تمثل هذه الطريقة جزءًا من بروتوكول أكبر لتربية الحفظ خارج الموقع المستخدم في الإنتاج الضخم المختبري للفراشات المعرضة للخطر. وهو يوضح كيف يمكن تكييف أساليب تربية أساسية للبحث العلمي للمساعدة في معالجة الثغرات السلوكية الرئيسية، أو تاريخ الحياة، أو البيانات الإيكولوجية. الطرق المحددة المقدمة لتقييم وقت تطوير اليرقات وعدد من اليرقات stadia لها قابلية واسعة للتطبيق على غيرها من برامج الحفاظ على الفراشات أو البحوث.
هذه التقنية هي نهج فعال لتوثيق مقاييس تاريخ الحياة للفراشة المهددة بالانقراض مثل عدد النجوم اليرقات ، ومدة مراحل النمو ، وحجم جميع مراحل الحياة. لقد قمنا بتبسيط بروتوكولنا بحيث يمكن زيادة الإنتاجية والكفاءة في المختبر وهو أمر مهم بشكل خاص عند جمع البيانات في إطار زمني قصير. تتطلب هذه الطريقة البراعة والاهتمام بالتفاصيل لتجنب ضرر الكائن الحي ، حيث أن يرقات الفراشة صغيرة جدًا خاصة عندما يكون حديثي الولادة.
إثبات الإجراء سيكون جاكوب هورنفيلدت، طالب جامعي من مختبرنا. للبدء ، استخدم فرشاة طلاء صغيرة لشعر الإبل بالألوان المائية لتحريك ية و عزل يرقة واحدة ووضعها تحت مجهر تشريح في طبق بتري. غمس شعرة واحدة من قلم الحشرة في الطلاء المضيء غير التكسية من لون متناقض مع اليرقة ، ووضع قطرة صغيرة واحدة من الطلاء بعناية على الجزء الخلفي من اليرقة.
بعد 30 ثانية، يجف الطلاء. مع مساعدة من الفرشاة الصغيرة الشعر الجمل مائية الألوان، ووضع كل يرقة الفردية في بلده اثنين من أوقية كوب جزء من البلاستيك واضحة تحتوي على ما يقرب من واحد إلى ثلاثة أوراق صغيرة من المواد المضيفة محطة جديدة، وكتابة معرف فريد على الكأس والغطاء. تأمين بحزم الغطاء.
تحقق بعناية كل يرقة يوميا. مع ملقط، وإزالة الأوراق ووضعها على سطح أبيض. تفقد الكأس والغطاء واضحة.
فحص الأوراق تحت مجهر تشريح لوجود اليرقات exuviae وكبسولات الرأس. عندما لوحظ اليرقة الاكزوفيا، إزالته من الكأس ووضعها في قارورة مليئة 0.2 ميكرولترات من الجلسرين. تسمية الجزء العلوي من الغطاء والجانب مع عدد اليرقة، وتاريخ molt، وكبسولة الرأس.
ضع اليرقات الاكسوفية وكبسولة الرأس المرتبطة بها في غطاء كوب من البلاستيك واضح ، ووضع بضع قطرات من الإيثانول فيه. مراقبة اليرقات exuvia تحت مجهر تشريح. إذا كانت كبسولة الرأس اليرقات مفصولة بالفعل عن الاكسوفيا ، ضع قطرة من الجلسرين على طرف ملقط entymological مدببة ولمس بلطف كبسولة الرأس إلى الجلسرين.
ضع كبسولة الرأس في أنبوب الطرد الدقيق المصاحب. إذا كانت كبسولة الرأس لا تزال ملتصقة باليرقة اليرقة ، استخدم ملقطًا مدببًا ودبوسًا حشريًا لفصل كبسولة الرأس عن اليرقات ال exuvia. مرة واحدة يتم فصله استخدام تقنية الجلسرين لالتقاط كبسولة الرأس.
بعد كل زول، إعادة رسم اليرقات وتسجيل التواريخ molt. كل يوم، استخدم الفرجار الرقمية لقياس الطول الكلي للجسم من الرأس إلى الجزء الأخير من البطن لكل يرقة. اتخاذ ثلاثة قياسات وتسجيل متوسط الثلاثة جنبا إلى جنب مع التاريخ والوقت.
تحقق من كوب البلاستيك المقابلة للتأكد من عدم وجود قالب في ذلك. إزالة جميع frass والحطام المضيف القديم وإضافة المواد المضيفة الطازجة حسب الحاجة. إعادة اليرقة إلى الكأس.
الحفاظ على الأكواب تحت درجة حرارة المختبر بين 27 و 32 درجة مئوية لنشاط اليرقات الأمثل والتنمية. الحفاظ على الحالة حتى تصل جميع اليرقات إلى إنستار النهائي وتبدأ مرحلة ما قبل الداء. عندما تتوقف اليرقات عن التغذية ، قم بتشغيل لون بني أخضر باهت ، وتفقد شيفروناتها ، وغالبًا ما تتجول خارج المضيف ، ضع قطعة صغيرة من الورق المموج في الكأس.
مرة واحدة كل يرقة قد pupated قياس طولها الكلي وتسجيل تاريخ pupation. هذا هو الهضّة الأخيرة لكل فرد. تحقق من الخواد يوميا.
عندما كبروا في الفراشات، واستخدام ملقط لعقد فراشة الكبار وضربة بلطف على الأجنحة للكشف عن لون سطح الجناح العلوي. يبدو أن الذكور لديهم اللون الأزرق في جميع أنحاء الأجنحة والإناث قد خفضت الأزرق ووعن برتقالي على الجناح الخلفي. تسجيل تاريخ eclosion والجنس من كل فراشة الكبار الناتجة.
لقياس طول الوتر الجناح من كل فراشة عقد بلطف فراشة مع ملقط واستخدام الفرجار الرقمية. في حالة الفراشة نشطة جداً بحيث لا يمكن قياسها ضعها في الثلاجة لمدة 30 ثانية أو أقل وحاول مرة أخرى. وقد مكّن هذا البروتوكول من إجراء بحوث موجهة وجمع بيانات واسعة النطاق بشأن العديد من الثغرات الرئيسية في البيانات الهامة لتحسين أفضل ممارسات التربية والتربية في المختبرات.
هنا كبسولات الرأس الأربعة التي تم جمعها لشخص واحد. وكان معظم اليرقات أربعة يرقات مع كل مرحلة حياة غير ناضجة أقل من خمسة أيام. الإناث عادة ما وضعت أسرع في جميع المراحل غير ناضجة بالمقارنة مع الذكور.
على الرغم من أن هذا لم يكن تأثير كبير مع قيمة p عند 0.625. هذه الخطوة دقيقة للغاية خاصة عندما تكون اليرقات حديثي الولادة الطازجة. من المهم أن تتذكر استخدام المجهر أثناء هذه الخطوة للتأكد من تطبيق الطلاء على المكان المناسب على ظهر اليرقة.
ويمكن توسيع هذه الأساليب للمساعدة في تقييم معدلات البقاء على قيد الحياة في مرحلة النمو، والأداء التفاضلي على مضيفي اليرقات المتعددين، فضلاً عن مساعدة الباحثين على تفسير البيانات من الميدان بشكل أفضل. وتوضح هذه الطريقة المباشرة كيف يمكن، مع القليل من التخطيط للممارسات الأساسية لتربية الكائنات الحية، أن تتكيف بسهولة مع البحث العلمي. ويمكن بعد ذلك استخدام النتائج للمساعدة في إعلام، وربما تكييف، أساليب خارج الموقع لتعزيز النجاح.
