Questo metodo rappresenta una porzione di un più ampio protocollo di allevamento di conservazione ex situ utilizzato per la produzione di massa di laboratorio di farfalle a rischio. Illustra come i metodi di allevamento di base possono essere adattati per la ricerca scientifica per aiutare ad affrontare le principali lacune comportamentali, della storia della vita o dei dati ecologici. I metodi specifici presentati per valutare il tempo di sviluppo larvale e il numero di stadi larvali hanno un'ampia applicabilità ad altri programmi di allevamento o ricerca per la conservazione delle farfalle.
Questa tecnica è un approccio efficace per documentare le metriche della storia della vita di una farfalla in via di estinzione come il numero di instar larvali, la durata delle fasi di sviluppo e le dimensioni di tutte le fasi della vita. Abbiamo semplificato il nostro protocollo in modo che la produttività e l'efficienza possano essere aumentate in laboratorio, il che è particolarmente importante quando si raccolgono i dati in un breve lasso di tempo. Questo metodo richiede destrezza e attenzione ai dettagli per evitare danni all'organismo, poiché le larve di farfalla sono molto piccole soprattutto come neonati.
A dimostrare la procedura sarà Jacob Hornfeldt, un laureato del nostro laboratorio. Per iniziare, usa un piccolo pennello ad acquerello per capelli di cammello per spostare e isolare attentamente una singola larva e posizionarla sotto un microscopio sezionato in una piastra di Petri. Immergere un singolo capello della penna insetto in vernice luminosa non tossica di colore contrastante con quello della larva e mettere con cura una piccola goccia di vernice sul retro della larva.
Dopo 30 secondi, la vernice si asciuga. Con l'aiuto di un piccolo pennello ad acquerello per capelli di cammello, posiziona ogni singola larva nella propria tazza di porzione di plastica trasparente da due oncia contenente circa una o tre piccole foglie di materiale ospite terminale fresco e scrivi un identificatore univoco sulla tazza e sul coperchio. Fissare saldamente il coperchio.
Controlla attentamente ogni larva ogni giorno. Con le forcep, rimuovere le foglie e impostarle su una superficie bianca. Ispezionare la tazza e il coperchio chiaro.
Esaminare le foglie al microscopio sezionato per la presenza di exuviae larvali e capsule della testa. Quando si osserva un'esuvia larvale, rimuoverla dalla tazza e posizionarla in una fiala piena di 0,2 microlitri di glicerina. Etichettare la parte superiore del coperchio e il lato con il numero di larva, la data della muta e la capsula della testa.
Posizionare l'exuvia larvale e la capsula della testa associata in un coperchio trasparente della tazza di plastica e metterla un paio di gocce di etanolo. Osservare l'exuvia larvale al microscopio sezionato. Se la capsula larvale della testa è già separata dall'exuvia, posizionare una goccia di glicerina sulla punta delle forcep entimologiche appuntite e toccare delicatamente la capsula della testa alla glicerina.
Posizionare la capsula della testa nel tubo di microcentrifugo associato. Se la capsula della testa è ancora attaccata all'exuvia larvale, utilizzare pini appuntiti e un perno di insetto per separare la capsula della testa dall'exuvia larvale. Una volta separato, utilizzare la tecnica della glicerina per raccogliere la capsula della testa.
Dopo ogni muta, ridipingi le larve e registra le date della muta. Ogni giorno, usa le pinze digitali per misurare la lunghezza totale del corpo dalla testa all'ultimo segmento addominale di ogni larva. Prendi tre misurazioni e registra la media delle tre insieme alla data e all'ora.
Controllare la tazza di plastica corrispondente per assicurarsi che non vi sia muffa. Rimuovere tutte le sfilacciate e i vecchi detriti ospiti e aggiungere nuovo materiale ospite in base alle esigenze. Riportare la larva alla tazza.
Mantenere le tazze a temperatura di laboratorio tra 27 e 32 gradi Celsius per un'attività e uno sviluppo larvali ottimali. Mantieni la condizione fino a quando tutte le larve raggiungono la loro instar finale e iniziano lo stadio prepupale. Quando le larve cessano di nutrirsi, trasformano un colore uniforme verde-marrone opaco, perdono i loro galloni e spesso vagano dall'ospite, posizionano un piccolo pezzo di carta ondulata nella tazza.
Una volta che ogni larva si è completamente impupata misura la sua lunghezza totale e registra la data della pupa. Questa è la muta finale di ogni individuo. Controlla le pupe ogni giorno.
Quando sono cresciuti in farfalle, usa le forcep per tenere la farfalla adulta e soffiare delicatamente sulle ali per rivelare il colore superiore della superficie dell'ala. I maschi sembrano avere il blu su tutte le ali e le femmine hanno ridotto il blu e un vaso arancione sull'ala posteriore. Registra la data di eclosion e il sesso di ogni farfalla adulta risultante.
Per misurare la lunghezza dell'accordo alare di ogni farfalla tenere delicatamente la farfalla con pinze e utilizzare pinze digitali. Nel caso in cui la farfalla sia troppo attiva per essere misurata, posizionarla in frigorifero per 30 secondi o meno e riprovare. Questo protocollo ha permesso la ricerca diretta e un'ampia raccolta di dati su numerose lacune chiave di dati importanti per migliorare le migliori pratiche di allevamento e allevamento di laboratorio.
Ecco le quattro capsule per la testa raccolte per un individuo. La maggior parte delle larve aveva quattro moli con ogni stadio di vita immaturo meno di cinque giorni. Le femmine in genere si sono sviluppate più velocemente in tutti gli stadi immaturi rispetto ai maschi.
Anche se questo non è stato un effetto significativo con un valore p a 0,625. Questo passaggio è molto meticoloso soprattutto quando le larve sono neonati appena nati. È importante ricordare di utilizzare un microscopio durante questo passaggio per assicurarsi che la vernice sia applicata sul posto appropriato sul retro del bruco.
Questi metodi possono essere ampliati per aiutare a valutare i tassi di sopravvivenza allo stadio di sviluppo, le prestazioni differenziali su più ospiti larvali, oltre ad aiutare i ricercatori a interpretare meglio i dati dal campo. Questo metodo semplice illustra come con un po 'di pianificazione le pratiche di base di allevamento degli organismi possano essere prontamente adattate per la ricerca scientifica. I risultati possono quindi essere utilizzati per aiutare a informare e potenzialmente adattare i metodi ex situ per migliorare il successo.
