La simultanéité et les interactions des lignes entre le cerveau et le microbiote intestinal restent inconnues. Utilisez cette technique, les altérations du microbiote intestinal après des lésions cérébrales traumatiques chez la souris peuvent être examines. Le principal avantage de cette technique est qu’elle est relativement simple et efficace.
Nous vous montrerons que nous serons Wendong You, un étudiant diplômé de mon laboratoire. Pour l’induction traumatique de lésion cérébrale, confirmez un manque de réponse au pincement d’onteil dans une souris anesthésiée, et appliquez l’onguent aux yeux de l’animal. Après le rasage, désinfecter la peau exposée du cuir chevelu avec 70% d’éthanol avant d’inciser le cuir chevelu dans un plan sagittal.
À l’aide de forceps, rétracter l’incision des deux côtés et séparer légèrement le périoste. Utilisez un marqueur pour dessiner un cercle de trois millimètres de diamètre sur la zone pariétale droite du crâne à deux millimètres de la ligne médiane. Utilisez une perceuse électrique pour pénétrer soigneusement le crâne sans endommager le dura.
Retirez le rabat d’os pour exposer une fenêtre d’os de trois millimètres et placez une canule de dommages en plastique au-dessus de la craniotomie. Après avoir cimenté la canule au crâne avec de l’acrylique dentaire, utilisez une seringue de cinq millilitres pour remplir la canule d’une solution saline stérile de 0,9 % normale, en prenant soin d’éviter les bulles. Allumez l’oscilloscope et l’amplificateur.
Confirmez que le tube à haute pression du dispositif latéral de blessure de percussion de fluide est exempt des bulles d’air, et livrez environ 10 impulsions d’essai, jusqu’à ce que l’appareil donne un signal régulier. Ajustez l’angle de la position de départ du pendule pour atteindre une intensité d’impulsion d’environ deux atmosphères standard et reliez la canule de blessure au dispositif latéral de blessure de percussion de fluide. A appuyer sur la gâchette pour libérer le pendule, induisant les lésions cérébrales.
Ensuite, obtenir et transmettre une impulsion à la dura à travers l’ensemble fermé, système de tubes remplis de liquide. Après l’induction des lésions cérébrales, retirer la canule et suture de l’incision. Placez ensuite la souris sur un coussin chauffant avec surveillance jusqu’à ce qu’elle soit ambulatoire, avant de retourner l’animal dans sa cage d’origine avec un accès ad libitum à la nourriture et à l’eau.
Aux points de temps expérimentaux indiqués, exposez les intestins selon les protocoles standard et utilisez des forceps atraumatiques pour séparer doucement le caecum des autres voies intestinales. Lorsque le tissu a été localisé, couper le caecum avec des ciseaux pointus et extraire manuellement le contenu du caecum sur une vinaigrette stérile. Transférez ensuite le contenu dans un tube de microcentrifugeuse de 1,5 millilitre, pour un stockage de moins 80 degrés Celsius jusqu’à l’analyse du microbiome.
Le séquençage recombinant d’ADN 16S démontre une diversité réduite dans le microbiote de caecum chez les souris trois jours après des dommages traumatiques de cerveau, avec le taxa le plus abondant dans le contenu de caecum des groupes faux et traumatiques de dommages de cerveau montrés dans la figure. En outre, l’échelle multidimensionnelle non métrique révèle des changements dans la composition du microbiote de caecum après des dommages traumatiques de cerveau. N’oubliez pas de garder le dura intact lors du perçage du crâne, et d’être doux lors de la localisation et la séparation du caecum d’autres voies intestinales.
Après cette procédure, l’hématoxyline et la coloration et l’analyse de l’éosine peuvent être effectuer pour examiner le changement histologique et la réponse inflammatoire dans les voies intestinales après des lésions cérébrales traumatiques.
