Ainsi, cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans un processus de découverte de médicaments sur la façon dont un médicament spécifique se comporte dans un organisme vivant. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet de présélectionner rapidement et efficacement les grandes tailles d’échantillons. Cette technique a déjà un impact majeur dans la découverte de médicaments en permettant une évaluation hautement quanititative des effets des candidats médicaments.
Cette méthode fournit de nouvelles idées mécanistes sur l’apparition et la progression des maladies qui se déroulent mal. En outre, cette méthode peut également être appliquée à d’autres systèmes, tels que le vieillissement et les dépistages génétiques. Nous sommes très heureux de cette occasion d’introduire de nouvelles méthodes physiques dans l’espace de la découverte de médicaments.
Ces démonstartions de cette méthode est critique que les étapes de dépistage nécessitent une grande familiarité avec cette technique automatique novo. Sam Casford, un assistant de recherche de notre laboratoire, démontrera la procédure. Avant de commencer l’intervention, ajouter 2,2 millileters de chaque composé médicamenteuse à la concentration appropriée à six plaques de 5 fluorodeoxyuridines ou FUDR par souche de ver, en répartissant soigneusement le composé sur toute la surface de la plaque, et sécher les plaques dans des conditions stériles.
Pendant que les plaques sèchent, utilisez 15 millilitres de tampon M9 pour laver les vers de cinq riches plaques de facteur de croissance des nématodes, et transférer les vers libérés dans un tube conique pour la centrifugation. Suspendre à nouveau les nématodes en trois millilitres de tampon M9 frais pour quantifier le nombre de vers au stade larvaire L4, et ensemencer 700 larves de L4 sur chacune des six plaques fudr sèches par souche de ver, par composé. Lorsque tous les nématodes ont été ensemencés, placez les plaques contenant les souches pour lesquelles la parlyse est induite en augmentant la température à 24 degrés Celsius pendant 24 heures.
Le lendemain, allumez les lumières de scène du traqueur parallèle de ver, et nettoyez l’étape en verre du traqueur avec 70 pour cent d’éthanol. S’il ne reste aucun résidu visible, retirez le bouchon de la lentille et utilisez un duster d’air pour nettoyer la lentille d’imagerie. Confirmez que la caméra est correctement branchée et installée, et commencez à enregistrer avec le logiciel de capture d’image.
Ajustez les paramètres de la caméra pour enregistrer 20 images par seconde, avec les paramètres d’enregistrement mono-16 appropriés. Utilisez une boîte de Pétri vide de neuf centimètres pour vous assurer que la scène est réglée à la bonne hauteur et ajustez la scène si nécessaire. Dans des conditions stériles, ajouter trois millilitres de solution M9 à une plaque de criblage de motilité, et utiliser deux millilitres de solution M9 pour laver un tiers de la surface de deux plaques FUDR chargées par nématode du même groupe expérimental dans la plaque de criblage.
Ensuite, placez la plaque de criblage sur l’étape du traqueur. Utilisez un seul ver pour concentrer la caméra, et commencer à enregistrer les animaux. Lorsque l’enregistrement est terminé, jetez la plaque de motilité et marquez les plaques FUDR comme étant utilisées une seule fois avant de les retourner à l’incubateur.
Pour analyser les données vidéo, ouvrez l’interface utilisateur graphique du logiciel parallèle d’analyse de données de suivi des vers et utilisez la fonction de navigation pour charger la vidéo d’intérêt. Sélectionnez un dossier de destination de sortie et confirmez que 600 à 1200 images sont définies pour une analyse de 30 secondes. Insérez un facteur de conversion de 0,029 pixel à millimètre pour l’imagerie d’une boîte de Pétri de neuf centimètres à pleine résolution, et sélectionnez l’algorithhm de suivi de suivi keep dead.
Sous l’onglet paramètres de localisation, réglez les images à utilisation Z à 100, le rembourrage Z à 3, les pixels standard à 54, le seuil à 9, l’ouverture à 1, et la fermeture à 2. Ajustez les paramètres de filtrage à une taille minimale de 20, une taille maximale de 180, et un ver comme de 0,94. Définissez les paramètres des trajectoires de formation à une distance maximale de 10, une longueur minimale de 150 et une mémoire de 10.
Réglez les virages et les paramètres de vitesse à un seuil de courbure de 1,8, un minimum de virages de 0, et un cadre pour estimer la vitesse de 150. Accordez les statistiques du ver mort à un battement maxmim par minute de 5, et une vitesse maximale de 1. Sélectionnez le dossier de sortie et sélectionnez le nombre d’images de sortie à 50, et la taille de la police à 10.
Utilisez la fonction exemple pour tester les paramètres et la sortie des images de l’échantillon pour vérifier si les vers sont visibles tout au long des huit étapes de seuil. Lancez ensuite la fonction Démarrer le travail et combinez les résultats individuels pour l’ensemble des données afin d’analyser les fichiers de résultats des tests, en économisant les résultats via l’exportation vers la fonction TSV. Cette méthode permet la caractérisation des fenotypes nématodes pour les études à grande population de divers modèles de vers de maladies neurodégénératives, tels que la démence frontotemporale, la maladie de Parkinson, la maladie d’Alzheimer et la sclérose latérale amyotrophique.
Ainsi que la caractérisation des effets des molécules thérapeutiques potentielles, en utilisant des modèles de ver de la maladie de Parkinson et d’Alzheimer. La grande précision de ces mesures est obtenue en augmentant le nombre de vers qui peuvent être analysés par rapport aux méthodes traditionnelles. Lors de l’exécution de cette procédure, il est important de se rappeler de minimiser le temps entre l’ajout des vers à la motilité et le début du suivi.
Après cette procédure, d’autres méthodes peuvent être effectuées pour compléter les résultats et établir un lien avec l’agrégation des protéines. Après son développement, cette technique a ouvert la voie à des chercheurs dans le domaine des maladies neurodégénératives et dépliantes, telles que la maladie de Parkinson et la maladie d’Alzheimer, pour explorer les bonnes applications de découverte. N’oubliez pas que travailler avec fudr peut être extrêmement dangereux et les précautions, telles que le port de gants de nitrile, doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.
