كان يؤيد هذا العمل من مؤسسة القلب البريطانية (جزء من الغرام/13/60/30406) وجامعة برمنغهام.

وافق جميع الإجراءات الحيوان الحيوان رعاية هيئة المراجعة الأخلاقية ووزارة الداخلية في المملكة المتحدة (المملكة المتحدة، مشروع ترخيص 40/3745). وتستخدم الفئران على خلفية C57BL/6، 8-12 أسبوع القديمة، وزن الجسم ز 19-25 ومن كلا الجنسين.
1-الحيوان التخدير
<ol>
	<li>ضع ماوس في دائرة التعريفي والحث على التخدير من خلال مزيج إيسوفلوراني 5% مع الأكسجين 100%. استخدام تدفق بمعدل 0.5 لتر/دقيقة انتظر حتى يتوقف الماوس تماما عن التحرك وعن تواتر التنفس تصبح نادرة.</li>
	<li>إزالة الماوس من الدائرة والبطن مع ماكينة كهربائية للحلاقة. إزالة الشعر من البطن دقيق قدر الإمكان لتجنب تلوث تجويف البطن.</li>
	<li>ضع الماوس في موقف ضعيف ومكان الآنف للماوس في مخروط مرتبطة بنظام التخدير. انخفاض نسبة إيسوفلوراني إلى 2-3% (النسبة المئوية الدقيقة قد تختلف قليلاً من الحيوان للحيوان). تأكد من أن الحيوان هو النوم بمعدل التنفس أقل من المعتاد ولكن تجنب يلهث. في حالة حدوث يلهث، إنقاص نسبة isoflurane بنسبة 0.5 في المائة.
	<ol>
		<li>تحقق منعكس دواسة لتأكيد أنيسثيتيزاتيون السليم وبدء عملية جراحية إلا إذا كانت سالبة. تطبيق مرهم البيطرية في العينين لمنع جفاف.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>تطبيق حلاً مكافحة جراثيم (1% هيبيتاني) على الماوس البطن ومسح المنطقة باستخدام القطن معقمة برعم بطريقة تستبعد احتمال تلوث الموقع الجراحي (مثلاً، الداخل الخارج بطريقة دائرية) إعادة. كرر 3 مرات.</li>
</ol>
2-تطبيق تضيق IVC والانتعاش الماوس
ملاحظة: جميع الصكوك وكذلك كمواد (براعم القطن، والشاش، والمالحة إلخ) يجب أن يكون اتصالهم مجال الجراحة المعقمة. المشغل يجب فرك قبل الجراحة وارتداء قفازات معقمة وثوب أثناء الإجراء. ينبغي تغليف مقابض المجهر في إحباط عقيمة.
<ol>
	<li>إعطاء الفئران علاج المضادة ألم قبل الجراحة وخلال كامل الفترة التجريبية. على سبيل المثال، استخدام البوبرينورفين 0.1 مغ/كغ تحت الجلد 30 دقيقة قبل الجراحة، وبعد ذلك كل 12 ساعة حتى يتم euthanized الحيوان. تجلط الدم في هذا الأسلوب تطور على نحو مماثل لالتهاب عقيم، تجنب استخدام الأدوية المضادة للالتهابات تخدير.</li>
	<li>تغطية الماوس مع ثني عقيمة وجعل ثقب في ثني تعرض الموقع لعملية جراحية. باستخدام مقص، جعل شق على طول خط الوسط البطن، 1.5 سم أسفل من القص. استخدام براعم القطن اكستيريوريزي الأمعاء على الجانب الأيمن من الماوس وتغطيتها بشاش معقم غارقة في المياه المالحة الدافئة (37 درجة مئوية) لتجنب الجفاف.</li>
	<li>تحديد IVC وفروعه الجانبية (قد يكون هناك 0 أو 1 أو 2 منهم) في اتجاه والذيلية من الموقع الانصهار IVC مع الوريد الكلوي الأيسر. اضطر جميع فروع الجانب المرئي مع خيوط بروليني خاملة 7-0 كالقرب من IVC قدر الإمكان.
	<ol>
		<li>حاول أن لا تعقد الفروع الجانبية مع الملقط مباشرة، بل بالأحرى سحب لهم عقد في الأنسجة الدهنية المحيطة بها مع الملقط في يد واحدة، وجعل نفق تحت الفرع مع الملقط في اليد الأخرى. لا تقم بإغلاق فروع مرة أخرى.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>عقد الأنسجة المحيطة بالملقط، سحب IVC أعلى ويسار المنتجة للتوتر في منطقة صغيرة بين IVC وفي الشريان الاورطي بالضبط في الزاوية بين في IVC والوريد الكلوي الأيسر. تأخذ في الاعتبار أن من المستحيل تقريبا فصل الشريان الاورطي IVC حتى 2-3 ملم أدناه (في اتجاه والذيلية).</li>
	<li>استخدام حركات متباينة مع نصائح الملقط في الخاص بك جعل اليد اليمنى ثقب بين الشريان الاورطي وفي IVC. نضع في اعتبارنا أن أدلى الحركات أكثر، كلما زادت فرصة إلحاق الضرر بالسفينة. ومن الناحية المثالية، في محاولة للتقليل من عدد الحركات إلى 3-5.</li>
	<li>إعداد قطعة من 7-0 خياطة برلين خاملة لطولها حوالي 2 سم. ضعه في التجويف البريتوني الماوس على الجانب الأيسر للمشغل في المنطقة المجاورة IVC.</li>
	<li>سحب في IVC يصل واليسار مرة أخرى. إدراج نصائح الملقط الحق في الحفرة بين الشريان الاورطي وفي IVC حيث تظهر التلميحات على الجانب الآخر من IVC. تأخذ بخياطة وسحب مرة أخرى من خلال الثقب (الشكل 3أ).</li>
	<li>جعل عقده المؤقت مع خياطة ولكن لا تغلقه. ضع ز 30 إبرة ("فاصل") بنت هوك إلى العقدة والآن إغلاقه (الشكل 3ب).</li>
	<li>إزالة فاصل (الشكل 3ج).</li>
	<li>إرجاع الأمعاء إلى التجويف الصفاقى القطن برعم وتوزيعها على قدم المساواة في مجال تكنولوجيا المعلومات.</li>
	<li>إغلاق الصفاق بخياطة فيكريل 6-0 باستخدام حلقات متواصلة. إغلاق الحلقات الأولى والأخيرة كعقدة.</li>
	<li>إغلاق الجلد باستخدام دبابيس معدنية.</li>
	<li>حقن الماوس مع 0.5 مل الحارة (37 درجة مئوية) المالحة الجلوكوز تحت الجلد لاستعادة توازن السائل في الحي.</li>
	<li>ضع الماوس في أقفاص فردية في غرفة دافئة (25 درجة مئوية) أو غرفة ووضع الطعام وهلام المياه داخل القفص. مراقبة حتى الماوس هو شُفي تماما (بشكل عام، حول ح 1).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community.">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).</li><li>Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secular+trends+in+occurrence+of+acute+venous+thromboembolism:+the+Worcester+VTE+study+(1985-2009).">Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009).</a> Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).</li><li>House of Commons Health Care Committee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prevention+of+Venous+Thromboembolism+in+Hospitalised+patients.">The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients.</a> The House of Commons. , (2005).</li><li>Kuipers, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Travel+and+venous+thrombosis:+a+systematic+review.">Travel and venous thrombosis: a systematic review.</a> J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).</li><li>Lopez, J. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+venous+thrombosis.">Pathophysiology of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 123, 30-34 (2009).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=von+Willebrand+factor-mediated+platelet+adhesion+is+critical+for+deep+vein+thrombosis+in+mouse+models.">von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models.</a> Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).</li><li>Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+with+a+deficiency+in+CLEC-2+are+protected+against+deep+vein+thrombosis.">Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis.</a> Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+promote+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).</li><li>von Bruhl, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes,+neutrophils,+and+platelets+cooperate+to+initiate+and+propagate+venous+thrombosis+in+mice+in+vivo.">Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo.</a> J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).</li><li>Sevitt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+and+growth+of+valve-pocket+thrombi+in+femoral+veins.">The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins.</a> J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).</li><li>Witsch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+hollow+and+perforated+flexible+wire+allows+the+safe+and+effective+local+application+of+thrombolytic+therapy+in+a+mouse+model+of+deep+vein+thrombosis.">A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).</li><li>Shaya, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+effect+of+dabigatran+and+dalteparin+on+thrombus+stability+in+a+murine+model+of+venous+thromboembolism.">Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism.</a> J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).</li><li>Ni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+platelet+thrombus+formation+in+arterioles+of+mice+lacking+both+von+Willebrand+factor+and+fibrinogen.">Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen.</a> J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).</li><li>Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+complete+stasis+model+of+inferior+vena+cava+thrombosis.">Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis.</a> J Vis Exp. (52), (2011).</li><li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL/6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+(stasis)+model.">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li><li>Siefert, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+venous+thrombus+resolution+in+plasminogen+activator+inhibitor+type-2+deficient+mice.">Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice.</a> J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).</li><li>Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossroads+of+coagulation+and+innate+immunity:+the+case+of+deep+vein+thrombosis.">Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 11, 233-241 (2013).</li><li>Day, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrovascular+thrombosis+is+driven+by+tissue+factor+derived+primarily+from+the+blood+vessel+wall.">Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall.</a> Blood. 105 (1), 192-198 (2005).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+fibrinolytic+system+in+ApoE+gene-deleted+mice+with+hyperlipidemia+augments+deep+vein+thrombosis.">Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis.</a> J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).</li><li>Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+ligation+rapidly+induces+tissue+factor+expression+and+venous+thrombosis+in+rats.">Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+of+venous+thrombosis.">Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis.</a> J Vis Exp. (53), e2737 (2011).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+to+study+thrombogenesis+and+thrombus+resolution+with+continuous+blood+flow+in+the+mouse.">The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse.</a> Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+high-density+lipoprotein+receptor+SR-BI+and+apoA-I+protect+against+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis.">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li><li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches.">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li><li>Geddings, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strengths+and+weaknesses+of+a+new+mouse+model+of+thrombosis+induced+by+inferior+vena+cava+stenosis:+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH.">Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).</li><li>Alvarado, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+mice+have+increased+thrombotic+potential:+sex+differences+in+a+mouse+model+of+venous+thrombosis.">Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

ويرد هنا، على بروتوكول لتضيق IVC، الذي يحاكي تشويه تدفق الدم، عامل المسبّب رئيسي دفت،. تضيق IVC يدفع تنمية الجلطات في 65-100% فئران C57BL/6 ضمن ح 48 و 25-50% من الفئران داخل 2-6 ح6،،من823 (بريل، بيانات غير منشورة، عام 2016). قيداً رئيسيا للأسلوب هو التغير في خثرة حجم24 (الشكل 4)، الذي يتم الاحتفال به بعد (ح 6) قصيرة الأجل وطويلة الأجل (ح 48) IVC تضيق. الأسباب الكامنة وراء هذا التغير (نظراً لأن نفس الشروط، مثل الفاصلة، التخدير إلخ، تستخدم) تظل غامضة ولكن يمكن للمرء أن يتكهن التشريحية أن الاختلافات بين الفئران (مثلاً، عرض IVC وعدد وموقع كل من الجانب والخلف فروع) تكمن وراء هذه الظاهرة. التغير في حجم خثرة يجعل انتشار تجلط الدم (% من الفئران مع خثرة) النتائج الرئيسية. يمكن مقارنة انتشار الجلطة باستخدام جدول للطوارئ واختبار فيشر الضبط. واحدة من التجارب كان استثناء عند خثرة انخفاض حجم مع انتشار الجلطة نفسها بعد أن لوحظ حقن الأجسام المضادة التي تحول دون بودوبلانين 7.
هذا الأسلوب مفيد بشكل خاص عند بدء تجلط وريدي يتم دراستها. أنها تسمح للتحقيق في الأحداث المبكرة في جدار السفينة، مثل تجنيد الخلايا، مما يؤدي في نهاية المطاف إلى تجلط الدم. يمكن تقييم آثار thrombotic برو أو مكافحة المخدرات باستخدام هذا النموذج مع انتشار تجلط الدم يجري قراءات الأولية. تضيق ح 48 ينطبق على تكشف النمط الظاهري لمكافحة الخثاريه، بينما يمكن أن تضيق ح 6 إذا كان المتوقع النمط الظاهري بروثرومبوتيك. يمكن أيضا إجراء التحليل النسيجي خثرة والمحيطة IVC الجدار.
يبقى السؤال عما إذا كانت فروع الجانب ينبغي أن تكون متصلة أو ترك البراءات مفتوحة. وقد أظهرت مجموعة واحدة أن ربط الفروع الجانبية لا يزيد حجم خثرة والموقع من جانب فرع أقرب من 1.5 ملم إلى موقع ربط IVC يخل بشكل كبير خثرة التنمية25. إغلاق فروع جانبية قد حمل إصابة غشائي في نفوسهم وأيضا زيادة وقت الجراحة26. في أيدينا، عدم إغلاق فرع الجانب إلى حد كبير يقلل من انتشار تجلط الدم (وصولاً إلى 10-30% بعد تضيق ح 48؛ بريل، غير منشورة) و لذلك نحن اضطر جميع فروع الجانب المرئي.
ومن الناحية المثالية، ينبغي أن تستخدم عناصر تحكم ليتيرماتي الفئران، حتى على نفس الخلفية ولكن من مصادر مختلفة، قد يؤدي إلى انتشار الجلطة مختلفة قليلاً. إذا كان هو دراسة تأثير دفت نفسها على أية معلمات (على سبيل المثال، الكيمياء الحيوية)، ينبغي استخدام الحيوانات تعمل بالشام. تعمل الشام الفئران الخضوع لنفس الإجراء ولكن حرف مزدوج حول IVC يتم إغلاق فضفاضة وبقي هناك دون إنتاج تضيق.
الخطأ الأكثر شيوعاً (خطوة حاسمة) في هذا البروتوكول هو محاولة لفصل الشريان الاورطي و IVC عدم التحديد في الزاوية بين السفن ولكن أقل قليلاً، الذي عادة ما ينتج النزيف. عند حدوث نزيف الانتعاش الجيد للماوس يصبح من غير المحتمل وينصح بالتوقف عن التجربة و euthanize الحيوان. عادة، الفئران استرداد جيدا، والتحرك داخل القفص ولا تفقد الوزن إلى حد كبير. ونحن نوصي باستخدام الفئران أعلاه 20 غرام لكل من الذكور والإناث وإبقاء الحيوانات (خاصة الذكور) في أقفاص فردية بعد الجراحة حتى نهاية التجربة لتجنب القتال والإصابة. وقد أفيد في نموذج (كهربائياً) آخر من دفت أن الفئران الذكور تنتج الجلطات أكبر من الإناث27. لم يكشف تحليل للبيانات المتوفرة لدينا عن اختلاف كبير في انتشار تجلط الدم بين الفئران الذكور والإناث (بريل، غير منشورة). ولذلك، الباحثون مدعوون إلى القيام بتجارب باستخدام نموذج IVC تضيق على الفئران من كلا الجنسين.
انهيار خياطة الجروح و/أو المواد الغذائية الأساسية قد لا يمكن استبعاد تجارب طويلة خاصة في (في الأسبوع وأطول). وهكذا، ينبغي التحقق من الفئران على الأقل مرتين في يوم على وجه التحديد لسلامة خياطة وينبغي إيلاء اهتمام خاص لظهور آثار الدم على الفراش القفص.
تجدر الإشارة إلى أنه، مثل أي نموذج حيوانية أخرى، قد تضيق IVC حدودها من حيث الترجمة إلى البشر. على سبيل المثال، لا تملك إيفكس مورين الصمامات، بينما يطور دفت البشرية داخل الصمامات الوريدية. أيضا، أن البشر لديهم اتجاه العمود الفقري عمودي مع المضخة العضلية يجري إليه هامة تسارع تدفق دم في الأوردة. وفي المقابل، لدى الفئران الاتجاه الأفقي في اتجاه العمود الفقري مع أي دور لضخ العضلات في دعم الدم العائد إلى القلب. ينبغي النظر في هذه القيود عند ترجمة البيانات الماوس إلى الأمراض التي تصيب البشر.

تجلط الأوردة العميقة (DVT) هو تطوير الجلطات في الأوردة العميقة، عادة (ولكن ليس فقط) في الساقين. في أدوات العطف مع الانسداد الرئوي (PE؛ عينت معا "الجلطات الوريدية"، إعطاؤهم) فإنه يطور في الأمريكيين 900,000 تقريبا سنوياً ويمثل قضية صحية خطيرة ومشكلة اقتصادية1،2. PE، مضاعفات دفت، يحدث عندما يحصل فصل من موقعة أولية خثرة ويصل إلى الرئتين، مما قد يسبب قصور في التنفس والموت. أن حصيلة إعطاؤهم يتجاوز معدل الوفيات الناجمة عن الإيدز، الحوادث الثدي السرطان وحركة المرور، والجمع بين3.
العوامل الرئيسية التي تسبب دفت إلى جانب يعرف الأسباب، مثل السرطان أو الصدمات النفسية، هو انعدام الحراك 4،5. وهذا قد ينتج عن الجراحة (خاصة العظام)، والشلل، والرحلات الجوية الطويلة أو لأسباب أخرى. تدفق الدم في الأوردة يعتمد على ضخ العضلات وذلك تدفق نتائج التثبيت أطرافهم في ركود الدم في الصمامات الوريدية، الأمر الذي يؤدي إلى تجلط الدم. وغرض الأسلوب الموصوفة هنا أن الخص هذه الدم تدفق التشويه6،7. يحاكي تقييد التدفق الجزئي في الأجوف فينا أدنى (IVC) الشروط التي تم إنشاؤها في الصمامات الوريدية البشرية والنتائج في تكوين خثرة في هيكل مماثل للجلطات البشرية6. جزء كبير من خثرة الأحمر ويتكون من خلايا الدم الحمراء، فيبرينوجين والتأسيس للصفائح الدموية. وقد الجلطات صغيرة "الجزء الأبيض" أثرت في الصفائح الدموية (الشكل 1)، التي تشبه "خطوط زان" الموصوفة في الجلطات الوريدية البشرية. تحتوي كلا الجزأين لخثرة أيضا8من العَدلات، التي هي من بين الخلايا الأولى يعينون في موقع خثرة المستقبل6،9. العَدلات في الجزء الأحمر طرد الفخاخ خارج الخلية العَدلات (شبكات)، بينما يبدو أن العَدلات في الجزء الأبيض خالية من شبكات8. وعلى نحو مماثل إلى دفت البشرية، يرافق تجلط الدم في الفئران مستويات البلازما مرتفعة د-ديمر (الشكل 2). الهيبارين منخفضة الوزن الجزيئي (انوكسابارين)، المستخدمة للوقاية من جلطات الأوردة العميقة في المرضى، كما يمنع تجلط الدم في الفئران. ميزة هامة من هذا الأسلوب غياب9من تعرية بطانية، التي من سمات البشرية دفت10. هذه الميزة يجعل تضيق IVC نموذج دفت ذات صلة سريرياً أكثر مما كان، على سبيل المثال، تنظيم دورات تعريفية تجلط الدم عن طريق كلوريد الحديد، مما يؤدي إلى تعرية بطانية والتي تتكون الجلطات الغالب من الصفائح الدموية11، 12،13. نموذج ركود تام في IVC هو المفضل من قبل عدة فرق14،،من1516. على النقيض من تضيق، الذي يحتفظ فيه تدفق المتبقية في السفينة، وتطبيق ركود تماما يتوقف التدفق ومما يحد من إمكانية الحصول على المواد التي تدار النظامية إلى موقع تجلط الدم. أيضا، أنه يبدو أن الآليات الأساسية تجلط الدم الناجم عن تضيق وركود مختلفة: تضيق النتائج في تطوير التهاب المحلية (تنشيط البطانة، الإفراج عن بلادي ويبيل الهيئة المحتوى، وتوظيف الخلايا المناعية و الصفائح الدموية لجدار الوعاء الدموي) مما تسبب في "إيمونوثرومبوسيس"،من69،17، بينما يبدو ركود للحث على الأحرى تجلط الدم، على وجه الخصوص، على أساس معامل الأنسجة وتجلط الدم الأخرى و الآليات ذات الصلة فيبرينوليسيس18،،من1920. وبالتالي، تعكس النماذج التي تضيق وركود قليلاً عن مختلف جوانب التنمية خثرة وريدية، على الرغم من أن التأكيد قد تتداخل مع آلياتها. الالكتروليتى IVC النموذجي (EIM) دفت،من21إلى22 الحث خثرة أوككلودينج إلا جزئيا جدار الوعاء. ولذلك، أنها ملائمة لاختبار آثار الإدارة المنهجية للعقاقير المختلفة على نمو خثرة. ومع ذلك، يفترض هذا النموذج، الإخلال بسلامة الجدار IVC (إدراج إبرة) وتنظيم دورات تعريفية تجلط الدم بالتيار الكهربائي مما يجعل أهمية هذه الآلية الفيزيولوجية المرضية على الأقل قابلة للطعن.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Charles River</td><td></td><td>8 - 10 weeks old, bothe genders</td></tr><tr><td>Scissors</td><td>WPI</td><td>15922</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 5/45 forceps</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Prolene suture</td><td>Ethicon</td><td>W8725</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Vicryl suture</td><td>Ethicon</td><td>W9981</td><td></td></tr><tr><td>Cotton buds</td><td>Spar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millswabs sterile&amp;nbsp;</td><td>Millpledge veterinary&amp;nbsp;</td><td>611950</td><td></td></tr><tr><td>Drapes</td><td>Kruuse</td><td>141765</td><td></td></tr><tr><td>Glucose Saline-Aqupharm3</td><td>Animal Care</td><td>XVD589</td><td></td></tr><tr><td>Clear H&lt;span class=&quot;font6&quot;&gt;&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;&lt;/span&gt;&lt;span class=&quot;font5&quot;&gt;0 HydroGel 98% sterile water&amp;nbsp;&lt;/span&gt;</td><td>Clearh2o</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane vaporizer</td><td>General Anaesthetic Services</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterilizer Steri350</td><td>Inotech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope Olympus SZX10</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis

العميق الوريد تجلط الدم (DVT) ولها مضاعفات مدمرة، الانسداد الرئوي، وهي مشكلة صحية خطيرة مع ارتفاع معدل الوفيات. آليات لتكوين خثرة في الأوردة تظل غامضة. انعدام الحركة (مثلاً، بعد عملية جراحية أو الرحلات الطويلة) واحد من العوامل الرئيسية التي تؤدي إلى دفت. الفيزيولوجية المرضية نتيجة للافتقار إلى التنقل من ركود تدفق الدم في الصمامات الوريدية. هنا، هو وصف نموذج الذي يحاكي هذا اضطراب التدفق كعامل تخثر القيادة. في هذا النموذج، يتم إنشاء قيد التدفق الجزئي (تضيق) في الأجوف فينا أدنى (IVC). ويؤدي إغلاق حوالي 90% من التجويف IVC ح 48 تنمية الجلطات هيكلياً مشابهة لتلك الموجودة في البشر. أوجه التشابه: ط) أكثر من حجم خثرة الأحمر، أي، يتكون من خلايا الدم الحمراء وفيبرينوجين، ثانيا) وجود جزء أبيض (خطوط زان)، ثالثا) غير-تجريد أحادي الطبقة غشائي ومستويات البلازما رابعا) مرتفعة د-ديمر، والخامس) إمكانية لمنع تجلط الدم من الهيبارين منخفض الوزن الجزيئي. وتشمل القيود حجم متغير من الجلطات، والحقيقة أن نسبة مئوية معينة من الفئران البرية من نوع (0-35%) قد لا تنتج من خثرة. بالإضافة إلى الملاحظة البصرية والقياس، قد تصور الجلطات بالتكنولوجيات غير الغازية، مثل الموجات فوق الصوتية، مما يسمح بمراقبة ديناميات التنمية خثرة. في نقاط زمنية أقصر (ح 1-6)، يمكن تطبيق الفحص المجهري إينترافيتال لمراقبة مباشرة الأحداث (مثلاً، تجنيد الخلايا لجدار الوعاء الدموي) السابقة لتكوين خثرة. استخدام هذا الأسلوب من عدة فرق العالم جعلت من الممكن الكشف عن الآليات الأساسية لبدء دفت وتحديد الأهداف المحتملة التي قد تكون مفيدة للوقاية منه.

ويرد هنا، نموذج دفت الناجمة عن تدفق التشويه في IVC. التعريفي لتضيق في IVC يبدأ تشويه وركود تدفق الدم، وبعد فترة من الوقت (في هذه الحالة، 48 ساعة) النتائج في تطوير خثرة، دفت هيكلياً مشابهة للبشرية الجلطات (الشكل 1أ). وجود خثرة الداخل IVC يمكن كشفها بسهولة بصريا (الشكل 1ب). تشابه هام بين نموذج ودفت البشرية من مستويات البلازما مرتفعة د-ديمر (الشكل 2). د-ديمر نتاج تدهور فيبرينوجين ووجودها في الدم يشير إلى أن يحدث عملية الخثاريه نشطة.
ويرد النموذج خطوة بخطوة في الشكل 3أ-ج. IVC يتعرض لها بعناية ويتم إجراء ثقب بين الشريان الاورطي وفي IVC ويتم سحبها خياطة (برلين 7-0) من خلال الثقب في أسفل IVC. ثم هو متصلة في IVC قبل الخياطة على فاصل (30 غ إبرة، الشكل 3د)، بعد الذي يتم إزالته فاصل. يسمح هذا الإجراء لحوالي 90% إغلاق التجويف IVC ترك ال 10% المتبقية المتعلقة بالبراءات. وهذا ما يضمن ركود تدفق الدم مما يؤدي في النهاية إلى تجلط الدم.
يوضح الشكل 4 العيب الرئيسي للنموذج، حجم متغير خثرة. تنفيذ كافة هذه الجلطات تم الحصول عليها في نفس التجربة على الفئران الذكور البرية نوع من نفس الأصل والعمر ووزن الجسم مماثلة. على الرغم من أن جميع الفئران تنتج الجلطات (تفشي تجلط الدم بنسبة 100%)، يتفاوت حجمها واضح في طائفة واسعة.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
رقم 1: خثرة الممثل بعد تقييد ح 48/تضيق. (أ) خثرة نموذجية بعد 48 ساعة IVC تضيق. ملاحظة الأحمر (خلايا الدم الحمراء التخصيب) والأجزاء البيضاء (الغنية بالصفائح الدموية). IVC (ب) مع (يسار) أو بدون (حق) خثرة. تغيير حجم أشرطة = 2 مم- <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
الشكل 2 : مستويات البلازما د-ديمر مرتفعة بعد تطبيق تضيق IVC. تعرض الفئران لتضيق IVC. الدم وتتخذ في النقاط الزمنية المشار إليها، استقرت 1:9 مع 3.8% سترات الصوديوم، البلازما أعد الطرد المركزي (2,300 س ز، 5 دقيقة) وهي التي تحدد مستويات د-ديمر مجموعة أليسا وفقا لإرشادات الشركة المصنعة. تعيين الدوائر تعمل بالشام الفئران، الصلبان المعين تضيق IVC. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
الشكل 3: تدفق القيد/تضيق في الوريد الأجوف السفلي (IVC) نموذج دفت في الفئران. تعرض مراحل متتالية من النموذج. (أ) يتم إجراء ثقب بين الشريان الاورطي وفي IVC ويتم سحبها خياطة من خلال ذلك حولها IVC. (ب) عقده مغلق على فاصل (إبرة 30 جرام). (ج) هو إزالتها فاصل: رأي النهائية التي يراها الطبيب الجراح قبل إغلاق الماوس. خط أصفر متقطع فىالوقت IVC. لرف تقف على الوريد الكلوي الأيسر. تغيير حجم أشرطة = 0.2 مم. (د) فاصل (إبرة 30 جرام). تغيير حجم أشرطة = 2 مم- <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
الشكل 4 . تغير حجم خثرة. تعرض الفئران لتضيق IVC ح 48. قدم الجلطات حصل في التجربة نفسها. أشرطة مقياس 2 مم- <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis at JoVE.com

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

يصف لنا هنا تضيق في الأجوف فينا أقل شأنا كنموذج مورين تجلط الوريد العميق. ويجمل هذا النموذج تقييد تدفق الدم، أحد المشغلات الكبرى تجلط وريدي في البشر.

تضيق الأجوف فينا أدنى: نموذج موريني تجلط الوريد العميق

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

stenosis-inferior-vena-cava-murine-model-deep-vein

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

23.9K Views.  University of Birmingham. يصف لنا هنا تضيق في الأجوف فينا أقل شأنا كنموذج مورين تجلط الوريد العميق. ويجمل هذا النموذج تقييد تدفق الدم، أحد المشغلات الكبرى تجلط وريدي في البشر.

Video: Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand (CD40L), human B cells can be expanded without difficulties from small amounts of peripheral blood within 14 days to very large amounts of highly-pure CD40-B cells (&gt;109 cells per patient) from healthy donors as well as cancer patients1-4. CD40-B cells express important lymph node homing molecules and can attract T cells in vitro5. Furthermore they efficiently take up, process and present antigens to T cells6,7. CD40-B cells were shown to not only prime na&iacute;ve, but also expand memory T cells8,9. Therefore CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been studied as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cell-based immunotherapy1,5,10. In order to further study whether CD40-B cells induce effective T cell responses in vivo and to study the underlying mechanism we established a cell culture system for the generation of murine CD40-activated B cells. Using splenocytes or purified B cells from C57BL/6 mice for CD40-activation, optimal conditions were identified as follows: Starting from splenocytes of C57BL/6 mice (haplotype H-2b) lymphocytes are purified by density gradient centrifugation and co-cultured with HeLa cells expressing recombinant murine CD40 ligand (tmuCD40L HeLa)11. Cells are recultured every 3-4 days and key components such as CD40L, interleukin-4, -Mercaptoethanol and cyclosporin A are replenished. In this protocol we demonstrate how to obtain fully activated murine CD40-B cells (mCD40B) with similar APC-phenotype to human CD40-B cells (Fig 1a,b). CD40-stimulation leads to a rapid outgrowth and expansion of highly pure (&gt;90%) CD19+ B cells within 14 days of cell culture (Fig 1c,d). To avoid contamination with non-transfected cells, expression of the murine CD40 ligand on the transfectants has to be controlled regularly (Fig 2). Murine CD40-activated B cells can be used to study B-cell activation and differentiation as well as to investigate their potential to function as APC in vitro and in vivo. Moreover, they represent a promising tool for establishing therapeutic or preventive vaccination against tumors and will help to answer questions regarding safety and immunogenicity of this approach12.

In this video, we demonstrate the procedure of CD40-activation and expansion of murine B cells from splenocytes of C57BL/6 mice, which can be used as a model antigen-presenting cell (APC) to study induction of immunity.

الفئران نموذج تفعيل CD40 - B من الخلايا

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential therapeutic compounds (1). New compounds to be utilized in the treatment and prevention of DVT are currently being developed. The delivery of potential therapeutic antagonist compounds to an affected thrombosed vein has been problematic. In the context of therapeutic applications, a model that uses partial stasis and consistently generates thrombi within a major vein has been recently established. The Electrolytic Inferior vena cava Model (EIM) is mouse model of DVT that permits thrombus formation in the presence of continuous blood flow. This model allows therapeutic agents to be in contact with the thrombus in a dynamic fashion, and is more sensitive than other models of DVT (1). In addition, this thrombosis model closely simulates clinical situations of thrombus formation and is ideal to study venous endothelial cell activation, leukocyte migration, venous thrombogenesis, and to test therapeutic applications (1). The EIM model is technically simple, easily reproducible, creates consistent thrombi sizes and allows for a large sample (i.e. thrombus and vein wall) which is required for analytical purposes.

Electrolytic Inferior Vena Cava Model EIM of Venous Thrombosis

The electrolytic induction of endothelial activation to the internal surface of the Inferior Vena Cava results in venous type thrombus formation due to endothelial activation and partial blood stasis, two components of Virchow's triad.

كهربائيا الوريد الأجوف السفلي النموذجي (EIM) من التخثر الوريدي

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential ...

Medicine

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

الفأرة النموذجي ركود كاملة من الوريد الأجوف السفلي التخثر

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological deficiencies. GVHD is caused by mature alloreactive T cells present in the bone marrow graft that are infused into the recipient and cause damage to host organs. However, in mice, T cells must be added to the bone marrow inoculum to cause GVHD. Although extensive work has been done to characterize T cell responses post transplant, bioluminescent imaging technology is a non-invasive method to monitor T cell trafficking patterns in vivo. 
Following lethal irradiation, recipient mice are transplanted with bone marrow cells and splenocytes from donor mice. T cell subsets from L2G85.B6 (transgenic mice that constitutively express luciferase) are included in the transplant. By only transplanting certain T cell subsets, one is able to track specific T cell subsets in vivo, and based on their location, develop hypotheses regarding the role of specific T cell subsets in promoting GVHD at various time points. At predetermined intervals post transplant, recipient mice are imaged using a Xenogen IVIS CCD camera. Light intensity can be quantified using Living Image software to generate a pseudo-color image based on photon intensity (red = high intensity, violet = low intensity). 
Between 4-7 days post transplant, recipient mice begin to show clinical signs of GVHD. Cooke et al.1 developed a scoring system to quantitate disease progression based on the recipient mice fur texture, skin integrity, activity, weight loss, and posture. Mice are scored daily, and euthanized when they become moribund. Recipient mice generally become moribund 20-30 days post transplant. 
Murine models are valuable tools for studying the immunology of GVHD. Selectively transplanting particular T cell subsets allows for careful identification of the roles each subset plays. Non-invasively tracking T cell responses in vivo adds another layer of value to murine GVHD models.

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Murine bone marrow transplantation is a widely used technique to study immunological mechanisms governing graft-versus-host disease in humans. The ability to monitor T cell trafficking patterns in vivo allows for detailed analysis of the development and perpetuation of T cell responses during graft-versus-host disease.

تحريض الطعم ضد المضيف المرض و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; مراقبة الخلايا T باستخدام نموذج MHC المطابقة الفئران

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, with the prevalence increasing.2 As with other diseases, animal models of allergic airway disease greatly facilitate understanding of the underlying pathophysiology, help identify potential therapeutic targets, and allow preclinical testing of possible new therapies. Models of allergic airway disease have been developed in several animal species, but murine models are particularly attractive due to the low cost, ready availability, and well-characterized immune systems of these animals.3 Availability of a variety of transgenic strains further increases the attractiveness of these models.4 Here we describe two murine models of allergic airway disease, both employing ovalbumin as the antigen. Following initial sensitization by intraperitoneal injection, one model delivers the antigen challenge by nebulization, the other by intratracheal delivery. These two models offer complementary advantages, with each mimicking the major features of human asthma.5
The major features of acute asthma include an exaggerated airway response to stimuli such as methacholine (airway hyperresponsiveness; AHR) and eosinophil-rich airway inflammation. These are also prominent effects of allergen challenge in our murine models,5,6 and we describe techniques for measuring them and thus evaluating the effects of experimental manipulation. Specifically, we describe both invasive7 and non-invasive8 techniques for measuring airway hyperresponsiveness as well as methods for assessing infiltration of inflammatory cells into the airways and the lung. Airway inflammatory cells are collected by bronchoalveolar lavage while lung histopathology is used to assess markers of inflammation throughout the organ. These techniques provide powerful tools for studying asthma in ways that would not be possible in humans.

Experimental mouse models of allergic asthma offer new possibilities for studying disease pathogenesis and developing new therapeutics. These models are well suited to measuring factors governing the allergic immune response, airway inflammation, and pulmonary pathophysiology.

الفئران نموذج من الربو المستحثة مسببات الحساسية

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

زرع الوريد الأجوف السفلي مداخلة الكسب غير المشروع في نموذج الفأر

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

مقايسة الجلطة الوريدية المحسنة في نموذج سرطان الفئران باستخدام مقاطع الأوعية الدموية

Venous Thrombosis Assay in a Mouse Model of Cancer

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis (CAT). Deep venous thrombosis is a common complication in cancer survivors and can be potentially fatal. The current murine venous thrombosis models typically involve a complete or partial mechanical occlusion of the inferior vena cava (IVC) using a suture. This procedure induces a total or partial stasis of blood and endothelial damage, triggering thrombogenesis. The current models have limitations such as higher variability in clot weights, significant mortality rate, and prolonged learning curve. This report introduces surgical refinements using vascular clips to address some of these limitations. Using a syngeneic colon cancer xenograft mouse model, we employed customized vascular clips to ligate the infrarenal vena cava. These clips allow residual lip space similar to a 5-0 polypropylene suture after IVC ligations. Mice with the suture method served as controls. The vascular clip method resulted in a consistent reproducible partial vascular occlusion and greater clot weights with less variability than the suture method. The larger clot weights, greater clot mass, and clot to the IVC luminal surface area were expected due to the higher pressure profile of the vascular clips compared to a 6-0 polypropylene suture. The approach was validated by gray scale ultrasonography, which revealed consistently greater clot mass in the infrarenal vena cava with vascular clips compared to the suture method. These observations were further substantiated with the immunofluorescence staining. This study offers an improved method to generate a venous thrombosis model in mice, which can be employed to deepen the mechanistic understanding of CAT and in translational research such as drug discovery.

تسليط الضوء على المؤلف: تطوير أبحاث تجلط الدم المرتبطة بالسرطان في نماذج القوارض 

This article aims to present an optimized method for assessing venous thrombosis in a mouse cancer model, using vascular clips to achieve venous ligation. Optimization minimizes variability in thrombosis-related measurements and enhances relevance to human cancer-associated venous thrombosis.

مقايسة الجلطة الوريدية في نموذج فأر للسرطان

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis ...

Cancer Research

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death through pulmonary embolism or results in the post-thrombotic syndrome, characterized by chronic leg pain, swelling, and ulceration, or in chronic pulmonary hypertension resulting in significant chronic respiratory compromise. This is the most common cardiovascular disease after myocardial infarction and ischemic stroke and is a clinical challenge for all medical disciplines, as it can complicate the course of other disorders such as cancer, systemic disease, surgery, and major trauma.
Experimental models are necessary to study these mechanisms. The stasis model induces consistent thrombus size and a quantifiable amount of thrombus. However, it is necessary to systematically ligate side branches of the inferior vena cava to avoid variability in thrombus sizes and any erroneous data interpretation. We have developed a non-invasive technique to measure thrombus size using ultrasonography. Using this technique, we can assess thrombus development and resolution over time in the same animal. This approach limits the number of mice required for quantification of venous thrombosis consistent with the principle of replacement, reduction, and refinement of animals in research. We have demonstrated that thrombus weight and histological analysis of thrombus size correlate with measurement obtained with ultrasonography. Therefore, the current study describes how to induce deep vein thrombosis in mice using the inferior vena cava stasis model and how to monitor it using high frequency ultrasound.

The present protocol describes the steps to obtain venous thrombosis using a stasis model. In addition, we are using a non-invasive method to measure thrombus formation and resolution over time.

تجلط الوريد العميق الناجم عن ركود في الفئران التي يرصدها الموجات فوق الصوتية عالية التردد

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

تضيق الأجوف فينا أدنى: نموذج موريني تجلط الوريد العميق

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

الفئران نموذج تفعيل CD40 - B من الخلايا

كهربائيا الوريد الأجوف السفلي النموذجي (EIM) من التخثر الوريدي

الفأرة النموذجي ركود كاملة من الوريد الأجوف السفلي التخثر

تحريض الطعم ضد المضيف المرض و

الفئران نموذج من الربو المستحثة مسببات الحساسية

زرع الوريد الأجوف السفلي مداخلة الكسب غير المشروع في نموذج الفأر

مقايسة الجلطة الوريدية في نموذج فأر للسرطان

مقايسة الجلطة الوريدية في نموذج فأر للسرطان

مقايسة الجلطة الوريدية في نموذج فأر للسرطان

تجلط الوريد العميق الناجم عن ركود في الفئران التي يرصدها الموجات فوق الصوتية عالية التردد