><tr><td>SCP Plugsys servo controller</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-2806</td><td></td></tr><tr><td>Windkessel&amp;nbsp;</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3717</td><td></td></tr><tr><td>HSE-USB data acquisition</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3330</td><td></td></tr><tr><td>Low-Flux Dialysator Diacap Polysulfone</td><td>B.Braun</td><td>7203525</td><td></td></tr><tr><td>PE-Tubing for aorta cannulation 1.19 mm I.D. x 1.70 mm O.D.</td><td>Scientific Commodities Inc.</td><td>BB31695-PE/8</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Buffer reagents:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aminoplasmal 10%</td><td>B.Braun</td><td>134518064</td><td></td></tr><tr><td>Sodium pyruvate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256-25G</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamic acid monosodium salt hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1626-100G</td><td></td></tr><tr><td>L-(-)-Malic acid sodium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1125-25G</td><td></td></tr><tr><td>Sodium-L-Lactate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7022-10G</td><td></td></tr><tr><td>alpha-Ketoglutaric acid sodium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K1875-25G</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>31434-1KG-R</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761-5KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60130-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Urea</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>U5378-500G</td><td></td></tr><tr><td>Creatinine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4255-10G</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Roche</td><td>10835242001</td><td></td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; * 6H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2393-500G</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; * 6H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O&amp;nbsp;</td><td>Riedel-de-Ha&amp;euml;n</td><td>12074</td><td></td></tr><tr><td>NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638-500G</td><td></td></tr><tr><td>Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876-500G</td><td></td></tr><tr><td>Antidiuretic Hormone dDAVP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V2013-1MG</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Inulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filter used for erythrocyte filtration</td><td>Macherey-Nagel</td><td>MN 615</td><td></td></tr><tr><td>BGA Analysis:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ABL 80 flex</td><td>Radiometer Medical ApS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Electron Microscope:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Philips CM100 TEM</td><td>FEI</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

the mouse isolated perfused kidney technique

Fare izole edilmiş perfüze böbrek (MIPK) perfüze edildi ve 1 saat için fonksiyonel ex vivo koşullar altında bir fare böbrek tutmak için kullanılan bir tekniktir. Bu izole organ ve perfüzyon böbrek biyomühendislik için Decellularization veya anti-reddi veya asal böbrek yüksek dozlarda genom düzenleme ilaç uygulaması da dahil olmak üzere gelecekte mümkün olabilir pek çok yenilikçi uygulamalar için fizyolojisi eğitimi için bir ön koşuldur nakli için. perfüzyon süre boyunca, böbrek, böbrek fonksiyonu değerlendirilebilir, manipüle ve çeşitli ilaç tatbik edilebilir. İşlemden sonra, böbrek nakledilen veya moleküler biyoloji, biyokimya analizi, ya da mikroskopi için işlenir. Bu yazıda perfüzat ve fare böbrekler ex vivo perfüzyon için gerekli cerrahi teknik anlatılmaktadır. perfüzyon aparatı detayları verilen ve veri v gösteren sunulmuşturböbreğin hazırlama iability: morfolojik okumalar ve moleküler okuma farklı nefron bölümlerinin taşıyıcı proteinlerin Western blotlar farklı nefron bölümlerinin işlevsel transmisyon elektron mikroskobuyla böbrek kan akışı, vasküler direnç ve idrar verileri.

yöntem tarif ile, izole edilmiş fare böbrekleri, en az 1 saat boyunca canlı kalabilir. Fonksiyonel (böbrek kan akımı ve damar direnci, venöz çıkış, glomerüler filtrasyon hızı, idrar fraksiyonel Na + ve K + atılımını kan gazı analizi ve idrar osmolalitesi) ve morfolojik (iletim elektron sürekli perfüzyon 1 saat sonra doku canlılığını test vahşi tip C57BL / 6 fareden oluşan dört böbreklerde mikroskobu, TEM) yöntemleri. Ayrıca, farklı ...

Watch this Scientific Journal Video about The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique at JoVE.com

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

Fare izole edilmiş perfüze böbrek (MIPK) perfüze edildi ve 1 saat için fonksiyonel ex vivo koşullar altında bir fare böbrek tutmak için kullanılan bir tekniktir. tamponlar ve cerrahi teknik ayrıntılı olarak tarif edilmiştir.

Fare İzole perfüze Böbrek Tekniği

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

the-mouse-isolated-perfused-kidney-technique

Research

JoVE Journal

Biology

21.6K Görüntüleme.  University of Zürich.  Fare izole edilmiş perfüze böbrek (MIPK) perfüze edildi ve 1 saat için fonksiyonel ex vivo koşullar altında bir fare böbrek tutmak için kullanılan bir tekniktir. tamponlar ve cerrahi teknik ayrıntılı olarak tarif edilmiştir. 

Video: The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients revealed that only a mild increase in serum creatinine levels (0.3 to 0.4 mg/dl) is associated with a 70% greater risk of death than in persons without any increase 1. Along these lines, surgical procedures requiring cross-clamping of the aorta and renal vessels are associated with a renal failure rates of up to 30% 4. Similarly, AKI after cardiac surgery occurs in over 10% of patients under normal circumstances and is associated with dramatic increases in mortality. AKI are also common complications after liver transplantation. At least 8-17% of patients end up requiring renal replacement therapy 5. Moreover, delayed graft function due to tubule cell injury during kidney transplantation is frequently related to ischemia-associated AKI 6. Moreover, AKI occurs in approximately 20% of patients suffering from sepsis 6.The occurrence of AKI is associated with dramatic increases of morbidity and mortality 1. Therapeutic approaches are very limited and the majority of interventional trials in AKI have failed in humans. Therefore, additional therapeutic modalities to prevent renal injury from ischemia are urgently needed 3, 7-9. 
To elucidate mechanisms of renal injury due to ischemia and possible therapeutic strategies murine models are intensively required 7-13. Mouse models provide the possibility of utilizing different genetic models including gene-targeted mice and tissue specific gene-targeted mice (cre-flox system). However, murine renal ischemia is technically challenging and experimental details significantly influence results. We performed a systematic evaluation of a novel model for isolated renal artery occlusion in mice, which specifically avoids the use of clamping or suturing the renal pedicle 14. This model requires a nephrectomy of the right kidney since ischemia can be only performed in one kidney due to the experimental setting. In fact, by using a hanging-weight system, the renal artery is only instrumented once throughout the surgical procedure. In addition, no venous or urethral obstruction occurs with this technique. We could demonstrate time-dose-dependent and highly reproducible renal injury with ischemia by measuring serum creatinine. Moreover, when comparing this new model with conventional clamping of the whole pedicle, renal protection by ischemic preconditioning is more profound and more reliable. Therefore his new technique might be useful for other researchers who are working in the field of acute kidney injury.

A precise murine model for acute kidney injury (AKI) due to ischemia is an important tool to investigate acute kidney injury and possibly find therapeutic tools to treat renal injury. The hanging weight system offers a tool for immediate and reliable renal artery occlusion and reperfusion without causing renal congestion.

İzole Renal Arter Tıkanıklığı Asılı ağırlık Sistemi

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients ...

Tıp

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and podocytes with their slit diaphragms. The delicate structure of the glomerular filter, especially the slit diaphragm, relies on the interplay of diverse cell surface proteins. Studying these cell surface proteins has so far been limited to in vitro studies or histologic analysis. Here, we present a murine in vivo biotinylation labeling method, which enables the study of glomerular cell surface proteins under physiologic and pathophysiologic conditions. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of a protein of interest. Semi-quantitation of glomerular cell surface abundance is readily available with this novel method, and all proteins accessible to biotin perfusion and immunoprecipitation can be studied. In addition, isolation of glomeruli with or without biotinylation enables further analysis of glomerular RNA and protein as well as primary glomerular cell culture (i.e., primary podocyte cell culture).

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Here we present a protocol for murine in vivo labeling of glomerular cell surface proteins with biotin. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of the protein of interest.

Yalıtım Glomeruli ve Glomerular hücre yüzey proteinleri Vivo etiketleme

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and ...

Biyokimya

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

Fare Böbrek Transplantasyonu: Allogreft Reddi Modelleri

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Reliable and High Efficiency Extraction of Kidney Immune Cells

Immune system activation occurs in multiple kidney diseases and pathophysiological processes. The immune system consists of both adaptive and innate components and multiple cell types. Sometimes, the cell type of interest is present in very low numbers among the large numbers of total cells isolated from the kidney. Hence, reliable and efficient isolation of kidney mononuclear cell populations is important in order to study the immunological problems associated with kidney diseases. Traditionally, tissue isolation of kidney mononuclear cells have been performed via enzymatic digestions using different varieties and strengths of collagenases/DNAses yielding varying numbers of viable immune cells. Recently, with the development of the mechanical tissue disruptors for single cell isolation, the collagenase digestion step is avoided and replaced by a simple mechanical disruption of the kidneys after extraction from the mouse. Herein, we demonstrate a simple yet efficient method for the isolation of kidney mononuclear cells for every day immune cell extractions. We further demonstrate an example of subset analysis of immune cells in the kidney. Importantly, this technique can be adapted to other soft and non-fibrous tissues such as the liver and brain.

Techniques that are reliable and efficient for the isolation of kidney immune cells are needed for downstream applications. This requires surface antibody labeling of a small number of kidney immune cells. Herein, we describe a concise method for isolation of kidney immune cells that seemingly achieves this goal.

Böbrek Bağışıklık Hücreleri Güvenilir ve Yüksek Verimlilik Ekstraksiyon

Immune system activation occurs in multiple kidney diseases and pathophysiological processes.  The immune system consists of both adaptive and innate ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Comparative Proteomic Analysis of Whole Kidney, Medulla, and Cortical Tubules in Diabetic Pathogenesis of Kidney Injury in Mice

Defining the sequence of events in renal disease is the cornerstone of clinical practice in the nephrologist toolkit. Tissue proteomic analyses are a significant approach to understanding the fundamental physiological and molecular processes of renal pathophysiology. The methods and protocols we present here will allow for the molecular dissection of the kidney in each specific region of interest related to disease sequelae. To determine the effects of disease on specific kidney regions and structures with unique functions, the goals of this protocol are to demonstrate simplified mouse kidney compartmentalization and renal cortical tubule isolation techniques in tandem with streamlined label-free quantitative proteomic workflows. Combining these methods will assist in the identification of perturbed molecular patterns in the whole kidney, medullary compartments, and cortical tubule structures of kidneys, with the ultimate and eventual goal of single-cell proteomics in pathological contexts. Applying these methods in virtually any disease model will be helpful in delineating mechanisms of pathology related to kidney dysfunction.

Here, we present a detailed protocol for proteomic analysis of the whole kidney, isolated cortical tubule, and medullary proteomes. The study also compares regional proteomes in a diabetic mouse model and non-diabetic mice.

Farelerde Böbrek Hasarının Diyabetik Patogenezinde Tüm Böbrek, Medulla ve Kortikal Tübüllerin Karşılaştırmalı Proteomik Analizi

Defining the sequence of events in renal disease is the cornerstone of clinical practice in the nephrologist toolkit. Tissue proteomic analyses are a ...

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the key steps to investigate TRMs. There are slight variations in lymphocyte isolation protocols for different organs. Kidney is an essential non-lymphoid organ with numerous immune cell infiltration especially after pathogen exposure or autoimmune activation. In recent years, multiple labs including our own have started characterizing kidney resident CD8+ T cells in various physiological and pathological settings in both mouse and human. Due to the abundance of T lymphocytes, kidney represents an attractive model organ to study TRMs in non-mucosal or non-barrier tissues. Here, we will describe a protocol commonly used in TRM-focused labs to isolate CD8+ T cells from mouse kidneys following systemic viral infection. Briefly, using an acute lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) infection model in C57BL/6 mice, we demonstrate intravascular CD8+ T cell labeling, enzymatic digestion, and density gradient centrifugation to isolate and enrich lymphocytes from mouse kidneys to make samples ready for the subsequent flow cytometry analysis.

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Following viral infection, kidney harbors a relatively large number of CD8+ T cells and offers an opportunity to study non-mucosal TRM cells. Here, we describe a protocol to isolate mouse kidney lymphocytes for flow cytometry analysis.

Akış Sitometri Analizi için Fare Böbrek-Resident CD8+ T hücrelerinin izolasyonu

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

Optical Clearing and Imaging of Immunolabeled Kidney Tissue

Optical clearing techniques render tissue transparent by equilibrating the refractive index throughout a sample for subsequent three-dimensional (3-D) imaging. They have received great attention in all research areas for the potential to analyze microscopic multicellular structures that extend over macroscopic distances. Given that kidney tubules, vasculature, nerves, and glomeruli extend in many directions, which have been only partially captured by traditional two-dimensional techniques so far, tissue clearing also opened up many new areas of kidney research. The list of optical clearing methods is rapidly growing, but it remains difficult for beginners in this field to choose the best method for a given research question. Provided here is a simple method that combines antibody labeling of thick mouse kidney slices; optical clearing with cheap, non-toxic and ready-to-use chemical ethyl cinnamate; and confocal imaging. This protocol describes how to perfuse kidneys and use an antigen-retrieval step to increase antibody- binding without requiring specialized equipment. Its application is presented in imaging different multicellular structures within the kidney, and how to troubleshoot poor antibody penetration into tissue is addressed. We also discuss the potential difficulties of imaging endogenous fluorophores and acquiring very large samples and how to overcome them. This simple protocol provides an easy-to-setup and comprehensive tool to study tissue in three dimensions.

The combination of antibody labeling, optical clearing, and advanced light microscopy allows three-dimensional analysis of complete structures or organs. Described here is a simple method to combine immunolabeling of thick kidney slices, optical clearing with ethyl cinnamate, and confocal imaging that enables visualization and quantification of three-dimensional kidney structures.

Optik temizleme ve Immünolabeled böbrek dokusu görüntüleme

Optical clearing techniques render tissue transparent by equilibrating the refractive index throughout a sample for subsequent three-dimensional (3-D) ...

An Effective Mouse Model of Unilateral Renal Ischemia-Reperfusion Injury

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models are the only available resources that mimic the complexities of the IRI-associated damage encountered in vivo. This paper describes an effective mouse model of unilateral renal IRI that delivers highly reproducible data. Ischemia is induced by occluding the right renal pedicle for 30 min followed by reperfusion. In addition to the surgical procedure, a sequential overview of the expected physiological and histopathological changes following renal IRI will be provided by comparing data from seven different reperfusion times (4 h, 8 h, 16 h, 1 day, 2 days, 4 days, and 7 days). Critical data for planning experiments ahead, such as mean surgical time, average anesthetic consumption, and body weight changes over time, will be shared. This work will help researchers implement a reliable renal IRI model and select the appropriate reperfusion time that aligns with their intended investigative goals.

Renal ischemia-reperfusion injury is associated with high morbidity and mortality in hospitalized patients. Here, we present a simple and effective mouse model of unilateral renal ischemia-reperfusion injury and provide a sequential overview of representative pathological changes observed in the kidney.

Tek Taraflı İskemi-Reperfüzyon Hasarının Etkili Bir Fare Modeli

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models ...

Isolation, Characterization, And High Throughput Extracellular Flux Analysis of Mouse Primary Renal Tubular Epithelial Cells

Mitochondrial dysfunction in the renal tubular epithelial cells (TECs) can lead to renal fibrosis, a major cause of&#160;chronic kidney disease (CKD). Therefore, assessing mitochondrial function in primary TECs may provide valuable insight into the bioenergetic status of the cells, providing insight into the pathophysiology of CKD. While there are a number of complex protocols available for the isolation and purification of proximal tubules in different species, the field lacks a cost-effective method optimized for&#160;tubular cell isolation without the need for purification. Here, we provide an isolation protocol that allows for studies focusing on both primary mouse proximal and distal renal TECs. In addition to cost-effective reagents and minimal animal procedures required in this protocol, the isolated cells maintain high energy levels after isolation and can be sub-cultured up to four&#160;passages, allowing for continuous studies. Furthermore, using a high throughput extracellular flux analyzer, we assess the mitochondrial respiration directly in the isolated TECs in a 96-well plate for which we provide recommendations for the optimization of cell density and compound concentration. These observations suggest that this protocol can be used for renal tubular ex vivo studies with a consistent, well-standardized production of renal TECs. This protocol may have broader future applications to study mitochondrial dysfunction associated with renal disorders for drug discovery or drug characterization purposes.

This protocol provides a cost-effective approach to isolate and characterize mouse primary renal tubular cells that can subsequently be sub-cultured to assess renal biological functions ex vivo, including mitochondrial bioenergetics.

Yalıtım, karakterizasyonu ve yüksek işlem hacmi ekstraselüler akı analiz fare birincil Renal tübüler epitel hücresi

Mitochondrial dysfunction in the renal tubular epithelial cells (TECs) can lead to renal fibrosis, a major cause of&#160;chronic kidney disease (CKD). ...

Biyoloji

Glomeruli Isolation: A Technique to Obtain Intact Glomeruli from Murine Kidney

Source: Eymael, J. et al. <a href="https://www.jove.com/video/60324" target="_blank">Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation.</a> J. Vis. Exp. (2020)
This video describes the method to isolate intact glomeruli from mouse kidneys. The encapsulated and decapsulated glomeruli thus obtained can further be used for culturing parietal epithelial cell outgrowths from the murine kidney.

Glomerül İzolasyonu: Murin Böbrek'ten Sağlam Glomerül Elde Etme Tekniği

Source: Eymael, J. et al. Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation. J. Vis. Exp. ...