الحرمان البصري أحادية هو بروتوكول تجريبي ممتاز للحث على اللدونة استجابة القشرية البصرية الأولية. عادة، الخلايا العصبية في الجزء المناظير من القشرة البصرية الأولية في الماوس تستجيب حوالي ضعف بقوة لتحفيز العين contralateralal كما إلى العين ipsilateral. ومع ذلك، خياطة اغلاق العين contralateralral خلال الفترة الحرجة لللدونية هيمنة العين يؤدي إلى فقدان سريع للاستجابة من قبل الخلايا العصبية V1 لتحفيز العين المقابلة، ويتبع أيضا زيادة لاحقة في الاستجابة للعين ipsilateral.
هنا، نقدم البروتوكول التجريبي للحرمان أحادي الاتجاه ونقترح طريقة شائعة الاستخدام لتحليل الاتجاه في هيمنة العين أثناء الحرمان البصري. وضع الأدوات الجراحية في صندوق الألومنيوم والأوتوكلاف لهم تحت 120 درجة مئوية لمدة نصف ساعة. إعداد 2٪ agarose حل في غلاية حمام الماء والاحتفاظ بها في 75 درجة مئوية.
ضع طبقة رقيقة من مرهم العين على كلتا العينين. تحت المجهر التشريحي مع الإضاءة، خياطة الجفون. جعل حوالي أربع غرز.
جعل عقدتين إلى ثلاث من مؤشر الترابط. تطبيق ثلاثة microliters من الغراء تجفيف الفورية 502 على رأس العقدة لزيادة استقرار العقدة. ثم قطع الخيط قصيرة بما فيه الكفاية.
عندما يكون الماوس مستيقظا تماما، ووضعها في قفص عقد منفصلة. قبل التسجيل الكهربائي، استخدم الأيزوفلوران لإضفاء الحساسية على الماوس. إزالة الغرز وفضح مقلة العين.
تقليم بعناية الجفن. قم بشطف العينين بالحلول الخاصة بالعدسات اللاصقة وتحقق من وضوح العينين. يمكن استخدام الماوس فقط مع حالة جيدة من مقل العيون.
بعد تخدير الماوس، ضع الماوس على إطار مجسم. استخدام وسادة التدفئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم طوال العملية. ضعي مرهم العين على سطح العينين لتبقيه رطباً.
إزالة الشعر من الماوس لفضح جلده. اِنزع ثمانية ملليمترات مضروبة في ثمانية ملليمترات من الجلد بين الأذنين لفضح الجمجمة وإزالة أنسجة فروة الرأس. ثم إزالة النسيج الضام الإفراط مع بيروكسيد الهيدروجين.
حفر ثقب في الجمجمة فوق المخيخ. إصلاح المسمار العظام الصغيرة في الحفرة كمرجع. إجراء عملية استئصال القحف الصغيرة من ملليمتر واحد في قطرها في V1 منظار المنطقة.
إزالة بعناية جزء الجمجمة دون إيذاء الدماغ. غطي السطح القشري المكشوف بنسبة 2٪ agarose لمنع التجفيف. إصلاح قطب التنغستن على إطار استريو تكسيكس.
ضع قطب التنغستن عموديًا على منطقة V1 المناظير للتأكد من أن الخلايا المسجلة تتفاعل مع كلتا العينين. يتم فصل التحفيز بمقدار 30 درجة في كتلة عشوائية. وقد تم عرض ما مجموعه 3 إلى 5 كتل في كل قياس.
قناع عين واحدة مع لوحة بلاستيكية غير شفافة. تقديم LCD1 إلى وضع في 23 سم من عيون الماوس. المتقدمة microelectrode ببطء من قبل micromanipulator الهيدروليكية النفط.
إيقاف التقدم إشارة عالية نسبة الضوضاء إشارة عندما يتم تقدم القطب إلى طبقة أربعة وبدء القياس. نحن تضخيم الأنشطة ارتفاع في عامل 1،000 وتصفية من 300 إلى 10 كيلوهيرتز ومن ثم عينة منه في 40 كيلوهيرتز. ثم قناع العين الأخرى وقياس استجابة العين المقابلة.
الإشارات التي تقاس بأقطاب كهربائية واحدة هي الأنشطة السكانية. استخدام البرنامج لفصل المسامير من الخلايا المختلفة. أولاً، قم بتصفية الإشارة من 500 إلى 5000 هرتز.
تعيين اثنين من المؤشرات، واحد من أجل انحراف إيجابي واحد ل الارتفاعات انحراف السلبية. إعداد قوالب الارتفاع. تعيين منطقة القوالب حيث يظهر الاختلاف الأكبر بين فئات مختلفة من التموج.
استخدم تحليل المكونات الرئيسية لفصلها إلى مجموعات. تصنيف المسامير من حد باستخدام الخوارزمية K يعني. ربط الاتجاه مع ارتفاع معدل اطلاق ومؤامرة منحنيات ضبط الاتجاه لipsilateral و contralateral eyes.
ثم حساب مؤشر OD للخلايا المفردة التي تمثل استجابة contralateral وipsilateral تعيين درجة OD لكل خلية وفقا لمؤشر OD. حساب مؤشر تحيز المقابلة وفقا للصيغة. يُظهر هذا الرسم التخطيطي منحنيات ضبط الاتجاه للعين ipsilateral و contralateral في الماوس أحادي الزاوية المحروم وغير المُنَح.
وهذا البروتوكول يتيح نجاح الحرمان البصري الأحادي وقياس هيمنة العين من الماوس المحروم وغير المُغلق في الفترة الحرجة. لقد أظهرنا لك للتو كيفية إنجاز هذه التجربة وكنا قد حللنا التغيير في هيمنة العين أثناء الحرمان البصري. خلال التجربة ، من المهم تجنب العدوى في عملية خياطة والتفاعل أثناء التسجيل الكهربائي.
شكرا لمشاهدة الفيديو لدينا.
