この方法は、危険な蝶の実験室量産に使用される大規模なex situ保全繁殖プロトコルの一部を表す。これは、基本的な畜産法を科学的研究にどのように適応し、主要な行動、生命史、または生態学的データギャップに対処するのに役立つかを示しています。幼虫の発達時間と幼虫のスタディアの数を評価するために提示された具体的な方法は、他の蝶の保全繁殖または研究プログラムに広範な適用性を有する。
この技術は、幼虫のインスターの数、発達段階の持続時間、およびすべてのライフステージの大きさなど、絶滅の危機に瀕している蝶の生命史メトリックを文書化するための効果的なアプローチです。私たちは、短期間でデータを収集する際に特に重要である実験室で生産性と効率を高めることができるように、プロトコルを合理化しました。この方法は、蝶の幼虫は特に新生児として非常に小さいので、生物の害を避けるために細部に器用さと注意を必要とします。
この手順のデモンストレーションは、私たちの研究室の学部生であるジェイコブ・ホーンフェルトです。まず、小さなラクダの髪の水彩絵筆を使用して、1つの幼虫を慎重に移動して分離し、シャーレ内の解剖顕微鏡の下に置きます。昆虫ペンの1本の髪を、幼虫の色と対照的な色の無毒な発光塗料に浸し、幼虫の背中に小さなペンを慎重に塗ります。
30秒後、塗料が乾燥します。小さなラクダの髪の水彩画の絵筆の助けを借りて、新鮮な端末ホスト材料の約1〜3つの小さな葉を含む独自の2オンス透明プラスチック部分カップに個々の幼虫を配置し、カップと蓋にユニークな識別子を書きます。蓋をしっかり固定します。
各幼虫を毎日注意深くチェックしてください。鉗子で、葉を取り除き、白い表面に置きます。カップとクリア蓋を点検します。
幼虫の滲出および頭部カプセルの存在のために解剖顕微鏡の下で葉を調べなさい。幼虫の滲出液が観察されたら、カップから取り出し、0.2マイクロリットルのグリセリンで満たされたバイアルに入れる。蓋の上部と側面に幼虫番号、モルトの日付、およびヘッドカプセルのラベルを付けます。
幼虫のエクスフェビアと関連するヘッドカプセルを透明なプラスチック部分のカップ蓋に入れ、その中にエタノールを2滴入れます。解剖顕微鏡で幼虫の滲出を観察します。幼虫のヘッドカプセルが既に滲出液から分離されている場合は、尖ったエンティモ学的鉗子の先端にグリセリンを一滴置き、ヘッドカプセルをグリセリンにそっと触れる。
頭部カプセルを関連するマイクロ遠心チューブに入れる。ヘッドカプセルがまだ幼虫の排泄物に取り付けられている場合は、尖った鉗子と昆虫ピンを使用して、頭部カプセルを幼虫エウビアから分離する。分離したら、グリセリン技術を使用してヘッドカプセルを拾います。
各モルトの後、幼虫を再塗装し、モルトの日付を記録します。毎日、デジタルキャリパーを使用して、各幼虫の頭から最後の腹部セグメントまでの総体長を測定します。3つの測定値を取り、日付と時刻と一緒に3つの平均を記録します。
対応するプラスチックカップをチェックして、カビが入っていないか確認してください。すべてのフレームと古いホストの破片を取り除き、必要に応じて新鮮なホスト材料を追加します。幼虫をカップに戻します。
最適な幼虫活動と発達のために27〜32°Cの間で実験室の温度の下でカップを維持する。すべての幼虫が最後のインスターに到達するまで状態を維持し、準備段階を開始します。幼虫が餌をやめるとき、均一な鈍い緑がかった茶色の色を回し、シェブロンを失い、しばしばホストからさまよって、カップに小さな段ボール紙を入れます。
各幼虫が完全に子犬になったら、その全長を測定し、子犬の日付を記録します。これは各個人の最後の脱皮である。毎日子犬をチェックしてください。
彼らは蝶に成長したら、大人の蝶を保持し、上翼の表面の色を明らかにするために翼に穏やかに吹くために鉗子を使用してください。男性は翼のいたるところに青があるように見え、女性は後ろの翼に青とオレンジ色のアイスポットを減らしました。結果として得られる各大人の蝶の分化日と性別を記録します。
各蝶の翼弦長を測定するには、蝶を鉗子でそっと保持し、デジタルキャリパーを使用します。蝶がアクティブすぎて測定できない場合は、冷蔵庫に30秒以下入れてからもう一度試してみてください。このプロトコルは、最高の実験室の繁殖と畜産の慣行を改善するために重要な多数の重要なデータギャップに関する研究と広範なデータ収集を可能にしました。
ここでは、1人の個人のために収集された4つのヘッドカプセルがあります。幼虫の大半は4つの脱皮を有し、各未熟な生命段階は5日未満である。女性は通常、男性と比較してすべての未熟な段階でより速く発達した。
これは0.625のp値で有意な効果ではなかったが。このステップは、幼虫が孵化したばかりの新生児である場合は特に細心の注意を払います。このステップでは、毛虫の背面の適切な場所に塗料を塗布することを忘れないように、顕微鏡を使用することが重要です。
これらの方法は、発達段階生存率、複数の幼虫ホストの差異性能を評価し、研究者が現場からのデータをよりよく解釈するのを助けるために拡張することができます。この簡単な方法は、少しの計画で基本的な生物の畜産の実践が科学的研究のために容易に適応することができる方法を示しています。その結果は、成功を高めるためにex situメソッドを知らせ、潜在的に適応するのに役立ちます。
