درسنا توافر قابلية الذوبان من المعادن الدقيقة مثل السيلينيوم الزنك مع أشكال كيميائية مختلفة أو مصادر، كما نسميها، في سياق تغيير تكوين الأعلاف. في جناح النويدات المشعة، تزن ما يقرب من 0.2 غرام من عينات تغذية السلمون الأطلسي الأرض، ومزجها مع متتبع إشعاعي الزنك من نشاط محدد معروف في أنبوب عينة حجم خمسة ملليلتر. إعداد ستة aliquots أخرى من العازلة وإضافة واحدة من الأحماض الأمينية هو مبين هنا إلى كل للوصول إلى تركيز الضرس النهائي من خمسة ملليمولار.
إضافة المياه العذبة المعوية لومينال العازلة لإطعام العينة. بعد ذلك، إضافة العازلة الإنارة المعوية المياه العذبة إلى aliquots العازلة التي تحتوي على الأحماض الأمينية. أغلق الأنابيب وتدور عليها على الدوار الدوار في 25 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة.
ثم، الطرد المركزي في 1، 157 × ز لمدة 10 دقائق، لفصل الكسور القابلة للذوبان وغير قابلة للذوبان. استخدم جهاز صراف غاما لقياس عدد الكمية في الدقيقة من المتتبع الإشعاعي للزنك في الكسور القابلة للذوبان وغير القابلة للذوبان. غسل تراوت قوس قزح المستمدة خط الخلايا المعوية مرتين مع ملليلتر واحد من محلول EDTA، وشفط من الحل بعد كل غسل باستخدام ماصة.
علاج الخلايا المغسولة مع محلول 0.25٪تريبسين. تدوير بلطف قارورة في زوايا حادة لمدة دقيقتين. ثم أضف 10 ملليلتر من L-15 المتوسطة التي تحتوي على 5٪ FBS لتحييد تريبسين.
باستخدام ماصة معقمة، قم بفك تعليق الخلية الناتج في أنبوب طرد مركزي قاعي مخروطي. جهاز طرد مركزي 130 x G لمدة ثلاث دقائق. ثم باستخدام مقياس الدم، وتحديد كثافة الخلايا التي تم حصادها عن طريق العد اليدوي.
قم بزرع الخلايا على 24 لوحة بئر بكثافة خلية تبلغ 50,000 خلية لكل ملليلتر، لكل بئر، واحتضان الصفائح عند 19 درجة مئوية تحت جو طبيعي لمدة 48 ساعة قبل التجارب. بعد إطعام السمك لمدة 11 يوما والقتل الرحيم لهم، وجمع عينة مجمعة من البراز الأسماك عن طريق تجريد من زعنفة البطن إلى فتحة شج ووضعها على طبق من ذهب. استخدام ملعقة لنقل البراز من لوحة إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر.
تخزين العينات على الفور في 20 درجة مئوية. في هذه الدراسة، يتم تقييم توافر المعادن من علف السمك باستخدام عدد من الطرق المجانية. التحليل التمثيلي لتغذية السلمون الأطلسي عن طريق الكروماتوغرافيا استبعاد الحجم المقترنة استحثاثيا البلازما طريقة قياس الطيف الكتلي، ويوفر بيانات عن الأنواع الكيميائية الزنك وجدت في جزء قابل للذوبان.
يمكن رؤية خمسة الزنك التي تحتوي على قمم في هذا الكسر، كل مع وزن جزيئي مختلف. يمكن أن يكون للأنواع الكيميائية الزنك الموجودة في الكسر القابل للذوبان مصادر مختلفة ، لأن الأعلاف المستخدمة تحتوي على مكونات بحرية ونباتية على حد سواء ، ويتم استكمالها. مجموعة الوزن الجزيئي لهذه الأنواع تشير إلى أن هذه المركبات قد تكون البروتينات المعدنية.
في حين أن قابلية الذوبان من الزنك المكمل 65 يزيد من وجود جميع الأحماض الأمينية اختبارها, تم العثور على أعلى الذوبان مع الهستيدين واللسين. يتأثر امتصاص الزنك Apical في خلايا Arteca GC بشكل كبير بوجود L-Met أو DL-Met بتركيزين ملليمولار. وعلاوة على ذلك، فإن تأثير الميثيونين على امتصاص الزنك يتأثر سلبا بوجود مادة سداسي كل مرة.
الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هو أننا حاولنا الجمع بين النهج المختلفة في الدراسات البصرية والتحليلية، و invivo، لمقارنة ومجاملة بعضها البعض عندما يتعلق الأمر بدراسة توافر المعادن.
