التحقيق في التعديلات في Caecum Microbiota بعد إصابات الدماغ الصادمة في الفئران

في وقت واحد والخطوط التفاعلات بين الدماغ والأمعاء الميكروبات لا يزال غير معروف. استخدام هذه التقنية، يمكن فحص التعديلات في ميكروبيوتا الأمعاء بعد إصابة الدماغ الرضية في الفئران. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها بسيطة وفعالة نسبيا.

إثبات الإجراء سيكون وندونغ أنت، طالب دراسات عليا من مختبري. لالإصابة الدماغية الرضية التعريفي، تأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع في الماوس المُقصّر، وتطبيق مرهم على عيون الحيوان. بعد الحلاقة، قم بتطهير جلد فروة الرأس المكشوف بنسبة 70٪ من الإيثانول قبل أن ينكز فروة الرأس في متن طائرة برجية.

باستخدام ملقط، تراجع شق على كلا الجانبين، وفصل periosteum قليلا. استخدم علامة لرسم دائرة قطرها ثلاثة ملليمترات على المنطقة الجدارية اليمنى من الجمجمة على بعد ملليمترين من خط الوسط. استخدام الحفر الكهربائية لاختراق الجمجمة بعناية دون إتلاف دورا.

إزالة رفرف العظام لفضح نافذة العظام من ثلاثة ملليمترات ووضع قنية إصابة بلاستيكية على استئصال القحف. بعد ترسيخ القنب إلى الجمجمة مع الاكريليك الأسنان، واستخدام حقنة خمسة ملليلتر لملء القنية مع المالحة معقمة 0.9٪ طبيعي، مع الحرص على تجنب فقاعات. بدوره على منظار ومكبر للصوت.

تأكد من أن أنبوب الضغط العالي لجهاز إصابة السائل الجانبي خالي من فقاعات الهواء، ويقدم حوالي 10 نبضات اختبار، حتى يعطي الجهاز إشارة ثابتة. ضبط زاوية وضعية بدء البندول للوصول إلى كثافة نبضية من حوالي اثنين من الغلاف الجوي القياسية وتوصيل cannula إصابة بجهاز إصابة السائل الجانبي. اسحب الزناد لإطلاق البندول، مما يؤدي إلى إصابة الدماغ.

ثم الحصول على ونقل نبض إلى دورا من خلال نظام كامل مغلقة، أنابيب مملوءة بالسوائل. بعد تحريض إصابات الدماغ، وإزالة القنية وخياطة شق. ثم ضع الماوس على وسادة التدفئة مع المراقبة حتى يتم الإسعافية، قبل أن يعود الحيوان إلى قفصه المنزل مع إعلان libitum الوصول إلى الطعام والماء.

في نقاط الوقت التجريبية المشار إليها، وفضح الأمعاء وفقا للبروتوكولات القياسية واستخدام ملقط الاتنمية لفصل بلطف caecum من المسالك المعوية الأخرى. عندما تم تحديد مكان الأنسجة ، قطع caecum مع مقص حاد واستخراج محتويات الجسم يدويا على خلع الملابس العقيمة. ثم نقل محتويات أنبوب microcentuge 1.5 ملليلتر، للتخزين ناقص 80 درجة مئوية حتى تحليل الميكروبيوم.

16S تسلسل الحمض النووي المؤتلف يدل على انخفاض التنوع في ميكروبيوتا caecum في الفئران بعد ثلاثة أيام من إصابة الدماغ الرضية، مع الترابي الأكثر وفرة داخل محتويات caecum من مجموعات إصابات الدماغ صورية ورضية هو مبين في هذا الرقم. علاوة على ذلك ، يكشف التحجيم غير المتري والمتعدد الأبعاد عن تغييرات في تكوين ميكروبيوتا caecum بعد إصابة الدماغ الرضية. تذكر أن تبقي دورا سليمة عند حفر الجمجمة، وتكون لطيفة عند تحديد مكان وفصل caecum من الأراضي المعوية الأخرى.

بعد هذا الإجراء، يمكن أن يؤدي التلطيخ والويسين وتحليل لفحص التغير النسيجي والاستجابة الالتهابية داخل الأمعاء بعد إصابة الدماغ الرضية.