Bu teknolojinin en büyük avantajı fare kalp ya hızlı görüntüleme için izin olmasıdır. Ve gen terapisi nden sonra hava kanallarının varlığını gözlemlemek için kullanılabilir. Bu yöntem gelişim kardiyolojisi hakkında bilgi sağlasa da nöroloji ve pulmonoloji gibi diğer sistemlere de uygulanabilir.
Genellikle bireyler bu teknikle mücadele edeceklerdir, çünkü yetişkin fare kalbinin bir görüntülemesini yapmak zor olabilir ve konfokal ve ters mikroskopi gibi diğer geleneksel tekniklerden farklıdır. 405 nanometre, 473 nanometre ve 532 nanometre üç dalga boyları ile sürekli dalga lazer yerleştirin. Daha sonra, ayna bir yapıştırın ve kiriş için 45 derece ayna düzlemi ile hizalayın.
Bu, lazeri çift taraflı aydınlatma kurulumlarını oluşturan ışın ayırıcıya yönlendirir. Daha sonra, 50 milimetre çapında nötr yoğunluk filtresi, bir ışın genişletici ve 25 milimetre çapında iğne deliği, birbirinden 150 milimetre konumlandırılmış bir ışın geçmek. Kirişi iğne deliğinden 150 milimetre uzaklıktaki 50-50 ışın bölücüse geçirin.
Sonra, aynayı ışın ayırıcısından 150 milimetre, ileri ışına 90 derece, ve ayna düzlemi ışına 45 derecelik açıyla hizala. Sonra, aynayı aynadan üç 100 milimetre uzakta yerleştirin ve ayna düzleminin ayna ikiden yansıyan ışınına 45 derecelik bir açıyla hizala. Bu yansıyan ışını çift aydınlatma Lı ışık sayfasının bir tarafını oluşturmak için kullanın.
Işın ayırıcısının uzak tarafına, ayna yıyerleştir inki, böylece ayna düzlemi 45 derecede, ileri yönde yayılan ışına kadar. Çift aydınlatma ışık sayfasının ikinci tarafını oluşturmak için ayna beşten yayılan ışını kullanın. Daha sonra, sistemik moda çift taraflı aydınlatma sistemi kurmak.
Silindirik lensi ayna üçten iki 150 milimetre uzağa, diğer bir özdeş silindirik lensi ise ayna beşten 150 milimetre uzakta, çift aydınlatma düzeninin diğer tarafına yerleştirin. Daha sonra, her biri silindirik lenslerle aynı hizada, 90 derecelik kirişi yansıtacak şekilde 50 milimetrelik mesafelere iki ayna yerleştirin. Işık tabakasının her iki tarafında, bir çift mercekten akromatik bir doublet oluşturur, ilk lens önceki aynadan 100 milimetre uzaklıkta ve bir inç çapında ve odak uzaklığı 100 milimetredir.
İkinci lens lens bir 160 milimetre yerleştirilmelidir, bir inç çapı ile, ve odak uzaklığı 60 milimetre. Daha sonra, aydınlatma hedeflerini önceki akromatik doublet'lerden bir ve iki 150 milimetre yerleştirin, böylece ışınla aynı hizada olurlar. Hedeflerden yayılan ışın, numunelerin görüntülenmesi için ışık sayfasını oluşturur.
İlk olarak, floresan boncuk örneğini, önceden ısıtılmış kırılma indisi eşleştirme çözeltisinde 1'den 150'ye kadar olan 0,53 mikrometre boncuk çözeltisini seyrelterek, yüzde bir düşük erime ile agarose'u işaret ederek hazırlayın. Sonra, 12 milimetre iç çapı ile borosilikat cam boru bir parça kullanın, ve 18 milimetre bir dış çapı, 30 milimetre uzunluğunda. Pipet borosilikat boru boncuk agarose çözeltisi ve oda sıcaklığında katılaşmak için agarose sağlar.
Şimdi, bir 3-D baskılı ABS odası doldurun 99.5 yüzde gylcerol çözeltisi ile. Borosilikat cam boru yerleştirin, boncuk içeren, odanın içine. ABS haznesinde numunenin hareketini ve yönünü kontrol etmek için borosilikat cam boruya 3 boyutlu motorlu çeviri aşaması takın.
Ardından, saniyede 30 kare hızında sCMOS kamerayı kullanarak görüntü elde etmek için özel tasarlanmış yazılımkullanın. Motor denetleyicisini kullanarak, numuneyi yanal yönde bir milimetre hareket ettirin ve numunenin tamamı görüntülene ne kadar görüntülenene kadar her bir milimetrelik artışla görüntüler elde edin. Bir görselleştirme yazılımı kullanarak edinilen görüntüleri yığını ve bu boncuk görüntüleri kullanarak sistemin nokta yayma işlevini ölçmek.
PH'sı 7,5 olan bir kırılma indisi eşleştirme çözümü kullanın ve eşleşen çözeltiye yüzde bir agarose çözün. Kırgın indeks eşleştirme çözeltisine yüzde bir agarose çözünmüş olarak temizlenmiş bir yetişkin fare kalp örneği yerleştirin. Daha sonra, borosilikat cam boru içine örnek ekleyin ve agarose oda sıcaklığında katılaşmak için izin.
Numunenin hareketini ve yönünü kontrol etmek için borosilikat cam boruya 3-B baskılı ABS haznesine 3-B motorlu çeviri aşaması takın. Numuneyi, çift aydınlatma sistemi tarafından oluşturulan Gauss kirişinin merkezinde olacak şekilde yerleştirin. Ardından, sCMOS kameranın satın alma oranını saniyede 30 kare olarak ayarlayın.
Şimdi, motor kumandasını kullanarak, numuneyi eksenel yönde bir milimetre hareket ettirin ve her bir milimetrelik artışta görüntüler elde edin. Tüm örnek görüntülenene kadar devam edin. Bir görselleştirme yazılımı kullanarak elde edilen görüntüleri yığını.
Bu görüntü yığınlarını kullanarak 3-B görüntüleri geliştirin. Bunu başarmak için, daha önce belirlenen nokta yayma işlevini deconvolve ve elde edilen görüntü yığınları için kullanmak. Son olarak, kalbin hatlarını gözlemlemek için bir piksel eşik yoğunluğu değeri ayarlayın ve bu gri ölçek yoğunluğuna bağlı olarak görüntülere sözde renk ekleyin.
Doğum sonrası ilk günde, diğer özelliklerin yanı sıra kapakçıklar, atriyum, ventrikül, pektinate kas ve trabekülasyon görselleştirebilirsiniz. Doğumdan sonraki yedinci günde, özellikler daha da tanımlanır. Atriyum, ventrikül, ventriküler kavite boyutları ve ventrikül duvar kalınlığı belirgindir.
Kalp içinde kardiyomiyosit farklılaşmasını incelemek için, heterozigot knock-in fareler kardiyomiyositgöstermek için cre-labeled edildi. Etiketli hücreler burada, her düzlem yönünde gösterilir. Üç uçak birleşerek kalbin 3 boyutlu bir görüntüünü oluşturdu.
Inset içinde kırmızı daire li bölge netlik tekniği geçiyor ve borosilikat cam boru içine yerleştirilen sonra iki yarı saydam fare kalpleri gösterir. Doğum sonrası fareleri incelemenin yanı sıra, görüntüleme sistemi yetişkin fare kalbini incelemek için de kullanılabilir. Burada, GFP etiketli ROMK kanalları 7,5 ay olarak gösterilir.
Bunlar çoğunlukla ventriküler duvarda bulunmuştur. Bir kez hakim, bu teknik bir ila iki dakika içinde yapılabilir. Bu yordamı çalışırken, tüp içinde örnek etrafında tüm kabarcıklar kaldırmak için önemlidir.
Görüntü yığınlarının otomatik bölümlenmesi gibi diğer yöntemler, kardiyovasküler yaralanma ve rejenerasyon ile ilgili ek soruları yanıtlamak için gerçekleştirilebilir. Gelişiminden sonra, bu teknik araştırmacılar tarafından farelerde doğum sonrası ve erişkin gelişim evrelerinde kardiyak mimariyi incelemek için kullanılmıştır.
