نشكر سارة وو وكميل غراهام لتطوير المراحل المبكرة من فحص البارد التحقيق، ومركز بلومينغتون ذبابة الفاكهة المالية للأسهم ذبابة، وأعضاء المختبر Galko لقراءة نقدية للمخطوطة. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة NRSA (NIH F31NS083306) لHNT، والمعاهد الوطنية للصحة R01NS069828، R21NS087360 وجامعة تكساس MD اندرسون كلارك زمالة في البحوث الأساسية لMJG.

1. إعداد اليرقات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع الأسهم أو الصلبان الوراثية في حاضنة 25 درجة مئوية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا زرع الصليب، استخدم 20-25 الإناث البكر و15-20 ذكور في قارورة تحتوي على وسائل الاعلام دقيق الذرة الطيران العادية. السماح الإناث لوضع البيض لحوالي 48 ساعة قبل نقلهم إلى قارورة جديدة من المواد الغذائية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 4-5 أيام البيض العلمانيين، وجمع 3 طور مرحلي الثالثة اليرقات من النمط الجيني المطلوب من قبل التدفق بلطف مجرى المياه إلى الطعام طري واليرقات، ومن اجل الخروج من المحتويات في، طبق بتري نظيفة متوسطة الحجم (60 ملم × 15 مم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ذلك، فرز بلطف اليرقات من حيث الحجم باستخدام ملقط أو الفرشاة لمنع أكبر &quot;يتجول الطور 3 الثالثة&quot; أو اليرقات غث صغيرة من التي يجري اختبارها. اليرقات تجاهل تحتوي على أي علامات أو موازنات الوراثية غير مرغوب فيها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هل لديك زميل أطباق تسمية أعضاء المختبر أو حاويات حيث سيتم وضع اليرقات مرتبة بحيث المجرب يمكن أن يكون &quot;الأعمى&quot; لالسابقينحالة perimental أو التركيب الوراثي لليرقات إن وجدت. المجرب يمكن تطبيق تسميات فك الشفرة إلى البيانات التي تم جمعها بعد التجربة باستخدام مفتاح التي تم إنشاؤها بواسطة أعضاء المختبر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام سكوبولا، نقل كمية سنتات الحجم من المواد الغذائية الطازجة إلى (35 ملم × 10 ملم أو 60 ملم × 15 ملم) نظيفة، وصفت طبق بيتري شغل في منتصف الطريق مع الماء درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحرك بلطف اليرقات مرتبة على الطعام (لمنع المجاعة أو الجفاف إذا كان من المتوقع اختبار ليستغرق أكثر من 20 دقيقة) باستخدام ملقط أو الفرشاة. </li></ol> 2. الباردة مسبار الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل وحدة التحقيق الباردة والسماح لعدد قليل من دقيقة حتى تبرد إلى درجة الحرارة المطلوبة. إذا الإعداد لدرجات حرارة منخفضة، والتكثيف من المحتمل تشكل جنبا إلى جنب التحقيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> امسحي أي الرطوبة الزائدة مع مختبر مسح قبل التطبيق لاليرقة. عندما لا تكون قيد الاستعمال المباشر، مكان العزل غطاء على التحقيق لكلا عزل وللحفاظ على طرف نظيفة ومنع الضرر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع منتصف 3 الثالثة طور مرحلي اليرقة على قطعة رقيقة من الفينيل المنقولة الظلام (عادة استخدام قطعة صغيرة من قطع الموثق دفتر) تحت المجهر مشرق الميدان. المساعدات الفينيل السوداء في التصور وعلى النقيض من في تحريك يرقة دون لمسها لمحاذاة بشكل صحيح مع لجنة التحقيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط المجهر (انظر جدول المواد) وحدة الضوء (انظر جدول المواد) إلى سطوع المتوسط (50-75٪ كحد أقصى سطوع) لتوفير التباين ومنع اليرقات من الجفاف بسرعة كبيرة جدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل أي اليرقات التي لا تظهر لأول مرة تنقل تحوي العادي لأنها يمكن أن يتغلب على النتائج. يجب أن تكون اليرقة رطبة من طبق بيتري من الماء وإلا فإن يرقة ستلتزم الفينيل تثبيط الحركة العادي. يجب أن المياه لا بركة حول يرقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقدم التحقيق باليد نحو اليرقة في 90º زاوية إلى المحور الأمامي الخلفي الجسم، وذلك باستخدام الفينيل لنقل اليرقة إلى كورموقف مصحح (انظر الشكل 1A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشرق غيض من التحقيق لوضع بلطف عبر السطح الظهري من منتصف اليرقة مع لجنة التحقيق في ما يقرب من زاوية 45º إلى مرحلة المجهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على تحقيق الاتصال، بدء الموقت المختبر. الضغط النزولي يكفي لالبادئة قليلا سطح بشرة اليرقات في حين لا يزال يسمح للأمام أو للحركة الى الوراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد لجنة التحقيق في مكان لمدة تصل إلى 10 ثانية أو حتى لوحظ استجابة سلوكية أثار الباردة - أيهما أسبق. ثم إزالة التحقيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل الاستجابة السلوكية لوحظ والكمون استجابة. وتعتبر اليرقات التي لا تستجيب في غضون 10 ثانية &quot;غير المستجيبين&quot;. الكمون يمكن أيضا أن تسجل لالمستجيبين وتستخدم لقياس التغيرات في استجابة متانة / السعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل يرقة وإعداد المقبل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 2،3-2،11 حتى يتم الوصول إلى العدد المطلوب من اختبار اليرقات (ثلاث مجموعات من ن = كانت 20-40 اليرقات شالحوار الاقتصادي الاستراتيجي هنا). </li></ol>

<ol>
	<li>Grueber, W. B., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tiling+of+the+Drosophila+epidermis+by+multidendritic+sensory+neurons.">Tiling of the Drosophila epidermis by multidendritic sensory neurons.</a> Development. 129 (12), 2867-2878 (2002).</li><li>Gao, F. B., Brenman, J. E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+regulating+dendritic+outgrowth,+branching,+and+routing+in+Drosophila.">Genes regulating dendritic outgrowth, branching, and routing in Drosophila.</a> Genes Dev. 13 (19), 2549-2561 (1999).</li><li>Sweeney, S. T., Broadie, K., Keane, J., Niemann, H., O'Kane, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+expression+of+tetanus+toxin+light+chain+in+Drosophila+specifically+eliminates+synaptic+transmission+and+causes+behavioral+defects.">Targeted expression of tetanus toxin light chain in Drosophila specifically eliminates synaptic transmission and causes behavioral defects.</a> Neuron. 14 (2), 341-351 (1995).</li><li>Hwang, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nociceptive+neurons+protect+Drosophila+larvae+from+parasitoid+wasps.">Nociceptive neurons protect Drosophila larvae from parasitoid wasps.</a> Curr Biol. 17 (24), 2105-2116 (2007).</li><li>Im, S. H., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pokes,+sunburn,+and+hot+sauce:+Drosophila+as+an+emerging+model+for+the+biology+of+nociception.">Pokes, sunburn, and hot sauce: Drosophila as an emerging model for the biology of nociception.</a> Dev Dyn. 241 (1), 16-26 (2012).</li><li>Milinkeviciute, G., Gentile, C., Neely, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+a+tool+for+studying+the+conserved+genetics+of+pain.">Drosophila as a tool for studying the conserved genetics of pain.</a> Clin Genet. 82 (4), 359-366 (2012).</li><li>Turner, H. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TRP+Channels+Pkd2,+NompC,+and+Trpm+Act+in+Cold-Sensing+Neurons+to+Mediate+Unique+Aversive+Behaviors+to+Noxious+Cold+in+Drosophila.">The TRP Channels Pkd2, NompC, and Trpm Act in Cold-Sensing Neurons to Mediate Unique Aversive Behaviors to Noxious Cold in Drosophila.</a> Curr Biol. , (2016).</li><li>Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+mechanosensory+transduction:+mechanoreception-defective+mutations+of+Drosophila.">Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila.</a> Neuron. 12 (6), 1195-1206 (1994).</li><li>Tsubouchi, A., Caldwell, J. C., Tracey, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+filopodia,+Ripped+Pocket,+NOMPC,+and+NMDARs+contribute+to+the+sense+of+touch+in+Drosophila+larvae.">Dendritic filopodia, Ripped Pocket, NOMPC, and NMDARs contribute to the sense of touch in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 22 (22), 2124-2134 (2012).</li><li>Yan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+NOMPC+is+a+mechanotransduction+channel+subunit+for+gentle-touch+sensation.">Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation.</a> Nature. 493 (7431), 221-225 (2013).</li><li>Tracey, W. D., Wilson, R. I., Laurent, G., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=painless,+a+Drosophila+gene+essential+for+nociception.">painless, a Drosophila gene essential for nociception.</a> Cell. 113 (2), 261-273 (2003).</li><li>Babcock, D. T., Landry, C., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+signaling+mediates+UV-induced+nociceptive+sensitization+in+Drosophila+larvae.">Cytokine signaling mediates UV-induced nociceptive sensitization in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 19 (10), 799-806 (2009).</li><li>Chattopadhyay, A., Gilstrap, A. V., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+global+methods+of+assessing+thermal+nociception+in+Drosophila+larvae.">Local and global methods of assessing thermal nociception in Drosophila larvae.</a> J Vis Exp. (63), e3837 (2012).</li><li>Grueber, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projections+of+Drosophila+multidendritic+neurons+in+the+central+nervous+system:+links+with+peripheral+dendrite+morphology.">Projections of Drosophila multidendritic neurons in the central nervous system: links with peripheral dendrite morphology.</a> Development. 134 (1), 55-64 (2007).</li><li>Hughes, C. L., Thomas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensory+feedback+circuit+coordinates+muscle+activity+in+Drosophila.">A sensory feedback circuit coordinates muscle activity in Drosophila.</a> Mol Cell Neurosci. 35 (2), 383-396 (2007).</li><li>Zhong, L., Hwang, R. Y., Tracey, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pickpocket+is+a+DEG/ENaC+protein+required+for+mechanical+nociception+in+Drosophila+larvae.">Pickpocket is a DEG/ENaC protein required for mechanical nociception in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 20 (5), 429-434 (2010).</li><li>Xiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-avoidance-mediating+photoreceptors+tile+the+Drosophila+larval+body+wall.">Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall.</a> Nature. 468 (7326), 921-926 (2010).</li><li>Neely, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TrpA1+regulates+thermal+nociception+in+Drosophila.">TrpA1 regulates thermal nociception in Drosophila.</a> PLoS One. 6 (8), e24343 (2011).</li><li>Zhou, Y., Cameron, S., Chang, W. T., Rao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+directional+change+after+mechanical+stimulation+in+Drosophila.">Control of directional change after mechanical stimulation in Drosophila.</a> Mol Brain. 5, 39 (2012).</li><li>Im, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tachykinin+acts+upstream+of+autocrine+Hedgehog+signaling+during+nociceptive+sensitization+in+Drosophila.">Tachykinin acts upstream of autocrine Hedgehog signaling during nociceptive sensitization in Drosophila.</a> Elife. 4, e10735 (2015).</li><li>Babcock, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+signaling+regulates+nociceptive+sensitization.">Hedgehog signaling regulates nociceptive sensitization.</a> Curr Biol. 21 (18), 1525-1533 (2011).</li><li>Berrigan, D., Pepin, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+Maggots+Move+-+Allometry+and+Kinematics+of+Crawling+in+Larval+Diptera.">How Maggots Move - Allometry and Kinematics of Crawling in Larval Diptera.</a> J. Insect Physiol. 41 (4), 329-337 (1995).</li><li>Galko, M. J., Krasnow, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+genetic+analysis+of+wound+healing+in+Drosophila+larvae.">Cellular and genetic analysis of wound healing in Drosophila larvae.</a> PLoS Biol. 2 (8), E239 (2004).</li><li>Burra, S., Wang, Y., Brock, A. R., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Drosophila+larvae+to+study+epidermal+wound+closure+and+inflammation.">Using Drosophila larvae to study epidermal wound closure and inflammation.</a> Methods Mol Biol. 1037, 449-461 (2013).</li><li>Dar, A. C., Das, T. K., Shokat, K. M., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+genetic+discovery+of+targets+and+anti-targets+for+cancer+polypharmacology.">Chemical genetic discovery of targets and anti-targets for cancer polypharmacology.</a> Nature. 486 (7401), 80-84 (2012).</li><li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+disease+models+in+Drosophila+melanogaster+and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery.">Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacol Rev. 63 (2), 411-436 (2011).</li><li>Gill, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multistate+life-tables+and+regression+models.">Multistate life-tables and regression models.</a> Math Popul Stud. 3 (4), 259-276 (1992).</li><li>Mantel, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ranking+procedures+for+arbitrarily+restricted+observation.">Ranking procedures for arbitrarily restricted observation.</a> Biometrics. 23 (1), 65-78 (1967).</li><li>Breslow, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+generalized+Kruskal-Wallis+test+for+comparing+K+samples+subject+to+unequal+patterns+of+censorship.">A generalized Kruskal-Wallis test for comparing K samples subject to unequal patterns of censorship.</a> Biometrika. 57 (3), 579-594 (1970).</li><li>Gehan, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+generalized+wilcoxon+test+for+comparing+arbitrarily+singly-censored+samples.">A generalized wilcoxon test for comparing arbitrarily singly-censored samples.</a> Biometrika. 52, 203-223 (1965).</li></ol>

تطبيق براءات الاختراع الولايات المتحدة الأمريكية (CL) معلقا على تصميم المسبار البارد. وسيتم توفير معلومات إضافية حول تفاصيل أرقام جزء التحقيق البارد والبناء، فضلا عن الاستشارات إضافية على تصميم أداة بناء على طلبها.

مقايسة الموصوفة هنا يمكن استخدامها لنوعيا وكميا تقييم حس الألم أو توعية مسبب للألم في يرقات مختلف الخلفيات الوراثية والتأثيرات البيئية، و / أو الظروف الناجمة عن الضرر. منذ هذا الاختبار يسمح لتطبيق التنسيق من التحفيز الباردة، مع هذه الأداة يمكن للمرء أن تقييم وظيفة م...

وقد ثبت ذبابة الفاكهة أن تكون مفيدة للغاية لتحديد الجينات رواية حفظها والدوائر العصبية التي تكمن وراء السلوك المعقد. توفر الذباب مجموعة أدوات الجينية المتطورة والجهاز العصبي مبسطة التي تتيح دقة الجيني والخلايا العصبية التلاعب 1، 2، 3، 4 لتشريح الأسس الخلوية والجزيئية من حس الألم 5 و 6 و 7. اليرقات هي مفيدة بشكل خاص لهذه التحليلات، بالنظر إلى أن فحوصات السلوكية لمسة رقيقة 8 و 9 و 10 و الحرارة الضارة 11 و 12 و 13 و الإحساس الميكانيكية من المحفزات الضارة 4، </sup&gt; وقد تم بالفعل إنشاء 11، وإهاب اليرقات شفافة يسمح للتصوير الحية أو ثابت من البشرة والخلايا العصبية الحسية الأساسية. في الآونة الأخيرة، كما تم تطوير مقايسة لالباردة الضارة 7، والذي وصفنا في المزيد من التفاصيل هنا. باستخدام ما يرام، والمخروطية ذات الرؤوس التحقيق البارد، وتبين لنا أن يرقات ذبابة الفاكهة المعرض مجموعة من السلوكيات رد الفعل الباردة محددة، تختلف عن السلوكيات التي لوحظت خلال الحركة العادية، وبعد لمسة رقيقة، أو بعد القاسية الميكانيكية أو ارتفاع في درجة الحرارة المحفزات 7 و 8 و 11 . وتشمل السلوكيات الباردة محددة انكماش قوي لكامل الجسم (CT)، ورفع 45-90º للقطاعات الخلفي (PR) ورفع في وقت واحد الأمامية والخلفية قطاعات في U-الشكل (US). انتشار هذه السلوكيات يزداد مع انخفاض درجات الحرارة ولكن في كل القمم في الصورةمختلفة طفيفة درجات الحرارة الباردة. الأعمال الأخيرة تشير إلى أن الردود CT وتوسط من قبل مختلف الخلايا العصبية الحسية المحيطية من تلك التي تستجيب للحرارة الضارة أو المنبهات الميكانيكية القاسية 7. مثل الكثير من nociceptors الفقاريات، ذبابة الفاكهة شجيري متعددة (MD) الخلايا العصبية الحسية المحيطية وجود هياكل شجيري المعقدة التي arborize على البشرة 1. الخلايا العصبية MD موجودة في كل شريحة هيئة اليرقات، وإسقاط محاور لالحبل العصبي البطني 14. يتم فصل الخلايا العصبية الحسية MD إلى أربع فئات مختلفة (I-IV) على أساس التشكل شجيري ووتتراوح الوظائف الحسية 4، 9، 10، 15، 16، 17. في حين أن الخلايا العصبية في الصف الرابع اللازمة لردود لفة الجسم الجانبي اليرقاتلدرجات حرارة عالية أو المنبهات الميكانيكية قاسية 4، والطبقة يطلب III الخلايا العصبية للاستجابة لمسة رقيقة 9 و 10 و لا يتم تفعيلها إلا من خلال الباردة، ولكن أيضا مطلوبة لالاستجابات السلوكية أثار الباردة-7. كل من الدرجة الثالثة والدرجة IV الخلايا العصبية تستخدم منفصلة مستقبلات عابرة المحتملة (TRP) قنوات لتسهيل الاستجابات السلوكية لالضارة 7 و 11 و 18 و المحفزات 9، 10، 17، 19 غير الضارة. وعلاوة على ذلك، وتوعية حس الألم اليرقات إصابة التالية، على الصعيدين الخلوية 20 و السلوكية 12، 21. مقايسة الموصوفة هنا يسمح للquantificatioن أي من المعتاد، أو يحتمل أن تغير الاستجابات السلوكية لدرجات الحرارة الباردة التي تتراوح بين البرد الضارة (≤ 10 درجة مئوية)، بارد حميدة (11-17 درجة مئوية)، ودرجات الحرارة المحيطة (18-22 درجة مئوية). درجات الحرارة الباردة المستخدمة في هذا الاختبار هي قادرة على تفعيل مباشرة من الطبقة الثالثة الخلايا العصبية الحسية، انتزاع قوية، وزيادة الكالسيوم استنساخه والاستجابات السلوكية أثار الباردة، والتي يمكن أن يكون نوعيا وكميا تحليلها 7. هذا الاختبار يمكن تطبيقها على يرقات أي الوراثي تقريبا فضلا عن اليرقات تتعرض لظروف بيئية مختلفة (التغذية تتغير الإصابة، وكلاء الدوائية) لتحديد العوامل الوراثية والبيئية على حد سواء التي تؤثر على حس الألم البارد، والتوعية مسبب للألم أو ليونة مسبب للألم. وبالنظر إلى أن thermosensation في كل مكان عبر العديد من الأنواع، يوفر هذا الاختبار أداة قيمة لدراسة حس الألم وقد كشف أهداف الجينات رواية أو التفاعلات العصبية التي من شأنها تحسينفهمنا من حس الألم الفقاريات. التحقيق البارد مبنية خصيصا (انظر التحقيق البارد، جدول المواد) يستخدم في درجة الحرارة حلقة مغلقة تسيطر عليها الجهاز بلتيير، الذي يبرد رمح الألومنيوم ورأس مخروطي الشكل من خلال التوصيل الحراري. تم تضمين الثرمستور داخل غيض الألومنيوم المخروطية تقارير درجة الحرارة في الوقت الحقيقي على وحدة التحكم. وترد بالوعة الحرارة ومروحة وحدة حرارية لتنظيم الحمل تأثير بلتيير في الحرارة (مراقبة الجودة) حتى مدى درجة الحرارة المطلوبة من (22-0 ° C) لا يمكن أن يتحقق (انظر وحدة تحكم الحرارية، جدول المواد). يتم تطبيق التحفيز البارد الضارة من تلميح التحقيق البارد من جهة، إلى خط الوسط ظهري، إلى شريحة (ق) على مسافة واحدة من طرفي الأمامية والخلفية (تقريبا شريحة A4، انظر الشكل 1A) من اليرقة. وردا على المحفزات الباردة، اليرقات تنتج عادة واحد من ثلاثة السلوكيات أثار الباردة ضمن 10 ثانية قطع: كامل الجسمانكماش (CT)، ورفع 45-90º من الأمامية والخلفية قطاعات في U-الشكل (US)، أو رفع للقطاعات الخلفي (PR) (الموصوفة في نتائج). يتم تنفيذ أيا من هذه السلوكيات أثناء الحركة تحوي العادي أو السلوك تستخدم علفا. هذه السلوكيات هي أيضا متميزة من ردود مسة لطيفة واستجابة المتداول مكره لدرجات الحرارة العالية أو المنبهات الميكانيكية الضارة.

<table><tbody><tr><td>Cold Probe</td><td>Pro-Dev Engineering</td><td>Custom-built on demand</td><td>Part numbers and construction details can be provided on request</td></tr><tr><td>Thermal Control Unit</td><td>TE Technology</td><td>Custom Built enclosure</td><td>Part numbers and construction details can be provided on request</td></tr><tr><td>Zeiss Stemi 2000 microscope</td><td>Zeiss</td><td>NT55-605</td><td></td></tr><tr><td>Fiber-Lite MI-150 High Intensity Illuminator</td><td>Dolan-Jenner Industries.</td><td>A20500</td><td></td></tr><tr><td>Schott Dual Gooseneck 23 inch Fiber Optic Light Guide</td><td>Schott North America, Inc.</td><td>Schott A08575</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>FST</td><td>FS-1670</td><td>Used to sort and handle larvae. Be sure to smooth and blunt forceps tips slightly to lower the risk of accidently puncturing or injuring the larvae</td></tr><tr><td>Paintbrush</td><td>Dick Blick Art Materials</td><td>06762-1002</td><td>Used to sort and handle larvae. It is helpful if the paintbrush is damp during use.</td></tr><tr><td>35 mm x 10 mm Polystyrene Petri dish</td><td>Falcon</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>60mm x 10 mm Polystyrene Petri dish</td><td>Falcon</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Piece of black vinyl (at least 2 inches x 2 inches)</td><td></td><td></td><td>Used to provide contrast and orient larvae to the cold probe</td></tr><tr><td>Fisherbrand Scoopula Spatula</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-357Q</td><td>Used to move food</td></tr><tr><td>Kimtech Science Kimwipes</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666A</td><td>Used to dry the larvae and cold probe if there is excess moisture</td></tr></tbody></table>

novel assay for cold nociception in drosophila larvae

كيف الكائنات العقل والاستجابة لدرجات الحرارة الضارة لا تزال غير مفهومة. وعلاوة على ذلك، فإن الآليات الكامنة للتوعية الآلية الحسية، كما هو الحال في مرضى الذين يعانون من اعتلال الأعصاب المحيطية أو توعية الإصابة التي يسببها، لا يتميز أيضا. تم استخدام نموذج ذبابة الفاكهة لين العريكة وراثيا لدراسة الخلايا والجينات اللازمة لكشف الحرارة الضارة، التي أسفرت عن الجينات الحفاظ متعددة من الفائدة. لا يعرف إلا القليل عن ذلك الخلايا ومستقبلات مهمة للاستشعار البارد الضارة. وعلى الرغم من ذبابة الفاكهة لا البقاء على قيد الحياة التعرض لفترات طويلة لدرجات الحرارة الباردة (≤10 درجة مئوية)، وسوف تجنب بارد، مفضلا ارتفاع درجات الحرارة في المقايسات تفضيل السلوكية، وكيف تشعر وربما تجنب المحفزات الباردة الضارة في الآونة الأخيرة تم التحقيق فقط. نحن هنا وصف وتوصيف أول البرد الضارة (≤10 درجة مئوية) الفحص السلوكي فيذبابة الفاكهة. استخدام هذه الأداة وفحص، وتبين لنا محقق كيفية تقييم نوعيا وكميا السلوكيات مسبب للألم الباردة. ويمكن القيام بذلك في ظل ظروف طبيعية ثقافة / صحية، أو يفترض في سياق المرض أو الإصابة أو التوعية. وعلاوة على ذلك، يمكن تطبيق هذا الاختبار على اليرقات التي اختيرت لالمورثات المرغوبة، والتي قد تؤثر thermosensation، والألم، أو التوعية مسبب للألم. وبالنظر إلى أن الألم هو عملية الحفظ جدا، وذلك باستخدام هذا الاختبار إلى مزيد من الدراسة حس الألم الحراري ومن المرجح أن جمع التفاهم مهم من العمليات الألم في الأنواع الأخرى، بما في ذلك الفقاريات.

يرقات ذبابة الفاكهة الخطوة مع الحركة تحوي يتضمن توقف في بعض الأحيان، يتحول الرأس، والتغيرات في اتجاه و22. وردا على طلب التنسيق من التحفيز البارد الضارة إلا أن اليرقات المعرض مجموعة من السلوكيات فريدة من نوعها، على عكس لفة جانبية مك...

Watch this Scientific Journal Video about Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae at JoVE.com

Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae

نحن هنا لشرح فحص رواية لدراسة حس الألم البارد في يرقات ذبابة الفاكهة. هذا الاختبار يستخدم لبلتيير التحقيق مبنية خصيصا قادرة على تطبيق حافز البارد الضارة التنسيق والنتائج القابلة للقياس في السلوكيات الباردة محددة. وهذه التقنية تسمح مزيد من تشريح الخلوية والجزيئية من حس الألم البارد.

رواية الفحص لالباردة حس الألم في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يرقات

How organisms sense and respond to noxious temperatures is still poorly understood. Further, the mechanisms underlying sensitization of the sensory ...

novel-assay-for-cold-nociception-in-drosophila-larvae

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae

7.7K Views.  UT MD Anderson Cancer Center.  نحن هنا لشرح فحص رواية لدراسة حس الألم البارد في يرقات ذبابة الفاكهة. هذا الاختبار يستخدم لبلتيير التحقيق مبنية خصيصا قادرة على تطبيق حافز البارد الضارة التنسيق والنتائج القابلة للقياس في السلوكيات الباردة محددة. وهذه التقنية تسمح م?...

Video: Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of thermal nociceptors1,2 while the second involves a wholesale (global) activation of most or all such neurons3. Together, these techniques allow visualization and quantification of the behavioral functions of Drosophila nociceptive sensory neurons.
The Drosophila larva is an established model system to study thermal nociception, a sensory response to potentially harmful temperatures that is evolutionarily conserved across species1,2. The advantages of Drosophila for such studies are the relative simplicity of its nervous system and the sophistication of the genetic techniques that can be used to dissect the molecular basis of the underlying biology4-6 In Drosophila, as in all metazoans, the response to noxious thermal stimuli generally involves a "nocifensive" aversive withdrawal to the presented stimulus7. Such stimuli are detected through free nerve endings or nociceptors and the amplitude of the organismal response depends on the number of nociceptors receiving the noxious stimulus8. In Drosophila, it is the class IV dendritic arborization sensory neurons that detect noxious thermal and mechanical stimuli9 in addition to their recently discovered role as photoreceptors10. These neurons, which have been very well studied at the developmental level, arborize over the barrier epidermal sheet and make contacts with nearly all epidermal cells11,12. The single axon of each class IV neuron projects into the ventral nerve cord of the central nervous system11 where they may connect to second-order neurons that project to the brain.
Under baseline conditions, nociceptive sensory neurons will not fire until a relatively high threshold is reached. The assays described here allow the investigator to quantify baseline behavioral responses or, presumably, the sensitization that ensues following tissue damage. Each assay provokes distinct but related locomotory behavioral responses to noxious thermal stimuli and permits the researcher to visualize and quantify various aspects of thermal nociception in Drosophila larvae. The assays can be applied to larvae of desired genotypes or to larvae raised under different environmental conditions that might impact nociception. Since thermal nociception is conserved across species, the findings gleaned from genetic dissection in Drosophila will likely inform our understanding of thermal nociception in other species, including vertebrates.

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of thermal nociceptors1,2 while the second involves a wholesale (global) activation of most or all such neurons3. Together, these techniques allow visualization and quantification of the behavioral functions of Drosophila nociceptive sensory neurons.

المحلية والعالمية طرق تقييم Nociception الحرارية في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يرقات

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other insects proprioception is provided by specialized sensory organs termed chordotonal organs (ChOs) 2. Like many other organs in Drosophila, ChOs develop twice during the life cycle of the fly. First, the larval ChOs develop during embryogenesis. Then, the adult ChOs start to develop in the larval imaginal discs and continue to differentiate during metamorphosis.
The development of larval ChOs during embryogenesis has been studied extensively 10,11,13,15,16. The centerpiece of each ChO is a sensory unit composed of a neuron and a scolopale cell. The sensory unit is stretched between two types of accessory cells that attach to the cuticle via specialized epidermal attachment cells 1,9,14. When a fly larva moves, the relative displacement of the epidermal attachment cells leads to stretching of the sensory unit and consequent opening of specific transient receptor potential vanilloid (TRPV) channels at the outer segment of the dendrite 8,12. The elicited signal is then transferred to the locomotor central pattern generator circuit in the central nervous system.
Multiple ChOs have been described in the adult fly 7. These are located near the joints of the adult fly appendages (legs, wings and halters) and in the thorax and abdomen. In addition, several hundreds of ChOs collectively form the Johnston's organ in the adult antenna that transduce acoustic to mechanical energy 3,5,17,4.
In contrast to the extensive knowledge about the development of ChOs in embryonic stages, very little is known about the morphology of these organs during larval stages. Moreover, with the exception of femoral ChOs 18 and Johnston's organ, our knowledge about the development and structure of ChOs in the adult fly is very fragmentary.
Here we describe a method for staining and visualizing ChOs in third instar larvae and pupae. This method can be applied together with genetic tools to better characterize the morphology and understand the development of the various ChOs in the fly.

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

A method to immunostain and visualize chordotonal organs in larvae and pupae of Drosophila melanogaster is described.

تصور في Proprioceptors<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يرقات وشرانق

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Novel Whole-tissue Quantitative Assay of Nitric Oxide Levels in Drosophila Neuroinflammatory Response

Neuroinflammation is a complex innate immune response vital to the healthy function of the central nervous system (CNS). Under normal conditions, an intricate network of inducers, detectors, and activators rapidly responds to neuron damage, infection or other immune infractions. This inflammation of immune cells is intimately associated with the pathology of neurodegenerative disorders, such as Parkinson&#39;s disease (PD), Alzheimer&#39;s disease and ALS. Under compromised disease states, chronic inflammation, intended to minimize neuron damage, may lead to an over-excitation of the immune cells, ultimately resulting in the exacerbation of disease progression. For example, loss of dopaminergic neurons in the midbrain, a hallmark of PD, is accelerated by the excessive activation of the inflammatory response. Though the cause of PD is largely unknown, exposure to environmental toxins has been implicated in the onset of sporadic cases. The herbicide paraquat, for example, has been shown to induce Parkinsonian-like pathology in several animal models, including Drosophila melanogaster. Here, we have used the conserved innate immune response in Drosophila to develop an assay capable of detecting varying levels of nitric oxide, a cell-signaling molecule critical to the activation of the inflammatory response cascade and targeted neuron death. Using paraquat-induced neuronal damage, we assess the impact of these immune insults on neuroinflammatory stimulation through the use of a novel, quantitative assay. Whole brains are fully extracted from flies either exposed to neurotoxins or of genotypes that elevate susceptibility to neurodegeneration then incubated in cell-culture media. Then, using the principles of the Griess reagent reaction, we are able to detect minor changes in the secretion of nitric oxide into cell-culture media, essentially creating a primary live-tissue model in a simple procedure. The utility of this model is amplified by the robust genetic and molecular complexity of Drosophila melanogaster, and this assay can be modified to be applicable to other Drosophila tissues or even other small, whole-organism inflammation models.

Novel Whole-tissue Quantitative Assay of Nitric Oxide Levels in Drosophila Neuroinflammatory Response

Levels of the inflammatory cell-signaling molecule nitric oxide (NO) are commonly assayed using Griess reagent. In this protocol, we have created a modified Griess assay utilizing live Drosophila brain tissue in order to detect the secretion of NO in a simple, quantifiable and highly repeatable method.

Neuroinflammation is a complex innate immune response vital to the healthy function of the central nervous system (CNS). Under normal conditions, an ...

Immunology and Infection

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

In the following we describe the methodological details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with genetic interference, provides a handle to analyze the neuronal and molecular fundamentals of specifically associative learning in a simple larval brain.
Organisms can use past experience to adjust present behavior. Such acquisition of behavioral potential can be defined as learning, and the physical bases of these potentials as memory traces1-4. Neuroscientists try to understand how these processes are organized in terms of molecular and neuronal changes in the brain by using a variety of methods in model organisms ranging from insects to vertebrates5,6. For such endeavors it is helpful to use model systems that are simple and experimentally accessible. The Drosophila larva has turned out to satisfy these demands based on the availability of robust behavioral assays, the existence of a variety of transgenic techniques and the elementary organization of the nervous system comprising only about 10,000 neurons (albeit with some concessions: cognitive limitations, few behavioral options, and richness of experience questionable)7-10.
Drosophila larvae can form associations between odors and appetitive gustatory reinforcement like sugar11-14. In a standard assay, established in the lab of B. Gerber, animals receive a two-odor reciprocal training: A first group of larvae is exposed to an odor A together with a gustatory reinforcer (sugar reward) and is subsequently exposed to an odor B without reinforcement 9. Meanwhile a second group of larvae receives reciprocal training while experiencing odor A without reinforcement and subsequently being exposed to odor B with reinforcement (sugar reward). In the following both groups are tested for their preference between the two odors. Relatively higher preferences for the rewarded odor reflect associative learning - presented as a performance index (PI). The conclusion regarding the associative nature of the performance index is compelling, because apart from the contingency between odors and tastants, other parameters, such as odor and reward exposure, passage of time and handling do not differ between the two groups9.

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Drosophila larvae are able to associate odor stimuli with gustatory reward. Here we describe a simple behavioral paradigm that allows the analysis of appetitive associative olfactory learning.

مشهي التعلم النقابي في الشم<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقات

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

Light Preference Assay to Study Innate and Circadian Regulated Photobehavior in Drosophila Larvae

Light acts as environmental signal to control animal behavior at various levels. The Drosophila larval nervous system is used as a unique model to answer basic questions on how light information is processed and shared between rapid and circadian behaviors. Drosophila larvae display a stereotypical avoidance behavior when exposed to light. To investigate light dependent behaviors comparably simple light-dark preference tests can be applied. In vertebrates and arthropods the neural pathways involved in sensing and processing visual inputs partially overlap with those processing photic circadian information. The fascinating question of how the light sensing system and the circadian system interact to keep behavioral outputs coordinated remains largely unexplored. Drosophila is an impacting biological model to approach these questions, due to a small number of neurons in the brain and the availability of genetic tools for neuronal manipulation. The presented light-dark preference assay allows the investigation of a range of visual behaviors including circadian control of phototaxis.

Light Preference Assay to Study Innate and Circadian Regulated Photobehavior in Drosophila Larvae

Here we describe a light-dark preference test for Drosophila larva. This assay provides information about innate and circadian regulation of light sensing and processing photobehavior.

ضوء الفحص ميول لدراسة الساعة البيولوجية الفطرية وPhotobehavior الخاضعة للرقابة في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يرقات

Light acts as environmental signal to control animal behavior at various levels. The Drosophila larval nervous system is used as a unique model to answer ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

واحدة ذبابة الفحص لسلوك البحث عن الطعام في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

An Improved Assay and Tools for Measuring Mechanical Nociception in Drosophila Larvae

Published assays for mechanical nociception in Drosophila have led to variable assessments of behavior. Here, we fabricated, for use with Drosophila larvae, customized metal nickel-titanium alloy (nitinol) filaments. These mechanical probes are similar to the von Frey filaments used in vertebrates to measure mechanical nociception. Here, we demonstrate how to make and calibrate these mechanical probes and how to generate a full behavioral dose-response from subthreshold (innocuous or non-noxious range) to suprathreshold (low to high noxious range) stimuli. To demonstrate the utility of the probes, we investigated tissue damage-induced hypersensitivity in Drosophila larvae. Mechanical allodynia (hypersensitivity to a normally innocuous mechanical stimulus) and hyperalgesia (exaggerated responsiveness to a noxious mechanical stimulus) have not yet been established in Drosophila larvae. Using mechanical probes that are normally innocuous or probes that typically elicit an aversive behavior, we found that Drosophila larvae develop mechanical hypersensitization (both allodynia and hyperalgesia) after tissue damage. Thus, the mechanical probes and assay that we illustrate here will likely be important tools to dissect the fundamental molecular/genetic mechanisms of mechanical hypersensitivity.

An Improved Assay and Tools for Measuring Mechanical Nociception in Drosophila Larvae

The goal of this protocol is to show how to perform an improved assay for mechanical nociception in Drosophila larvae. We use the assay here to demonstrate that mechanical hypersensitivity (allodynia and hyperalgesia) exists in Drosophila larvae.

فحص محسن وأدوات لقياس النوسسيبل الميكانيكي في يرقات دروسوفيليا

Published assays for mechanical nociception in Drosophila have led to variable assessments of behavior. Here, we fabricated, for use with Drosophila ...

Behavior

A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae

Many animals, including the fruit fly, Drosophila melanogaster, are capable of discriminating minute differences in&#160;environmental temperature, which enables them to seek out their preferred thermal landscape. To define the temperature preferences of larvae over a defined linear range, we developed an assay using a temperature gradient. To establish a single-directional gradient, two aluminum blocks are connected to independent water baths, each of which controls the temperature of individual blocks. The two blocks set the lower and upper limits of the gradient. The temperature gradient is established by placing an agarose-coated aluminum plate over the two water-controlled blocks so that the plate spans the distance between them. The ends of the aluminum plate that is set on the top of the water blocks defines the minimum and maximum temperatures, and the regions in-between the two blocks form a linear temperature gradient. The gradient assay can be applied to&#160;larvae of different ages and can be used to identify mutants that exhibit phenotypes, such as those with mutations affecting genes encoding TRP channels and opsins, which are required for temperature discrimination.

A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae

Here, we present a protocol to determine the preferred environmental temperature of Drosophila larvae using a continuous thermal gradient.

مقايسة تدرج درجة الحرارة لتحديد تفضيلات الحرارية يرقات المورفولوجية

Many animals, including the fruit fly, Drosophila melanogaster, are capable of discriminating minute differences in&#160;environmental temperature, which ...

Behavioral Assays for Optogenetic Manipulation of Neural Circuits in Drosophila melanogaster

Optogenetics has become a fundamental technique in neuroscience, enabling precise control of neuronal activity through light stimulation. This study introduces easy-to-implement setups for applying optogenetic methods in Drosophila melanogaster. Two optogenetic tools, CsChrimson, a red-light-activated cation channel, and GtACR2, a blue-light-activated anion channel, were employed in four experimental approaches. Three of these approaches involve single-fly experiments: (1) a blue-light optogenetic thermotactic positional preference assay targeting temperature-sensitive heating cells, (2) a red-light optogenetic positional preference assay activating bitter sensing neurons, and (3) a proboscis extension response assay activating the sweet-sensing neurons. The fourth approach (4) is a fly maze setup to assess avoidance behaviors using multiple flies. The ability to manipulate neural activity temporally and spatially offers powerful insights into sensory processing and decision-making, underscoring the potential of optogenetics to advance our knowledge of neural function. These methods provide an accessible and robust framework for future research in neuroscience to enhance the understanding of specific neural pathways and their behavioral outcomes.

This paper presents methods for optogenetic manipulation in Drosophila melanogaster, utilizing CsChrimson and GtACR2 to activate and silence specific neurons. Four experiments are described to utilize optogenetics to explore thermotactic and gustatory behaviors, providing insights into the underlying neural mechanisms governing these processes.

المقايسات السلوكية للتلاعب البصري الوراثي للدوائر العصبية في ذبابة الفاكهة السوداء

Optogenetics has become a fundamental technique in neuroscience, enabling precise control of neuronal activity through light stimulation. This study ...

Local Heat Probe Assay: A Method to Assess Nociception of High Temperatures in Drosophila Larvae

Source: Chattopadhyay, A., et al. <a href="https://www.jove.com/video/3837/" target="_blank">Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae</a>. J. Vis. Exp. (2012).
Drosophila larvae have dedicated sensory neurons&#8211;nociceptors&#8211;whose response to potentially harmful thermal stimuli triggers aversive&#8211;or so-called &#34;nocifensive&#34;&#8211;behaviors in the animal. This video describes a method to assess thermal nociception by recording larval behavior in response to local application of a heat probe onto the cuticle. This method is, therefore, called the local heat probe assay.

فحص المسبار الحراري المحلي: طريقة لتقييم الشعور بالألم في درجات الحرارة المرتفعة في ذبابة الفاكهة

Source: Chattopadhyay, A., et al. Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae. J. Vis. Exp. (2012).
Drosophila larvae ...

رواية الفحص لالباردة حس الألم في

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

المحلية والعالمية طرق تقييم Nociception الحرارية في

تصور في Proprioceptors

Novel Whole-tissue Quantitative Assay of Nitric Oxide Levels in Drosophila Neuroinflammatory Response

مشهي التعلم النقابي في الشم

ضوء الفحص ميول لدراسة الساعة البيولوجية الفطرية وPhotobehavior الخاضعة للرقابة في

واحدة ذبابة الفحص لسلوك البحث عن الطعام في

فحص محسن وأدوات لقياس النوسسيبل الميكانيكي في يرقات دروسوفيليا

مقايسة تدرج درجة الحرارة لتحديد تفضيلات الحرارية يرقات المورفولوجية

المقايسات السلوكية للتلاعب البصري الوراثي للدوائر العصبية في ذبابة الفاكهة السوداء

فحص المسبار الحراري المحلي: طريقة لتقييم الشعور بالألم في درجات الحرارة المرتفعة في ذبابة الفاكهة