동시성 및 두뇌와 창 자 microbiota 사이 라인 상호 작용은 알 수 없는 남아. 이 기술을 사용, 마우스에 외상성 뇌 손상 후 창 자 microbiota에 변경 검사할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 비교적 간단하고 효율적이라는 것입니다.
절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 대학원생 인 웬동 유 (Wendong You)가 될 것입니다. 외상성 뇌 손상 유도의 경우 마취 된 마우스의 발가락 핀치에 대한 반응부족을 확인하고 동물의 눈에 연고를 적용하십시오. 면도 후, 적혈구평면에서 두피를 절개하기 전에 노출된 두피 피부를 70%에탄올로 소독합니다.
집게를 사용하여 양쪽의 절개를 철회하고 periosteum을 약간 분리합니다. 마커를 사용하여 중간선에서 2밀리미터 떨어진 두개골의 오른쪽 정수리 영역에 3mm 직경원을 그립니다. 전기 드릴을 사용하여 두라를 손상시키지 않고 조심스럽게 두개골을 관통하십시오.
뼈 플랩을 제거하여 3mm 의 뼈 창을 노출하고 두개 부호 에 플라스틱 부상 캐뉼라를 놓습니다. 치과 아크릴로 두개골에 캐뉼라를 시멘트 한 후, 5 밀리리터 주사기를 사용하여 캐뉼라를 멸균 0.9% 정상 식염수로 채우고 거품을 피하십시오. 오실로스코프와 앰프를 켭니다.
측면 유체 타악기 손상 장치의 고압 튜브가 기포가 없는지 확인하고 장치가 일정한 신호를 제공할 때까지 약 10개의 테스트 펄스를 전달합니다. 진자 시작 위치의 각도를 조정하여 약 2개의 표준 대기의 펄스 강도에 도달하고 부상 캐뉼라를 측면 유체 타악기 손상 장치에 연결합니다. 방아쇠를 당겨 진자 해제, 뇌 손상을 유도.
그런 다음 닫혀 있는 유체 로 채워진 튜브 시스템 전체를 통해 펄스를 두라로 전송합니다. 뇌 손상 유도 후, 캐뉼라를 제거하고 절개를 봉합합니다. 그런 다음 마우스를 외래가 될 때까지 모니터링하는 가열 패드에 마우스를 놓고 음식과 물에 대한 광고 리비도 액세스 할 수있는 가정용 케이지로 동물을 반환하십시오.
표시된 실험 시점에서 표준 프로토콜에 따라 내장을 노출하고 외상성 집게를 사용하여 다른 장과 caecum을 부드럽게 분리합니다. 조직이 발견되면, 날카로운 가위로 케이쿰을 자르고 수동으로 캐컴 함량을 멸균 드레싱에 추출하십시오. 그런 다음 미생물군유전체 분석전까지 영하 80도 저장을 위해 1.5밀리리터 미세원심분리기 튜브로 내용을 전송한다.
16S 재조합 DNA 염기서열분석은 외상성 뇌 손상 후 3일 후 마우스에서 케이쿰 미생물의 다양성 감소를 나타내며, 수치에 나타난 가짜 및 외상성 뇌 손상 그룹의 케이쿰 함량 내에서 가장 풍부한 taxa가 있다. 또한, 비메트릭, 다차원 스케일링은 외상성 뇌 손상 후 카이쿰 미생물의 조성에 변화를 나타낸다. 두개골을 드릴링 할 때 dura를 그대로 유지하고 다른 장과 caecum을 찾고 분리 할 때 부드럽게해야합니다.
이 절차에 따라, 헤마톡시린과 에오신 염색 및 분석은 외상성 뇌 손상 후 장내 조직학적 변화 및 염증 반응을 검사하기 위해 수행될 수 있다.
