Name: the mouse isolated perfused kidney technique
Uploaded: 2016-11-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
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The authors would like to thank Hans-Joachim Schurek for invaluable scientific advice. The authors would like to thank Monique Carrel and Mich&#232;le Heidemeyer for excellent technical assistance, David Penton Ribas and Nourdine Faresse for a critical reading of the manuscript and Carsten Wagner and J&#252;rg Biber for the NaPi-2a antibody. This work was supported by the Swiss National Centre for Competence in Research "Kidney.CH" and by a project grant (310030_143929/1) from the Swiss National Science Foundation.

Todos os procedimentos que envolvem animais descritos neste manuscrito foram conduzidos de acordo com a lei suíça e aprovado pela administração veterinária do Cantão de Zurique, Suíça. 1. Preparação Tampão <ol><li> Preparar soluções 1 - 4 e a solução de hormônio antidiurético (ADH) (Tabela 1). </li><li> Prepara-se o tampão de diálise (Tabela 1). NOTA: Este é o tampão utilizado como o tampão de diálise durante a perfusão. Mais tarde, os eritrócitos serão diluídas neste tampão para formar o perfusato final. </li><li> preparação de eritrócitos. <ol><li> Dilui-se 250 ml de concentrado de eritrócitos humana (material testado obtido a partir do banco de sangue local) para 500 ml com tampão de diálise. Centrifugar a 2000 xg durante 8 minutos. Remover o tampão, tomando cuidado para não remover quaisquer eritrócitos. 3x. </li></ol></li><li> Prepara-se o (albumina de soro de bovino; BSA) de albumina de tampão. <ol><li> Em 200 ml de dialysitampão s, dissolver 44 g de BSA usando uma barra de agitação. Filtra-se a solução com papel de filtro. </li></ol></li><li> Prepara-se o perfusado. <ol><li> Filtrar os eritrócitos a partir do passo 1.3.1 através de papel de filtro para o tampão de BSA. Encha até um volume total de 800 ml com tampão de diálise. NOTA: Este é o perfusato final. O hematócrito agora deve situar-se entre 8 e 12%. O perfusato pode ser armazenado durante até 12 h a 4 ° C. </li></ol></li></ol> 2. Início de Diálise e Oxigenação <ol><li> Ligar o banho de água em torno do reservatório maior tampão, menor do reservatório tampão, e a câmara de humidade (uma pequena câmara, de parede dupla trazida a 37 ° C e 100% de humidade para realizar mais tarde, o rim) a 37 ° C (Figura 2) . </li><li> Encher o reservatório de tampão de maior com o tampão de diálise e o reservatório menor com o perfusato. </li><li> Ligue a 5% de CO 2/95% O 2 afluxo de gás para o tampão de diálise. </li><li> Ligar diálise contínua do perfusado contra o tampão de diálise. Tome o cuidado de usar tubos de diálise baixo fluxo. Vá para a Etapa 3. </li></ol><img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig2.jpg" /> Figura 2: Desenho esquemático do circuito de perfusão. Esquema mostra os principais componentes do circuito de perfusão e a direcção do fluxo tampão. Todos os componentes rodeados por azul escuro são mantidos a 37 ° C com um banho de água / termostato. 1: tampão de diálise de pelo menos 3 vezes o volume de tampão de perfusão é continuamente borbulhada com 95% de O2 / 5% de CO 2. 2: tampão de diálise e tampão de perfusão são continuamente dialisada contra o outro num tubo de diálise por uma bomba de rolos. 3: througho constante Devido a esta diálise, o tampão de perfusão é enriquecida com 9% de O2 / 5% de CO 2 e de electrólitos são mantidos níveisperfusão ut. 4: Uma bomba de cilindro impele o tampão de perfusão para o rim. 5: Uma Windkessel remove as ondas peristálticas e funciona como uma armadilha de bolhas. 6: transdutor de pressão (ligados a 4. (bomba de roletes) para manter a pressão contínua, permitindo o fluxo alternando livremente). 7: Durante a perfusão, o rim permanece numa câmara húmida para 100% de humidade atmosférica e 37 ° C Temperatura de rim. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig2large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> 3. Cirúrgica Procedimento Parte 1 (para um diagrama de todas as ligaduras, consulte a Figura 3) Nota: Executar todas as ligaduras usando 5-0 fio cirúrgico. <ol><li> Anestesiar um rato por injecção intraperitoneal (10 mL / g de peso corporal, de 20 mg / ml de cetamina e 1 mg / ml de xilazina dissolvido em 0,9% de NaCl). Confirmar profundidade suficiente de AnesthAIAS por testar a ausência de reflexos traseira pés. </li><li> Corrigir o rato em decúbito dorsal na câmara húmida. Proteger os olhos com pomada veterinário. Coloque uma seringa de 1 ml abaixo da coluna vertebral para elevar os vasos lombares. </li><li> Realizar uma laparotomia mediana da crista púbica para a abertura do esterno primeira a pele, em seguida, os músculos abdominais, com uma tesoura. </li><li> Remover o intestino e colocá-lo no lado esquerdo da lateral do mouse a partir do abdômen. </li><li> Libertar a bexiga de tecido conjuntivo e explorar ambos os ureteres e uretra. </li><li> Coloque uma ligadura em torno do ureter esquerdo (ligadura I). Fecha-o. </li><li> Colocar uma ligadura em torno da uretra (ligadura II). Fecha-o. </li><li> Coloque um &quot;laço&quot; ligadura em torno de toda a bexiga (ligadura III). </li><li> Faça uma incisão na bexiga 1 mm. </li><li> Canular a abertura com dois centímetros PE 50 tubos. </li><li> Fechar ligadura III em torno do tubo. </li><li> Cortar o uréter esquerdo e uretra distai das ligaduras. o bladder agora está ligado ao ureter direito apenas e movimentando-se livremente. </li><li> Desmarque a aorta abdominal de tecido conjuntivo e gordura. </li><li> Coloque uma ligadura meados de aorta abdominal (ligadura IV). </li><li> Colocar uma ligadura em torno da aorta abaixo do diafragma entre a artéria mesentérica superior e o tronco celíaca (V ligadura). </li><li> Colocar uma ligadura à volta da artéria mesentérica superior (VI ligadura). </li><li> Coloque uma ligadura da aorta imediatamente abaixo do direito e acima da artéria renal esquerda (VII ligadura). </li><li> Coloque uma ligadura em torno do pacote de caudal veia (veia) (VIII ligadura). Vá para a Etapa 4. </li></ol><img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig3.jpg" /> Figura 3: Desenho esquemático das ligaduras colocadas durante a cirurgia. Vista do abdómen aberto após a laparotomia. O intestino é movido para fora para a esquerda. L e R indicam o rim esquerdo eo direito. olinhas pretas mostram a área da respectiva laqueação. Ligaduras primeira colocação e depois fechada, na sequência indicada no texto. X marca a localização da incisão para canulação da aorta. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig3large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> 4. Priming do circuito de perfusão <ol><li> Inicie a bomba rotativa e encher o tubo com perfusato. Tome cuidado para esvaziar todas as bolhas de ar. </li><li> Encha o dispositivo Windkessel a cerca de nível médio com perfusato. </li><li> Calibra-se o transdutor de pressão até 0 mm de Hg quando toda a tubagem é cheio e o fluxo é 0. Manter a agulha de perfusão, a nível renal durante este tempo. </li><li> Manter o fluxo em um nível mínimo constante (0,6 ml / min) e vá para a Etapa 5. </li></ol> 5. Surgical Procedimento Parte 2 <ol><li> Coloque um grampo entre ligadura IV ea ramificação da rena esquerdal artéria. </li><li> Faça uma pequena incisão no caudal aorta de ligadura IV, tomando cuidado para não cortar a parede dorsal. </li><li> Dilatar a abertura da aorta com um vaso dilatador. </li><li> Canular a aorta, com uma agulha (2 cm de comprimento, puxado PE 50), empurrando a ponta apenas para o grampo. </li><li> Abra o grampo. </li><li> Empurrar a ponta da agulha cranialmente até atingir a junção da artéria renal direita e da aorta. </li><li> Fechar ligadura VII. </li><li> Fechar ligadura IV. </li><li> Abra o peito com uma tesoura dissecando o diafragma. Com um único corte, separe a aorta, a veia cava, coração e nervos vegetativos. Com este passo, o animal foi sacrificado através de exsanguinação sob anestesia profunda rápida contínua. </li><li> Iniciar o controle da pressão da bomba de perfusão. Manter a pressão média entre 80 e 100 mmHg. </li><li> Fechar V. ligadura </li><li> Fechar ligadura VI. </li><li> Fechar ligadura VIII. </li><li> Livre do rim direito de tissu conjuntivoe e sua incorporação na cápsula adiposo com uma tesoura. </li><li> Corte a aorta proximal à ligadura V. </li><li> Corte da artéria mesentérica superior distalmente à ligadura VI. </li><li> Cortar o feixe vascular-sustentável rim para fora, tomando cuidado para não cortar os próprios vasos. </li><li> Cortar o fígado na ligação para o rim. Cuidar para libertar o rim, mas deixa uma pequena parte do aderente fígado a ele, de modo que a veia cava é mantida aberta por ela. </li><li> Pegue o pacote de rim para fora do mouse. Remover o rato da câmara úmida. </li><li> Coloque um &quot;laço&quot; ligadura à volta da ligação de fígado e rim (IX ligadura). </li><li> Canular a veia cava com uma linha venosa (dois centímetros PE 50). </li><li> Fechar ligadura IX. fluxo venoso através do cateter venoso deve começar imediatamente. </li><li> Feche a câmara úmida. </li></ol> 6. As análises a jusante <ol><li> Durante a hora seguinte, monitorar continuamente o fluxo sanguíneo e intravasculpressão de ar 15. Recolhe fluxo venoso, que pode ser utilizado para análise de, por exemplo, a libertação de renina renal 7. Coleta de urina para análise da concentração de eletrólitos e taxa de filtração glomerular 14. Após 1 hora de perfusão, os rins podem ser snap-congelados por western blot ou ser fixado para a imagem latente aproxima 16. </li></ol>

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The authors have no competing financial interests and nothing else to disclose.

O mouse rim isolado perfundido é uma ferramenta para o estudo da função renal em um ambiente controlado ex vivo, durante 1 hora, fazendo a ponte entre experiências in vivo em animais intactos, o que pode ser falho pelo impacto de vários fatores sistêmicos e experimentos in vitro em segmentos dos néfrons isolados ou células cultivadas, o que necessariamente negligenciam o impacto da estrutura de órgãos intactos na função. Há, ao conhecimento dos autores, nenhuma técnica alternativa com a qual para executar esta tarefa específica. Estudos bioquímicos sobre o tecido renal, no entanto, pode ser realizada de uma forma muito mais simples que utiliza fatias de rim 17. Enquanto a técnica apresentada é actualmente utilizado principalmente para estudar a fisiologia renal, muitas novas aplicações estão sendo discutidos. Por exemplo, poderia ser usado para bioengenharia rim durante descelularização perfusão e recelularização 12. Além disso, a perfusão normotérmica prolongado de rins antes da transplantation, com a administração de doses elevadas de anti-rejeição ou genoma de edição de drogas em solução de perfusão, está a ser estudado; mesmo em ambientes clínicos 8, 9, 10, 11. O rim de rato perfundido isolado é uma excelente ferramenta que pode ser usado para estas aplicações, especialmente para elucidar o papel dos genes individuais com modelos knockout. Três passos são essenciais para uma experiência bem sucedida. Este documento fornece laboratórios interessadas os meios para reproduzir o procedimento. Em primeiro lugar, o tampão tem de ser preparada de tal modo que o rim recebe a maior parte dos nutrientes necessários para a viabilidade prolongado sob condições reprodutíveis. Um equilíbrio deve ser encontrado entre as condições totalmente controlados (tampão sintético) e uma condição de perfusão nativa (sangue total). Portanto, albumina e eritrócitos de mamífero a um hematócrito de 10% devem ser incluídas. Este hematócrito representa, na experiência dos autores, o melhor compromisso entre suficientes tproblema de oxigenação e baixa viscosidade tampão (aumento do hematócrito diminui o fluxo dramaticamente durante a perfusão de pressão constante (comparar os valores apresentados neste trabalho com os valores em Rins sem eritrócitos 18)). A qualidade e frescura dos eritrócitos é crítica. Durante os passos de lavagem, os eritrócitos precisa de ser manuseado com cuidado para evitar a hemólise. O tampão deve ser preparada de fresco no dia da experiência. Em segundo lugar, a cirurgia deve ser realizado por um cirurgião treinado dentro do tempo mais curto possível. O cirurgião tem de executar 6 ligaduras em torno dos principais vasos comunicantes do rim para o resto do corpo, ao mesmo tempo manter a perda de sangue do animal a um mínimo. Para melhores resultados, as intervenções cirúrgicas deve ser realizado dentro de 30 minutos. Se a pressão sanguínea arterial média do animal gotas, durante a cirurgia ou prolongada devido à anestesia, abaixo de 60 mmHg, perfusão renal vai já ser mínimo e o tecido vai ser propensoa necrose. Para descartar isso, o rim esquerdo pode ser feita após a cirurgia, quando a perfusão do rim direito já começou, e usado como um controlo não tratado. Terceiro, durante o tempo da perfusão o correcto funcionamento do aparelho de perfusão, que consiste de um circuito de pequenos animais-perfusão padrão, tem de ser assegurada. Enquanto o computador executa a perfusão, por si só, é necessária supervisão humana, por exemplo para verificar a existência de bolhas no circuito de perfusão. Os dados representativos fornecidos permite a avaliação da viabilidade do rim 1 hora depois da perfusão ex-vivo e a comparação do sucesso técnico de qualquer execução deste método para a abordagem aqui descrita. Durante pelo menos 1 hora, o fluxo sanguíneo renal, resistência vascular, gases sanguíneos do fluxo venoso e taxa de filtração glomerular deve permanecer estável. Existem certas limitações para a técnica, que tem de se manter em mente. Mesmo um Kidney emissão da cirurgia de maior sucesso só podem permanecer viáveis ​​por um tempo limitado. Os autores encontraram uma HR de ser o melhor ponto de tempo em que a parar de perfusão. Além disso, enquanto a perfusão do rim isolado permite o estudo do órgão inteiro isolado em profundidade, é difícil diferenciar efeitos específicos sobre um tipo de célula. Rins corrigidos após 1 hora pode mostrar defeitos em segmentos S3 de túbulos proximais e células ascendente de membros grossos, enquanto glomérulos, segmentos S1, DCT e CDs devem permanecer intactos. A utilização obrigatória de eritrócitos, especialmente de seres humanos, também está ligada a riscos potenciais (por exemplo, infecções) para o experimentador. Em resumo, o rim de rato perfundido isolado é uma técnica útil para estudar com que todo o órgão ex vivo. Como qualquer técnica, tem certas vantagens e limitações. Os autores acreditam que ambas as novas aplicações múltiplas atualmente surgindo e este protocolo poderia fornecer sufficient impulso para outros laboratórios para reproduzir este esforço.

A perfusão isolada de órgãos tem sido objecto de um esforço contínuo entre os fisiologistas por muitas décadas 1. A técnica permite que a função do órgão, sem influências sistêmicas, tais como pressão arterial, hormônios ou nervos, a ser estudado. Carl Eduard Loebell é considerado para ser o primeiro a ter descrito a perfusão bem sucedida de um rim isolado, em 1849 2. Desde então, o aparelho de perfusão foi submetido refinamento significativa. Frey e Gruber introduzido um pulmão artificial para bombas de oxigenação e pulsátil para perfusão contínua 2. Enquanto os primeiros pesquisadores estudaram principalmente os rins de mamíferos de grande porte, ou seja, porcos e cães 2 3 -o primeiro relatório do uso de rins de ratos, por Weiss et al. , Foi um marco no estudo da perfusão-mamífero-órgão pequeno 4. Schurek et ai. relataram a necessidade de adição de eritrócitos de mamífero para o perfusato se tubular renal suficienteoxigenação deveria ser alcançado 5. Crítico para experiências a longo prazo foi a introdução de diálise contínua do tampão pelo mesmo grupo de pesquisa 6. Em 2003, Schweda et al. foram os primeiros a relatar um rim do rato funcional isolado perfundido (MIPK) 7, posteriormente refinado por Rahgozar et al. 18 e Lindell et ai. 14. Embora tecnicamente mais exigente do que o de rato perfundido isolado de rim, o uso do MIPK carrega a vantagem de permitir o uso de uma grande variedade de ratinhos geneticamente alterados. Este artigo apresenta os dados sobre o método dos autores para perfusão isolados de rato rins durante 1 h. O método permite a avaliação contínua da taxa renal fluxo, resistência vascular, liberação de hormônio, gasometria, análise de urina, bem como a aplicação de medicamentos. Seguindo o procedimento, rins podem ser processadas para análise molecular e bioquímica, ser fixo por microscopia, outransplantado para um rato receptor (Figura 1). <img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig1.jpg" /> Figura 1: Visão geral do Possível entrada / saída para o rim isolado perfundido. BGA: Hemogasometria. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig1large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> Esta técnica provavelmente vai receber uma atenção crescente nos próximos anos, como muitas aplicações inovadoras estão sendo discutidas com o alvorecer da perfusão renal normotérmica prolongado antes do transplante (com ou sem a aplicação de anti-rejeição ou drogas edição do genoma) 8, 9, 10 , 11, a bioengenharia dos rins inteiros de andaimes descelularizados 12, bem como a aplicação de doses elevadas de corantes fluorescentes para a imagem latente multiphoton 13 </sup&gt;. Também é um modelo ideal com o qual se estudar o papel de genes específicos durante a lesão renal aguda 14. Um protocolo de passo-a-passo é dado para permitir que outros laboratórios para realizar isolado rato perfusão renal com sucesso. Em primeiro lugar, a composição e preparação do buffer é especificado. Em seguida, a cirurgia é descrito em pormenor e os passos críticos são mostrados. Em terceiro lugar, os dados são apresentados que são representativos de uma preparação bem sucedida: o fluxo sanguíneo renal, resistência vascular, taxa de filtração glomerular, e eletrólitos fraccionada medições funcionais de viabilidade e eletrônica de transmissão micrografias da morfologia dos diferentes segmentos dos néfrons de Rins todos excreção- fixado após 1 hora de perfusão.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Perfusion Circuit:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Moist chamber 834/8</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-2901</td><td></td></tr><tr><td>Cannular with basket and side port</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-2947</td><td></td></tr><tr><td>Thermostat TC120-ST5&amp;nbsp;</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-4544</td><td></td></tr><tr><td>ISM 827/230V Roller Pump Reglo Analogue</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-0114</td><td></td></tr><tr><td>Reservoir jacketed for buffer solution 1 L</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3438</td><td></td></tr><tr><td>Reservoir jacketed for buffer solution 0.5 L</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3436</td><td></td></tr><tr><td>Pressure Transducer APT300&amp;nbsp;</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3862</td><td></td></tr><tr><td>TAM-D Plugsys Transducer</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-1793</td><td></td></tr><tr><td>SCP Plugsys servo controller</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-2806</td><td></td></tr><tr><td>Windkessel&amp;nbsp;</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3717</td><td></td></tr><tr><td>HSE-USB data acquisition</td><td>Harvard Apparatus/Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3330</td><td></td></tr><tr><td>Low-Flux Dialysator Diacap Polysulfone</td><td>B.Braun</td><td>7203525</td><td></td></tr><tr><td>PE-Tubing for aorta cannulation 1.19 mm I.D. x 1.70 mm O.D.</td><td>Scientific Commodities Inc.</td><td>BB31695-PE/8</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Buffer reagents:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aminoplasmal 10%</td><td>B.Braun</td><td>134518064</td><td></td></tr><tr><td>Sodium pyruvate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256-25G</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamic acid monosodium salt hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1626-100G</td><td></td></tr><tr><td>L-(-)-Malic acid sodium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1125-25G</td><td></td></tr><tr><td>Sodium-L-Lactate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7022-10G</td><td></td></tr><tr><td>alpha-Ketoglutaric acid sodium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K1875-25G</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>31434-1KG-R</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761-5KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60130-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Urea</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>U5378-500G</td><td></td></tr><tr><td>Creatinine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4255-10G</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Roche</td><td>10835242001</td><td></td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; * 6H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2393-500G</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; * 6H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O&amp;nbsp;</td><td>Riedel-de-Ha&amp;euml;n</td><td>12074</td><td></td></tr><tr><td>NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638-500G</td><td></td></tr><tr><td>Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876-500G</td><td></td></tr><tr><td>Antidiuretic Hormone dDAVP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V2013-1MG</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Inulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filter used for erythrocyte filtration</td><td>Macherey-Nagel</td><td>MN 615</td><td></td></tr><tr><td>BGA Analysis:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ABL 80 flex</td><td>Radiometer Medical ApS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Electron Microscope:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Philips CM100 TEM</td><td>FEI</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

the mouse isolated perfused kidney technique

O mouse rim isolado perfundido (MIPK) é uma técnica para manter um rim do rato em condições ex vivo perfundidos e funcionais durante 1 h. Este é um pré-requisito para o estudo da fisiologia do órgão isolado e para muitas aplicações inovadoras que possam ser possíveis no futuro, incluindo decellularization perfusão de bioengenharia nos rins ou a administração de anti-rejeição ou drogas edição do genoma em altas doses para preparar o rim para transplante. Durante o tempo da perfusão, o rim pode ser manipulada, a função renal pode ser avaliada, e vários produtos farmacêuticos administrados. Após o procedimento, o rim transplantado ou pode ser processado para a biologia molecular, bioquímica, ou microscopia. Este artigo descreve o perfusado e da técnica cirúrgica necessária para a perfusão ex-vivo de rins de rato. Os detalhes do aparelho de perfusão são dados e os dados são apresentados mostrando o vESPONSABILIDADE da preparação do rim: fluxo sangüíneo renal, resistência vascular, e urina dados como funcionais, micrografias eletrônicas de transmissão de diferentes segmentos dos néfrons como leituras morfológicas e Western blot de proteínas de transporte de diferentes segmentos dos néfrons como leitura molecular.

Com o método descrito, rins isolados do rato podem permanecer viáveis ​​durante pelo menos 1 h. Foi testada a viabilidade dos tecidos depois de 1 hora de perfusão contínua com funcional (fluxo sanguíneo renal e resistência vascular, gasometria do fluxo venoso, taxa de filtração glomerular, urinário fraccionada Na + e K + excreção, e osmolaridade urinária) e morfológico (eletrônica de transmissão microscopia, TEM) em quatro métodos rins de tipo selvagem C57BL / 6. Além disso, transferências de Western de proteínas marcadoras apicais de diferentes segmentos do túbulo foram realizadas, comparando rins perfundidos isolados de rins não perfundidada dos mesmos animais. Em todas as experiências, utilizou-se a perfusão de pressão constante, mantendo-se a pressão de perfusão em ~ 100 mmHg (Figura 4). Nestas rins, o fluxo de perfundido e resistência vascular permaneceu estável ao longo de um tempo de 55 min a 15,6 ± 0,4 ml / min * g de peso do rim e 35 ± 1,0 mmHg * min / mL, respectivamente (Figura 4 A). A diminuição do fluxo de perfusato ou um aumento da resistência vascular é um parâmetro muito sensível no que diz respeito à diminuição da viabilidade do tecido e deve ser monitorizada ao longo da perfusão com cuidado. De gás do sangue e a análise do electrólito em amostras de 100 ul administrado 60 minutos após o início da perfusão renal revelou produção de CO 2 e consumo de O 2, quando o influxo arterial foi comparado com o fluxo de saída venosa (Tabela 2). Os outros parâmetros permaneceram inalteradas entre a artéria e veia (Tabela 2). Ênfase especial deve ser colocado sobre a liberação de potássio venosa inalterado, pois pode ocorrer um aumento durante o dano tecidual. Taxa de filtração glomerular, avaliados através de apuramento FITC-inulina 14, tendeu a aumentar ao longo do tempo (Figura 4 B), mas esta tendência não atingiu significância. fração de excreção de sódio e potássio avaliada após 55 minutos de perfusãoé aumentada em comparação com a situação in vivo (Figura 4 C). A osmolaridade urinária não é elevada acima da osmolalidade do fluxo venoso após 55 min de perfusão (Figura 4 D). Para os estudos morfológicos, os rins foram fixadas após perfusão em paraformaldeído a 3% e 0,1% de glutaraldeído em tampão de diálise como previamente descrito 17. ultrassonografia renal foi avaliada com TEM. Glomérulos e S1 segmentos de túbulos proximais apareceu em grande parte inalterado após a perfusão (Figuras 5 A e B). Alguns, mas não todos os segmentos S2 / S3 de túbulos proximais e os membros ascendentes grossos que não foram perto de feixes vasculares foram mostrando sinais de danos em órgãos, como descrito anteriormente em ratos isolado Rins 5 (Figuras 5 C e D). Mesmo após a inspeção, túbulos contorcidos distais e dutos coletores não mostrou sinais evidentes de necrose (As Figuras 5E, F, e G). Em conclusão, os achados morfológicos em rins de rato espelhar a situação encontrada no rato rim isolado perfundido 5. Western blot de proteínas marcadoras apicais dos diferentes segmentos dos néfrons em Rins isolados (snap-congelados após 1 hora de perfusão) em comparação com os rins contralaterais não perfundidada do mesmo animal (snap-congelados antes do início da perfusão) não revelou alterações significativas. Foram estudados NaPi-IIa (localizado nos túbulos proximais), NKCC2 (membros ascendente espesso), NCC (túbulos contornados distais), e ENaC (túbulos de ligação / recolha de condutas) (Figuras 6 A e B). <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig4.jpg" /> Figura 4: Avaliação da viabilidade funcional de Rins por 55 min. A) &lt;/ Strong&gt; Durante a perfusão pressão constante, a resistência vascular e fluxo de perfusato manteve-se estável durante 55 minutos. Os primeiros 15 min são excluídas devido à alta variabilidade sempre visto durante este tempo. B) a taxa de filtração glomerular (FITC-inulina) de quatro rins avaliadas após 25 e 55 min exibido aumento significativo ligeira, mas não ao longo do tempo. C) a excreção fracionada de sódio e potássio avaliada após 55 min de perfusão. D) plasma venoso e na urina osmolaridade após 55 min de perfusão. n = 4 em todas as experiências. Os dados estão apresentados como médias ± SEM. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig4large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig5.jpg" /> Figura 5: Microscopia Eletrônica de Transmissão. Representante Morfologia do D<html> Segmentos ifferent Nephron de perfusão Rins em um ponto de 1 hr End. A) Os glomérulos estão intactos. Detalhe de uma podócito em um glomérulo. Segmento B) S1 de um túbulo proximal. segmentos S1 estão intactos. Segmento C) S2 / S3, de um túbulo proximal. Alguns, mas não todos os segmentos S2 / S3 do túbulo proximal são altamente necrosado. Células aparecem inchado e mostrar grandes danos intracelular. O esboço tubular é mantida apenas pela membrana basal. D) membro grosso ascendente (TAL). Esses TALs que estão longe de os feixes vasculares mostrar os primeiros sinais de degeneração hidrópica. membranas luminais apareça diluído e frágil. E) Distal túbulo contornado (DCT). DCT estão intactos. F) Detalhe das invaginações basolateral de uma célula DCT. Fenestrated endotélio, membrana basal, invaginações basolateral e mitocôndrias estão intactos. G) Recolher conduta (CD). CDs estão intactos.e.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig5large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig6.jpg" /> Figura 6: Western Blot de apicais marcador proteínas em Rins isolados Comparado a não perfundidada Rins dos mesmos animais. A) As transferências de Western de rins perfundidos durante 1 hr e os rins não perfundidada. NaPi-IIa é representativo para o túbulo proximal. NKCC2 é representativo para o ramo ascendente espesso. NCC e NCC fosforilada na treonina 53 (pT53 NCC) são encontradas exclusivamente no túbulo contornado distal. Alfa e gama subunidades de ENaC em seu corpo inteiro e seus respectivos produtos proteoliticamente clivados são mostrados representante para o ligar túbulo / ducto coletor. B) Quantificação de A) não revelou diferenças significativas entre f rins perfundidosou 1 hr e os rins não perfundidada. n = 3 em todas as experiências. Os dados são apresentados como médias ± SEM e os valores individuais são mostrados. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig6large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="tabela 1" src="/files/ftp_upload/54712/54712tbl1.jpg" /> Tabela 1: Composição das Soluções e tampão de diálise. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712tbl1large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta tabela.</a> <img alt="mesa 2" src="/files/ftp_upload/54712/54712tbl2.jpg" /> Tabela 2: Gás de sangue e Análise de eletrólitos de Arterial entrada e saída venosa de perfusão mouse Rins 60 min após o início da perfusão (n = 4). Os dados são apresentados como médias ±SEM.

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The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

O mouse rim isolado perfundido (MIPK) é uma técnica para manter um rim do rato em condições ex vivo perfundidos e funcionais durante 1 h. Os tampões e técnica cirúrgica encontram-se descritos em pormenor.

A técnica de rim perfundidos rato isolado

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

the-mouse-isolated-perfused-kidney-technique

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

21.6K visualizações.  University of Zürich.  O mouse rim isolado perfundido (MIPK) é uma técnica para manter um rim do rato em condições ex vivo perfundidos e funcionais durante 1 h. Os tampões e técnica cirúrgica encontram-se descritos em pormenor. 

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Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients revealed that only a mild increase in serum creatinine levels (0.3 to 0.4 mg/dl) is associated with a 70% greater risk of death than in persons without any increase 1. Along these lines, surgical procedures requiring cross-clamping of the aorta and renal vessels are associated with a renal failure rates of up to 30% 4. Similarly, AKI after cardiac surgery occurs in over 10% of patients under normal circumstances and is associated with dramatic increases in mortality. AKI are also common complications after liver transplantation. At least 8-17% of patients end up requiring renal replacement therapy 5. Moreover, delayed graft function due to tubule cell injury during kidney transplantation is frequently related to ischemia-associated AKI 6. Moreover, AKI occurs in approximately 20% of patients suffering from sepsis 6.The occurrence of AKI is associated with dramatic increases of morbidity and mortality 1. Therapeutic approaches are very limited and the majority of interventional trials in AKI have failed in humans. Therefore, additional therapeutic modalities to prevent renal injury from ischemia are urgently needed 3, 7-9. 
To elucidate mechanisms of renal injury due to ischemia and possible therapeutic strategies murine models are intensively required 7-13. Mouse models provide the possibility of utilizing different genetic models including gene-targeted mice and tissue specific gene-targeted mice (cre-flox system). However, murine renal ischemia is technically challenging and experimental details significantly influence results. We performed a systematic evaluation of a novel model for isolated renal artery occlusion in mice, which specifically avoids the use of clamping or suturing the renal pedicle 14. This model requires a nephrectomy of the right kidney since ischemia can be only performed in one kidney due to the experimental setting. In fact, by using a hanging-weight system, the renal artery is only instrumented once throughout the surgical procedure. In addition, no venous or urethral obstruction occurs with this technique. We could demonstrate time-dose-dependent and highly reproducible renal injury with ischemia by measuring serum creatinine. Moreover, when comparing this new model with conventional clamping of the whole pedicle, renal protection by ischemic preconditioning is more profound and more reliable. Therefore his new technique might be useful for other researchers who are working in the field of acute kidney injury.

A precise murine model for acute kidney injury (AKI) due to ischemia is an important tool to investigate acute kidney injury and possibly find therapeutic tools to treat renal injury. The hanging weight system offers a tool for immediate and reliable renal artery occlusion and reperfusion without causing renal congestion.

Uso de um sistema de suspensão de peso para oclusão da artéria renal isolada

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients ...

Medicina

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and podocytes with their slit diaphragms. The delicate structure of the glomerular filter, especially the slit diaphragm, relies on the interplay of diverse cell surface proteins. Studying these cell surface proteins has so far been limited to in vitro studies or histologic analysis. Here, we present a murine in vivo biotinylation labeling method, which enables the study of glomerular cell surface proteins under physiologic and pathophysiologic conditions. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of a protein of interest. Semi-quantitation of glomerular cell surface abundance is readily available with this novel method, and all proteins accessible to biotin perfusion and immunoprecipitation can be studied. In addition, isolation of glomeruli with or without biotinylation enables further analysis of glomerular RNA and protein as well as primary glomerular cell culture (i.e., primary podocyte cell culture).

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Here we present a protocol for murine in vivo labeling of glomerular cell surface proteins with biotin. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of the protein of interest.

Isolamento de glomérulos e In Vivo de rotulagem das proteínas de superfície celular Glomerular

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and ...

Bioquímica

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

Rato Transplante Renal: Modelos de rejeição de enxertos

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Reliable and High Efficiency Extraction of Kidney Immune Cells

Immune system activation occurs in multiple kidney diseases and pathophysiological processes. The immune system consists of both adaptive and innate components and multiple cell types. Sometimes, the cell type of interest is present in very low numbers among the large numbers of total cells isolated from the kidney. Hence, reliable and efficient isolation of kidney mononuclear cell populations is important in order to study the immunological problems associated with kidney diseases. Traditionally, tissue isolation of kidney mononuclear cells have been performed via enzymatic digestions using different varieties and strengths of collagenases/DNAses yielding varying numbers of viable immune cells. Recently, with the development of the mechanical tissue disruptors for single cell isolation, the collagenase digestion step is avoided and replaced by a simple mechanical disruption of the kidneys after extraction from the mouse. Herein, we demonstrate a simple yet efficient method for the isolation of kidney mononuclear cells for every day immune cell extractions. We further demonstrate an example of subset analysis of immune cells in the kidney. Importantly, this technique can be adapted to other soft and non-fibrous tissues such as the liver and brain.

Techniques that are reliable and efficient for the isolation of kidney immune cells are needed for downstream applications. This requires surface antibody labeling of a small number of kidney immune cells. Herein, we describe a concise method for isolation of kidney immune cells that seemingly achieves this goal.

Extração Eficiência confiável e alta de rim células imunes

Immune system activation occurs in multiple kidney diseases and pathophysiological processes.  The immune system consists of both adaptive and innate ...

Imunologia e Infecção

Comparative Proteomic Analysis of Whole Kidney, Medulla, and Cortical Tubules in Diabetic Pathogenesis of Kidney Injury in Mice

Defining the sequence of events in renal disease is the cornerstone of clinical practice in the nephrologist toolkit. Tissue proteomic analyses are a significant approach to understanding the fundamental physiological and molecular processes of renal pathophysiology. The methods and protocols we present here will allow for the molecular dissection of the kidney in each specific region of interest related to disease sequelae. To determine the effects of disease on specific kidney regions and structures with unique functions, the goals of this protocol are to demonstrate simplified mouse kidney compartmentalization and renal cortical tubule isolation techniques in tandem with streamlined label-free quantitative proteomic workflows. Combining these methods will assist in the identification of perturbed molecular patterns in the whole kidney, medullary compartments, and cortical tubule structures of kidneys, with the ultimate and eventual goal of single-cell proteomics in pathological contexts. Applying these methods in virtually any disease model will be helpful in delineating mechanisms of pathology related to kidney dysfunction.

Here, we present a detailed protocol for proteomic analysis of the whole kidney, isolated cortical tubule, and medullary proteomes. The study also compares regional proteomes in a diabetic mouse model and non-diabetic mice.

Análise proteômica comparativa de rins inteiros, medula e túbulos corticais na patogênese diabética da lesão renal em camundongos

Defining the sequence of events in renal disease is the cornerstone of clinical practice in the nephrologist toolkit. Tissue proteomic analyses are a ...

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the key steps to investigate TRMs. There are slight variations in lymphocyte isolation protocols for different organs. Kidney is an essential non-lymphoid organ with numerous immune cell infiltration especially after pathogen exposure or autoimmune activation. In recent years, multiple labs including our own have started characterizing kidney resident CD8+ T cells in various physiological and pathological settings in both mouse and human. Due to the abundance of T lymphocytes, kidney represents an attractive model organ to study TRMs in non-mucosal or non-barrier tissues. Here, we will describe a protocol commonly used in TRM-focused labs to isolate CD8+ T cells from mouse kidneys following systemic viral infection. Briefly, using an acute lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) infection model in C57BL/6 mice, we demonstrate intravascular CD8+ T cell labeling, enzymatic digestion, and density gradient centrifugation to isolate and enrich lymphocytes from mouse kidneys to make samples ready for the subsequent flow cytometry analysis.

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Following viral infection, kidney harbors a relatively large number of CD8+ T cells and offers an opportunity to study non-mucosal TRM cells. Here, we describe a protocol to isolate mouse kidney lymphocytes for flow cytometry analysis.

Isolamento das células CD8+ T residentes em rim do rato para análise de citometria de fluxo

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

Optical Clearing and Imaging of Immunolabeled Kidney Tissue

Optical clearing techniques render tissue transparent by equilibrating the refractive index throughout a sample for subsequent three-dimensional (3-D) imaging. They have received great attention in all research areas for the potential to analyze microscopic multicellular structures that extend over macroscopic distances. Given that kidney tubules, vasculature, nerves, and glomeruli extend in many directions, which have been only partially captured by traditional two-dimensional techniques so far, tissue clearing also opened up many new areas of kidney research. The list of optical clearing methods is rapidly growing, but it remains difficult for beginners in this field to choose the best method for a given research question. Provided here is a simple method that combines antibody labeling of thick mouse kidney slices; optical clearing with cheap, non-toxic and ready-to-use chemical ethyl cinnamate; and confocal imaging. This protocol describes how to perfuse kidneys and use an antigen-retrieval step to increase antibody- binding without requiring specialized equipment. Its application is presented in imaging different multicellular structures within the kidney, and how to troubleshoot poor antibody penetration into tissue is addressed. We also discuss the potential difficulties of imaging endogenous fluorophores and acquiring very large samples and how to overcome them. This simple protocol provides an easy-to-setup and comprehensive tool to study tissue in three dimensions.

The combination of antibody labeling, optical clearing, and advanced light microscopy allows three-dimensional analysis of complete structures or organs. Described here is a simple method to combine immunolabeling of thick kidney slices, optical clearing with ethyl cinnamate, and confocal imaging that enables visualization and quantification of three-dimensional kidney structures.

Esclarecimento ótico e imagem latente do tecido Immunolabeled do rim

Optical clearing techniques render tissue transparent by equilibrating the refractive index throughout a sample for subsequent three-dimensional (3-D) ...

An Effective Mouse Model of Unilateral Renal Ischemia-Reperfusion Injury

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models are the only available resources that mimic the complexities of the IRI-associated damage encountered in vivo. This paper describes an effective mouse model of unilateral renal IRI that delivers highly reproducible data. Ischemia is induced by occluding the right renal pedicle for 30 min followed by reperfusion. In addition to the surgical procedure, a sequential overview of the expected physiological and histopathological changes following renal IRI will be provided by comparing data from seven different reperfusion times (4 h, 8 h, 16 h, 1 day, 2 days, 4 days, and 7 days). Critical data for planning experiments ahead, such as mean surgical time, average anesthetic consumption, and body weight changes over time, will be shared. This work will help researchers implement a reliable renal IRI model and select the appropriate reperfusion time that aligns with their intended investigative goals.

Renal ischemia-reperfusion injury is associated with high morbidity and mortality in hospitalized patients. Here, we present a simple and effective mouse model of unilateral renal ischemia-reperfusion injury and provide a sequential overview of representative pathological changes observed in the kidney.

Um modelo eficaz de rato de isquemia renal unilateral-reperfusão lesão

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models ...

Isolation, Characterization, And High Throughput Extracellular Flux Analysis of Mouse Primary Renal Tubular Epithelial Cells

Mitochondrial dysfunction in the renal tubular epithelial cells (TECs) can lead to renal fibrosis, a major cause of&#160;chronic kidney disease (CKD). Therefore, assessing mitochondrial function in primary TECs may provide valuable insight into the bioenergetic status of the cells, providing insight into the pathophysiology of CKD. While there are a number of complex protocols available for the isolation and purification of proximal tubules in different species, the field lacks a cost-effective method optimized for&#160;tubular cell isolation without the need for purification. Here, we provide an isolation protocol that allows for studies focusing on both primary mouse proximal and distal renal TECs. In addition to cost-effective reagents and minimal animal procedures required in this protocol, the isolated cells maintain high energy levels after isolation and can be sub-cultured up to four&#160;passages, allowing for continuous studies. Furthermore, using a high throughput extracellular flux analyzer, we assess the mitochondrial respiration directly in the isolated TECs in a 96-well plate for which we provide recommendations for the optimization of cell density and compound concentration. These observations suggest that this protocol can be used for renal tubular ex vivo studies with a consistent, well-standardized production of renal TECs. This protocol may have broader future applications to study mitochondrial dysfunction associated with renal disorders for drug discovery or drug characterization purposes.

This protocol provides a cost-effective approach to isolate and characterize mouse primary renal tubular cells that can subsequently be sub-cultured to assess renal biological functions ex vivo, including mitochondrial bioenergetics.

Isolamento, caracterização e alto Throughput análise de fluxo extracelular de Mouse primária Renal Tubular as células epiteliais

Mitochondrial dysfunction in the renal tubular epithelial cells (TECs) can lead to renal fibrosis, a major cause of&#160;chronic kidney disease (CKD). ...

Biologia

Glomeruli Isolation: A Technique to Obtain Intact Glomeruli from Murine Kidney

Source: Eymael, J. et al. <a href="https://www.jove.com/video/60324" target="_blank">Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation.</a> J. Vis. Exp. (2020)
This video describes the method to isolate intact glomeruli from mouse kidneys. The encapsulated and decapsulated glomeruli thus obtained can further be used for culturing parietal epithelial cell outgrowths from the murine kidney.

Isolamento de glomérulos: uma técnica para obter glomérulos intactos do rim murino

Source: Eymael, J. et al. Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation. J. Vis. Exp. ...