大脑和肠道微生物群之间的同步性和线相互作用仍然未知。使用这种技术,可以检查小鼠脑外伤后肠道微生物群的改变。这种技术的主要优点是相对简单和高效。
演示这个程序的将是文东你,一个研究生从我实验室。对于创伤性脑损伤诱导,确认麻醉小鼠对手趾捏缺乏反应,并给动物的眼睛涂抹软膏。剃须后,用70%乙醇对裸露的头皮皮肤进行消毒,然后再将头皮在下垂平面中倾斜。
使用钳子,收回两侧的切口,并稍微分离周分。使用标记在头骨的右侧区域绘制一个三毫米直径的圆,该圆离中线两毫米远。使用电钻小心地穿透头骨,而不会损坏杜拉。
取出骨瓣,露出三毫米骨窗,并在颅骨切除术上放置一个塑料损伤管。用牙科丙烯酸将牙管粘合到头骨后,使用五毫升注射器用无菌 0.9% 的正常盐水填充管,注意避免气泡。打开示波器和放大器。
确认横向流体打击损伤装置的高压管无气泡,并提供约10个测试脉冲,直到该装置发出稳定信号。调整钟摆起始位置的角度,达到约两个标准大气的脉冲强度,将损伤管连接到横向流体打击损伤装置。扣动扳机释放钟摆,诱发脑损伤。
然后通过整个封闭的、充满液体的管道系统获取脉冲并将其传输到 dura。脑损伤诱导后,取出牙管,缝合切口。然后将鼠标放在加热垫上,进行监测,直到它被流动,然后将动物返回到其家庭笼子,并获取食物和水。
在指示的实验时间点,根据标准方案暴露肠道,并使用创伤钳轻轻地将肠子与其他肠道分离。当组织被定位时,用锋利的剪刀切割表,并手动将表骨内容物提取到无菌敷料上。然后将内装物转移到1.5毫升微离心管中,用于零下80摄氏度的储存,直到微生物群分析。
16S重组DNA测序显示,在创伤性脑损伤三天后,小鼠的caecum微生物群多样性降低,图中所示的虚假和创伤性脑损伤组中,最丰富的分类。此外,非公制、多维结垢显示创伤性脑损伤后,小细胞微生物群的组成发生变化。记住在钻头骨时保持杜拉完好无损,在定位和分离其他肠道时要保持温和。
按照这个程序,血氧素和 eosin 染色和分析可以执行,以检查创伤性脑损伤后肠道内的组织学变化和炎症反应。