此方法表示用于实验室大规模生产风险蝴蝶的较大原位保护育种协议的一部分。它说明了如何将基本的饲养方法用于科学研究，以帮助解决关键行为、生命历史或生态数据差距。评估幼虫发育时间和幼虫数量的具体方法，具有广泛的适用性，适用于其他蝴蝶保护育种或研究项目。

这项技术是记录濒危蝴蝶生命史指标的有效方法，如幼虫星的数量、发育阶段的持续时间和所有生命阶段的大小。我们简化了我们的协议，从而提高了实验室的生产率和效率，这在短时间内收集数据尤为重要。这种方法需要灵巧和注重细节，以避免有机体的伤害，因为蝴蝶幼虫非常小，特别是作为新生儿。

演示这个程序的将是雅各布·霍恩费尔特，一个来自我们实验室的本科生。首先，使用小骆驼发水彩画笔小心地移动和分离单个幼虫，并将其放在培养皿中的解剖显微镜下。将昆虫笔的单毛浸入与幼虫颜色对比的非毒发光涂料中，并小心地将一小滴油漆放在幼虫的背面。

30秒后，油漆干干。在一个小骆驼毛水彩画笔的帮助下，将每个幼虫放在自己的两盎司透明塑料部分杯中，里面装着大约一到三片小叶的新鲜端接物，并在杯子和盖子上写上一个独特的标识符。牢固固定盖子。

每天仔细检查每个幼虫。使用钳子，取出叶子并将其设置为白色表面。检查杯子和透明盖子。

在解剖显微镜下检查叶子是否存在幼虫和头胶囊。当观察到幼虫时，将其从杯子中取出，放在装满 0.2 微升甘油的小瓶中。用盖子的顶部和侧面贴上幼虫编号、摩尔特日期和头胶囊的标签。

将幼虫和相关的头胶囊放在一个透明塑料部分杯盖中，并放入几滴乙醇中。在解剖显微镜下观察幼虫。如果幼虫头胶囊已经与 exuvia 分离，则将一滴甘油放在尖角的内皮钳的尖端，轻轻触摸头胶囊到甘油。

将头胶囊放在相关的微离心管中。如果头胶囊仍然附着在幼虫上，请使用尖钳和昆虫针将头胶囊与幼虫分离。一旦它被分离使用甘油技术拿起头胶囊。

每次脱毛后，重新粉刷幼虫并记录摩尔日期。每天，使用数字卡钳测量从头部到每个幼虫最后一个腹部段的总体长。进行三次测量，并记录三个测量的平均值以及日期和时间。

检查相应的塑料杯，确保塑料杯中没有霉菌。清除所有碎屑和旧主机碎屑，并根据需要添加新的主机材料。把幼虫还到杯子里

将杯子保持在 27 至 32 摄氏度的实验室温度下，以实现最佳的幼虫活性和发育。保持这个条件，直到所有幼虫到达他们最后的星形，并开始准备阶段。当幼虫停止喂养时，变成统一的暗褐色，失去它们的雪佛龙，并经常从宿主上徘徊，在杯子里放置一小块波纹纸。

一旦每个幼虫完全幼崽测量其总长度，并记录幼崽的日期。这是每个人最后的皮。每天检查小狗。

当他们成长为蝴蝶时，用钳子抓住成年蝴蝶，轻轻吹在翅膀上，露出上翼表面的颜色。雄性似乎有蓝色在翅膀和女性已经减少蓝色和橙色眼盆在后翼。记录每只成年蝴蝶的相闭日期和性别。

要测量每只蝴蝶的翅膀和弦长度，用钳子轻轻握住蝴蝶，并使用数字卡钳。如果蝴蝶太活跃，无法测量，请将蝴蝶放在冰箱中 30 秒或更以下，然后重试。该协议使对许多关键数据差距进行定向研究和广泛数据收集，这些关键数据差距对于改善最佳实验室育种和饲养做法非常重要。

这里是为一个人收集的四个头胶囊。大多数幼虫有四个皮毛，每个不成熟的生命阶段不到五天。与男性相比，女性在所有不成熟的阶段通常发育得更快。

虽然这不是一个显著的影响，p 值为 0.625。这一步是非常细致的，尤其是当幼虫是新鲜孵化的新生儿。请务必记住，在此步骤中使用显微镜，以确保将油漆涂在毛毛虫背面的适当位置。

这些方法可以扩展，以帮助评估发育阶段生存率，对多个幼虫宿主的差异性能，以及帮助研究人员更好地解释来自该领域的数据。这种简单明了的方法说明了如何通过一些规划基本有机体饲养实践可以很容易地适应科学研究。然后，这些结果可用于帮助通知和潜在地位方法，以提高成功。