이 방법은 위험 나비의 실험실 대량 생산에 사용되는 더 큰 전 시투 보존 사육 프로토콜의 일부를 나타냅니다. 그것은 주요 행동, 생명 역사, 또는 생태 데이터 격차를 해결하는 데 도움이 과학 연구에 대한 기본 축축 방법을 조정할 수있는 방법을 보여줍니다. 애벌레 발달 시간과 애벌레 스타디아의 수를 평가하기 위한 특정 방법은 그밖 나비 보존 사육 또는 연구 프로그램에 광범위하게 적용됩니다.
이 기술은 애벌레 별 수, 발달 단계의 지속 시간 및 모든 생명 단계의 크기와 같이 멸종 위기에 처한 나비의 생명 기록 메트릭을 문서화하기위한 효과적인 접근 방식입니다. 우리는 짧은 시간 내에 데이터를 수집할 때 특히 중요한 실험실에서 생산성과 효율성을 높일 수 있도록 프로토콜을 간소화했습니다. 이 방법은 나비 애벌레가 특히 신생아로 매우 작기 때문에 유기체의 해를 피하기 위해 손재주및 세부 사항에 주의를 기울여야합니다.
절차를 시연하는 것은 우리 실험실의 학부생 인 제이콥 혼펠트 (Jacob Hornfeldt)가 될 것입니다. 시작하려면 작은 낙타 헤어 수채화 페인트 브러시를 사용하여 조심스럽게 움직이고 하나의 애벌레를 분리하고 페트리 접시에 해부 현미경 아래에 놓습니다. 곤충 펜의 한 머리를 유충의 것과 대조되는 색상의 무독성 발광 페인트에 담그고 애벌레 뒤쪽에 작은 페인트 한 방울을 조심스럽게 넣습니다.
30초 후에 페인트가 건조합니다. 작은 낙타 헤어 수채화 페인트 브러시의 도움으로, 신선한 단말 호스트 재료의 약 1 ~ 3 개의 작은 잎을 포함하는 자신의 2 온스 투명 플라스틱 부분 컵에 각 개별 애벌레를 배치하고, 컵과 뚜껑에 고유 식별자를 작성합니다. 뚜껑을 단단히 고정합니다.
매일 각 유충을 주의 깊게 확인하십시오. 집게를 사용하여 잎을 제거하고 흰색 표면에 놓습니다. 컵과 뚜껑을 검사합니다.
애벌레 외출 및 머리 캡슐의 존재에 대 한 해부 현미경에서 잎을 검사. 애벌레 외출이 관찰되면 컵에서 제거하고 글리세린 의 0.2 마이크로 리터로 채워진 유리병에 놓습니다. 뚜껑 의 상단과 측면에 유충 번호, 용액 날짜 및 헤드 캡슐로 레이블을 지정합니다.
애벌레 외출과 관련 헤드 캡슐을 투명한 플라스틱 부분 컵 뚜껑에 넣고 에탄올 몇 방울을 넣습니다. 해부 현미경에서 애벌레 외경을 관찰한다. 애벌레 헤드 캡슐이 이미 엑외에서 분리된 경우 뾰족한 응약 집게 끝에 글리세린 한 방울을 놓고 머리 캡슐을 글리세린에 부드럽게 만드십시오.
상기 헤드 캡슐을 관련 마이크로원심분리기 튜브에 놓는다. 헤드 캡슐이 여전히 애벌레 외경에 부착되어 있는 경우 뾰족한 집게와 곤충 핀을 사용하여 머리 캡슐을 애벌레 엑설비아에서 분리하십시오. 분리되면 글리세린 기술을 사용하여 헤드 캡슐을 선택하십시오.
각 몰트 후, 애벌레를 다시 페인트하고 몰트 날짜를 기록합니다. 매일 디지털 캘리퍼를 사용하여 머리에서 각 애벌레의 마지막 복부 세그먼트까지의 총 신체 길이를 측정합니다. 세 가지 측정을 수행하여 날짜 및 시간과 함께 세 가지 평균을 기록합니다.
해당 플라스틱 컵을 확인하여 곰팡이가 없는지 확인합니다. 모든 frass 및 오래 된 호스트 파편을 제거 하 고 필요에 따라 신선한 호스트 재료를 추가 합니다. 애벌레를 컵에 반품합니다.
최적의 애벌레 활동과 개발을 위해 27에서 섭씨 32도 사이의 실험실 온도에서 컵을 유지하십시오. 모든 애벌레가 최종 인스타에 도달하고 준비 단계를 시작할 때까지 상태를 유지합니다. 애벌레가 먹이를 중단하면 균일한 둔한 녹색 갈색 색을 돌리고, 갈매기를 잃고, 종종 호스트를 방황하고, 컵에 골판지 종이의 작은 조각을 놓습니다.
각 애벌레가 완전히 새끼를 가지고되면 전체 길이를 측정하고 새끼의 날짜를 기록합니다. 이것은 각 개인의 최종 용해입니다. 매일 강아지를 확인하십시오.
그들은 나비로 성장했을 때, 성인용 나비를 잡고 부드럽게 상단 날개 표면 색상을 공개날개에 날려 집게를 사용합니다. 수컷은 날개 전체에 파란색이 있는 것처럼 보이며 암컷은 뒷날개에 파란색과 주황색 안점이 줄어듭니다. 각 결과 성인 나비의 백과 날짜와 성별을 기록합니다.
각 나비의 날개 코드 길이를 측정하려면 부드럽게 집게와 나비를 잡고 디지털 캘리퍼를 사용합니다. 나비가 너무 활동적인 경우 30초 이하의 냉장고에 놓고 다시 시도하십시오. 이 프로토콜은 최고의 실험실 사육 및 축산 관행을 개선하는 데 중요한 수많은 주요 데이터 격차에 대한 지시된 연구 및 광범위한 데이터 수집을 가능하게 했습니다.
다음은 한 개인을 위해 수집된 4개의 헤드 캡슐입니다. 애벌레의 대다수는 5 일 미만 각 미숙한 생활 단계와 4 개의 몰트가 있었다. 여성은 일반적으로 남성에 비해 모든 미숙한 단계에서 더 빨리 개발.
p 값이 0.625로 큰 효과는 없었습니다. 이 단계는 특히 애벌레가 갓 부화 된 신생아일 때 매우 세심합니다. 이 단계에서 현미경을 사용하여 애벌레 뒤쪽의 적절한 장소에 페인트가 적용되는지 확인하는 것이 중요합니다.
이러한 방법은 개발 단계 생존율, 여러 애벌레 호스트의 차등 성능을 평가하고 연구원이 현장에서 데이터를 더 잘 해석하는 데 도움이 될 수 있도록 확장 될 수 있습니다. 이 간단한 방법은 약간의 계획 기본 유기체 축산 관행을 통해 과학 연구에 쉽게 적응 할 수있는 방법을 보여줍니다. 그런 다음 결과를 사용하여 성공을 향상시키기 위해 전 시투 방법을 알리고 잠재적으로 적응할 수 있습니다.
