لذلك يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في عملية اكتشاف المخدرات حول كيفية سلوك دواء معين في كائن حي. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هو أنه يسمح لأحجام العينة الكبيرة ليتم فحصها بسرعة وكفاءة. ولهذه التقنية بالفعل تأثير كبير في اكتشاف المخدرات من خلال التمكين من إجراء تقييم شديد الحساسية لآثار المرشحين للمخدرات.
هذه الطريقة توفر رؤى ميكانيكية جديدة في بداية وتطور الأمراض الخاطئة. وعلاوة على ذلك، يمكن تطبيق هذه الطريقة أيضا على أنظمة أخرى، مثل الشيخوخة والفحوصات الجينية. نحن متحمسون جدا من قبل هذه الفرصة لإدخال أساليب مادية جديدة في الفضاء من اكتشاف المخدرات.
هذه demonstartions من هذا الأسلوب أمر بالغ الأهمية كما تتطلب خطوات الفرز على دراية عالية مع هذه التقنية التلقائية نوفو. (سيثبت الإجراء أن يكون (سام كاسفورد مساعد بحث من مختبرنا قبل البدء في الإجراء ، أضف 2.2 ملليلتر من كل مركب دوائية عند التركيز المناسب إلى ستة ألواح 5-fluorodeoxyuridine أو FUDR لكل سلالة دودة ، عن طريق نشر المركب بعناية على سطح اللوحة بالكامل ، وتجفيف اللوحات تحت ظروف معقمة.
في حين أن الصفائح هي التجفيف، واستخدام 15 ملليلتر من M9 العازلة لغسل الديدان من خمسة لوحات عامل نمو النعمة الخيطية الغنية، ونقل الديدان المحررة في أنبوب مخروطي للطرد المركزي. إعادة تعليق الديدان الخيطية في ثلاثة ملليلترات من M9 العازلة الطازجة للحصول على كمية من عدد الديدان في مرحلة اليرقات L4، وبذور 700 L4 اليرقات على كل من لوحات FUDR الجافة الستة لكل سلالة دودة، لكل مركب. عندما تم زرع جميع الديدان الخيطية ، ضع الصفائح التي تحتوي على السلالات التي يتم حثها على التحلل عن طريق رفع درجة الحرارة عند 24 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
في اليوم التالي، قم بتشغيل أضواء المسرح لتعقب الدودة الموازية، وتنظيف المرحلة الزجاجية للمتعقب بنسبة 70 في المائة من الإيثانول. إذا لم يبقى بقايا مرئية، قم بإزالة غطاء العدسة واستخدم منفضة الهواء لتنظيف عدسة التصوير. تأكد من أن الكاميرا موصولة بشكل صحيح ومثبتة، ثم ابدأ التسجيل باستخدام برنامج التقاط الصور.
اضبط إعدادات الكاميرا لتسجيل 20 إطارًا في الثانية، مع معلمات التسجيل الأحادية 16 المناسبة. استخدام فارغة، تسعة سنتيمتر بتري طبق لضمان أن يتم تعيين المرحلة إلى الارتفاع الصحيح، وضبط المرحلة إذا لزم الأمر. في ظل ظروف معقمة، إضافة ثلاثة ملليلترات من M9 حل ل لوحة فحص حركية، واستخدام مليلترين من M9 حل لغسل ثلث مساحة سطح اثنين من لوحات FUDR تحميل الديدان الخيطية من نفس المجموعة التجريبية في لوحة الفحص.
ثم ضع لوحة الفحص على مرحلة المقتفي. استخدام دودة واحدة لتركيز الكاميرا، والبدء في تسجيل الحيوانات. عند اكتمال التسجيل، تجاهل لوحة الحركة، ووضع علامة على لوحات FUDR على أنها تستخدم مرة واحدة قبل إعادتها إلى الحاضنة.
لتحليل بيانات الفيديو، افتح واجهة مستخدم المستخدم الرسومية لبرنامج تحليل بيانات تعقب الفيروسات المتنقلة المتوازية، واستخدم وظيفة التصفح لتحميل الفيديو الذي يهمك. حدد مجلد وجهة إخراج وتأكد من تعيين إطارات 600 إلى 1200 لتحليل 30 ثانية. إدراج 0.029 بكسل إلى ملليمتر عامل التحويل لتصوير طبق بتري تسعة سنتيمترات في القرار الكامل، وحدد الحفاظ على الميت تتبع algorithhm.
ضمن علامة التبويب معلمات تحديد موقع تعيين الصور استخدام Z إلى 100، حشوة Z إلى 3، بكسل القياسية إلى 54، العتبة إلى 9، الفتح إلى 1، وإغلاق إلى 2. ضبط معلمات التصفية إلى الحد أدنى حجم 20، الحد الأقصى لحجم 180، ودودة مثل 0.94. تعيين معلمات مسارات التشكيل إلى مسافة قصوى تحرك 10، وطول الحد الأدنى 150، وذاكرة 10.
تعيين المعلمات الانحناءات والسرعة إلى عتبة ثني من 1.8، والحد الأدنى من الانحناءات 0، وإطارات لتقدير سرعة 150. ضبط إحصاءات الدودة الميتة إلى فوز maxmim في الدقيقة الواحدة من 5 ، وسرعة قصوى من 1. حدد مجلد الإخراج، وحدد عدد إطارات الإخراج إلى 50، وحجم الخط إلى 10.
استخدم الدالة المثال لاختبار المعلمات وإخراج الصور عينة للتحقق ما إذا كان الفيروس المتنقل مرئية خلال خطوات العتبة ثمانية. ثم قم ببدء تشغيل وظيفة "Job" ، وقم بدمج النتائج الفردية لمجموعة البيانات بأكملها لتحليل ملفات نتائج الاختبار ، وحفظ النتائج عبر التصدير إلى وظيفة TSV. هذه الطريقة تسمح توصيف أنواع الفينو دياتودا لدراسات سكانية كبيرة من نماذج دودة مختلفة من الأمراض العصبية، مثل الخرف الجبهي الصدغي، مرض باركنسون، مرض الزهايمر، والتصلب الجانبي الضموري.
فضلا عن توصيف آثار الجزيئات العلاجية المحتملة، وذلك باستخدام نماذج دودة من مرض باركنسون ومرض الزهايمر. ويتم تحقيق دقة عالية من هذه القياسات عن طريق زيادة عدد الديدان التي يمكن تحليلها مقارنة بالطرق التقليدية. أثناء تنفيذ هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر تقليل الوقت بين إضافة الديدان إلى الحركة وبداية التتبع.
بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى لتكملة النتائج وربطها بتجميع البروتين. بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الأمراض العصبية والتنكسية ، مثل باركنسون والزهايمر ، لاستكشاف تطبيقات الاكتشاف الصحيح. لا تنس أن العمل مع FUDR يمكن أن تكون خطرة للغاية وينبغي اتخاذ الاحتياطات، مثل ارتداء قفازات النتريل، دائما أثناء تنفيذ هذا الإجراء.
